目的:对天然猪小肠黏膜下层(SIS)膜进行表面修饰以提升其生物学活性。方法:采用溶胶-凝胶法对天然SIS膜进行了纳米羟基磷灰石(nHA)表面涂层以获得新型SIS/nHA膜，将0.5 mol/L四水硝酸钙[Ca(NO 3) 2·4H 2O]溶于无菌去离子水并搅拌均匀，随后将0.5 g SIS膜基材浸没其中持续搅拌20 min，加入0.3 mol/L磷酸氢二铵[(NH 4) 2·HPO 4]溶液，并滴加氢氧化铵(NH 4OH)调节溶液pH至10，37 ℃下磁力持续搅拌直至溶胶形成，待反应完全后，取出SIS基材，用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤3次，室温干燥。重复上述溶胶-凝胶过程3次，获得SIS/nHA膜。然后利用能谱-扫描电镜对材料表面理化性质进行表征，再将小鼠前成骨细胞以5×10 4细胞/膜的密度接种于各组材料，通过死活染色和噻唑蓝(MTT)试剂盒检测细胞在1、3、7 d增殖活性，同时将人脐静脉内皮细胞悬液(100 μl，1×10 5/ml)接种于铺有Matrigel胶的96孔板，比较SIS/nHA和SIS诱导成管能力。组间比较采用独立样本 t检验。 结果:溶胶-凝胶法成功将nHA沉积于SIS膜表面，与单纯的天然SIS膜比较，修饰后的SIS/nHA具有更理想的纳米磷灰石表面拓扑形貌；而且，体外实验证实培养1 d时，SIS和SIS/nHA的成骨增殖活性差异无统计学意义(0.215±0.027比0.230±0.035， t＝0.588， P>0.05)；而持续培养3 d(0.382±0.041比0.261±0.031， t＝4.077， P<0.05)和7 d(0.543±0.055比0.392±0.040， t＝3.846， P<0.05)后，SIS/nHA的成骨增殖活性显著高于SIS，差异均有统计学意义。体外成骨结果表明，SIS/nHA诱导4 h形成的成管节点数显著高于SIS组[(46.5±6.4)个比(31.3±5.1)个， t＝3.217， P<0.05]，同时SIS/nHA诱导形成的管腔长度也显著高于SIS组[(5 170.6±620.5) μm比(3 482.2±480.1) μm， t＝3.727， P<0.05]，差异均有统计学意义。 结论:nHA涂层修饰有效提升了SIS膜的表面生物活性，可在一定程度上为SIS的表面改性提供实验依据。

目的:建立现场海水浸泡伤动物感染模型，研究致病菌种类，为海水浸泡伤的诊疗提供依据。方法:于舟山某码头设立9个海水取水点，用无菌海水采样器取水。采用宏基因组测序法检测实验海域海水中所有的细菌种类，并作为海水对照组（SW组）。选取健康白猪16只，均通过手术造成左胫骨开放性骨折，按照实验设计分为实验组（ n=10）和对照组（ n=6）。实验组白猪创面于海水中浸泡2 h，而对照组白猪旷置于无菌手术室。2 h后所有实验动物包扎伤口，定期换药。术后7 d取伤口深部软组织、骨组织行病理学检查并观察感染情况，采用微生物多样性分析法检测致病菌种类并进行差异性分析。 结果:实验组10只白猪皆感染，对照组6只白猪中2只感染；与SW组比较，实验组菌群数量明显减少；与对照组比较，实验组菌群数量明显增多（ P<0.05或 P<0.01）。所有感染的白猪均检出坏死性梭杆菌、孔氏创伤球菌、猪链球菌、大肠埃希菌等机会致病菌，实验组除检出海水中专有的狭义梭状杆菌、脱硫弧菌、哈维氏弧菌外，还检出大芬戈尔德菌、化脓性拟杆菌等多种厌氧菌。 结论:开放性创伤经海水浸泡后具有较高的感染率，且为机会致病菌、海水细菌和厌氧菌的混合感染，故早期彻底的外科清创和使用覆盖厌氧菌的广谱抗生素对控制感染具有重要意义。

目的:通过动物活体实验探索内镜超声引导下哑铃样金属支架(LAMS)置入后胆囊取石的安全性与可行性。方法:选择体重30～35 kg小型猪6头，静脉麻醉下经腹部开放手术于胆囊内分别置入直径0.8～2.0 cm无菌人结石2～4枚，缝合胆囊及腹腔。造模成功后内镜超声引导下置入LAMS。超细内镜经胃越过支架进入胆囊后寻找结石并取出。经内镜乳头括约肌切开术(EST)及经内镜胆道内支架引流术(ERBD)预防胆漏。再以普通内镜拔出LAMS，金属夹封闭胃壁创面。观察技术成功率、操作时间及并发症发生情况。结果:5头猪在内镜超声引导下成功置入LAMS，超细内镜顺利进入胆囊，取石网篮取出直径小于1 cm结石，大结石经激光碎石后完全取出。操作总时间为87～128 min。术后观察无出血、穿孔、感染、胆瘘等并发症发生。另1头猪置入LAMS失败，由于先行EST加ERBD，造成胆囊体积缩小并远离胃腔，穿刺困难。结论:内镜超声引导下经胃-胆囊置入LAMS后超细内镜取出胆囊结石技术安全可行，可为行胆囊切除术困难者提供一种新的治疗途径。

