目的:建立猪带绦虫（Ts）14-3-3.2原核表达系统，并观察Ts14-3-3.2蛋白在Ts成虫和囊尾蚴中的表达情况。方法:在遵义医科大学寄生虫学教研室前期获得Ts14-3-3.2基因序列的基础上，采用基于PCR的精确合成（PAS）方法全基因合成Ts14-3-3.2基因，经限制性内切酶 NdeⅠ和 XbaⅠ双酶切后连接质粒pCzn1，构建重组质粒pCzn1-Ts14-3-3.2。将重组质粒转化至大肠埃希菌ArcticExpress感受态细胞中诱导表达，采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和考马斯亮蓝染色分析和鉴定表达产物，通过镍（Ni）柱亲和纯化获得纯化Ts14-3-3.2重组蛋白。采用该纯化重组蛋白免疫新西兰大白兔，制备Ts14-3-3.2重组蛋白多克隆抗体，采用免疫印迹法（Western blot）检测Ts14-3-3.2蛋白在Ts成虫和囊尾蚴中的表达情况。 结果:成功构建重组质粒pCzn1-Ts14-3-3.2，诱导表达后菌体上清液和沉淀均在相对分子质量约29.31 × 10 3处出现Ts14-3-3.2目的蛋白条带。纯化后带有His标签的Ts14-3-3.2重组蛋白能被抗His单克隆抗体识别，获得效价为1∶512 000的Ts14-3-3.2重组蛋白多克隆抗体。Western blot结果显示，Ts14-3-3.2蛋白在Ts成虫和囊尾蚴中均有表达。 结论:成功建立Ts14-3-3.2原核表达系统，获得了高纯度、高效价的Ts14-3-3.2重组蛋白多克隆抗体。Ts14-3-3.2蛋白在Ts成虫和囊尾蚴阶段均有表达。

目的:了解舟山海岛地区蜱类所携带的病原体多样性及其基因同源性。方法:2020年4—11月，采用布旗法收集舟山海岛地区发热伴血小板减少征病例居住地周围环境中的游离蜱，采用畜体检查法采集家畜身上的寄生蜱。蜱样本提取RNA或DNA进行荧光RT-PCR检测，以嗜吞噬细胞无形体、立克次体、查菲埃里克体、新型布尼亚病毒、汉坦病毒、汉城病毒、沃尔巴克体、山羊无形体为引物进行PCR扩增初筛。扩增序列测序后进行同源性分析，以邻接法构建系统进化树。结果:共采集蜱样本99只，其中游离蜱样本39只，寄生蜱样本60只。在蜱样本中检出嗜吞噬细胞无形体、立克次体、沃尔巴克体和山羊无形体核酸阳性。此次检出的沃尔巴克体与日本报道的沃尔巴克体（AB025965）同源性为98.70%；立克次体与中国云南立克次体03（KY433580）、日本立克次体LA16同源性为99.83%；嗜吞噬细胞无形体有2个进化分支：一个进化分支与安徽桐城（MK045683）及韩国济州岛（GU064903）的嗜吞噬细胞无形体同源性为100.00%，另一个进化分支与安徽金寨的嗜吞噬细胞无形体（MK045694）同源性为99.70%。结论:舟山海岛地区是嗜吞噬细胞无形体、山羊无形体和日本立克次体的自然疫源地，暴露居民存在感染风险。

