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尾静脉注射牙龈卟啉单胞菌对野生大鼠海马神经干细胞和神经元标志分子表达的影响
编辑人员丨1周前
目的:观察尾静脉注射牙龈卟啉单胞菌( Porphyromonas gingivalis,Pg)对野生成年大鼠海马神经干细胞和神经元标志分子表达水平的影响,初步探讨Pg入血对海马神经发生的作用。 方法:建立尾静脉注射Pg大鼠模型:18只雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠按随机数字表法随机分为3组(每组6只)。低剂量组、高剂量组大鼠分别经尾静脉注射1.0×10 3 和1.0×10 8菌落形成单位(colony forming unit,CFU)的Pg菌液200 μl,假手术组大鼠注射等体积磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS),3组大鼠均每周注射3次,连续8周。行为学检测:应用莫里斯水迷宫(Morris water maze,MWM)定位航行实验、空间探索实验检测大鼠学习和记忆能力。免疫组织化学法检测各组大鼠海马颗粒下区(subgranular zone,SGZ)神经干细胞标志分子神经上皮干细胞蛋白(nestin)、神经母细胞和未成熟神经元标志分子双皮质素(doublecortin,DCX)、成熟神经元标志分子神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)的阳性细胞分布。蛋白质印迹法检测各组大鼠海马组织nestin、DCX、NeuN的表达水平。 结果:学习和记忆能力:MWM定位航行实验结果显示,第5天到达平台时间高剂量组[22.83(16.00,38.34)s]显著长于假手术组[5.59(5.41,6.17)s]( t=-11.17, P<0.001),低剂量组[9.85(8.75,21.01)s]与假手术组相比差异无统计学意义( t=-6.83, P=0.080);MWM空间探索实验中60 s内穿越原平台位置次数,高剂量组[1.50(1.00,2.00)次]显著少于假手术组[4.00(2.75,4.00)次]( t=9.75, P=0.003),低剂量组[2.50(2.00,3.00)次]与假手术组相比差异无统计学意义( t=4.50, P=0.382)。免疫组织化学法结果显示,对于nestin阳性细胞密度,低剂量组[(35.36±4.32)个/mm 2]和高剂量组[(26.51±5.89)个/mm 2]均显著低于假手术组[(59.58±14.15)个/mm 2]( t=24.21, P=0.018; t=33.07, P=0.005);DCX阳性细胞平均吸光度值,低剂量组(0.007±0.002)和高剂量组(0.006±0.002)均显著低于假手术组(0.011±0.001)( t=0.004, P=0.018; t=0.006, P=0.005);NeuN阳性神经元密度,高剂量组[(0.75±0.08)×10 3个/mm 2]显著低于假手术组[(1.13±0.14)×10 3个/mm 2]( t=0.38, P=0.017),低剂量组[(0.88±0.19)×10 3个/mm 2]与假手术组相比差异无统计学意义( t=0.25, P=0.075)。蛋白质印迹法结果显示,与假手术组相比,高剂量组海马中nestin、DCX、NeuN表达水平均显著降低( t=0.74, P<0.001; t=0.18, P=0.014; t=0.35, P=0.008),低剂量组上述3个指标与假手术组相比差异均无统计学意义( t=0.18, P=0.108; t=0.08, P=0.172; t=0.19, P=0.077)。 结论:尾静脉注射Pg后呈剂量依赖性降低野生大鼠学习和记忆能力,并显著降低大鼠海马神经干细胞和神经元标志分子nestin、DCX、NeuN阳性表达细胞数量和表达水平。
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编辑人员丨1周前