目的:探究猪带绦虫（Ts）14-3-3.3蛋白作为囊虫病疫苗候选分子的潜力。方法:选取60只昆明小鼠，体重为18 ~ 22 g，按体重采用随机数字表法分为3组，分别为生理盐水对照组（对照组）、Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗组（疫苗组）、Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗 +佐剂组（疫苗 +佐剂组），每组20只。采用多点皮下注射法，在0周首次免疫后进行2次加强免疫，共免疫3次，每次接种间隔2周。3组在首次免疫后0、2、4、6、8周分别剖杀4只小鼠，摘眼球取血和无菌取脾，分别用于分离血清和制备脾淋巴细胞悬液[处理因素：原液、抗原刺激、刀豆蛋白A（ConA）刺激]。采用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测小鼠血清特异性抗体免疫球蛋白（Ig）G、IgG2a、IgG1及IgE水平；采用CCK-8法检测小鼠脾淋巴细胞增殖水平；采用双抗夹心ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液肿瘤坏死因子（TNF）-α、白细胞介素（IL）-12、IL-13、IL-10水平。结果:疫苗、疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周IgG、IgG2a、IgG1水平均高于对照组，且疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周上述指标均高于疫苗组（ P均 < 0.05）。组间相同处理因素下，免疫2 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平比较，差异均有统计学意义（ P均 < 0.05）；疫苗、疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平均高于对照组，且疫苗 +佐剂组免疫2 ~ 8周上述指标均高于疫苗组（ P均 < 0.05）。组内不同处理因素下，抗原刺激、ConA刺激时免疫0 ~ 8周脾淋巴细胞增殖水平以及培养上清液TNF-α、IL-12、IL-13、IL-10水平均高于原液，且ConA刺激时免疫0 ~ 8周上述指标均高于抗原刺激（ P均 < 0.05）。 结论:Ts14-3-3.3重组蛋白疫苗可诱导小鼠产生有效的免疫应答。

[目的]以猪为动物模型研究共生微生物对宿主肠道发育代谢的调控作用.[方法]经无菌剖腹产、无菌饲养等技术培育无菌(germ-free,GF)仔猪和无特定病原(specific pathogen-free,SPF)仔猪,通过形态学观察、液相色谱分析、RNA-seq等方法研究共生微生物对仔猪肠道形态、代谢、基因表达及线粒体功能的影响.[结果]共生微生物对仔猪肠道的形态结构、短链脂肪酸含量、氨基酸代谢和肠道细胞线粒体含量等方面产生不同程度的影响;共生微生物影响仔猪肝脏、回肠和结肠组织的整体基因表达,调控线粒体氧化磷酸化、氨基酸代谢、脂质代谢等生物学过程相关基因表达,导致线粒体功能发生改变,从而影响仔猪肠道营养物质的吸收与代谢.[结论]共生微生物通过调控肠道细胞线粒体从而影响仔猪肠道发育和代谢,为"微生物-宿主互作"调控仔猪肠道健康相关研究奠定理论基础.

菌群与宿主相互关系等热点研究促进了对无菌动物需求的迅猛发展.无菌猪作为一种特殊的模式动物,其在科学研究中不仅排除了背景微生物因素的影响,而且与常用的无菌小鼠相比,其在解剖、生理、代谢等方面与人更为相似,因此在生命科学研究领域具有重要的应用价值.本文结合现有国外无菌猪研究进展和本实验室在无菌猪研究积累,就无菌猪的制备与微生物质量控制进行简要探讨.

[目的]研究猪圆环病毒2型(PCV2)感染导致的仔猪空肠病理变化及其菌群变化.[方法]经过口服和肌肉注射PCV2后测定3头仔猪病毒血症情况;随后将6头断奶仔猪随机分为感染组和对照组,感染组3头,空白组3头.相同接种途径感染仔猪,在感染后21 d宰杀仔猪,无菌采集空肠肠段及内容物分别进行显微病理观察和MiSeq测序分析空肠菌群变化.[结果]PCV2感染后21 d仔猪血清中病毒核酸达到较高水平,感染组仔猪空肠绒毛萎缩脱落,空肠微生物种类和丰度发生变化,菌群多样性增高,乳酸菌属含量显著降低,假单胞菌属含量显著增高.[结论]PCV2感染导致仔猪空肠菌群发生一定变化,空肠有益菌减少,有害菌增多,加重仔猪空肠炎症发生.

