目的:分析河南省人群百日咳血清流行病学分布特征、影响因素和百日咳感染率。方法:于2022—2023年采用横断面调查方法，调查河南省常住人口，采用酶联免疫吸附试验检测血清百日咳毒素IgG（PT-IgG），分析抗体阳性率（≥20 IU/ml）和中位数浓度（MC），以PT-IgG≥40 IU/ml估算百日咳感染率。抗体水平的组间比较采用秩和检验，抗体阳性率、感染率的组间比较采用 χ2检验。 结果:共纳入研究对象4 810名。PT-IgG总阳性率为12.10%，MC为3.04（0.35，10.36）IU/ml。不同地区、年龄组人群PT-IgG阳性率和抗体水平的差异均有统计学意义（地区阳性率： χ2=134.06， P<0.001，MC： H=337.74， P<0.001；年龄组阳性率： χ2=45.27， P<0.001，MC： H=134.49， P<0.001）。完成全程免疫后1年内PT-IgG阳性率（25.26%）和MC（8.01 IU/ml）最高；接种不同类型百日咳疫苗人群PT-IgG阳性率和抗体水平的差异均有统计学意义（阳性率： χ2=12.38， P=0.006，MC： H=17.93， P<0.001），其中全程接种无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌（结合）联合疫苗人群的抗体阳性率（35.71%）和MC（8.88 IU/ml）高于接种其他类型疫苗人群。对≥3岁且采样前1年内无百日咳疫苗免疫史人群进行百日咳自然感染率评估，在疫苗接种率维持在高水平的情况下，人群百日咳估算感染率为5 757.22/10万。3岁（1 940.16/10万）和4岁（1 765.68/10万）人群感染率处于全人群的低位，6岁时达到峰值（12 656.71/10万）。随后感染率虽然持续下降，但仍维持在较高水平，至40~49岁再次出现峰值（8 740.39/10万）。不同年龄组人群百日咳估算感染率的差异有统计学意义（ χ2=53.21， P<0.001）。 结论:河南省人群百日咳PT-IgG整体处于低位水平；百日咳估算感染率远高于报告发病率；建议在6岁时开展百日咳疫苗加强免疫。

目的:了解杭州地区儿童百日咳血清抗体水平，评估百日咳在儿童群体的发生率，评价疫苗免疫效果。方法:回顾性研究。收集并分析2018年1月至12月在杭州市儿童医院体检的1 486例0~14岁儿童的百日咳毒素抗体IgG水平，血清抗体水平≥30 IU/mL为血清阳性。将入组儿童按0~3岁、4~6岁、7~9岁、10~14岁进行分组；再将3岁以下儿童按0~<3月龄、3~<6月龄、6~<9月龄、9~<12月龄、12~<18月龄、18~≤36月龄进行分组；最后按免疫接种剂次将入组儿童进行分组，采用 Mann- Whitney U法、 Kruskal- Wallis法及 χ2检验比较不同组间的百日咳毒素抗体IgG水平及百日咳感染率。 结果:百日咳毒素抗体IgG的总体阳性率为23.62%(351/1 486)，抗体浓度中位数为6.60 IU/mL。0~14岁儿童中，0~3岁组儿童百日咳毒素抗体IgG阳性率和抗体浓度中位数水平最高，分别为24.58%(29/118)和6.95 IU/mL，不同年龄组抗体阳性率和抗体浓度中位数比较差异均无统计学意义(均 P>0.05)。0~3岁儿童中，不同组间百日咳毒素抗体IgG阳性率和抗体浓度中位数的比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)。预测杭州地区3岁以上儿童人群的百日咳感染率约为45.99%。3剂次以上的接种人群占87.48%(1 300/1 486)，对应人群的抗体阳性率为25.46%(331/1 300)。除未接种的儿童，不同免疫接种剂次组间儿童抗体阳性率和抗体浓度中位数比较差异均有统计学意义( χ2＝24.467、67.438，均 P<0.001)。 结论:杭州地区0~14岁儿童血清百日咳毒素抗体IgG阳性率水平较低，但预测百日咳人群感染率较高，易形成重要传染源，应重视并加强疫苗接种计划和研究，加强传染源监测，警惕"百日咳再现"。