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穿孔素基因缺陷原发性噬血细胞综合征的临床特征:单中心回顾性研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨穿孔素基因缺陷原发性噬血细胞综合征患者的临床特征。方法:回顾性分析2014年4月至2021年8月首都医科大学附属北京友谊医院确诊的16例穿孔素基因缺陷原发性噬血细胞综合征患者的临床资料,对患者的突变位点、突变类型、家族史、临床表现及预后等进行分析。结果:共纳入16例患者,男10例,女6例,中位发病年龄为17.5(4~42)岁。共发现16种突变:11种错义突变,1种无义突变,2种移码突变,2种整码突变。所有患者至少含有1个错义突变且为有害突变,其中c.1349C>T(p.T450M)和c.503G>A(p.S168N)是最常见的突变位点。11例NK细胞活性下降,10例穿孔素蛋白表达下降,8例起病时合并EB病毒感染,2例有家族史,4例累及中枢神经系统。11例患者行异基因造血干细胞移植,8例存活,未移植患者的中位生存时间为8(4~18)个月,移植患者的中位生存时间未达到。结论:应重视成年人中穿孔素基因缺陷原发性噬血细胞综合征的诊断,EB病毒感染可能是这类疾病的诱因,异基因造血干细胞移植对于患者的预后有较大影响。
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编辑人员丨1周前
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载骨髓间充质干细胞双层胶原神经管修复大鼠坐骨神经缺损的研究
编辑人员丨1周前
目的:观察载骨髓间充质干细胞(BMSCs)的双层胶原神经管对于修复大鼠坐骨神经离断损伤的修复效果。方法:将成年雄性SD大鼠21只,按照1∶2取3只作为空白组对照,其余18只SD大鼠随机分为3组,分别为自体组(AG组)、空管组(CT组)和细胞+管组(C+CT组)。通过体外分离培养Sprague-Dawley(SD)大鼠(南京医科大学动物实验中心提供)BMSCs接种双层胶原管构建神经组织工程移植物,植入大鼠坐骨神经1 cm缺损动物模型后16周,从大体观察、行为学、电生理、免疫组织化学等指标比较各组修复神经离断损伤的情况来评价修复效果,空白组切除后留出10 mm的空隙直接缝合。CT组仅用胶原管桥接神经,C + CT组使用注入BMSC细胞悬液的胶原管,AG组将离断出的神经翻转180°后缝合在缺损处。应用GraphPad Prism 6统计软件分析,采用单因素方差分析。结果:术后16周大体观察发现在胶原管组(CT组)BMSCs复合胶原管组(C+CT组)和自体组(AG组)中神经都己再生。通过坐骨神经功能指数(SFI)、复合肌肉动作电位(CMAP)值、靶肌湿重比、远端再生神经数目等定量指标分析显示,C+CT组和AG组的修复效果均优于CT组,差异有统计学意义(SFI, CT:-92.490±1.836;C+CT:-70.010±7.805;AG:-70.130±8.744; F=17.850, P<0.05),AG组虽优于C+CT组但C+CT组和AG组之间差异无统计学意义(湿重比,CT:0.308 7±0.146 1;C+CT:0.455 0±0.062 9;AG:0.625 7±0.128 3; F=9.036, P>0.05)。 结论:构建的载BMSCs双层胶原神经管在修复大鼠坐骨神经1 cm缺损中展现出与"金标准"自体神经修复接近的修复效果。
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编辑人员丨1周前
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X射线胸部照射对小鼠精子发生的影响
编辑人员丨1周前
目的:探讨X射线胸部照射对雄性成年小鼠精子发生的影响。方法:将24只健康雄性成年C57BL/6小鼠(6~8周龄)按照随机数表法分为X射线照射组(Radiation)和假照射组(Sham),每组12只。胸部照射面积为1.5 cm × 2 cm,剂量率3.04 Gy/min,8 Gy/d,连续照射3 d,总剂量24 Gy,于照射后第7天和第21天取材。剥离双侧睾丸,计算睾丸系数;HE染色法观察睾丸组织形态,并测量生精小管直径和生精上皮厚度;游离附睾尾中的精子用于统计精子数量;TUNEL和Western blot分别检测睾丸组织凋亡及凋亡相关蛋白水平变化,ELISA检测睾丸内干细胞因子(SCF)和胶质源性神经营养因子(GDNF)的水平。结果:与假照射组相比,照射组小鼠的睾丸和附睾组织形态结构严重破坏,生精小管直径在照射后第21天,生精小管直径减小,差异有统计学意义( t = 8.93, P < 0.05),生精上皮厚度在照射后第7天和第21天均明显减小,差异有统计学意义( t = 4.24、12.77, P < 0.05),精子数量减少,差异有统计学意义( t = 4.30、2.98, P < 0.05);生精小管内TUNEL阳性细胞数在照射后第7天和第21天显著上调( t= -2.73、-3.74, P < 0.05);睾丸内Cleaved Caspase-3蛋白水平在照射后第7天和第21天也显著上调,差异有统计学意义( t = -2.96、-2.46, P < 0.05);睾丸内SCF和GDNF水平在照射后第7天无明显改变,在照射后第21天均显著上调( t = -10.46、-5.42, P < 0.05)。 结论:本研究条件下X射线胸部照射可损伤雄性成年小鼠精子发生障碍,其机制可能与生精细胞凋亡增加和支持细胞分泌功能紊乱有关。
