目的:探讨过表达多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(LRIG1)对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的影响及其分子机制。方法:采用杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基培养U373细胞，分为对照组和LRIG1组，对照组采用对照慢病毒感染，LRIG1组采用过表达LRIG1慢病毒感染，48 h后筛选阳性细胞。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖；采用流式细胞术分析两组细胞凋亡；采用Transwell分析两组细胞侵袭；采用蛋白质印迹法(Western blot)分析凋亡和侵袭相关蛋白表达水平。计量资料比较采用 t检验。 结果:与对照组细胞(1.24±0.21)比较，LRIG1组细胞中LRIG1蛋白表达水平(2.81±0.30)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.015， P<0.05)。与对照组细胞(1.74±0.25)比较，LRIG1组细胞吸光度值(1.12±0.18)显著下降，差异有统计学意义( t＝3.641， P<0.05)。与对照组细胞[(78.65±10.58)%]比较，LRIG1组细胞EdU阳性率[(34.02±8.01)%]明显下降，差异有统计学意义( t＝4.387， P<0.05)。与对照组细胞[(5.02±1.81)%]比较，LRIG1组细胞凋亡率[(25.49±6.89)%]明显增加，差异有统计学意义( t＝6.914， P<0.05)。与对照组细胞[(88.14±9.28)个]比较，LRIG1组细胞侵袭数量[(39.48±5.81)个]明显下降，差异有统计学意义( t＝5.498， P<0.05)。与对照组细胞(0.58±0.10)比较，LRIG1组细胞中半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平(1.16±0.13)显著增加，差异有统计学意义( t＝3.001， P<0.05)。与对照组细胞(1.18±0.18)比较，LRIG1组细胞中基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平(0.44±0.11)显著下调，差异有统计学意义( t＝3.482， P<0.05)。 结论:过表达LRIG1可显著抑制脑胶质瘤细胞增殖和侵袭，促进肿瘤细胞凋亡。

目的:探讨基于软骨脱细胞外基质微载体体外构建具有功能化和自我更新能力的软骨类器官。方法:取新鲜的猪关节软骨，将部分仅粉碎处理的软骨微粒设置为天然软骨组；利用物理离心化学萃取相结合的脱细胞方法，制备粒径合适的细胞外基质（ECM）微载体，设置为微载体组。通过旋转式生物反应器将人脐带干间充质干细胞（hUCMSCs）和人软骨细胞（hCho）按照3∶1的比例与微载体负载，体外构建软骨类器官，将诱导不同时间的类器官分为诱导0、7、14及21 d组。4′，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）荧光染色观察、DNA定量评估微载体组和天然软骨组细胞残留情况；番红O、甲苯胺蓝染色观察微载体ECM保留情况，二甲氨基苯甲醛比色法测定微载体组和天然软骨组胶原蛋白含量；二甲基亚甲蓝（DMMB）比色法测定微载体组和天然软骨组糖胺聚糖（GAGs）含量。扫描电镜及能谱分析对微载体进行进一步表征；将添加体积分数10%胎牛血清（FBS）的杜尔伯克改良伊戈尔低糖培养基（DMEM）培养的hUCMSCs作为对照组，将微载体浸提液培养的hUCMSCs作为实验组，两组分别设置培养1、3、5 d共3个时间点的亚组，细胞增殖及毒性检测试剂盒（CCK-8）检测两组生物相容性。活死染色检测诱导0、7、14及21 d组的软骨类器官细胞活性，Ki67荧光染色鉴定诱导14 d软骨类器官的自我更新能力。RT-PCR测定诱导7、14、21 d组的软骨类器官，包括软骨形成相关标记物聚蛋白聚糖（ACAN）、Ⅱ型胶原（COL2A1）、性别决定区Y框蛋白9（SOX9）及软骨肥大、矿化相关标记物Ⅰ型胶原（COL1A1）、Runt相关转录因子2（RUNX2）、骨钙素（OCN）的表达水平；比色法和DMMB法测定诱导0、7、14及21 d组的类器官分泌胶原蛋白和GAGs能力。结果:DAPI荧光染色结果显示，天然软骨组具有大量细胞核，而微载体组则基本无细胞核。微载体组DNA含量为（7.8±1.8）ng/mg，较天然软骨组的（526.7±14.7）ng/mg显著降低（ P<0.01）。番红O、甲苯胺蓝染色可见微载体着色较深且均一，保留大量软骨ECM成分。