目的:探讨极低出生体重儿（VLBWI）晚发型脓毒症（LOS）的发生概况及其不良预后。方法:采用多中心前瞻性观察性队列研究，数据来源于中国北方新生儿协作网（SNN），收集并分析2018至2021年35家新生儿重症监护病房收治的6 639例VLBWI的一般资料、围生期情况及不良预后发生情况。根据住院期间是否发生LOS，分为LOS组和无LOS组，LOS组根据是否合并新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）及化脓性脑膜炎分为3个亚组。采用χ2 检验或Fisher确切概率法、独立样本 t检验、Mann-Whitney U检验及多因素Logistic回归模型，分析LOS与不良预后的关系。 结果:6 639例VLBWI中男3 402例（51.2%），发生LOS 1 511例（22.8%），其中超低出生体重儿（ELBWI）及超早产儿LOS的发生率分别为33.3%（392/1 176）和34.2%（378/1 105）；LOS组死亡157例（10.4%），其中LOS并发NEC组死亡48例（24.9%）。多因素Logistic回归分析显示，LOS并发NEC组与病死率和3~4级脑室内出血（IVH）或脑室周围白质软化（PVL）、中重度支气管肺发育不良（BPD）、宫外生长发育迟缓（EUGR）发生率的增加均相关（ OR=5.27、2.59、3.04、2.04，95% CI 3.60~7.73、1.49~4.50、2.11~4.37、1.50~2.79，均 P<0.01）；LOS并发化脓性脑膜炎组与病死率和3~4级IVH或PVL、中重度BPD发生率的增加均相关（ OR=2.22、8.13、3.69，95% CI 1.30~3.77、5.22~12.67、2.49~5.48，均 P<0.01），而LOS不并发NEC或化脓性脑膜炎组仅与中重度BPD发生率的增加相关（ OR=2.20，95% CI 1.83~2.65， P<0.001）。排除污染菌后，血培养阳性共456例，其中革兰阴性菌265例（58.1%），革兰阳性菌126例（27.6%），真菌65例（14.3%）；最常见的致病菌为肺炎克雷伯菌147例（32.2%），其次为凝固酶阴性葡萄球菌72例（15.8%），再次为大肠埃希菌39例（8.6%）。 结论:VLBWI的LOS的发生率较高，常见致病菌依次为肺炎克雷伯菌、凝固酶阴性葡萄球菌及大肠埃希菌；LOS与中重度BPD不良预后相关，并发NEC时预后差，病死率最高，并发化脓性脑膜炎时增加脑损伤的风险。

目的:建立一种宏基因组二代测序（mNGS）DNA流程检测BALF标本的性能确认方法。方法:以Hela细胞代表宿主细胞，向无菌生理盐水中加入不同浓度Hela细胞、7种病原体（肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、白色念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和腺病毒）和干扰物质制备模拟BALF标本，同时收集临床BALF标本，以传统检测方法为参比方法，评价mNGS检测结果，确定mNGS的最低检出限、精密度、抗干扰能力、稳定性和准确度。结果:模拟标本中，肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、白色念珠菌、新型隐球菌、烟曲霉和腺病毒7种病原体的最低检出限分别为150、262、102、67、96、83 CFU/ml和439 拷贝/ml。模拟阳性标本中所有病原体重复检测结果符合率均为100%。抗干扰试验结果显示，人源核酸浓度越高，mNGS检出病原体序列数越少。以大肠埃希菌和宋内志贺菌评价mNGS对近源物种分辨能力，结果显示，当宋内志贺菌浓度为4 000 CFU/ml时，该系统能稳定分辨大肠埃希菌和宋内志贺菌。稳定性试验结果显示，标本进行1、2、3次冻融或在4 ℃、-20 ℃、-80 ℃放置36 h后病原体序列数无明显变化。与传统检测方法相比，17份临床标本的初步准确度为82.4%（14/17）。2021年10月25日至2022年9月14日同济医院同时进行mNGS和传统方法检测的临床BALF标本的持续评估结果显示，mNGS相对细菌培养、真菌培养、分枝杆菌培养、结核分枝杆菌培养和常规PCR技术的准确度分别为67.5%（472/699）、81.5%（570/699）、92.3%（335/363）、96.4%（350/363）和86.8%（132/152）。与常规PCR技术比较，mNGS检测耶氏肺孢子菌、腺病毒、肺炎支原体的准确度分别为89.4%（84/94）、93.3%（56/60）和87.1%（61/70）。结论:通过制备模拟BALF标本以及以传统检测方法为参比方法，可以初步评价mNGS检测BALF标本的性能特征。