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编辑人员丨1周前
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巯基聚乙二醇修饰GNPs/miR-29纳米微粒的制备及细胞相容性研究
编辑人员丨1周前
目的:探讨巯基聚乙二醇(polyethylene glycol-thiol,PEG-SH)修饰的GNPs/miR-29纳米微粒诱导神经干细胞增殖、分化的作用。方法:采用氧化还原法制备PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒,检测紫外吸收光谱、粒径分布及Zeta电位。选取15只成年雄性SD大鼠,以改良Allen法构建脊髓损伤模型;在脊髓损伤区域分别植入人工合成的miR-29和PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒,采用凝胶电泳法分析miR-29表达的稳定性。取SPF级SD乳鼠10只,分离培养神经干细胞,使用Nestin、GFAP及NSE抗体鉴定细胞。以CCK-8法检测人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒对神经干细胞活性、增殖的影响。将人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒与神经干细胞共培养1周,观察神经元突起的密度、长度及数量。结果:PEG-SH修饰的纳米金呈棕红色;透射电镜下为均匀分布的球形;紫外吸收光谱呈现单峰波,在523 nm附近出现吸收峰值;Zeta电位随PEG-SH含量增加而逐渐增大,峰值为(22.5±5.2) mV;粒径随PEG-SH含量增加早期迅速达峰值后下降维持至稳定水平。脊髓损伤区域植入miR-29及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒0~6 h,人工合成的miR-29组可见清晰的表达条带,但12~24 h表达条带迅速消失;PEG-SH GNPs/miR-29微粒组,始终能观察到清晰的表达条带。接种细胞第1、3、5、7天,miR-29组OD值分别为0.34±0.17、0.78±0.31、1.28±0.68、1.64±0.38,与DMEM组相比差异无统计学意义;GNPs组、PEG-SH GNPs组以及PEG-SH GNPs/miR-29组的OD值与DMEM组相比差异均无统计学意义。PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒组神经元突起的密度为(56.38±3.65) μm 2、长度为(78.25±3.72) μm、数量为(356±34.52)个/1 000倍视野,均大于miR-29组[分别为(12.53±3.26) μm 2、(11.35±3.36) μm、(158±32.85)个/1 000倍视野]、PEG-SH GNPs组[分别为(14.12±3.45) μm 2、(12.56±3.57) μm、(160±32.52)个/1 000倍视野]和生理盐水组[分别为(10.25±3.52) μm 2、(9.35±3.28) μm、(152±32.28)个/1 000倍视野],但与胎牛血清组[分别为(56.48±3.56) μm 2、(76.85±3.65) μm、(350±35.26)个/1 000倍视野]比较差异无统计学意义。 结论:PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒具备良好的生物学性能,可诱导神经干细胞增殖、分化,对miR-29有一定程度的保护效应。
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编辑人员丨1周前