微载体组胶原蛋白含量为（252.9±1.4）μg/mg，GAGs含量为（173.4±0.8）μg/mg，均显著低于天然软骨组的（311.9±2.2）μg/mg、（241.3±0.7）μg/mg（ P<0.01）。扫描电镜显示，微载体表面有凹凸不平相互交错的胶原纤维网络。能谱分析结果显示，C、O、N元素均匀分布在微载体，表明该微载体成分组成均匀。微载体生物相容性良好，培养1、3 d时，对照组和实验组CCK-8实验结果比较，差异均无统计学意义（ P>0.05）；培养5 d，实验组 A值为0.53±0.02，优于对照组的0.44±0.03（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组中，hUCMSCs和hCho贴附在微载体表面且细胞活性好，活死比例分别为（70.6±1.1）%、（80.5±0.6）%、（94.5±0.9）%、（90.8±0.5）%（ P<0.01）；诱导14 d时，软骨类器官有大量Ki67阳性细胞。RT-PCR显示，诱导7 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为1.00±0.09、1.00±0.24、1.00±0.18、1.00±0.03、1.00±0.06、1.00±0.13；诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为4.16±0.28、5.09±1.25、5.65±1.05、0.47±0.01、1.68±0.02、0.21±0.06；诱导21 d组ACAN、COL2A1、SOX9、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平分别为13.42±0.92、3.07±0.21、1.84±1.08、2.72±0.17、2.91±0.18、3.32±1.20。与诱导7 d组比较，诱导14 d组ACAN、COL2A1、SOX9、RUNX2表达水平均升高（ P<0.05），COL1A1表达水平降低（ P<0.05），OCN表达水平差异无统计学意义（ P>0.05）；与诱导7 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2表达水平均显著升高（ P<0.01），COL2A1、SOX9、OCN表达水平差异均无统计学意义（ P>0.05）；与诱导14 d组比较，诱导21 d组ACAN、COL1A1、RUNX2、OCN表达水平均升高（ P<0.05或0.01），COL2A1表达水平差异无统计学意义（ P>0.05），SOX9表达水平降低（ P<0.05）。诱导0、7、14及21 d组胶原蛋白含量分别为（219.15±0.48）μg/mg、（264.07±1.58）μg/mg、（270.83±0.84）μg/mg、（280.01±0.48）μg/mg，GAGs含量分别为（171.18±1.09）μg/mg、（184.06±1.37）μg/mg、（241.08±0.84）μg/mg、（201.14±0.17）μg/mg。与诱导0 d组比较，诱导7、14、21 d组胶原蛋白和GAGs含量均显著升高（ P<0.01）。在诱导7、14、21 d组中，诱导7 d组胶原蛋白含量最低（ P<0.01），诱导21 d组胶原蛋白含量最高（ P<0.01）；诱导7 d组GAGs含量最低（ P<0.01），诱导14 d组GAGs含量最高（ P<0.01）。 结论:物理化学方法结合制备的微载体脱细胞成功，其基质保留较多，成分均一且无细胞毒性。基于微载体负载hUCMSCs与hCho体外成功构建软骨类器官，具有细胞活性好、自我更新能力、软骨形成相关基因表达强及分泌胶原蛋白和GAGs等特点，诱导14 d时构建的软骨类器官成软骨活性最佳。

目的:建立一种改良的人脐带间充质干细胞(MSCs)的培养方法，并分析其生物学特性。方法:采用组织块贴壁法原代分离人脐带MSCs，首先在杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)高糖培养基培养，接着改用含有间充质干细胞生长添加物的DMEM培养基传代培养；传代两次后，重新换回DMEM培养基进行培养(三联法培养组)。同时以DMEM高糖培养基作为对照组。通过绘制生长曲线，细胞表面标志物检测，成脂分化检测等，对培养获得的人脐带MSCs进行鉴定。两组间比较采用 t检验。 结果:三联法培养组获得人脐带MSCs成功率高，组织块加放无菌盖玻片的细胞爬出时间、原代培养时间和细胞密度明显优于未加无菌盖玻片[(96.16±4.61) h比(139.50±6.26) h，(15.17±2.36) d比(21.47±2.83) d，30.57%比14.27%， t＝9.650、2.960、9.669， P<0.05]，差异均有统计学意义；人脐带MSCs细胞表面高表达CD44(99.05%)和CD29(98.51%)，不表达造血干细胞表型CD45(0.05%)，且具有多向分化潜能。 结论:本方法分离培养的人脐带MSCs，步骤简单、成功率高、成本较低，适用于人脐带MSCs的大规模培养。

