目的:研究改性柑橘果胶（MCP）对兔关节软骨细胞的糖酵解代谢的影响。方法:分离、培养兔膝关节软骨细胞至第3代后，分别用含0、500 μg/ml MCP的培养液（MCP0和MCP500）培养3 d，设MCP0为对照组；连续传代培养软骨细胞，每代软骨细胞分别以MCP0和MCP500培养3 d；以白细胞介素-1β（IL-1β）处理软骨细胞1 d后，再分别用MCP0和MCP500培养3 d。以2-脱氧-葡萄糖（2DG）处理软骨细胞1 d后，再分别用MCP0和MCP500培养3 d；于培养3 d后，通过CCK-8方法检测软骨细胞的相对增殖情况；利用葡萄糖和乳酸检测试剂盒测定软骨细胞的葡萄糖摄取量和乳酸生成量；通过免疫荧光染色方法考察连续传代软骨细胞的Ⅱ型胶原α1（COL2A1）合成情况；采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测软骨细胞的 COL2A1、蛋白聚糖（ ACAN）、性别决定区Y框蛋白9（ SOX9）、缺氧诱导因子-1α（ HIF-1α）、葡萄糖转运蛋白-1（ Glut-1）、丙酮酸激酶M2（ PKM2）、乳酸脱氢酶A（ LDHA）和葡萄糖转运蛋白-3（ Glut-3）的基因表达情况。 结果:与对照组相比，MCP处理提高了软骨细胞的葡萄糖摄取量和乳酸生成量，上调了 ACAN、 HIF-1α、 Glut-1和 PKM2的基因表达水平；与对照组相比，连续传代过程中，MCP可以促进软骨细胞的增殖、维持软骨细胞的表型，上调 COL2A1、 ACAN、 SOX9、 HIF-1α、 Glut-1、P KM2和 LDHA的基因表达，提高软骨细胞COL2A1合成量和乳酸生成量；在经IL-β处理后，与对照组相比，MCP处理提高了软骨细胞的葡萄糖摄取量，上调了 COL2A1、 ACAN、 HIF-1α和 Glut-1的基因表达。在经2DG处理后，MCP处理提高了软骨细胞的葡萄糖摄取量，上调 SOX9、 HIF-1α、 PKM2和 Glut-3的基因表达。 结论:MCP能够增强软骨细胞的葡萄糖摄取能力，提高软骨细胞糖酵解代谢水平。

目的:研究改性柑橘果胶（MCP）对滑膜成纤维细胞（SF）及半乳糖凝集素-3（Gal-3）诱导处理后SF细胞的代谢活性及相关基因表达情况的影响。方法:分离、培养兔SF细胞，分别用不同质量浓度（0、250、500、750 mg/L）MCP的培养液处理SF细胞，同时用10 μg/ml Gal-3诱导24 h后进一步进行MCP处理SF细胞；分别于处理的第1、3、5天，通过CCK-8检测SF细胞的增殖活性；利用实时荧光定量PCR检测SF细胞的转化生长因子-β1（TGF-β1）、Ⅰ型胶原（COL1A2）及Gal-3的mRNA表达情况，并通过免疫荧光染色法考察SF细胞的COL1A2合成情况。结果:在第1、3、5天，不同质量浓度MCP均对SF细胞增殖有抑制作用（均 P<0.05）。与对照组相比，不同浓度的MCP可以引起不同的基因表达，高浓度的MCP上调了SF细胞的TGF-β1、COL1A2和Gal-3的mRNA表达；同时，MCP对SF细胞的COL1A2蛋白合成无影响。Gal-3诱导后，MCP处理可以下调TGF-β1和COL1A2的mRNA表达，且可以显著降低COL1A2蛋白的合成；尤其是500 mg/L MCP可以明显降低TGF-β1、COL1A2和Gal-3的mRNA表达。 结论:MCP具有抑制SF细胞过度增殖、调控SF细胞基因表达的作用。

