分析耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，CRKP）分子流行病学及探讨 blaKPC和 blaNDM水平传播机制，为预防和治疗CRKP提供参考依据。回顾性分析2022年1—12月湖南中医药大学第一附属医院临床非重复分离的CRKP，共计 49株。采用改良碳青霉烯灭活实验（mCIM）、EDTA-碳青霉烯灭活实验（eCIM）进行表型筛选；聚合酶链式反应（PCR）检测CRKP碳青霉烯耐药基因、β内酰胺酶耐药基因和毒力基因；多位点序列分析检测CRKP菌株的同源性。通过接合试验，推断 blaKPC和 blaNDM两种碳青霉烯耐药基因的水平传播机制。结果显示，本研究共收集到CRKP 49株，有44株携带 blaKPC，8株携带 blaNDM，其中同时携带 blaKPC和 blaNDM两种耐药基因的CRKP（ blaKPC+ blaNDM-CRKP）有3株。28株CRKP携带毒力基因（28/49，57.2%），1株CRKP拉丝试验阳性，且同时携带 Aerobactin和 rmpA两种毒力基因。共检出5种ST型，以ST11为主（41/49，83.7%）。3株 blaKPC-CRKP均接合成功，3株 blaNDM-CRKP仅1株接合成功，接合子菌株对亚胺培南以及头孢菌素类抗菌药物的敏感性均显著降低。综上，本研究CRKP耐药机制主要以产KPC酶为主，且同时携带多种β-内酰酶耐药基因，并有高毒力耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（high virulence carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae，hv-CRKP）和 blaKPC+ blaNDM-CRKP的局部流行。 blaKPC和 blaNDM可通过质粒水平传播，不同菌株的水平传播效率存在差异。

目的:分析1株碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的耐药及毒力特征。方法:将浙江大学医学院附属第二医院粪便中分离到的1株CRKP命名为肺炎克雷伯菌C35，采用微量肉汤稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度；全基因组测序和基因组分析确定菌株所携带耐药基因和毒力基因；核心基因组单核苷酸多态性（SNP）分型分析CRKP菌株之间的同源性关系；采用接合试验评估耐药基因的转移能力和效率；采用大蜡螟毒力实验测定菌株的毒力表型。结果:肺炎克雷伯菌C35对大多数受试药物耐药，尤其碳青霉烯类、舒巴坦和多黏菌素。SNP分型显示肺炎克雷伯菌C35与多株分离自本院不同病房的CRKP菌株具有很高的同源性。该菌属于ST11型，携带包括 blaKPC-2、 blaCTX-M-199、 mcr-1和 tet（A）变异体等在内的13种耐药基因。 blaKPC-2基因位于>69 800 bp的IncFⅡ型质粒上， blaCTX-M-199和 mcr-1基因共同位于>64 800 bp的IncI2型质粒上， tet（A）变异体位于83 628 bp的不可分型质粒上，3种质粒均为可接合性质粒。肺炎克雷伯菌C35还携带 rmpA和 rmpA2毒力基因以及气杆菌素（aerobactin）相关基因 iucABCD，为典型的碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌（CR-hvKP）。该菌在大蜡螟感染模型中也显示了较强的毒力表型，感染肺炎克雷伯菌C35菌株48 h后大蜡螟幼虫存活率仅为16.7%，明显低于无毒力对照菌株的80.0%。 结论:本研究在1株肠道定植CR-hvKP中检测到多个可接合性耐药质粒，包括同时携带 blaCTX-M-199和 mcr-1基因的IncI2质粒，需引起警惕，并对此类菌株进行主动监测。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)在临床高度流行，由于缺乏有效治疗药物而带来了显著挑战。 blaKPC-2编码的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶-2(KPC-2)是CRKP产生碳青霉烯抗性的主要原因之一。在中国和其他亚洲地区，Tn1721和IncFⅡ质粒是 blaKPC-2在缺乏规律间隔成簇短回文重复序列(CRISPR)和限制-修饰(R-M)系统的 Kpn ST11之间转移的主要载体。转座子的结构对耐药基因的转座频率有明显影响，这可能和不同转座子的转座模式有关系。 blaKPC-2在ST11中有流行优势与ST11免疫缺陷有重要联系，用重新设计的CRISPR/Cas3系统通过接合实验传递入ST11型肺炎克雷伯菌，高危IncFⅡ质粒可以被成功剪切，从而使ST11型CRKP恢复对抗生素的敏感性，这为CRKP的临床治疗和预防提供了新思路。