目的:评估细菌培养、聚合酶链反应(PCR)和血清抗百日咳毒素免疫球蛋白G(AntiPT-IgG)水平检测对疑诊百日咳的辅助诊断价值。方法:将2018年6月至2019年5月芜湖市第一人民医院儿科收治的110例百日咳疑似病例作为研究对象，采集鼻咽拭子进行百日咳鲍特菌培养及其特异核酸PCR检测，其中78例留取血清标本，以酶联免疫吸附试验检测AntiPT-IgG水平。结果:细菌培养与PCR组阳性率分别为21.8%和30.0%，2组比较差异无统计学意义( χ2＝1.198， P>0.05)。咳嗽病程<2周病例细菌培养阳性率为32.1%，明显高于2～4周(14.3%)与>4周(9.1%)病例( χ2＝6.522， P<0.05)。<2周病例PCR阳性率(39.6%)也明显高于咳嗽2～4周(25.7%)、>4周病例(13.6%)( χ2＝6.126， P<0.05)。78例患儿血清AntiPT-IgG水平为(75.727±78.454) IU/mL，其中<2周和2～4周AntiPT-IgG水平的中位数分别为5.909 IU/mL和20.948 IU/mL，阳性率分别为14.7%和38.1%。>4周和恢复期AntiPT-IgG水平分别为(79.281±68.254) IU/mL、(107.242±75.750) IU/mL，阳性率分别为39.1%、57.1%。 结论:疫苗时代，应综合病原学和血清学检测结果辅助临床诊断百日咳。咳嗽病程<2周可疑患儿细菌培养和特异核酸的病原检测阳性率高，咳嗽病程4周后血清学检测辅助诊断更为有效。

目的:观察组分无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗(DTacP-sIPV)或无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTacP-IPV/Hib)基础免疫大鼠后加强免疫破伤风类毒素、降低抗原含量的白喉毒素和无细胞百日咳联合疫苗(Tdap)是否产生免疫加强效果，为候选青少年及成人Tdap疫苗提供临床前研究参考。方法:将自主研发的DTacP-sIPV和已上市的DTacP-IPV/Hib按0、1、2月3剂免疫程序分别免疫Wistar大鼠，检测免疫前和每剂次免疫后各组大鼠血清中各组分抗体水平。基础免疫完成10个月后，用候选Tdap加强免疫1次，并检测加强免疫前和免疫1个月、6个月后血清中各组分抗体水平。结果:3剂次基础免疫1个月后，DTacP-sIPV组抗白喉类毒素(diphtheria toxoid，DT)、抗破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT)、抗百日咳毒素(pertussis toxin，PT)、抗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin，FHA)和抗百日咳黏附素(pertactin，PRN)抗体的几何平均滴度(GMT，Log2)分别为17.41、18.34、18.11、19.93、13.91，血清阳转率均达到100%；基础免疫10个月后，抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.17、14.26、13.60、14.51、10.39，血清阳转率维持在89%以上。Tdap加强免疫1个月后，DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA抗体的GMT分别为16.49和17.26、16.80和17.63、16.70和17.74、18.48和19.26，血清阳转率均达到100%，组间差异无统计学意义( P均>0.05)；抗PRN抗体的GMT分别为13.07和11.00，血清阳转率为100%和88%，DTacP-sIPV组高于DTacP-IPV/Hib组( P<0.05)。Tdap加强免疫6个月后，DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.74和14.87、15.07和15.14、14.84和15.73、16.62和16.37、11.44和9.96，血清阳转率维持在88%以上。 结论:候选疫苗Tdap在基础免疫接种DTacP-sIPV和DTacP-IPV/Hib的Wistar大鼠模型加强免疫中可诱导产生良好的体液免疫应答，但抗体滴度随时间推移而衰减。

