目的:构建猪带绦虫重组质粒pET30a-富含亮氨酸重复序列（LRR）结构域15（LRRC15），原核表达纯化的LRRC15重组蛋白，制备兔多克隆抗体。方法:采用全基因合成方法，获得猪带绦虫LRRC15蛋白编码基因；将其克隆至pET30a载体，构建重组质粒pET30a-LRRC15，并进行双酶切PCR鉴定；将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达LRRC15重组蛋白，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析鉴定表达产物；用Ni-IDA亲和层析柱纯化LRRC15重组蛋白，SDS-PAGE进行分析鉴定；蛋白质印迹法（Western blot，WB）鉴定纯化重组蛋白特异性；用纯化的LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，制备LRRC15多克隆抗体，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定纯化多克隆抗体的效价。结果:经PCR鉴定，扩增出长度为1 506 bp的条带，与LRRC15基因相符；经SDS-PAGE和WB鉴定，获得相对分子质量（ Mr）约为55.36 × 10 3的LRRC15目的蛋白；用LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，获得LRRC15多克隆抗体，其效价为1∶1 587 200。 结论:成功构建重组质粒pET30a-LRRC15，制备出猪带绦虫LRRC15重组蛋白，并获得了高纯度、高效价的LRRC15重组蛋白兔抗多克隆抗体。

自身免疫病的发病率逐年增加,严重威胁着人类健康.临床试验显示,服用猪鞭虫卵可以改善炎症性肠病和多发性硬化的临床表现.免疫学研究表明,猪鞭虫分泌或排泄产物可以调节细胞因子的释放和辅助性T细胞的分化.本文从猪鞭虫感染和机体免疫应答、猪鞭虫治疗IBD、猪鞭虫治疗MS、猪鞭虫治疗自身免疫病的机理等几方面对猪鞭虫治疗自身免疫病的效果和机制的研究进展做一综述.

有机阴离子转运蛋白(OAT)是一类底物特异性差、主要表达于屏障上皮细胞的转运蛋白,属于溶质载体超家族(SLC).此类蛋白主要位于肾近曲小管,在其他器官如肝、脑和胎盘也有分布,主要负责内源性和外源性有机阴离子的重吸收和分泌,介导众多带负电的体内代谢产物(包括尿酸、前列腺素、神经递质酸性代谢终产物、甾体激素等)和多种药物的跨细胞膜转运,对药物的排泄和药代动力学特性有重要影响.本文就目前发现的OAT家族各亚型成员的研究进展进行综述.

目的 将猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B3基因进行原核表达,分析重组蛋白的免疫反应性. 方法 根据Ts8B3基因序列设计引物,以囊尾蚴RNA反转录的cDNA为模板PCR扩增Ts8B3基因,扩增产物经BamH I /Xho I双酶切后连接至原核表达载体pGEX 4T-1,将重组质粒转化人大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli BL21,用异丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物.纯化重组蛋白,以囊虫病人血清为一抗,采用Western blot分析其免疫反应性.结果 PCR扩增Ts8B3基因片段为201 bp,双酶切和测序显示重组表达质粒构建成功.重组质粒转化BL21后经IPTG诱导4h,以包涵体的形式表达相对分子质量单位(Mr)为33×103的目的蛋白.纯化的重组蛋白能被囊虫病患者血清识别. 结论 成功构建Ts8B3基因重组质粒,表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础.

何立群教授是上海中医药大学曙光医院肾内科科主任、主任医师、博士生导师,从事临床研究30余载,对慢性肾功能衰竭的治疗有着丰富的临床经验,通过长期研究总结出了一套行之有效的治法和方药.余有幸是从何立群,现将其临床经验总结如下:慢性肾衰竭是由于多种原因如慢性肾炎,糖尿病,高血压等引起的肾脏实质性损害及进行性恶化的结果,是机体在排泄代谢产物,调节水、电解质、平衡酸碱以及产生和灭活某些内分泌活性物质的等方面出现紊乱所引发的一系列临床综合征.

肾脏在维持人体内环境平衡方面起到重要作用,其主要功能是形成尿液排泄代谢产物,维持机体内水、电解质及酸碱平衡.肾脏具有内分泌功能,通过产生肾素、促红细胞生成素、1,25-二羟维生素D3等参与血压调节、生成红细胞和参与钙磷代谢过程.肾脏疾病包括先天性发育异常、肾脏弥漫性或局灶性内科性疾病、肾脏肿瘤性病变、肾移植等,许多全身性疾病在肾脏也会有相应的表现,如高血压、糖尿病、急慢性心功能不全及各种原因所致的急慢性肾功能不全.MRI具有软组织分辨率高和多参数成像的特点,可以清晰地显示肾脏实质和集合系统的形态表现,对肾脏占位性病变能提供多种诊断信息.由于肾脏含水量丰富,具有血流灌注丰富、血氧代谢活跃的特点,为肾脏功能MRI尤其是无需外源性对比剂的MRI技术的应用提供了理论基础,可以早期发现肾脏的功能变化,早期诊断疾病,为临床提供有价值的信息.目前肾脏功能MRI中应用最为成熟的是MRI扩散加权成像(diffusion weighted imaging,DWI),其定量评价基础是水分子表观扩散系数(apparent diffusion coefficient,ADC),它能够提供组织内水分子的扩散和灌注信息.本文对MRI在肾脏疾病中的研究进展作一述评.