目的 分析碳青霉烯类耐药阴沟肠杆菌复合群(CRECL)的耐药谱和分子流行病学特征,指导临床抗感染治疗.方法 收集丽水市中心医院2012-2022年分离的非重复CRECL菌株,采用VITEK MS全自动快速微生物质谱检测系统进行菌种鉴定,以微量肉汤稀释法检测最小抑菌浓度值(MIC),利用聚合酶链式反应(PCR)扩增bla KPC、bla NDM、bla IMP、bla VIM、bla OXA-48等碳青霉烯酶基因并测序确认.通过接合实验和复制起始子扩增检测分析耐药基因定位及质粒类型;采用多位点序列分析(MLST)确定各菌株ST型,并结合BV-BRC数据库来源的CRECL构建系统发育树和最小生成树,分析CRECL的分子流行病学特征.结果 共收集非重复CRECL菌株22株,分布于14个临床科室,分属于16个ST型;22株菌对美罗培南、头孢他啶、头孢噻肟均100.00％耐药,对左氧氟沙星、氨曲南和多黏菌素的耐药率分别是81.81％、63.63％和31.81％,仅对替加环素100.00％敏感;经测序确认,17株CRECL菌株携带blaNDM基因,占77.27％,且其中15株位于IncX3型质粒,2株位于IncFⅡ型质粒;根据系统发育树和最小生成树分析,CRECL呈散发分布,未发现优势克隆群.结论 CRECL呈散发流行,医院分离菌株主要携带bla NDM基因,IncX3型质粒是介导该基因转移的主要原因.

目的 通过研究山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌,总结其流行病学和分子生物学特点.方法 收集山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离肺炎克雷伯菌为研究对象,进行细菌鉴定,药敏试验、改良碳青霉烯灭活试验筛选耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌.对所有菌株进行二代测序并分析,其中2株拉丝实验阳性耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌进行全基因组测序.结果 山西白求恩医院2015年1月—2022年1月血流感染患者血培养分离肺炎克雷伯菌共431株,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌共33株,其中耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌11株,其中拉丝实验阳性2株.所有菌株对厄他培南、亚胺培南均耐药,仅1株对美罗培南中介.33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌中26株产KPC-2、4株产NDM-1;有3株双酶型耐碳青霉烯高毒力肺炎克雷伯菌(KPC-2/NDM-9、KPC-2/OXA-1、NDM-1/OXA-1);4株未检测到碳青霉烯耐药基因.二代测序后进化分析结果显示33株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要序列类型(sequence types,ST)型别为ST11、ST147、ST412,主要血清型为KL64、KL47、KL25.质粒接合转移实验有18株转移成功.2株拉丝实验阳性菌株经全基因组测序发现携带毒力质粒和耐药质粒.结论 本院血流感染患者检出耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌从2015年逐年增加,2021年出现暴发流行.携带的碳青霉烯酶基因以KPC-2为主,ST11/KL64型菌株占多数.进一步加强临床耐药菌株筛检及控制对临床抗感染治疗作用关键.

