创面愈合是一个复杂而关键的过程，包括炎症、增殖和重塑3个阶段。表皮细胞在创面愈合中受到精密调控，一方面创缘周围的角质形成细胞通过迁移、增殖，形成新的基膜覆盖创面；另一方面表皮干细胞经过激活后，增殖分化被促进，终末分化、凋亡被抑制，角质形成细胞和表皮干细胞在各种因素调控下共同促进再上皮化进程。表皮组织中有一群对表皮组织功能维护有关键作用的T细胞亚群——树突状表皮T细胞（DETC）。DETC识别未知抗原后被激活，活化的DETC分泌胰岛素样生长因子Ⅰ、角质细胞生长因子1/2、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、γ干扰素、转化生长因子β等细胞因子，通过调节角质形成细胞迁移、增殖、凋亡之间的动态平衡以及创缘周围表皮干细胞的分化，促进表皮维持稳态和再上皮化。本文就DETC的生物特性、维持表皮稳态、在创面愈合中的作用几个方面展开讨论。

胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin，TSLP)，作为一种多效性的细胞生长因子，不仅参与人体皮肤纤维化、表皮增生以及血管生成等过程，同时还对免疫相关疾病(如呼吸系统疾病、过敏性疾病等)中多种免疫细胞具有调控作用，是免疫细胞的关键调控因子。TSLP主要通过TSLP受体介导的JAK/STAT、NF-κB等信号通路，参与调控多种固有免疫细胞(如树突状细胞、肥大细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、自然杀伤性T细胞、固有淋巴细胞)以及适应性免疫应答细胞(T和B淋巴细胞等)的分化、增殖过程与功能。现就近年来TSLP对多种免疫细胞增殖、分化及功能的调控研究进展作一综述。

目的:了解树突状表皮T淋巴细胞(DETC)对小鼠创缘表皮细胞增殖和凋亡的影响及其在创面愈合中的作用。方法:选取无特殊病原体(SPF)级野生型C57BL/6健康8～12周龄雄性小鼠28只、SPF级8～12周龄T淋巴细胞受体δ敲除(TCR δ －/－)雄性小鼠60只用于如下实验。(1)采用随机数字表法取8只野生型小鼠分离表皮细胞、原代培养DETC，并于培养即刻及培养15、30 d行DETC形态学观察和采用流式细胞仪检测纯度。(2)采用随机数字表法取5只野生型小鼠、5只TCR δ －/－小鼠，分别设为野生型对照组、TCR δ －/－组，每只小鼠背部制作直径6 mm圆形全层皮肤缺损创面。观察伤后即刻及伤后2、4、6、8、10 d创面愈合情况、计算剩余创面面积百分比。(3)同实验(2)取小鼠，分组并制作全层皮肤缺损模型。伤后3 d取创缘组织进行苏木精-伊红染色，检测新生上皮长度。(4)同实验(2)取小鼠，分组并制作全层皮肤缺损模型。伤后3 d取创缘表皮组织，采用蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，评估表皮细胞增殖情况。(5)同实验(2)取小鼠，分组并制作全层皮肤缺损模型。伤后3 d取创缘的表皮组织消化成单细胞悬液，采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。(6)取40只TCR δ －/－小鼠，同前行实验(2)～(5)检测，并采用随机数字表法分为TCR δ －/－对照组和TCR δ －/－＋DETC组，每个实验每组5只小鼠。其中小鼠背部同前造成全层皮肤缺损，TCR δ －/－＋DETC组小鼠伤后即刻于创缘多点注射1×10 5个DETC(溶解于100 μL磷酸盐缓冲液，纯度超过90%)，TCR δ －/－对照组小鼠同法注射等体积磷酸盐缓冲液。对数据行重复测量方差分析、 t检验及Bonferroni校正。 结果:(1)随着培养时间的延长，DETC树突状突起的数量逐渐增多。