目的:探讨凉血活血方对脓毒症急性肾损伤（AKI）小鼠肠道菌群、肠道屏障及肾组织NOD样受体蛋白3/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1/焦孔素D（NLRP3/caspase-1/GSDMD）细胞焦亡信号通路的影响。方法:将30只雄性C57BL/6小鼠随机分为假手术组（Sham组）、脓毒症组（CLP组）、脓毒症+凉血活血方组（CLP+LXHX组），每组10只。通过盲肠结扎穿孔术（CLP）建立脓毒症AKI小鼠模型；Sham组仅进行开腹处理。制模前2 h，CLP+LXHX组给予凉血活血方水煎剂（6 g/kg）灌胃治疗；Sham组及CLP组给予等体积生理盐水灌胃。制模后24 h，麻醉处死小鼠，取结肠和肾组织及结肠内新鲜粪便。光镜下观察小鼠肾组织和结肠组织的病理变化；采用实时聚合酶链反应（RT-PCR）检测小鼠肾脏组织炎症因子白细胞介素（IL-1β和IL-18）的mRNA表达；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测小鼠肾组织中NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达；采用16S rDNA高通量测序检测小鼠肠道菌群的变化。结果:与Sham组比较，CLP组肾脏组织炎症细胞浸润增加，肾脏空泡化，肾脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达及NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达均明显升高；结肠组织病理损伤显著，肠道菌群的物种丰富度显著降低，肠球菌和埃希菌-志贺菌的相对丰度显著增加，回肠杆菌属、拟普雷沃菌属、毛螺菌属、克雷伯菌属和副萨特菌属的相对丰度显著升高。与CLP组比较，凉血活血方可以显著减轻脓毒症小鼠肾脏组织和结肠组织病理损伤，并降低病理评分（分：肾脏组织为1.75±0.43比3.50±0.50，结肠组织为1.25±0.43比4.50±0.50，均 P<0.05），改善肠道菌群组成，降低肠球菌和埃希菌-志贺菌的相对丰度，并显著增加乳酸杆菌和阿克曼菌属的相对丰度，显著降低肾脏组织中IL-1β和IL-18的mRNA表达〔IL-1β mRNA（2 -ΔΔCt）：1.59±0.05比4.61±0.88，IL-18 mRNA（2 -ΔΔCt）：1.69±0.17比2.86±0.63，均 P<0.05〕及NLRP3、caspase-1和GSDMD的蛋白表达（NLRP3/GAPDH：0.71±0.04比0.89±0.01，caspase-1/GAPDH：1.04±0.04比1.48±0.04，GSDMD/GAPDH：0.90±0.01比1.41±0.02，均 P<0.05）。 结论:凉血活血方对脓毒症所致AKI具有明显的保护作用，其作用机制可能通过调节肠道菌群改善肠道屏障，从而抑制肾脏组织中NLRP3/caspase-1/GSDMD信号通路的活化，降低焦亡相关炎症因子的表达。