目的 明确89K样毒力岛(PAI)的基因组特征及其在猪链球菌致病及耐药传播方面的作用.方法 通过生物信息学方法分析89K样PAIs的基因组特征;通过接合实验比较两种89K样PAIs的转移能力;采用最小抑菌浓度法测定临床分离株及接合子的耐药谱;通过C57BL/6小鼠和斑马鱼感染模型分别评估两个临床菌株及其89K样PAIs的接合子的致病性.结果 携带89K样PAIs的猪链球菌临床菌株GX54和GX82的序列型(ST)分别为ST665和ST107.菌株GX54携带的PAI大小为75Kb,在核苷酸水平上与ST7流行型菌株携带的89K PAI具有99.21％的相似性和79.00％的覆盖率,而菌株GX82携带的PAI大小为87Kb,与89K PAI具有98.80％的相似性和86.00％的覆盖率.这两个PAIs的插入位点与89K PAI相同,均位于rplL位点,且PAIs的两端均含有一段15 bp的att序列(5'-TTATTTAAGAGTAAC-3').此外,这两个PAIs均具有完整的模块化结构,包含完整的NisK-NisR样双组分信号转导系统和Ⅳ型分泌系统(T4SS).而在SalR-SalK样双组分信号转导系统中,仅SalR基因保持完整,SalK基因发生错义突变.与89K PAI相比,本研究中的两个PAIs在基因组成上呈现出一定的差异.75K PAI插入了4个基因,包括两个假定蛋白基因和两个耐药基因tet(O)和erm(B).而87K PAI则插入了12个基因,主要涉及编码与质粒相关的重组酶和假基因,以及与耐药相关的cat、tet(L)、erm(B)基因.此外,还包括编码转座酶、拓扑异构酶等基因.菌株GX54携带的75K PAI的转移频率为4.61×10-5,显著高于菌株GX82携带的87K PAI的转移频率8.46×10-6.与受体菌P1/7RIF相比,两个89K样PAIs的接合子P1/7RIF-GX54与P1/7RIF-GX82的四环素类和大环内酯类抗生素的抗性水平,以及对斑马鱼的致病力均显著增加,且两接合子组间的致病力差异无统计学意义(P＞0.05).菌株GX54和菌株GX82感染C57BL/6小鼠后,菌株GX54感染组小鼠死亡率显著高于菌株GX82感染组(P＜0.05).攻毒8 h后,两感染组小鼠的外周血细菌载量无统计学意义(P＞0.05),但菌株GX54感染组小鼠血清中的TNF-α水平显著高于菌株GX82感染组小鼠(P＜0.05),而IL-6水平在两感染组间无统计学意义(P＞0.05).sly、mrp、epf,ofs,revS,nadR,SSU05_0473,neuB及neuC等在高致病型猪链球菌中常见的毒力基因在GX54与GX82也存在.结论 本研究首次发现了猪链球菌ST665和ST107型临床菌株携带可移动的89K样PAIs.携带不同89K样PAIs的菌株毒力水平具有显著差异,该差异与菌株在感染早期诱导宿主产生TNF-α的水平密切相关,且并非由外周血中的细菌载量差异所引起.仅以包括89K样PAIs在内的已知毒力基因存在与否做为判断猪链球菌毒力水平的方法存在不足.

目的 对某三甲医院分离的耐碳青霉烯肠杆菌目细菌(CRE)的耐药表型和耐药基因进行检测,并对其进行同源性分析,探讨产生耐药性的原因,为控制院内传播感染提供理论依据.方法 收集2019年1月-2021年9月淄博市第一医院临床标本分离的鉴定为CRE的菌株,通过改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)和EDTA改良碳青霉烯灭活试验(eCIM)对CRE菌株进行耐碳青霉烯表型筛选,采用聚合酶链反应(PCR)法对菌株进行耐碳青霉烯相关耐药基因的检测并通过接合实验研究耐药基因的传播能力,多位点序列分型(MLST)分析菌株的同源性关系.结果 CRE菌株中,大肠埃希菌54株,肺炎克雷伯菌15株;耐碳青霉烯大肠埃希菌blaNDM-1阳性38株、blaOXA-23阳性9株、blaOXA-48 阳性7株,耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌blaKPC-gp 阳性3株、blaKPC-qc 阳性 3 株、blaOXA-48阳性9株;接合实验结果证实blaNDM-1和blaKPC-gp可以通过接合实验进行传播;大肠埃希菌的ST类型为ST10、ST23、ST131、ST117型,聚类分析发现其分属于不同的克隆群;肺炎克雷伯菌的ST类型为ST11、ST23和ST342型,聚类分析发现其分属于不同的克隆群.结论 本地区CRE菌株中,bla NDM-1是导致大肠埃希菌耐药的主要基因,blaOXA-48是导致肺炎克雷伯菌耐药主要基因;MLST分型聚类分析发现碳青霉烯类抗菌药物耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌存在多个克隆复合群的克隆性传播,医院应加强院感防控和监测.

目的 分析2008-2022年成都市成华区手足口病流行病学特征,为制定本地区手足口病干预措施提供科学依据.方法 采用描述性流行病学研究方法,对2008-2022年成都市成华区手足口病监测资料进行分析.结果 2008-2022年成都市成华区共报告手足口病病例28 136例,年发病率在58.38/10万～457.65/10万之间;每年有2个发病高峰,分别为4-7月和10-11月.0～5岁年龄组占总报告病例数的94.45％;男、女性报告发病数比例为1.39∶1;散居儿童、托幼儿童发病数占总报告病例的95.97％,2011年及以前托幼儿童构成比最高,2012年及以后散居儿童构成比最高.报告病例主要集中在城郊接合街道辖区;实验室诊断手足口病病例共1 641例,重症114例,检测结果显示,肠道病毒A71型(enterovirus A71,EV-A71)、其他肠道病毒和柯萨奇病毒A16 型(coxsackievirus A16,CV-A16)分别占50.00％、42.98％和7.02％;手足口病重复感染率为3.14％.结论 手足口病防控以低龄、散居儿童为重点人群,人群居住密集、流动人口众多的街道为重点区域,托幼及托育机构为重点场所,引起发病的优势毒株变化为关注重点.需要加强健康教育,强化疫情监测,坚持晨午检制度,及时规范处置聚集性疫情,降低发病总数,减少重症和死亡.