培养即刻，4.67%的细胞是T淋巴细胞，这部分T淋巴细胞中94.10%为DETC。培养15 d时DETC纯度达18.50%，培养30 d时DETC纯度达98.70%。(2)伤后即刻，TCR δ －/－组、野生型对照组小鼠的创面情况相似；TCR δ －/－组小鼠伤后2～10 d的创面愈合速度慢于野生型对照组。与野生型对照组小鼠比较，TCR δ －/－组小鼠伤后2、4、6、8、10 d剩余创面面积百分比均明显升高( t＝3.492、4.425、4.170、4.780、7.318, P<0.01)。(3)TCR δ －/－组小鼠伤后3 d创缘新生上皮长度为(359±15)μm，明显短于野生型对照组的(462±26)μm( t＝3.462， P<0.01)。(4)TCR δ －/－对照组小鼠伤后即刻的创面情况与TCR δ －/－＋DETC组相似；TCR δ －/－＋DETC组小鼠伤后2～10 d的创面愈合速度明显快于TCR δ －/－对照组。与TCR δ －/－对照组比较，TCR δ －/－＋DETC组小鼠伤后2、4、6、8、10 d剩余创面面积百分比明显降低( t＝2.308、3.725、2.698、3.707、6.093, P<0.05或 P<0.01)。(5)TCR δ －/－＋DETC组小鼠伤后3 d创缘新生上皮长度为(465±31)μm，明显长于TCR δ －/－对照组的(375±21)μm( t＝2.390， P<0.05)。(6)伤后3 d，TCR δ －/－组小鼠创缘表皮细胞的PCNA表达量为1.25±0.04，明显低于野生型对照组的2.01±0.09( t＝7.415， P<0.01)。(7)伤后3 d，TCR δ －/－＋DETC组小鼠创缘表皮细胞的PCNA表达量为1.62±0.08，明显高于TCR δ －/－对照组的1.05±0.14( t＝3.561， P<0.05)。(8)伤后3 d，TCR δ －/－组小鼠创缘表皮细胞凋亡率为(16.1±1.4)%，明显高于野生型对照组的(8.1±0.6)%( t＝5.363， P<0.01)。(9)伤后3 d，TCR δ －/－＋DETC组小鼠创缘的表皮细胞凋亡率为(11.4±1.0)%，明显低于TCR δ －/－对照组的(15.4±1.4)%( t＝2.377， P<0.05)。 结论:DETC可通过促进小鼠创缘表皮细胞的增殖、抑制其凋亡，参与创面愈合过程。

目的:探讨卡泊三醇对咪喹莫特诱导的小鼠银屑病模型的治疗作用及机制.方法:BALB/c小鼠随机分为3组:空白对照组、咪喹莫特组和卡泊三醇组.咪喹莫特组小鼠背部每日涂抹5％咪喹莫特乳膏,卡泊三醇组小鼠背部每日先涂抹5％咪喹莫特乳膏,6h后再涂抹卡泊三醇搽剂,空白对照组每日涂抹凡士林作为对照.采用银屑病皮损面积与严重度指数(PASI)评分观察各组小鼠皮损变化情况;光镜观察皮损组织形态学变化;免疫病理分析各组皮损组织中淋巴细胞、中性粒细胞和树突状细胞浸润情况;实时荧光定量聚合酶链反应(q-PCR)对小鼠皮损组织中炎性细胞因子白细胞介素(IL)-17和干扰素(IFN)-γ的表达水平进行检测.结果:与咪喹莫特组比较,卡泊三醇组银屑病样皮损变化显著减轻,临床症状评分(clinical score,CS)降低,差异有统计学意义(P＜0.05);与咪喹莫特组比较,卡泊三醇组表皮厚度明显变薄,银屑病病理评分(Baker)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫病理结果显示卡泊三醇组皮损中的淋巴细胞、中性粒细胞和树突状细胞均低于咪喹莫特组,卡泊三醇组IL-17和IFN-γ表达水平与咪喹莫特组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:卡泊三醇具有一定的抗银屑病作用;该作用可能与降低皮损处的IL-17和IFN-γ表达水平有关.