目的 通过使用Galectin-3特异性配体拮抗剂改良柑橘果胶(modified citrus pectin,MCP)对肺动脉高压(PAH)动物模型进行干预,探讨MCP对PAH的治疗效果.方法 SD大鼠随机分为对照组、野百合碱(MCT)组、MCT+生理盐水组(MCT+saline)、MCT+MCP组.MCT组通过皮下注射MCT构建PAH模型,MCT+MCP组在注射MCT后使用MCP溶液灌胃.MCT+saline组在注射MCT后使用生理盐水灌胃.对照组在常规条件下饲养.对各组大鼠进行血流动力学、心脏形态、组织学及蛋白质表达等方面的检测.同时还检测PAH患者与健康对照者血浆中的Galectin-3水平.结果 PAH患者血浆Galectin-3水平较健康受试者显著升高(P＜0.05).MCP能显著降低MCT诱导的PAH大鼠的肺动脉平均压、右室收缩压及大鼠右室/(左室+室间隔)重量比.PAH大鼠肺动脉血管重构明显,MCP能显著减轻PAH大鼠肺动脉血管重构,但MCP并不能减轻Galectin-3在肺血管外膜中的表达.MCP能显著减少PAH大鼠肺组织中的collagen Ⅰ、collagen Ⅲ蛋白含量,但MCP并不能减轻Galectin-3蛋白在PAH大鼠肺组织中的表达.结论 MCP能够减低PAH大鼠的肺动脉压力,显著减轻PAH大鼠的肺动脉血管重构,表明Galectin-3在PAH的发病机制中起重要作用,靶向干预Galectin-3可能为PAH治疗提供新的思路.

目的 探讨D-阿洛糖(D-allose)对小鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)的神经功能恢复、半乳糖凝集素-3(Gal-3)、腺苷一磷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(AMPK/mTOR)及部分炎症因子表达的影响.方法 C57BL/6雄性小鼠50只,随机分为对照组(Con组)、假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注损伤组(MCAO组)、脑缺血再灌注损伤+D-阿洛糖组(MCAO+D-allose组)及脑缺血再灌注损伤+改良柑橘果胶组(MCAO+MCP组).采用线栓法建立大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)模型.造模成功后对小鼠进行Longa神经功能评分及转棒行走评分;采用TTC染色法观察脑梗死灶体积;通过Western blot及RT-PCR技术检测Gal-3、自噬相关分子的表达水平;免疫荧光技术检测脑组织中Gal-3的分布情况;试剂盒检测TNF-α,IL-8分泌.结果 相较于Con组和Sham组,MCAO模型可增加小鼠神经功能评分(P＜0.01)、增加脑梗死体积(P＜0.01)、上调Gal-3的表达并增强自噬(P＜0.01).给予D-阿洛糖及Gal-3抑制剂MCP治疗后可改善神经功能障碍、减小脑梗死体积(P＜0.01),并降低Gal-3的表达(P＜0.01),抑制AMPK磷酸化,促进mTOR磷酸化,抑制自噬(P＜0.01).结论 D-阿洛糖可有效促进CIRI小鼠神经功能恢复和减小梗死灶体积,其机制可能是通过下调Gal-3的表达进而抑制组织损伤后细胞过度自噬,并减少TNF-α,IL-8等炎性因子释放,从而发挥神经保护作用.

目的 检测改良性柑橘(MCP)对人膀胱癌增殖和生长的抑制作用.方法 MTT检测膀胱癌细胞T24和J82细胞的活性.Western blot检测T24和J82细胞中凋亡蛋白cv Caspase-3和cv PARP以及Galectin-3蛋白的表达水平.建立膀胱癌T24细胞皮下移植瘤裸鼠模型,灌胃MCP后,比较各组肿瘤重量和体积大小,免疫组化的方法检测各组别的增殖蛋白Ki67和凋亡蛋白cv Caspase-3以及Galectin-3蛋白表达水平的差异性.显微镜观察分析结果.结果 MTT结果证实MCP对人膀胱癌细胞T24和J82细胞活力有抑制作用(P＜0.05).Western blot证实浓度为2.0％的MCP组别中膀胱癌细胞凋亡蛋白表达明显增高.灌胃MCP对T24移植瘤荷瘤裸鼠的肿瘤体积和重量均有明显的抑制(P＜0.05),免疫组织化学染色定量分析表示700mg/kg组荷瘤鼠组织内Ki67和Caspase-3证实增殖指数降低(P＜0.05),其潜在靶点Galectin-3表达降低.结论 本课题研究显示MCP对膀胱癌细胞的增殖和存活的显著抑制作用,且Galectin-3表达降低.故MCP作为一种天然的膳食纤维,同样可以作为药物预防和治疗膀胱癌.