目的:探讨常春藤皂苷元(Hederagenin)对人胶质瘤(Glioma)细胞株U251MG凋亡的影响和机制。方法:应用不同剂量的Hederagenin作用于人胶质瘤细胞株U251MG 48 h后应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性。U251MG细胞分为实验组(给与80 μg/ml Hederagenin干预)及对照组[给与无血清的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养液]，流式细胞术检测细胞凋亡；划痕实验和Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力；蛋白质印迹法(Western blot)技术检测各组U251MG细胞凋亡及迁移侵袭相关蛋白的变化。多组数据间比较采用单因素方差分析，两组数据比较采用 t检验。 结果:MTT结果显示，实验组U251MG细胞活性明显低于对照组，且随药物剂量增加效应更加明显( F＝288.946， P<0.01)。流式细胞术(FCM)结果显示，Hederagenin作用于U251MG细胞48 h后实验组细胞凋亡率明显高于对照组[(21.07±4.85)%比(5.12±1.52)%， t＝7.687， P<0.01]，实验组细胞的迁移率明显低于对照组[(58.44±6.65)%比(80.26±6.86)%， t＝－5.594， P<0.01)，实验组细胞的跨膜细胞数明显少于对照组(63.33±7.69比115.83±9.35， t＝－10.623， P<0.01)。Western blot结果显示，Hederagenin作用后实验组U251MG细胞凋亡相关蛋白Survivin、bcl-2表达明显低于对照组(0.767±0.067比1.091±0.174，0.800±0.086比1.149±0.165， t＝－3.010、－3.249， P<0.05)，而丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(RIPK1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶3(RIPK3)、裂解的半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-8(cleave-Caspase-8)蛋白的表达明显高于对照组(1.121±0.134比0.380±0.037、0.604±0.067比0.417±0.043、1.310±0.185比0.823±0.124， t＝9.233、4.068、3.787， P<0.05)；侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、N-钙黏蛋白(N-cadherin)表达明显低于对照组(0.323±0.055比1.055±0.145、0.449±0.060比0.803±0.082、0.505±0.059比0.881±0.095， t＝－8.176、－6.034、－5.824， P<0.01)，而E-钙黏蛋白(E-cadherin)蛋白的表达明显高于对照组(0.681±0.056比0.418±0.050， t＝6.068， P<0.01)。 结论:Hederagenin对胶质瘤细胞有明显的抑制作用，该作用与Hederagenin促进细胞凋亡、抑制细胞迁移侵袭能力有关。

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)H19靶向微小RNA(miRNA，miR)-675/EHZ2对结肠癌细胞增殖的影响。方法:收集2013年7月到2018年7月郑州大学附属肿瘤医院结肠癌组织及其对应的癌旁组织各150例，采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析LINC00052和miR-330-3p表达水平。待细胞完全贴壁后，采用lncRNAH19 shRNA、lncRNA control shRNA、miRNA Control和miR-675慢病毒感染SW480细胞，感染12 h更换含嘌呤霉素(1 mg/L)的杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基处理24 h，存活的细胞即为稳定细胞株，分别命名为Lnc Control组、lncRNAH19 KD组、miR-Control组和miR-675组。