目的 探讨母细胞性浆细胞样树突状细胞肿瘤(BPDCN)的临床特征、诊断、治疗方法及疗效,以提高临床对该病的认识.方法 选择2017年8月21日,清华大学附属北京清华长庚医院血液科收治的1例BPDCN患者为研究对象.本例患者2016年11月于外院被诊断为BPDCN,随后接受5个疗程CHOP(环磷酰胺+多柔比星+长春新碱+泼尼松)-21方案化疗,获得部分缓解(PR)后,于2017年6月复发,为进一步治疗就诊于本院血液科.入院后,结合患者病史,并根据临床表现、骨髓检查及相关实验室检查结果进行诊断.2017年8月25日患者接受VDCP(长春地辛+柔红霉素+环磷酰胺+地塞米松)方案化疗,其中长春地辛的治疗策略为4 mg/d,d1、8、1 5、22应用;柔红霉素为60 mg/d,d4～5应用,80 mg/d,d6应用,60 mg/d,d15～16应用;环磷酰胺为1.7 g/d,d4、15应用;地塞米松为17 mg/d,d1～7应用;共化疗3个疗程.回顾性分析本例患者的实验室检查结果、进一步确诊及对疾病进展进行评估及疗效,并且对相关文献进行复习,探讨BPDCN诊疗的研究进展.结果 ①本次入院后,患者骨髓细胞流式细胞术检测结果示,原始细胞分布区域可见异常细胞群,约占有核细胞的9.4％,表达人类白细胞抗原(HLA)-DR、CD4、CD38、CD56、CD123,部分细胞表达CD33.骨髓细胞形态学检查结果示,骨髓细胞增生明显活跃,粒细胞系比例为38.0％、红细胞系比例为24.0％,粒、红细胞系比值为1.58∶1;可见巨核系细胞,以及成片增生的异型淋巴样细胞;原始细胞比例为27.0％,考虑为BPDCN骨髓侵犯.骨髓细胞免疫组织化学检测结果示,CD4(+)、CD56(+)、CD123(+)、CD68(+)、CD235(红细胞系+)、髓过氧化物酶(MPO)(粒细胞系+)、末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)(-)、CD117(＜1％)、CD3(-)、CD20()、CD23(-)、T细胞内抗原(TIA)-1(+),颗粒酶B(-).患者头皮活组织检查结果示,皮肤组织真皮全层可见肿瘤细胞弥漫性单一性浸润,未累及表皮;免疫组织化学检测结果示,CD4(+)、CD43(+)、CD56(+)、CD123(弱+)、TdT(散在+)、CD117(-)、CD3(-)、CD20(-)、CD23(-)、TIA-1(-)、颗粒酶B(-)、CD68(散在+).②本例患者确诊为BPDCN,入院时患者综合评估为疾病进展(PD).③VDCP方案化疗结束后,患者头皮、颜面、躯干皮疹全部消退;粒细胞计数恢复至正常参考值范围内;骨髓涂片结果示,骨髓增生明显活跃,粒细胞系比例为50.0％、红细胞系比例为36.5％,粒、红细胞系比值为1.37∶1,原始粒细胞比例为0.5％,可见异常淋巴细胞比例为3.5％.综合评价患者疗效为完全缓解(CR).患者拒绝继续治疗,于发病后20个月后(2018年2月)死亡.结论 BPDCN非常罕见,病程呈侵袭性,目前尚无标准治疗方案,预后差.

目的:观察清肝凉血解毒汤对咪喹莫特诱导的银屑病样小鼠模型皮损的影响.方法:72只BALB/c雄性小鼠,背部刮毛,随机分为空白对照组(Control,C)、模型组(Model,M)、复方高、中、低剂量组(Q-H、Q-M、Q-L)和甲氨蝶呤组(MTX),5％咪喹莫特乳膏(IMQ)背部涂抹诱导皮肤银屑病样模型.采用银屑病皮损面积和疾病严重程度(Psoriasis area and severity index,PASI)每日进行评分,光镜下观察皮损组织形态学变化及表皮厚度;免疫组化法检测皮损中增殖细胞核抗原(PCNA)和T淋巴细胞表面标志CD3表达情况;免疫荧光法检测皮损中CD11c+树突状细胞、CGRP、NK1R表达情况;采用实时PCR技术检测皮损中IL-1β、IL-12、IL-23mRNA表达水平;Western Blot法检测皮损中NPY、SP蛋白表达情况.结果:M组小鼠皮损上鳞屑厚,浸润明显,红斑重;其余各组皮损均较M组轻.与C组相比,M组表皮厚度、PCNA、CD3+ T细胞及CD11c+细胞均明显增多(P＜0.01);复方各剂量组与M组相比,表皮薄,PCNA、CD3+及CD11c+细胞表达个数均明显减少.M组与C组相比,CGRP、NK-1R、IL-1β、IL-12、IL-23mRNA表达均上调(P＜0.05),而余组与M组相比,上述指标的表达均明显下调(P＜0.05).与C组相比,M组小鼠皮损中NPY的表达增高(P＜0.05),MTX、Q-M、Q-L组表达量较M组低(P＜0.05);M、MTX、Q-M、Q-L组皮损中SP的表达均呈增高趋势,但组间相比无统计学差异.结论:清肝凉血解毒汤可通过下调NK-1R、NPY、CGRP的表达水平改善小鼠银屑病样皮损,降低表皮细胞的异常增殖、减轻炎症细胞的浸润,减少皮肤中CD11c+树突状细胞数量,下调IL-1β、IL-12、IL-23细胞因子的表达水平.

