硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）属于过氧化物氧还蛋白超家族一员，广泛表达于寄生虫各个生长发育阶段及其排泄分泌物中。一方面，重组TPx蛋白可参与宿主免疫调控；另一方面，重组TPx蛋白作为诊断性抗原具有较高的敏感性和特异性，可用于寄生虫病的免疫诊断；此外，还可作为候选疫苗分子用于寄生虫病的免疫预防。文中就人体重要寄生虫重组TPx蛋白对宿主免疫调控、免疫诊断及免疫预防的研究进展做一综述。

目的:构建猪带绦虫重组质粒pET30a-富含亮氨酸重复序列（LRR）结构域15（LRRC15），原核表达纯化的LRRC15重组蛋白，制备兔多克隆抗体。方法:采用全基因合成方法，获得猪带绦虫LRRC15蛋白编码基因；将其克隆至pET30a载体，构建重组质粒pET30a-LRRC15，并进行双酶切PCR鉴定；将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21（DE3）感受态细胞，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达LRRC15重组蛋白，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析鉴定表达产物；用Ni-IDA亲和层析柱纯化LRRC15重组蛋白，SDS-PAGE进行分析鉴定；蛋白质印迹法（Western blot，WB）鉴定纯化重组蛋白特异性；用纯化的LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，制备LRRC15多克隆抗体，用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）测定纯化多克隆抗体的效价。结果:经PCR鉴定，扩增出长度为1 506 bp的条带，与LRRC15基因相符；经SDS-PAGE和WB鉴定，获得相对分子质量（ Mr）约为55.36 × 10 3的LRRC15目的蛋白；用LRRC15重组蛋白免疫新西兰兔，获得LRRC15多克隆抗体，其效价为1∶1 587 200。 结论:成功构建重组质粒pET30a-LRRC15，制备出猪带绦虫LRRC15重组蛋白，并获得了高纯度、高效价的LRRC15重组蛋白兔抗多克隆抗体。

目的 研究旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原(Trichinella spiralis muscle larvae excretory-secretory,Ts-Es)诱导小鼠肠道保护性免疫能力以及免疫调节作用.方法 54只BALB/c小鼠随机分为3组,空白对照组、旋毛虫感染组(Ts)、旋毛虫Ts-Es抗原免疫组(Ts-Es).空白组小鼠腹腔注射PBS;抗原免疫组小鼠腹腔注射0.1 mL的Ts-Es抗原与等量弗氏完全佐剂;旋毛虫感染组腹腔注射PBS和弗氏完全佐剂,每隔7d注射1次,共3次,末次注射后7d旋毛虫感染组和Ts-Es抗原免疫组用400条/mL旋毛虫感染性幼虫灌胃攻击感染.解剖取材,检查肠道成虫及肌肉幼虫减虫率,用HE染色法观察肠道病理变化,RT-qPCR法检测小肠中 目的基因mRNA表达水平.结果 与旋毛虫感染组相比Ts-Es抗原免疫组成虫和肌幼虫减虫率分别为49％(t=8.109,P＜0.05)和67％(t=8.090,P＜0.05);与空白对照组相比旋毛虫感染组小肠T-bet(t=5.25,P＜0.05)、GATA3(t=2.50,P＜0.05)、RORγ-t(t=4.71,P＜0.05)、IFN-γ(t=3.17,P＜0.05)、IL-4(t=2.60,P＜0.05)、IL-5(t=3.05,P＜0.05)、IL-17A(t=4.88,P＜0.05)mRNA表达量升高,Foxp3表达量没有统计学差异(t=1.55,P＞0.05);与旋毛虫感染组相比 Ts-Es 抗原 免疫组 T-bet(t=4.23,P＜0.05)、RORγ-t(t=4.30,P＜0.05)、IFN-γ(t=3.02,P＜0.05)、IL-17A(t=3.17,P＜0.05)mRNA 表达量 下降;GATA3(t=3.96,P＜0.05)、Foxp3(t=2.76,P＜0.05)、IL-4(t=5.16,P＜0.05)、IL-5(t=3.69,P＜0.05)、IL-10(t=2.61,P＜0.05)mRNA 表达量升高;与空白对照组相比 Ts-Es 抗原免疫组 GATA3(t=6.4,P＜0.05)、Foxp3(t=4.32,P＜0.05)、IL-10(t=2.6,P＜0.05)、IL-4(t=7.26,P＜0.05)、IL-5(t=6.3,P＜0.05)mRNA 表 达量升高均有统计学差异;RORγ-t(t=0.41,P＞0.05)、T-bet(t=1.02,P＞0.05)、IFN-γ(t=0.09,P＞0.05)、IL-17A(t=1.80,P＞0.05)mRNA表达量无统计学差异;肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转,肠道HE染色结果显示,与旋毛虫感染组相比抗原免疫组炎症好转.结论 Ts-Es抗原免疫小鼠后可诱发转录因子GATA3,Foxp3相关的混合型免疫应答,并抑制旋毛虫感染引起的T-bet、RORγ-t所介导的炎症型免疫反应,抑制炎型细胞因子的释放,诱导宿主产生抗旋毛虫感染的免疫保护效果.