目的 初步探讨大片形吸虫排泄分泌产物(FgESP)对体外培养LO2人肝细胞的增殖及对肝细胞损伤相关的生化指标的影响.方法 将LO2人肝细胞分为5个密度组(1 000、3 000、5 000、7 000、10 000个/孔),铺于96孔板中,空白对照组只加入培养基,根据LO2细胞生长曲线选择最适细胞铺板密度.在96孔板中,以最适细胞密度铺板,分为0.02、0.10、0.20、0.40、1.00 mg/ml FgESP等5组,每组设4个重复,以PBS作为阴性对照组,在培养箱中孵育4、8、12、24、48和72 h后进行MTT细胞活性检测,测吸光度(A490值).在24孔板中,分为0.02、0.10、0.20、0.40、1.00 mg/ml FgESP等5组,每组设3个重复,以PBS作为阴性对照组,分别在培养4、8、12、24、48和72 h后,收集LO2细胞上清,测定碱性磷酸酶(ALP)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、白蛋白(ALB)的含量.采用GraphPad Prism 6.0软件进行统计学分析.结果 根据LO2人肝细胞生长曲线,筛选出5 000个/孔为96孔板最佳铺板密度.FgESP作用72 h后,MTT细胞活性检测结果显示,0.02、0.10、0.20、0.40、1.00 mg/ml FgESP等5组的A 490值分别为1.29±0.01、1.28±0.06、1.13±0.08、0.97±0.06、0.25±0.01,均低于对照组(1.45±0.05) (P＜ 0.01).生化指标检测结果显示,0.40、1.00 mg/ml FgESP作用细胞LO2人肝72 h后,ALT含量分别为2.00±0.00、3.67±0.58,AST含量分别为5.33±0.58、7.67±0.58,均高于对照组的(P＜0.01);作用48 h后,1.00 mg/ml FgESP组ALT、AST含量分别为2.00±0.00、7.00±0.00,高于对照组的0.33±0.58、3.67±0.58 (P＜ 0.01);在12～72 h内,0.10、0.20、0.40、1.00 mg/mlFgESP作用后ALP含量升高(P＜0.01),而0.02 mg/ml FgESP仅在作用72 h后ALP含量升高(P＜0.01);各实验组ALB含量与阴性对照组差异无统计学意义(P＞0.05).结论 FgESP体外作用可抑制LO2人肝细胞增殖能力,且细胞增殖的抑制及损伤程度与FgESP的浓度相关.

目的 研究正电子核素11C标记Notch通路抑制剂(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰基-S-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT)的制备方法,并进行正常兔PET/CT的初步动态显像.方法 采用细胞计数Kit-8法检测不同浓度DAPT和CH3-DAPT对人胰腺癌细胞株MiaPaCa-2增殖的影响,并计算半抑制浓度(IC50).以DAPT为前体,使用全自动合成仪进行合成,得到产物11C-N-甲基-DAPT(简称11C-DAPT),并用高效液相色谱(HPLC)仪进行分离纯化.正常新西兰兔静脉注射125.8 MBq(3.4 mCi) 1C-DAPT后,用PET/CT进行全身动态扫描.在不同器官勾画感兴趣区,测量放射性浓度随时间的动态变化.结果 DAPT和CH3-DAPT均可抑制人胰腺癌MiaPaCa-2细胞的增殖,呈浓度依赖关系,72 h的IC50分别为64.2、180.0 μmol/L.1C-DAPT合成过程大约30 min,未校正放射化学产率为25％ ～ 35％,放射化学纯度＞95％.11C-DAPT主要经肾脏排泄,全身脏器中肾脏摄取最高,肝脏、肠道、肺和脑摄取低.静脉注射后7 min肝脏、肾脏摄取达到高峰,28 min后降低＞50％.结论 11C-DAPT的合成过程简便、快速,放射化学纯度高.PET/CT的初步显像为进一步探索11C-DAPT作为胰腺癌新型靶向分子探针奠定了基础.

目的 原核表达猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B2基因,分析重组蛋白的免疫反应性. 方法 参照GenBank中Ts8B2基因序列设计引物,以合成基因为模板获得预期DNA片段,双酶切后连接至原核表达载体pGEX-4T-1.将重组质粒转化入大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli Rosstea,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物.尿素法提取重组蛋白,然后以脑囊虫病患者血清为一抗,Western blot分析其免疫反应性. 结果 Ts8B2基因PCR扩增产物为258bp,与理论值一致.双酶切和测序鉴定重组表达质粒构建成功,SDS-PAGE分析重组质粒转化菌表达相对分子质量为3.5×103,以包涵体形式存在目的蛋白,Western blot分析尿素法提取的重组蛋白能被脑囊虫患者血清识别. 结论 成功构建Ts8B2基因重组表达质粒表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础.

寄生虫感染和癌症关系复杂,具有促癌和抑癌两方面的作用.感染埃及血吸虫、麝后睾吸虫、华支睾吸虫等具有明确的致癌和促癌作用,这类蠕虫在宿主体内可能通过物理损伤引起细胞增生和分化、通过慢性病理性炎症激活信号转导通路、通过寄生虫来源的排泄和分泌产物引起代谢性氧化应激损伤,影响宿主细胞的基因组稳定性,引起细胞的分化和恶变,最终诱导宿主癌症的发生.而恶性疟原虫、克氏锥虫、弓形虫等寄生虫感染具有抑癌作用,主要表现为诱导宿主产生抗肿瘤免疫反应、抑制肿瘤新生血管生成及抑制肿瘤的侵袭和转移,部分针对应用寄生虫相关生物因子治疗癌症的研究已经取得一定的进展.本文综述寄生虫感染与癌症之间的复杂关系以及两者相互作用的机制.