采用生物信息学和双荧光素酶报告基因分析lncRNAH19和miR-675关系以及miR-675的靶基因。在结肠癌细胞株SW480建立lncRNAH19沉默细胞株和miR-765过表达细胞株，采用5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法和细胞计数试剂盒(CCK-8)法测定不同处理结肠癌细胞的增殖能力。体内异体移植瘤实验分析不同处理对成瘤的影响。采用 t检验分析两组数据的统计学意义。 结果:与癌旁组织lncRNAH19和miR-675[(1.12±0.18)、(1.09±0.17)]比较，结肠癌组织中lncRNAH19表达水平(3.49±0.27)显著增加，miR-675表达水平(0.32±0.11)显著下调，差异均有统计学意义( t＝3.109、2.981， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EdU阳性率[(89.44±10.25)%、(85.41±12.33)%]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EdU阳性率[(30.14±6.89)%、(41.72±8.32)%]显著下调，差异有统计学意义( t＝2.981、2.981， P<0.05)。CCK-8实验显示，与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝2.441、2.592， P<0.05)。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞体内增殖能力比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞能力显著下调，差异有统计学意义( F＝1.980、2.019， P<0.05)。生物信息学和双荧光素酶分析显示lncRNAH19能与miR-675互补结合，EHZ2是miR-675的靶蛋白。与Lnc-Contrtol组和miR-Control组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(1.19±0.13)、(1.04±0.14)]比较，lncRNAH19 KD组和miR-675组结肠癌细胞EHZ2蛋白表达水平[(0.32±0.13)、(0.47±0.13)]显著下调，差异有统计学意义( t＝3.109、3.011， P<0.05)。 结论:lncRNAH19通过靶向miR-675/EHZ2调控结肠癌细胞的增殖。

目的:观察白细胞介素(IL)-6对人主动脉瓣间质细胞成骨样分化及其成钙能力的影响。方法:选取2018年2月至2018年7月在郑州大学第一附属医院因主动脉夹层(Debakey I型)行Bentall手术患者的正常主动脉瓣，胶原酶消化法分离培养主动脉瓣间质细胞，稳传3～8代的原代细胞作为实验细胞。实验共分3组：对照组，单纯加入杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)细胞培养基常规培养；刺激组，DMEM细胞培养基＋10 mg/L白细胞介素(IL)-6；中和组，DMEM细胞培养基＋10 mg/L IL-6＋10 mg/L抗IL-6抗体。采用免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)两种蛋白在分离细胞中的表达，鉴定主动脉瓣间质细胞表型；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测3组中两种成骨样标志蛋白碱性磷酸酶(ALP)及骨形态发生蛋白(BMP)-2的表达差异；采用茜素红染色法，检测比较3组中主动脉瓣间质细胞的成钙能力并定量分析。组间比较应用单因素方差分析。结果:经胶原酶消化法分离的细胞中90%以上表达α-SMA及Vimentin两种蛋白。IL-6干预后，与对照组ALP及BMP-2(0.523±0.121、0.762±0.208)比较，刺激组(2.432±0.871、3.043±1.087)在主动脉瓣间质细胞中的表达均显著增高( F＝3.265、2.187， P<0.05)，差异有统计学意义；中和组中，ALP(0.712±0.211)及BMP-2(0.942±0.178)的表达则基本恢复正常，与对照组比较差异无统计学意义( F＝1.128、2.098， P>0.05)，与刺激组比较两者表达均显著减低( F＝11.322、17.109， P<0.05)，差异有统计学意义。茜素红染色结果显示刺激组中钙结节明显增多，而在中和组中，钙结节数量跟刺激组比较显著减低。钙沉淀定量分析结果跟茜素红染色结果一致[刺激组比对照组：(83.33±9.71) mg/g比(7.33±4.16) mg/g， F＝1.098、4.112， P<0.05， n＝3；中和组比刺激组：(11.67±2.08) mg/g比(83.33±9.71) mg/g， F＝14.192、9.781， P<0.05， n＝3]，差异均有统计学意义。 结论:IL-6可增强人主动脉瓣间质细胞的成骨样分化及成钙能力。