LAZY1 通过促进生长素的横向极性运输来调控水稻分蘖角,形成紧密直立的株型,从而提高水稻产量.为了研究LAZY1 表达的分子调控机制,本研究利用酵母单杂筛库技术筛选水稻LAZY1 的上游调控因子.首先以水稻粳稻品种日本晴基因组DNA为材料,经PCR扩增得到LAZY1 的启动子序列,接着连接到pHIS2 构建诱饵载体,并转化到AH109 酵母菌株得到pHIS2-LAZY1 诱饵菌.同时以萌发 3 d的日本晴幼苗为材料,采用SMART技术构建cDNA文库,再将纯化的cDNA文库和pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187 获得酵母单杂文库菌,接着将上述诱饵菌和文库菌进行接合完成酵母单杂筛库,共筛选得到 21 个候选的上游调控因子,进一步对其中的转录因子多蛋白桥梁因子OsMBF1 进行双荧光素酶实验验证,结果显示OsMBF1 可在体内促进LAZY1 的转录.本研究得到LAZY1 的上游正调控因子OsMBF1,为揭示LAZY1 介导的生长素极性运输和分蘖角决定的调控网络提供了理论基础,将有助于揭示水稻由散生变为直立生长的奥秘,具有重要的理论和实践意义.

目的 基于网络药理学、分子对接及体内实验验证探讨霍山石斛对非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的疗效及作用机制.方法 利用文献检索霍山石斛活性成分,采用SwissTargetPrediction数据库预测其潜在靶点,采用DisGeNET和GeneCards数据库筛选NAFLD靶点,并将药物靶点和疾病靶点取交集,构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,借助DAVID数据库进行基因本体功能和京都基因与基因组百科全书通路富集分析,构建"活性成分-靶点-疾病-通路"网络,并采用AutoDock等软件对关键活性成分和核心靶点进行分子对接验证.采用高脂高糖饮食诱导NAFLD小鼠模型,设置对照组、模型组、吡格列酮(10mg/kg)组和霍山石斛低、中、高剂量(200、400、600mg/kg)组,连续给药8周.检测血清三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)、丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)的含量;ELISA检测肝脏中TC、TG、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-1β及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平;油红O染色和苏木素-伊红(HE)染色检测肝组织病理变化;Western blotting检测肝组织中胰岛素受体(insulin receptor,InsR)、磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)、蛋白激酶 B(protein kinase B,Akt)、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)蛋白表达.结果 霍山石斛中筛选出石斛酚、铁皮石斛素A、4,4'-dihydroxy-3,5-dimethoxydihydrostilbene、柚皮素等38个活性成分,与NAFLD共同靶点有155个,作用于胰岛素、AKT1、白蛋白、TNF、IL-6、血管内皮生长因子A、过氧化物酶体增殖物激活受体γ、IL-1β等19个核心靶点,主要涉及癌症途径、PI3K/Akt通路、晚期糖基化终产物及其受体信号通路、缺氧诱导因子信号通路、TNF信号通路等,分子对接显示前5位核心成分与前5位核心靶点具有较好的接合能力.动物实验结果证实成功构建小鼠NAFLD模型,与模型组比较,霍山石斛组小鼠体质量、肝脏指数以及血清TG、TC、ALT、AST、LDL-C和肝脏TC、TG水平显著降低(P＜0.05、0.01),血清HDL-C水平显著升高(P＜0.01),改善肝脏脂肪蓄积和变性,肝脏InsR、PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达水平显著增加(P＜0.05、0.01),p-GSK-3β/GSK-3β蛋白表达显著减少(P＜0.01).结论 霍山石斛对NAFLD具有保护作用,其机制可能与激活PI3K/Akt通路、改善胰岛素抵抗和减少炎症反应有关.