目的:分析新生儿医院感染的危险因素并构建风险预测模型。方法:收集中国医科大学附属盛京医院2023年新生儿病房住院治疗患儿病历数据，根据是否发生医院感染分为感染组和非感染组，采用单因素分析比较两组间相关因素的差异，采用Logistic多因素回归分析筛选新生儿医院感染独立危险因素并构建风险预测模型，用受试者工作特征曲线分析模型的预测价值。结果:共纳入3 487例新生儿，其中男1 881例，女1 606例；中位胎龄35（32,38）周，中位出生体重2 470（1 760,3 200）g；感染组158例，非感染组3 329例。新生儿医院感染的主要病种为新生儿败血症（142例，85.5%）、中心静脉导管相关感染（13例，7.8%）、呼吸道感染（8例，4.8%），主要病原菌为肺炎克雷伯菌（50株，29.8%）、大肠埃希菌（26株，15.5%）、表皮葡萄球菌（25株，14.9%）。新生儿医院感染的独立危险因素为低出生体重（ OR=0.999,95% CI 0.999～1.000, P=0.039）、中心静脉导管置入（ OR=2.122，95% CI 1.359～3.315， P=0.001）、气管插管（ OR=3.241，95% CI 1.811～5.798， P<0.001）、进行肠外营养（ OR=11.087，95% CI 3.696-33.258， P <0.001）。以此为基础构建的风险预测模型回归方程为Logit（ P）=-47.407-0.001×出生体重+0.752×中心静脉导管置入+1.176×气管插管+2.406×肠外营养，受试者工作特征曲线下面积为0.870，灵敏度为89.2%，特异度为76.0%。 结论:低出生体重、中心静脉导管置入、气管插管、进行肠外营养4个独立危险因素构建的风险预测模型，对新生儿医院感染具有较好的预测性，有一定的临床应用价值。

目的:总结新生儿慢性肉芽肿病（chronic granulomatous disease，CGD）的临床特点、诊断方法及基因变异特征。方法:回顾性分析北京儿童医院新生儿中心2013年4月至2020年8月收治、经中性粒细胞呼吸爆发试验和基因检测确诊新生儿CGD患儿的病例资料，总结其临床特点、诊断方法及基因检测结果。结果:共收治11例CGD患儿，男10例，发病日龄（14.6±5.6）d，入院日龄（20.9±4.9）d，3例有家族史。首发症状发热10例，咳嗽1例；伴随症状咳嗽6例，呼吸困难4例，皮肤脓疱疹3例，发热、腹泻各1例。肺部CT表现为团絮状阴影6例，肺内结节影3例，圆形及不规则高密度影、肺内实变各1例，合并胸腔积液1例，胸膜增厚2例，经病理诊断CGD 1例。痰培养白色念珠菌3例，烟曲霉菌2例，烟曲霉菌合并金黄色葡萄球菌1例，烟曲霉菌合并肺炎克雷伯菌、大肠埃希氏菌1例。GM试验阳性2例，阴性2例。血和脑脊液培养均阴性。白细胞计数（10.0~44.0）×10 9/L，C反应蛋白14~165 mg/L。筛查诊断：中性粒细胞呼吸爆发试验阳性11例。基因检测结果：CYBB基因变异9例，NCF1基因、NCF2基因变异各1例。抗细菌联合抗真菌治疗2~5周，均好转出院。8例存活，其中5例行造血干细胞移植，4例成功，1例失败后继续口服药物存活；3例长期口服磺胺甲噁唑及伏立康唑或伊曲康唑。3例自行停药后死于重症感染。 结论:新生儿CGD以肺部感染多见，影像学多表现为肺内结节或团絮状阴影，少数可有实变或伴胸腔积液。可通过中性粒细胞呼吸爆发试验和基因检测诊断；基因变异以X连锁CYBB基因变异为主，少数为常染色体隐性遗传的NCF1/NCF2基因变异导致。