改性柑橘果胶是果胶水解得到分子质量和酯化度降低、无分支的果胶改性分子,是一种功能丰富的多糖;与果胶相比,其分子质量小、酯化度低、无分支,易通过小肠上皮吸收进入血液循环.改性柑橘果胶通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、增强免疫细胞活性、增加肿瘤细胞对化疗与放疗的敏感性等对多种肿瘤发挥作用,显著抑制肿瘤的生长和转移.本文综述了改性柑橘果胶的抗肿瘤作用及其相关机制的研究的最新进展,旨在促进其在抗肿瘤药物开发和靶向治疗中的应用.

半乳糖凝集素-3(Gal-3)在多种慢性疾病的发生和发展中起重要作用.血液或相关组织中Gal-3蛋白水平的升高在代谢性疾病(肥胖、非酒精性脂肪性肝炎、2型糖尿病等)和心血管疾病(动脉粥样硬化、冠心病、心力衰竭和血管栓塞等)的发生发展中发挥关键作用.Gal-3抑制剂(如柑橘果胶、GR-MB-02以及N-乙酰基-丝氨酸-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸)能有效改善肥胖、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝炎及心力衰竭.未来,深入研究Gal-3的表达调控对于研发具有良好药理活性的防治代谢和心血管疾病的药物具有重要意义.

背景:半乳糖苷凝集素3是关节软骨损伤和骨关节炎发生、发展中重要的前炎性因子,也是该类疾病治疗的潜在靶点.改性柑橘果胶是半乳糖苷凝集素3的竞争性抑制剂,但目前改性柑橘果胶对关节软骨的作用尚不清楚.目的:考察改性柑橘果胶对体外培养软骨细胞及白细胞介素1β诱导的骨性关节炎软骨细胞代谢活性及相关基因表达的影响.方法:①收集兔膝关节软骨细胞,分别以0(正常对照),250,500,750 mg/L的改性柑橘果胶进行处理,处理1,3,5 d;②改性柑橘果胶后处理实验:收集兔膝关节软骨细胞,首先以白细胞介素1β处理24 h,再分别以0,250,500,750 mg/L的改性柑橘果胶处理1,3,5 d,同时设置正常对照;③改性柑橘果胶预处理实验:收集兔膝关节软骨细胞,首先分别以0,250,500,750 mg/L的改性柑橘果胶预处理6 h,再以白细胞介素1β处理1,3,5 d,同时设置正常对照.于对应的时间点,采用RT-qPCR检测软骨细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9、Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶13和半乳糖苷凝集素3的mRNA相对表达,进一步通过免疫荧光染色考察软骨细胞Ⅱ型胶原的合成.结果 与结论:①与正常软骨细胞相比,不同质量浓度的改性柑橘果胶处理可以增加软骨细胞的相对增殖活性,提高SOX9和Ⅱ型胶原的表达水平、降低Ⅰ型胶原、基质金属蛋白酶13和半乳糖苷凝集素3表达水平;②与正常对照组相比,两种白细胞介素1β处理后均会下调软骨细胞的蛋白聚糖、SOX9、Ⅱ型胶原的表达水平,上调半乳糖苷凝集素3、基质金属蛋白酶13的表达水平;③与单纯白细胞介素1β处理组比较,白细胞介素1β先处理+改性柑橘果胶处理可上调Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和SOX9的表达水平,降低半乳糖苷凝集素3、基质金属蛋白酶13和I型胶原的表达水平;改性柑橘果胶预处理+白细胞介素1β后处理可上调Ⅱ型胶原、蛋白聚糖和SOX9的表达,降低Ⅰ型胶原、半乳糖苷凝集素3和基质金属蛋白酶13的表达,但上调的Ⅱ型胶原和蛋白聚糖表达水平未能达到正常软骨水平;④结果表明在此次实验条件下,改性柑橘果胶具有增强软骨细胞增殖活性、维持其表型的作用;同时,改性柑橘果胶干预可改变白细胞介素1β诱导软骨细胞的基因表达,上调软骨细胞外基质合成及软骨形成转录因子相关基因的表达水平,下调分解代谢、炎性因子及去分化相关基因的表达水平.