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柴胡疏肝散对抑郁模型小鼠行为及海马神经再生的影响
编辑人员丨1周前
目的:探究柴胡疏肝散(Chaihu-Shugan San,CSS)对慢性不可预知性温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)致抑郁小鼠行为及神经再生功能的影响。方法:将30只清洁级健康雄性C57BL/6成年小鼠按照随机数字表法分为空白组(Con组)、模型组(CUMS组)、柴胡疏肝散组(CSS组),每组10只。CUMS组和CSS组小鼠采用CUMS法建立抑郁模型,造模同时分别给予蒸馏水和CSS(2.7 g/kg)灌胃,Con组小鼠只给予等体积蒸馏水灌胃,不进行CUMS刺激。干预结束后,采用体质量增量、糖水偏爱实验、强迫游泳实验和悬尾实验检测小鼠抑郁样行为。采用免疫荧光染色法检测海马齿状回新生神经元数量。qRT-PCR法检测小鼠海马组织中脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF2)、纺锤体与动粒相关复合物2(spindle and kinetochore-associated protein 2,SKA2)mRNA表达水平。采用SPSS 22.0软件进行统计分析,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用Tukey检验。结果:(1)三组小鼠在造模后的体质量增量差异有统计学意义( F=8.859, P<0.05),CUMS组小鼠的体质量增量低于Con组和CSS组(均 P<0.05)。三组小鼠在行为学测试中的糖水偏爱率、悬尾不动时间和游泳不动时间均差异有统计学意义( F=10.544,12.957,8.095,均 P<0.05)。CUMS组小鼠的糖水偏爱率低于Con组[(87.46±2.78)%,(93.90±3.31)%, P<0.05],CSS组小鼠的糖水偏爱率[(91.65±2.61)%]则高于CUMS组( P<0.05)。CUMS组小鼠悬尾不动时间[(198.00±27.57)s]和游泳不动时间[(322.20±46.98)s]均高于Con组[悬尾不动时间(138.80±38.50)s,游泳不动时间(238.50±50.51)s,均 P<0.05]。CSS组小鼠的悬尾不动时间[(139.00±21.29)s]和游泳不动时间[(265.20±44.90)s]均低于CUMS组(均 P<0.05)。(2)免疫荧光染色结果显示,三组小鼠海马齿状回BrdU与NeuN双标的细胞数量差异有统计学意义( F=9.486, P<0.05)。CUMS组小鼠双标染色细胞数量[(31.66±3.21)个/视野]低于Con组[(63.66±15.17)个/视野]和CSS组[(58.00±6.00)个/视野](均 P<0.05)。(3)qRT-PCR结果显示,三组小鼠海马齿状回BDNF、FGF2和SKA2的mRNA水平均差异有统计学意义( F=14.522,9.337,8.701,均 P<0.05)。CUMS组小鼠海马齿状回BDNF mRNA(0.79±0.06)、FGF2 mRNA(0.74±0.18)和SKA2 mRNA(0.52±0.32)的相对表达量均低于Con组[BDNF mRNA(1.03±0.10),FGF2 mRNA(1.04±0.11),SKA2 mRNA(1.05±0.37),均 P<0.05]。与CUMS组相比,CSS组BDNF mRNA(1.07±0.80)、FGF2 mRNA(1.30±0.29)、SKA2 mRNA(1.40±0.55)相对表达水平均较高(均 P<0.05)。 结论:柴胡疏肝散能缓解抑郁模型小鼠的抑郁症状,其机制可能与提高海马区BDNF、FGF2、SKA2 mRNA的表达并促进神经干细胞增殖有关。
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编辑人员丨1周前
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神经干细胞联合神经营养因子-3基因修饰嗅鞘细胞移植对大鼠脑损伤后的修复作用
编辑人员丨1周前