目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(Excretory secretory antigen,ESA)富含亮氨酸重复序列结构域(Leucine-rich repeat containing 15,LRRC15)蛋白对仔猪树突状细胞(Dendritic cell,DC)成熟活化的影响.方法 收集正常仔猪DC体外诱导、培养,获得成熟与未成熟DC(immature DC,imDC).在正常仔猪未成熟DC中,分别加入LRRC15蛋白、ESA刺激,将LRRC15组作为实验组;同时建立ESA对照组、LPS阳性对照组、LRRC15+LPS阳性对照组、LPS+ESA阳性对照组和培养基阴性对照组.流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达量;ELISA检测DC细胞培养上清TNF-α、IL-6、IL-10、IL-12的分泌水平.结果 与未刺激DC组相比,LRRC15蛋白组诱导DC表面标志物CD80、CD86、MHC-Ⅱ表达均增加.在LPS存在情况下,LRRC15蛋白也能诱导CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子上调;ELISA检测结果显示,与1640培养基组、LPS组和ESA组相比,LRRC15蛋白组均诱导IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α分泌 降低,LRRC15蛋白组与1640培养基组相比 IL-6(t=7.529,P＜0.05),IL-10(t=2.780,P＜0.05),IL-12(t=4.673,P＜0.05),TNF-α(t=2.894,P＜0.05);LRRC15蛋白组与 LPS 组相比 IL-6(t=26.663,P＜0.05),IL-10(t=12.038,P＜0.05),IL-12(t=27.594,P＜0.05),TNF-α(t=29.540,P＜0.05);LRRC15 蛋白组与 ESA 组相比 IL-6(t=6.343,P＜0.05),IL-10(t=2.579,P＜0.05),IL-12(t=8.102,P＜0.05),TNF-α(t=3.890,P＜0.05).ESA组与1640培养基组相比能诱导IL-12分泌(t=3.430,P＜0.05),其他细胞分子分泌水平差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 LRRC15蛋白能诱导DC成熟活化,并抑制DC相关细胞因子的分泌,但能否通过其他途径诱导Th细胞分化还需进一步分析.

目的 探讨猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ESA)硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)对仔猪树突状细胞(DC)活化的影响.方法 体外诱导培养健康仔猪髓源DC,培养7 d后,加入终浓度为100 ng/ml的脂多糖(LPS)刺激,继续孵育2d,分别收集培养未成熟DC(imDC)和成熟DC(mDC),光学显微镜和扫描电镜下观察其培养1～9 d的形态学变化,流式细胞术检测其表面标志物CD1和主要组织相容性复合体Ⅱ(MHC-Ⅱ)的表达情况.另收集培养后7 d的imDC,设阴性对照组、TPx组、排泄分泌抗原(ESA)组、LPS阳性对照组,分别加入 RPMI 1640 培养基、TPx(50μg/ml)、ESA(50μg/ml)、LPS(100 ng/ml)刺激 48 h后,流式细胞术检测DC表面标志物MHC-Ⅱ、CD80、CD86的表达情况;ELISA检测DC细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、1L-10、IL-12的分泌水平.多组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验.结果 光学显微镜下可见,培养第1天,imDC呈卵圆形,形态单一;随着培养时间延长,DC体积逐渐增大,出现伪足和刺突等,并从卵圆形变为不规则状.扫描电镜下可见,与imDC相比,mDC形态不规则,大致呈长梭形,从胞体辐射出众多长短不一的突起,呈树枝状分布,为典型的树突状结构.流式细胞术检测结果显示,imDC中表达CD1、MHC-Ⅱ的DC占比分别为(0.113±0.005)％、(0.430+0.016)％,低于 mDC 的(21.400±0.327)％、(21.333±0.450)％(t=130.341、92.906,均P＜0.05).TPx 组表达 MHC-Ⅱ、CD80、CD86 的 DC 占比分别 为(15.300±0.245)％、(22.900±0.374)％、(13.033±0.249)％,均低于 LPS 阳性对照组的(19.000±0.374)％、(31.600±0.082)％、(21.300± 0.245)％(t=11.53、46.32、43.84,均P＜0.05)和 ESA 组的(18.365±0.618)％、(40.400±0.356)％、(30.300±0.283)％](t=9.55、93.17、91.57,均P＜0.05);TPx 组表达 MHC-Ⅱ 的 DC 占比高于阴性对照组的(12.133±0.492)％(t=9.87,P＜0.05).ELISA检测结果显示,培养上清中,TPx组DC分泌IL-6水平为 15.682±0.660,低于阴性对照组的 21.041±0.901(t=6.51,P＜0.05);分泌 TNF-α、IL-6、IL-10 和 IL-12水平均低于 LPS 阳性对照组的 169.037±7.823、42.118±1.932、34.730±1.772、52.504±2.431(t=36.79、32.09、13.09、35.05,均P＜0.05);分泌 IL-12 水平低于 ESA 组的 23.854±1.020(t=6.93,P＜0.05).结论 TPx通过诱导DC表面MHC-Ⅱ高表达、CD80和CD86低表达,以及降低IL-6的分泌水平来介导免疫耐受.