目的 探讨半乳糖凝集素3(Gal-3)抑制剂通过降低Gal-3的表达和心肌纤维化改善大鼠缺血性心力衰竭的机制研究.方法 选择45只6～8周无特定病原体级雄性Wistar大鼠为研究对象,采用永久性结扎左冠状动脉前降支诱发缺血性心力衰竭大鼠模型,然后根据实验目的将大鼠分为对照组(假手术大鼠)、模型组(模型大鼠)和抑制剂组(模型大鼠),每组15只.对照组假手术大鼠给予10 mg/kg 0.9％氯化钠溶液灌胃,抑制剂组则在模型组基础上给予0.9％氯化钠溶液中添加0.15 mg·kg-1·d-1的柑橘果胶灌胃,连续4周.通过蛋白质印迹分析Gal-3、内质网钙离子结合蛋白(RCN-3)、反丁烯二酸酶、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原的蛋白表达.通过磁共振成像测量大鼠的射血分数,通过压力容量导管测量左心室收缩末期(LVESPVR)和舒张末期压力-容积关系(LVEDPVR).通过实时聚合酶链反应分析大鼠心肌中C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、转化生长因子-β(TGF-β)及结缔组织生长因子(CT-GF)的mRNA表达.通过测定试剂盒检测大鼠心脏谷胱甘肽(GSH)含量和过氧化氢酶(CAT)活性.结果 与对照组相比,模型组Gal-3蛋白表达、LVEDPVR、CRP、IL-1β、IL-6、TGF-β和CTGF的mRNA表达、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达均显著升高,RCN-3和反丁烯二酸酶蛋白表达、LVESPVR、左心室射血分数、GSH含量及CAT活性均显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);而与模型组相比,抑制剂组Gal-3蛋白表达、LVEDPVR、CRP、IL-1β、IL-6、TGF-β和CTGF的mRNA表达、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原蛋白表达均显著降低,RCN-3和反丁烯二酸酶蛋白表达、LVESPVR、左心室射血分数、GSH含量及CAT活性均显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Gal-3抑制剂可影响氧化还原途径,并通过减少Gal-3、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原及炎症因子的水平,从而改善缺血性心力衰竭大鼠的心肌纤维化及心功能.

目的 探讨半乳糖凝集素-3(Gal-3)诱导血管平滑肌细胞增殖及促进大鼠动静脉内瘘(AVF)狭窄发生的作用,并探讨可能机制.方法 取30只AVF大鼠,随机数字法分为AVF组、柑橘果胶组、联合组,每组10只;另取10只大鼠行假手术,设为假手术组.联合组灌胃柑橘果胶生理盐水溶液(含柑橘果胶0.15 mg/kg),尾静脉注射表皮生长因子[细胞外信号调节激酶(ERK)通路激动剂(EGF)](10 μg/kg);柑桔果胶组灌胃柑橘果胶生理盐水溶液(0.15 mg/kg),尾静脉注射等体积PBS;假手术组、AVF组灌胃等量生理盐水,尾静脉注射等体积PBS.每日1次.干预4周.MTT法检测血管平滑肌细胞增殖能力;ELISA法检测血清炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)]水平;ELISA法检测血管组织转化生长因子-β(TGF-β1)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平;Western blot法检测血管组织p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p-p38 M APK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达量.结果 与AVF组比较,柑橘果胶组 24、48、72 h 吸光度值,血清 TNF-α、IL-6 水平,血管组织 TGF-β1、VEGF 水平,p-p38 M APK/p38 M APK、p-ERK1/2/ERK1/2降低(P＜0.05);与柑橘果胶组比较,联合组24、48、72 h吸光度值,血清TNF-α、IL-6水平,血管组织TGF-β1、VEGF 水平,p-p38 MAPK/p38 M APK、p-ERK1/2/ERK1/2 升高(P＜0.05).结论 Gal-3 抑制剂改良柑橘果胶可抑制血管平滑肌细胞增殖及炎症反应,缓解AVF狭窄,并抑制ERK信号通路活性.