目的:观察神经干细胞(NSCs)联合神经营养因子-3(NT-3)基因修饰嗅鞘细胞(OECs)移植对颅脑损伤(TBI)大鼠神经修复的作用。方法:取新生乳鼠海马和嗅球原代培养NSCs及OECs并鉴定。用含NT-3基因的慢病毒载体转染OECs,构建NT-3基因修饰OECs(OECs-NT-3)。取50只体重(200±20) g SD成年雄性大鼠(山西医科大学实验动物中心)随机分为假手术组、模型组、OECs-NT-3移植组、NSCs移植组、OECs-NT-3联合NSCs移植组,分组后制作大鼠颅脑损伤模型,给予相应细胞移植处理。细胞移植后1、7、14、28 d行改良神经功能评分(mNSS),并各时间点取脑组织,制备石蜡切片行苏木精-伊红(HE)染色,原位缺口末端标记法(TUNEL)检测,溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、p75免疫组织化学染色。结果:大鼠mNSS评分:移植28 d,联合组[(4.00±1.05)分]与模型组[(8.50±1.43)分]、OECs-NT-3组[(5.50±1.35)分]、NSCs组[(6.00±1.49)分]比较,差异有统计学意义( t=-7.997、-2.764、-3.464, P<0.05),而OECs-NT-3组与NSCs组比较,差异无统计学意义( t=-0.785, P>0.05)。HE染色示假手术组、模型组、OECs-NT-3组、NSCs组、联合组损伤灶细胞密度依次为(220±22)、(299±47)、(347±35)、(390±72)、(523±55)个/每高倍镜视野。联合组脑组织结构排列相对规整,损伤灶细胞密度较模型组、OECs-NT-3组、NSCs组显著提高,差异有统计学意义( t=7.246、5.996、3.373, P<0.05)。p75及BrdU免疫组织化学提示两种移植细胞能持续存活且广泛分布在损伤灶周围。移植7 d,假手术组、模型组、OECs-NT-3组、NSCs组、联合组细胞凋亡指数依次为(1.67±0.17)%、(47.49±7.92)%、(31.22±3.97)%、(34.48±4.69)%、(18.17±3.13)%。联合组与模型组、OECs-NT-3组、NSCs组比较,差异有统计学意义( t=5.963、4.470、5.012, P<0.05)。 结论:神经干细胞联合NT-3基因修饰嗅鞘细胞移植可减轻大鼠脑损伤后神经细胞凋亡,修补局部缺损,对神经功能的恢复具有显著促进作用。
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编辑人员丨1周前
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电针与干细胞治疗大鼠急性周围神经损伤的磁共振扩散张量成像评估
编辑人员丨1个月前
目的运用磁共振扩散张量成像技术(diffusion tensor imaging,DTI)评估电针与干细胞移植在急性周围神经损伤疾病中的治疗效果.材料与方法将48只造模成功的成年SD大鼠随机平均分为电针组、干细胞组和对照组,每组16只.电针组大鼠接受环跳和足三里的电针治疗.干细胞组大鼠于损伤处神经外膜下微量注射3μL含有约5×105个骨髓间充质干细胞的生理盐水悬浊液.对照组显微注射同体积的生理盐水.使用多参数磁共振成像技术[包括DTI和磁共振T2加权脂肪饱和序列(T2-weighted fat saturation,T2WI-FS)、组织学评估、免疫组化分析监测神经结构的变化(包括神经直径、髓鞘厚度及形态改变、轴突连续性的恢复).运用坐骨神经功能指数(somatic functional index,SFI)和步行轨迹分析方法评估神经的运动功能.采用重复测量单因素方差分析不同实验组间大鼠磁共振横向弛豫时间(T2值)、DTI指标[各向异性分数(fractional anisotropy,FA)和径向扩散率(radial diffusivity,RD)]、SFI值的差异性.运用Bonferroni检验校正不同时间节点下多重检验的阈值结果.结果急性周围神经损伤后第1周,所有组大鼠的FA值显著下降,随后逐渐升高,直至第4周恢复至接近正常水平;而RD值在手术后1周内显著上升,随后逐渐下降,同样于第4周时恢复至接近正常水平.电针组和干细胞组大鼠在术后不同时间点(2~4周)的恢复均优于对照组,且电针组的恢复最为显著(P<0.001).T2WI-FS显示在术后的1、2、4周,电针组及干细胞组大鼠与对照组大鼠相比在神经水肿消退速度方面具有显著差异(P<0.001);神经直径与T2值在手术后1周内显著升高,此后逐渐下降,在第4周时恢复至接近正常水平;甲苯胺蓝染色与SPRR1A轴突染色均指向电针组的神经纤维连续性恢复最快,其次是干细胞组.结论电针在急性周围神经损伤疾病中的治疗效果可与干细胞移植治疗相当,并在减轻水肿及炎性反应方面极具优势.DTI参数FA和RD值是髓鞘完整性的成像标志物.