外源性过敏性肺泡炎(Extrinsic Allergic Alveolitis,EAA),又称为过敏性肺炎(Hypersensitivity Pneumonitis,HP),它是由于人体吸入各种抗原性有机物质而引起的一种间质性肺病[1].农民肺、化学人工肺、蘑菇肺、鸽子肺等均属于过敏性肺炎的范畴,以往在临床上属于少见病,近些年,其发病率愈发增高.其中,鸽子肺又称为饲鸽者肺(PigeonBreeder's lung,PBL),当敏感个体反复长期吸入鸽子的分泌排泄物,远端支气管及肺泡会发生过度的免疫应答,其临床症状与普通肺部感染相似,可表现为咳嗽、咳痰、气短、呼吸困难等,但起病更急,病情更重,多数患者因就诊不及时或误诊导致疾病逐渐发展甚至演变为肺间质纤维化,出现肺动脉高压、肺源性心脏病等重度并发症[2,3],严重影响患者生存质量.现收集我院经临床证实的5例PBL患者的材料进行回顾性分析,以期提高对本病临床特征及影像学表现的认识,有助于早期诊断及治疗、改善患者的预后和提高生活质量.

弓形虫是一种有核细胞专性寄生虫,可引起人兽共患病——弓形虫病,弓形虫疫苗是防控此病的关键.本文就国内外研究的现状,简要介绍了弓形虫排泄分泌抗原(E/SA)疫苗、全虫疫苗、核酸疫苗、活载体疫苗和基因工程疫苗的研究情况,希望可为有效控制弓形虫病提供参考.

目的 将猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B3基因进行原核表达,分析重组蛋白的免疫反应性. 方法 根据Ts8B3基因序列设计引物,以囊尾蚴RNA反转录的cDNA为模板PCR扩增Ts8B3基因,扩增产物经BamH I /Xho I双酶切后连接至原核表达载体pGEX 4T-1,将重组质粒转化人大肠埃希菌DH5α(E.coli DH5α),PCR、双酶切筛选阳性质粒,测序确认后转化至E.coli BL21,用异丙基-βD-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测表达产物.纯化重组蛋白,以囊虫病人血清为一抗,采用Western blot分析其免疫反应性.结果 PCR扩增Ts8B3基因片段为201 bp,双酶切和测序显示重组表达质粒构建成功.重组质粒转化BL21后经IPTG诱导4h,以包涵体的形式表达相对分子质量单位(Mr)为33×103的目的蛋白.纯化的重组蛋白能被囊虫病患者血清识别. 结论 成功构建Ts8B3基因重组质粒,表达的重组蛋白具有免疫反应性,为进一步研究该蛋白在抗体检测中的应用奠定了基础.

制备可溶性表达的重组日本血吸虫信号传导蛋白14-3-3 (rSj 14-3-3)并优化表达条件,分析其免疫学特性和免疫诊断价值.成功构建了BL21/pET30a-rSj 14-3-3表达菌株,最佳的表达体系为细菌生长至OD600为0.6～1.0时加入IPTG至最佳终浓度0.1 mmol/L,28℃诱导16h.上清液中可溶性的rSj14-3-3蛋白纯化后的浓度为2.804 mg/mL.以rSj 14-3-3为抗原,间接ELISA检测显示,48份急性与35份慢性血吸虫病患者血清的抗体阳性率分别为95.6％和92.0％;与27份华支睾吸虫和15份钩虫患者血清的交叉反应率分别为7.4％和6.7％;与30份健康人血清假阳性反应率为0％.抗rSj14-3-3兔血清及所制备的多抗可被纯化出的rSj14-3-3蛋白及血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然Sj14-3-3分子的反应,且多抗效价达1∶1 280 000.本研究成功表达并纯化出rSj14-3-3蛋白,优化了其诱导表达条件,且此蛋白具有较高的抗原特异性.

目的 制备重组刚地弓形虫微线体蛋白10(MIC10),并对其免疫学特性进行分析. 方法 利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从弓形虫总RNA中反转录制备第一链cDNA,再利用特异性引物从cDNA中扩增出编码MIC10的基因片段,构建重组表达质粒pET28a-MIC10,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)后用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过镍螯合亲和层析法纯化重组MIC10蛋白.用纯化的重组蛋白免疫家兔,制备抗MIC10多克隆抗体,采用Western blot分析重组MIC10蛋白的免疫学特性. 结果 采用RT-PCR法从弓形虫cDNA中反转录扩增到长度约为416bp的特异性DNA,基因序列分析证实为编码MIC10的基因片段;制备的重组表达质粒pET28a-MIC10转化大肠埃希菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,能表达重组MIC10蛋白;用纯化的重组MIC10蛋白免疫家兔,血清抗体效价达到1∶200 000以上.Western blot分析显示该抗体能识别弓形虫排泄分泌抗原中的天然MIC10分子而不识别弓形虫成虫抗原,证明MIC10为外分泌蛋白. 结论 制备了具有天然免疫原性的重组弓形虫MIC10蛋白,并证明该蛋白为外分泌蛋白.