目的:探讨依托咪酯对脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导心肌细胞炎症、凋亡的影响及其可能作用机制。方法:将体外培养的大鼠心肌细胞H9c2采用随机数字表法分为5组（每组3个复孔，每组实验重复3次）：正常对照组（Con组）、脂多糖组（LPS组）、脂多糖+20 μmol/L依托咪酯组（E-L组）、脂多糖+50 μmol/L依托咪酯组（E-M组）、脂多糖+100 μmol/L依托咪酯组（E-H组）。Con组正常培养，LPS组加入含浓度1 mg/L LPS的杜氏改良培养基（dulbecco's modified eagle medium, DMEM）培养24 h，E-L组、E-M组、E-H组分别使用不同浓度（20、50、100 μmol/L）依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。再次选取正常培养的心肌细胞采用随机数字表法分为两组（每组3个复孔，每组实验重复3次）：脂多糖+100 μmol/L依托咪酯+anti-微RNA（microRNA, miR）-NC组（anti-miR-NC组）和脂多糖+100 μmol/L依托咪酯+anti-miR-214-3p组（anti-miR-214-3p组）。anti-miR-NC组和anti-miR-214-3p组分别将anti-miR-NC和anti-miR-214-3p转染至心肌细胞，加入含有100 μmol/L依托咪酯与1 mg/L LPS的DMEM培养液培养24 h。ELISA法检测TNF-α、IL-6、IL-1β水平，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）检测miR-214-3p与转导素β1X连锁受体蛋白质1（transducin β-like 1X related protein 1, TBL1XR1）的表达量，双荧光素酶报告实验验证miR-214-3p与TBL1XR1的靶向调控关系，Western blot法检测TBL1XR1、B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）相关蛋白（Bcl-2-associated X protein, Bax）、Bcl-2的表达量。结果:与Con组比较，LPS组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达升高（ P<0.05），Bcl-2蛋白水平和miR-214-3p表达降低（ P<0.05）；与LPS组比较，E-L组、E-M组、E-H组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率、TBL1XR1 mRNA表达呈剂量依赖性降低（ P<0.05），Bcl-2蛋白水平和miR-214-3p表达呈剂量依赖性升高（ P<0.05）；E-L组、E-M组、E-H组两两比较差异有统计学意义（ P<0.05）。miR-214-3p可负向调控TBL1XR1的表达（ P<0.05）。与anti-miR-NC组比较，anti-miR-214-3p组TNF-α、IL-6、IL-1β、Bax水平以及细胞凋亡率升高（ P<0.05），Bcl-2蛋白水平降低（ P<0.05）。 结论:依托咪酯可通过调控miR-214-3p/TBL1XR1分子轴从而抑制LPS诱导的心肌细胞炎症及凋亡。

目的:探讨巯基聚乙二醇（polyethylene glycol-thiol，PEG-SH）修饰的GNPs/miR-29纳米微粒诱导神经干细胞增殖、分化的作用。方法:采用氧化还原法制备PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒，检测紫外吸收光谱、粒径分布及Zeta电位。选取15只成年雄性SD大鼠，以改良Allen法构建脊髓损伤模型；在脊髓损伤区域分别植入人工合成的miR-29和PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒，采用凝胶电泳法分析miR-29表达的稳定性。取SPF级SD乳鼠10只，分离培养神经干细胞，使用Nestin、GFAP及NSE抗体鉴定细胞。