目的:探究百日咳患儿的血清百日咳毒素(pertussis toxin，PT)-IgG抗体水平及其影响因素。方法:收集2015年7月至2018年12月深圳市儿童医院实验室确诊为百日咳且完成PT-IgG抗体检测的患儿的年龄、病程、疫苗接种状况等临床资料，采集患儿静脉血检测PT-IgG抗体水平，采集鼻咽拭子进行聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)检测百日咳鲍特菌核酸，并进行百日咳鲍特菌培养。两组间比较采用曼-惠特尼 U检验，多组间比较采用Kruskal-Wallis检验。采用多元线性回归分析PT-IgG抗体水平的影响因素。 结果:共纳入871例百日咳患儿，年龄为4(2, 7)个月，年龄<6月龄者592例(68.0%)，<1岁者754例(86.6%)，病程为15(11, 20) d。871例患儿中，PCR和(或)培养阳性者864例(99.2%)，其中仅PCR阳性者696例，仅培养阳性者35例，PCR和培养均阳性者133例。疫苗未接种、已接种至少1剂者分别为452例(51.9%)和346例(39.7%)。年龄为0~2月龄、3~5月龄、6月龄~2岁、≥3岁组患儿PT-IgG抗体水平分别为0.7(0, 8.2) IU/mL、2.3(0, 23.0) IU/mL、24.6(0, 112.3) IU/mL和24.9(0, 114.7) IU/mL，病程为0~2周、>2~4周、>4~8周、>8周组患儿PT-IgG抗体水平分别为0(0, 7.9) IU/mL、8.7(0, 56.0) IU/mL、26.6(5.1, 82.9) IU/mL和68.0(15.3, 118.8) IU/mL，不同年龄和病程组患儿PT-IgG抗体水平差异均有统计学意义( H＝88.346、94.076，均 P<0.01)。疫苗未接种、已接种至少1剂者PT-IgG抗体水平分别为0.9(0, 12.7) IU/mL、14.6(0, 86.3) IU/mL，差异有统计学意义( Z＝-8.520， P<0.01)。PT-IgG≥80 IU/mL者在全年龄组占16.0%(139/871)，在年龄≥3岁组中占34.3%(12/35)，13例年龄≥3岁且病程>2周的患儿中6例为PT-IgG≥80 IU/mL。年龄、病程、疫苗接种状态是PT-IgG抗体水平的独立影响因素( β＝0.108、0.189、0.250，均 P<0.01)。 结论:百日咳患儿的PT-IgG抗体水平受年龄、病程、疫苗接种状态影响，单份血清以80 IU/mL为诊断界值可能导致漏诊率增加，需进一步探索适合我国儿童的标准。

目的:了解宁波市健康人群百日咳感染血清流行病学特征，评估人群百日咳实际感染水平。方法:采用横断面调查设计，分层随机抽取宁波市3个区（县）9个年龄组共1 206名健康居民纳入研究，采集调查对象血清并用ELISA法定量检测血清百日咳毒素IgG（PT-IgG）抗体。结果:调查对象PT-IgG抗体阳性率为0.91%（95% CI：0.45%~1.63%），抗体几何平均滴度（GMT）为3.10（95% CI：2.86~3.36）IU/ml。9个年龄组人群PT-IgG抗体阳性率在0.00%~1.68%之间，GMT在2.08~5.28 IU/ml之间。≥5岁人群百日咳评估感染率为4 572.81/10万（95% CI：1 807.30/10万~9 348.12/10万），感染率高峰出现在5~岁组和≥50岁组，分别为9 301.62/10万（95% CI：1 121.77/10万~33 154.68/10万）和8 967.02/10万（95% CI：1 059.45/10万~31 845.94/10万）。 结论:2019年宁波市人群百日咳实际感染率较高。由于疫苗诱导产生的抗体并不持久，宁波市青少年和成年人已成为百日咳感染重点人群。建议强化百日咳监测能力，完善疫苗免疫策略。