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编辑人员丨1个月前
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间充质干细胞来源外泌体在脑缺血再灌注损伤中神经保护作用的研究进展
编辑人员丨1个月前
脑卒中是导致我国成年人残疾、死亡的首位原因,其中80%以上的脑卒中为缺血性脑卒中.缺血再灌注损伤是导致缺血性脑卒中病人残疾、死亡的常见原因.目前,针对缺血再灌注损伤的临床药物主要包括自由基清除剂、钙离子拮抗剂和兴奋性氨基酸拮抗剂等,疗效不理想.近年来,越来越多的研究者开始尝试应用干细胞治疗,但动物实验发现移植的干细胞在脑内存活率较低,很少有干细胞能分化为神经元.令人意外的是,研究发现干细胞可以通过旁分泌外泌体发挥神经保护作用.但天然外泌体靶向能力差,目前已经研发的工程性外泌体针对神经细胞具有主动靶向能力.本文对间充质干细胞来源外泌体在脑缺血再灌注损伤中的神经作用研究进展作一综述.
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编辑人员丨1个月前
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前脑神经元芳香酶敲除对自然衰老雌性大鼠海马CA1区胶质细胞分化的影响
编辑人员丨2024/7/20
目的 芳香化酶(Aromatase)为雌激素合成关键酶,本研究采用前脑神经元芳香化酶敲除雌性大鼠(FBN-Aro-KO,KO),观察随衰老海马CA1区神经干细胞向星形胶质细胞、小胶质细胞分化的变化,揭示脑源雌激素的神经保护作用,为神经退行性脑病的防治提供重要靶点.方法 动物分组为①自然衰老雌性大鼠:1、3、6、14和18Mon;②6、18Mon K O大鼠和年龄匹配野生型大鼠(WT).免疫荧光染色检测神经干细胞标志蛋白(SOX2)、星形胶质细胞标志蛋白(GFAP)、小胶质细胞标志蛋白(Iba1)、轴突和树突骨架蛋白(MBP和MAP2)水平.结果 在自然衰老组,1、3、6Mon大鼠SOX2+细胞数差异无统计学意义(P>0.05);与之比较,14Mon和18Mon组SOX2+的细胞数显著降低;GFAP荧光强度、SOX2+与GFAP+的共定位表达以及SOX2+/GFAP+细胞的增殖率升高(P<0.05).在18Mon组,与WT组比较,KO组GFAP荧光强度、SOX2+细胞数、SOX2+与GFAP+共定位细胞数以及GFAP+增殖率均显著升高(P<0.01);且与WT组比较,KO组星形胶质细胞的总体积显著增大(P<0.05).在自然衰老组,与1Mon组比较,14和18Mon组Iba1免疫荧光强度显著增强(P<0.0001);与18Mon WT组比较,KO组SOX2+与Iba1+的共定位表达、Iba1荧光强度、小胶质细胞的总体积显著增多(P<0.05).在6Mon组,与WT组比较,KO组SOX2+与GFAP+的共定位表达、GFAP的荧光强度及增殖率均显著增高(P<0.01);但MAP2和MBP的荧光强度显著降低(P<0.01).结论 自然衰老过程中,雌性大鼠海马CA1区神经发生在成年后显著较少,中年后细胞增殖降低;但胶质细胞增殖率增加.前脑神经元脑源雌激素长期缺失(敲除合成关键酶Aro-matase),增加海马CA1区神经干细胞增殖和胶质细胞增殖、活化,促进神经炎症,最终导致神经元骨架蛋白水平降低.
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编辑人员丨2024/7/20