以CCK-8法检测人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒对神经干细胞活性、增殖的影响。将人工合成的miR-29、PEG-SH GNPs及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒与神经干细胞共培养1周，观察神经元突起的密度、长度及数量。结果:PEG-SH修饰的纳米金呈棕红色；透射电镜下为均匀分布的球形；紫外吸收光谱呈现单峰波，在523 nm附近出现吸收峰值；Zeta电位随PEG-SH含量增加而逐渐增大，峰值为（22.5±5.2） mV；粒径随PEG-SH含量增加早期迅速达峰值后下降维持至稳定水平。脊髓损伤区域植入miR-29及PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒0~6 h，人工合成的miR-29组可见清晰的表达条带，但12~24 h表达条带迅速消失；PEG-SH GNPs/miR-29微粒组，始终能观察到清晰的表达条带。接种细胞第1、3、5、7天，miR-29组OD值分别为0.34±0.17、0.78±0.31、1.28±0.68、1.64±0.38，与DMEM组相比差异无统计学意义；GNPs组、PEG-SH GNPs组以及PEG-SH GNPs/miR-29组的OD值与DMEM组相比差异均无统计学意义。PEG-SH GNPs/miR-29纳米微粒组神经元突起的密度为（56.38±3.65） μm 2、长度为（78.25±3.72） μm、数量为（356±34.52）个/1 000倍视野，均大于miR-29组[分别为（12.53±3.26） μm 2、（11.35±3.36） μm、（158±32.85）个/1 000倍视野]、PEG-SH GNPs组[分别为（14.12±3.45） μm 2、（12.56±3.57） μm、（160±32.52）个/1 000倍视野]和生理盐水组[分别为（10.25±3.52） μm 2、（9.35±3.28） μm、（152±32.28）个/1 000倍视野]，但与胎牛血清组[分别为（56.48±3.56） μm 2、（76.85±3.65） μm、（350±35.26）个/1 000倍视野]比较差异无统计学意义。 结论:PEG-SH修饰的GNPs/miR-29纳米微粒具备良好的生物学性能，可诱导神经干细胞增殖、分化，对miR-29有一定程度的保护效应。

目的:从在体和细胞水平评价蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)途径内质网应激与右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的关系。方法:在体实验　健康清洁级雄性小鼠20只，体重20～30 g，6～8周龄，采用随机数字表法将小鼠分为4组( n＝5)：假手术组(S组)、假手术+右美托咪定组(SD组)、脑缺血再灌注组(IR组)和脑缺血再灌注+右美托咪定组(IRD组)。采用改良二血管阻断联合低血压法制备脑缺血再灌注损伤模型。IRD组于缺血10 min时、SD组于相应时点腹腔注射右美托咪定25 μg/kg。再灌注1 h时采用改良神经系统损伤程度法进行行为学评分，随后处死大鼠，取脑组织，采用Western blot法测定内质网应激蛋白：免疫球蛋白重链结合蛋白(BIP)、真核起始因子2α(EIF-2α)、p-EIF-2α、PERK、p-PERK的表达。细胞实验　选取标准小鼠海马神经元细胞系，采用随机数字表法分为4组( n＝12)：对照组(C组)、糖氧剥夺/复氧复糖组(OGD/R组)、糖氧剥夺/复氧复糖+右美托咪定组(OGD/R+D组)、糖氧剥夺/复氧复糖+PERK途径抑制剂ISRIB组(OGD/R+ISRIB组)。糖氧剥夺/复氧复糖模型的制备：使用低糖培养基在94%N 2-5%CO 2-1%O 2混合气体孵育6 h，然后复氧复糖。于糖氧剥夺前30 min，OGD/R+D组加入终浓度5 mmol/L的右美托咪定，OGD/R+ISRIB组中加入终浓度10 mmol/L的ISRIB。复氧复糖12 h时，采用CCK-8法检测细胞存活率，复氧复糖24 h时，采用Western blot法测定内质网应激蛋白的表达。 结果:在体实验　与S组比较，IR组行为学评分升高，脑组织BIP、p-EIF-2α、p-PERK表达上调( P<0.05)。与IR组比较，IRD组行为学评分降低，脑组织BIP、p-EIF-2α、p-PERK表达下调( P<0.05)。细胞实验　与C组比较，OGD/R组BIP、p-EIF-2α、PERK与p-PERK表达上调，细胞存活率下降( P<0.05)；与OGD/R组比较，OGD/R+D组、OGD/R+ISRIB组BIP、p-EIF-2α与p-PERK表达下调，细胞存活率升高( P<0.05)；与OGD/R+ISRIB组比较，OGD/R+D组PERK表达下调( P<0.05)，其余指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:右美托咪定减轻小鼠脑缺血再灌注损伤的机制可能与抑制PERK途径内质网应激有关。