目的:探讨新生儿病房内医院感染的现状调查与危险因素分析。方法:采用便利抽样法选取2018年6月至2019年7月烟台市烟台山医院新生儿病房收治的新生儿470例作为研究对象。通过问卷调查的形式，收集研究对象基本资料，并对医院感染现状进行分析。通过单因素分析影响老年腹腔手术患者手术室感染的相关危险因素，通过多因素Logistic回归分析影响新生儿病房医院感染的独立危险因素。结果:该院新生儿病房收治的470例新生儿中，有11例新生儿发生医院感染，感染率为2.34%，感染部位分布为：上呼吸道感染4例(36.36%)、下呼吸道感染3例(27.27%)、消化道感染2例(18.18%)、泌尿系统感染1例(9.09%)、皮肤软组织感染1例(9.09%)。感染病原菌分布为：革兰阴性菌6例(54.54%)，以大肠埃希菌及肺炎克雷伯菌为主；革兰阳性菌5例(45.45%)，以金黄色葡萄球菌粪肠球菌为主。单因素分析结果显示，胎龄、出生体重、羊水污染、喂养方式、新生儿窒息、入住NICU、抗菌药物使用、住院时间及手卫生达标情况均是影响新生儿病房医院感染的相关因素(均 P<0.05)。Logistic回归方程分析结果显示，胎龄、出生体重、新生儿窒息及手卫生达标情况是影响新生儿病房医院感染的独立危险因素( OR>1， P<0.05)。 结论:新生儿病房医院感染通常可分为上/下呼吸道及消化道感染，且多以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌等病原菌为主，其危险因素分别与出生体重、新生儿窒息等独立因素相关。临床需针对上述特征及危险因素分别制定营养支持优化、感染防控强化管理和新生儿综合优质护理等相应防控对策，以降低新生儿病房医院感染风险。

目的:获取具有生物活性的狂犬病病毒核蛋白在大肠埃希菌表达系统中高效表达。方法:实验使用密码子优化技术重新编码狂犬病病毒CTN-1株核蛋白基因，人工合成全长基因并克隆至pET-43.1a表达载体，在大肠埃希菌BL21(DE3)株中诱导表达，并使用Western blot检测其反应原性。结果:诱导后SDS-PAGE分析显示在相对分子质量50×10 3处出现明显的表达条带，与预期蛋白质条带大小一致。其中在大肠埃希菌 A600为0.5左右，37℃诱导5 h时表达产量最高(约为32.3%)。大量表达时核蛋白的表达形式主要为包涵体，后经Ni 2+螯合层析纯化，获得纯度为95%以上的目的蛋白。纯化产物经Western blot鉴定，与疫苗免疫小鼠血清呈阳性反应，表明大肠埃希菌表达CTN-1株核蛋白具有生物活性。 结论:本实验成功建立了CTN-1株核蛋白在大肠埃希菌表达系统的高效表达方法，并获得了高纯度目的蛋白，为进一步的临床诊断和新型疫苗制备提供基础资料。

目的:分析不同感染类型新生儿败血症的临床特征。方法:采用回顾性研究方法，选取中南地区5家医院新生儿科2012年1月至2019年12月确诊败血症的新生儿为研究对象，根据发病日龄（≤3 d和>3 d）分为早发型败血症（early-onset sepsis，EOS）组和晚发型败血症（late-onset sepsis，LOS）组，LOS组再根据入院后发病时间（>48 h和≤48 h）分为医院感染LOS组和社区感染LOS组。应用SPSS 26.0统计软件对各组临床特征和病原学特点进行分析。结果:纳入的580例患儿中EOS组286例（49.3%），LOS组294例（50.7%）。LOS组中，医院感染和社区感染各147例。医院感染LOS组胎龄和出生体重小于EOS组和社区感染LOS组［（32.7±3.6）周比（37.1±3.7）周、（37.7±3.0）周，（1 810±717）g比（2 837±865）g、（3 024±710）g］，差异有统计学意义（ P<0.05）。EOS组和社区感染LOS组致病菌以凝固酶阴性葡萄球菌和大肠埃希菌为主，医院感染LOS组以肺炎克雷伯菌为主。医院感染LOS组应用碳青霉烯类抗生素的比例高于EOS组和社区感染LOS组（62.6%比28.7%、16.2%）（ P<0.05），且抗生素使用疗程长于EOS组和社区感染LOS组［19（14，27）d比15（12，20）d、14（12，19）d］（ P<0.05）。 结论:不同感染类型的新生儿败血症临床特点存在差异，有必要建立相应的防控和诊治方案。