目的 制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)兔多克隆抗体(简称多抗),建立定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并进行验证及应用.方法 采用传统方法,用PT免疫青紫蓝兔制备PT兔多抗.优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并进行特异性、线性、准确性、精密性、灵敏度验证.采用建立的方法对脱毒过程样品及其他百日咳抗原纯化过程样品菌毛蛋白(fimbriae proteins,FIM)原液中PT抗原含量进行检测.结果 PT抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的工作条件为PT兔多抗包被浓度为1 μg/mL,酶标抗体稀释度为1∶8 000.此检测系统能与PT纯化蛋白发生特异性反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉类毒素、破伤风类毒素均未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法线性检测范围在25～400ng/mL之间;PT高、中、低浓度回收率分别为103.27％、91.48％、103.52％;酶标板内和板间的变异系数(CV)均小于10％;该方法的灵敏度为20.719 ng/mL,检测下限为41.438 ng/mL.检测5种不同脱毒工艺条件下、不同取样时间点的35批样品,其抗原含量变化均符合脱毒反应变化趋势.结论 成功制备了PT兔多抗,并建立了精密性和准确性良好的定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,可用于组分百白破联合疫苗生产过程中化学脱毒样品的抗原含量检测.

全球"百日咳再现"已成为学术界广泛关注的公共卫生事件.百日咳患儿特征性临床表现为长期且频繁的痉挛性咳嗽,不仅使患儿感到痛苦,还与诸多并发症密切相关.研究表明,百日咳鲍特菌的百日咳毒素(PT)、脂寡糖(LOS)和自转运蛋白(Vag8)协同作用引起咳嗽.针对百日咳咳嗽的对症治疗效果并不肯定.百日咳毒素抑制剂包括伴侣抑制剂、人肽、小分子抑制剂和人源化抗体,作为对因治疗的一种手段,可作为百日咳咳嗽新的治疗策略.

目的:评估临床收治的肺炎或哮喘住院患儿中百日咳近期或现症感染状况.方法:收集在呼吸科住院的610例肺炎患儿及60例哮喘患儿年龄、咳嗽病史和百白破疫苗接种史等资料,检测患儿住院时冻存的血清标本中白喉毒素(DT)-IgG和百日咳毒素(PT)-IgG水平,分析百白破疫苗接种、百日咳近期或现症感染情况.结果:670例咳嗽患儿中,88.8％的患儿DT-IgG阳性,提示该组患儿普遍接种过百白破疫苗,仅有32.2％的患儿PT-IgG抗体水平处于检测限以上;诊断为肺炎与哮喘的患儿中分别有5例(0.8％)与6例(10.0％)存在百日咳近期或现症感染.结论:在小儿呼吸科住院治疗的肺炎和哮喘患儿中有少数百日咳近期或现症感染患儿未被诊断,应予以重视.

百日咳是传染性强、感染率高的急性呼吸道传染病,主要感染婴幼儿,是婴儿死亡的主要原因之一.百日咳鲍特菌(Bordetella pertussis)是引起百日咳的最主要病原菌.近年来世界各地多次出现百日咳暴发,迫切需研制更加有效的新型百日咳疫苗.本研究构建了一株减毒百日咳活疫苗BPTM1,利用同源重组方法敲除编码百日咳鲍特菌主要毒力因子百日咳毒素(pertussis toxin,PTX)和皮肤坏死毒素(dermonecrotic toxin,DNT)的基因,并用大肠埃希菌的同源基因置换了负责气管细胞毒素(tracheal cytotoxin,TCT)转运的基因 ampG.通过聚合酶链反应验证毒素及相关基因的敲除和置换,蛋白免疫印迹法检测表明PTX的S1亚基未表达.体外生长曲线和体内定植曲线均表明,相比于野生型百日咳鲍特菌BPMM,减毒BPTM1的生长和定植能力未受影响,其所致肺部病理效应减轻,而所诱导的百日咳鲍特菌特异性IgG、IgG1、IgG2a抗体保持高水平.本研究表明,减毒百日咳鲍特菌BPTM1有可能成为百日咳候选疫苗.