目的 目前临床上黏膜下注射剂种类繁多,但使用何种黏膜下注射剂尚未达成共识.将异戊烷作为一种黏膜下注射剂,评估其可行性、有效性及安全性,为临床应用提供依据. 方法 37℃恒温水浴下,对新鲜离体猪胃(离体时间<6 h)进行黏膜下注射,观察对比注射等渗盐水与注射异戊烷后黏膜隆起一定高度(1.5 cm),等渗盐水和异戊烷的用量和隆起效果;新鲜离体猪胃,用等渗盐水和异戊烷隆起相同面积(直径2 cm)的黏膜,随后采用高频电刀进行隆起部位完整切除,对比分析操作时间;在活体大鼠的胃黏膜下注射相同量(20 μL)的等渗盐水(对照组)或异戊烷(实验组),测量注射部位黏膜厚度,1 h后用无菌手术刀片完整切除隆起部位(直径2 mm),测定黏膜切除10 min内的出血量,并对隆起部位进行病理检查. 结果 将离体猪胃黏膜隆起相同高度(1.5 cm),异戊烷的平均用量[(0.14±0.07)mL]显著少于等渗盐水[(13.65±4.60)]mL,差异具有统计学意义(P<0.01).5、10、15、20、30、45、60 min时,与等渗盐水相比,异戊烷维持率差异均有统计学差异(P<0.01).黏膜下等渗盐水注射初始平均隆起面积为[(18.10±6.22)cm2],60 min平均隆起面积为[(24.24±7.19)cm2],差异具有统计学意义(P=0.03);异戊烷隆起面积则相对稳定,黏膜下注射0 min和60 min时的平均隆起面积差异无统计学意义[(22.93±8.16) cm2vs(21.70±7.86)cm2,P=0.71].异戊烷处理后平均切开时间[(3.22±0.53)min]显著短于等渗盐水处理[(9.60±1.98) min],差异具有统计学意义(P<0.01).黏膜下注射前后异戊烷处理后、黏膜厚度变化差值显著高于等渗盐水处理[(1.34± 0.30)mm vs(0.28±0.16)mm,P=0.000]. 结论 黏膜下注射异戊烷可持久维持有效的黏膜隆起高度,有利于后续内镜黏膜切除操作,对组织无损害,有望成为一种新型的黏膜下注射剂.

目的 通过将不同饲料利用效率猪的粪便移植至伪无菌小鼠,探讨其对受体小鼠生长性能的影响规律,并初步揭示其机制.方法 使用36头28 kg左右的杜×长×大阉公猪进行42 d单笼饲养(自由采食)并测算其饲料转化效率.实验结束时将36头猪根据饲料转化效率分为高、中、低3组,采集三组猪的新鲜粪便,通过灌胃移植到经广谱抗生素处理过的小鼠中,监测粪便移植后小鼠的生长性能变化.采用全收粪法测定饲料利用效率高、中、低三组猪的营养物质消化率,并采用16S rRNA V3-4可变区扩增测序对猪和小鼠的粪便微生物组成进行分析比较.结果 将不同饲料利用效率猪的粪便移植至广谱抗生素处理的伪无菌小鼠后,小鼠重现了猪的生长性能表型;在肠道微生物的组成结构方面,高饲料转化效率猪及其高生长性能的受体鼠,肠道微生物的物种丰富度和微生物多样性相对较高;高饲料利用效率猪的总能消化率(P=0.01)显著增加,产气短杆菌的丰度显著提高,且其粪便移植后受体小鼠的肠球菌和阿克曼氏菌丰度也显著高于低饲料利用效率的受体小鼠,表明肠道微生物在能量的高效利用方面起着重要的作用.结论 移植不同饲料利用效率猪的粪便可定向改变伪无菌小鼠肠道微生物的物种丰富度、微生物多样性及其生长性能.高饲料利用效率猪的优势主要在于能量消化利用效率较高,肠道中与能量高效利用相关微生物丰度相对较高.

目的:通过构建猪的感染创面的实验动物模型,来揭示负压封闭引流对感染创面愈合过程中黏附分子的影响.方法:制作猪背部感染创面模型,分别用无菌纱布(对照组)及负压(实验组)治疗创面.记录创面一般愈合情况及恢复时间,术后不同时间点分别用Western Blot及蛋白芯片技术检测ICAM-1、VCAM-1、P-selectin、E-se-lectin表达量的高低.结果:创面恢复时间实验组少于对照组;感染创面造模成功且术后3、7d创面中心的组织中细菌数实验组均小于对照组;术后14 d创面均未检出细菌.Western Blot及蛋白芯片技术结果均显示术后3d和7d,实验组ICAM-1、VCAM-1、P-selectin表达均显著高于对照组.结论:负压封闭引流技术可以有效控制感染,促进感染创面愈合,其机制可能与增加创面愈合过程中ICAM-1,VCAM-1,P-selectin,E-selectin的表达有关.