目的:通过体外细胞模型，探讨蠲痹汤对骨关节炎（OA）的作用机制。方法:将ATDC5细胞分为4组：正常组、OA组、蠲痹汤组和Fer-1组。OA组加入10 ng/ml白细胞介素（IL）-1β诱导炎症杜尔伯科改良伊格尔（DMEM）培养基；蠲痹汤组加入IL-1β＋蠲痹汤诱导炎症DMEM培养基；Fer-1组加入IL-1β＋Fer-1诱导炎症DMEM培养基。进行蛋白质印迹法（Western blot）试验检测软骨细胞的肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、环氧化酶-2（COX-2），Collagen Ⅱ、Aggrecan、基质金属蛋白酶13（MMP-13）、p53、ACSL4、SLC7A11和GPX-4的表达，使用细胞免疫荧光染色检测GPX-4的表达。利用化学发光法检测软骨细胞的代谢产物丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH）、Fe 2＋、线粒体内铁的含量。多组比较采用单因素方差分析。 结果:Fer-1组和蠲痹汤组的TNF-α（3.282±0.261、2.255±0.253）、iNOS（5.046±0.478、3.443±0.039）、COX-2（3.484±0.333、2.450±0.467）蛋白相对表达水平低于IL-1β组（4.384±0.601、6.863±0.637、4.812±0.496），差异有统计学意义（ t＝3.848、7.432、5.579、10.500、4.289、7.629， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的MMP-13（2.738±0.224、4.276±0.663）、p53（3.364±0.898、4.289±0.936）、ACSL4（2.897±0.767、2.776±0.594）蛋白相对表达水平低于IL-1β组（5.779±0.018、7.413±1.635、6.077±0.847），差异有统计学意义（ t＝10.640、5.258、4.752、3.666、6.048、6.279， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的Collagen Ⅱ（0.752±0.143、0.609±0.073）、Aggrecan（0.663±0.139、0.570±0.022）、SLC7A11（0.623±0.037、0.400±0.034）、GPX-4（0.686±0.041、0.537±0.065）蛋白相对表达水平高于IL-1β组（0.298±0.049、0.268±0.154、0.097±0.021、0.163±0.063），差异有统计学意义（ t＝4.661、3.895、4.631、3.538、23.700、13.660、12.890、9.226， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的GPX-4（15.476±2.519、12.133±0.703）荧光强度高于IL-1β组（5.141±0.153），差异有统计学意义（ t＝8.117、5.491， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的线粒体内铁（9.689±2.680、11.043±1.818）荧光强度低于IL-1β组（16.604±3.262），差异有统计学意义（ t＝3.675、2.955， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的MDA[（8.755±0.390）、（10.915±0.379） nmol/ml]、Fe 2＋[（4.200±0.041）、（5.189±0.083） nmol]含量低IL-1β组[（13.130±0.430） nmol/ml、（7.109±0.071） nmol]，差异有统计学意义（ t＝14.960、7.573、59.230、39.090， P<0.05）。Fer-1组和蠲痹汤组的GSH[（7.215±0.382）、（6.988±1.246） μmol/g prot]含量高于IL-1β组[（4.826±0.426） μmol/g prot]，差异有统计学意义（ t＝4.240、3.838， P<0.05）。 结论:蠲痹汤通过调控SLC7A11-GSH-GPX4轴抑制软骨细胞铁死亡减轻炎性反应和细胞外基质降解。