目的 探讨树突状表皮T淋巴细胞(DETC)和Vγ4 T淋巴细胞对小鼠表皮细胞增殖分化的影响及其在创面愈合中的作用. 方法 (1)取6只8周龄C57BL/6雄性小鼠,采用随机数字表法(分组方法下同)分为对照组和创面组,每组3只.于创面组小鼠背部剪1条长4 cm深达皮肤全层的直线切口,对照组小鼠不行任何处理.伤后3d,断颈处死2组小鼠,取创面组小鼠背部距创缘5 mm内的皮肤,取对照组小鼠相应部位正常皮肤制成单细胞悬液,流式细胞仪检测表达白细胞介素17A(IL-17A)的Vγ4 T淋巴细胞的百分比及表达胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的DETC百分比.(2)取10只8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为对照组和Vγ4T淋巴细胞清除组,每组5只.Vγ4 T淋巴细胞清除组小鼠腹腔注射200 g亚美尼亚仓鼠抗小鼠Vγ4 T淋巴细胞单克隆中和抗体,对照组小鼠腹腔注射等量亚美尼亚仓鼠Ig,分别于背部脊柱两侧各打1个深达皮肤全层的孔,观察伤后1～8d创面愈合情况,并计算剩余创面面积百分比.(3)取6只8周龄C57BL/6雄性小鼠,同实验(2)进行分组及处理,每组3只.伤后3d,蛋白质印迹法检测创缘表皮组织IL-17A和IGF-Ⅰ的蛋白表达.(4)取30只3d龄C57BL/6雄性小鼠,断颈处死后提取表皮细胞,流式细胞仪(下同)检测角蛋白14阳性细胞率.(5)另取小鼠表皮细胞,分为对照组、IGF-Ⅰ组与IL-17A组,每组3孔(下同).IGF-Ⅰ组与IL-17A组细胞分别加入1 mL终质量浓度为100 ng/mL的重组小鼠IGF-Ⅰ和重组小鼠IL-17A,对照组细胞加入等量无菌磷酸盐缓冲液(PBS).培养5d后,检测角蛋白14阴性细胞率.另取小鼠表皮细胞,同前进行分组及处理,培养10 d后,检测角蛋白10阳性细胞率.(6)另取小鼠表皮细胞,加入4 mmol/L羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染液,分为对照0d组、对照7d组、IGF-Ⅰ组、IL-17A组.IGF-Ⅰ组、IL-17A组细胞同实验(5)对应组进行处理,对照0d组、对照7d组细胞同实验(5)对照组进行处理.对照0d组细胞培养0d,余3组细胞培养7d,检测CFSE荧光波峰位置.(7)另取小鼠表皮细胞,分为对照组、IGF-Ⅰ组.IGF-Ⅰ组细胞加入1 mL终质量浓度为100 ng/mL重组小鼠IGF-Ⅰ,对照组细胞加入等量无菌PBS,培养5d后,同前进行角蛋白14和CFSE染色,检测CFSE阳性细胞角蛋白14阴性细胞率.另取小鼠表皮细胞,分为对照组与IL-17A组,IL-17A组细胞加入1 mL终质量浓度为100 ng/mL重组小鼠IL-17A,对照组细胞加入等量无菌PBS,培养5d后,检测CFSE阳性细胞角蛋白14阴性细胞率.对数据行单因素方差分析和t检验. 结果 (1)伤后3d,对照组小鼠正常表皮组织中表达IGF-Ⅰ的DETC百分比为(9.9±0.8)％,明显低于创面组小鼠创缘表皮组织中的(19.0±0.6)％,t=8.70,P＜0.01;对照组小鼠正常表皮组织中表达IL-17A的Vγ4 T淋巴细胞百分比为(0.123 ±0.024)％,明显低于创面组小鼠创缘表皮组织中的(8.967±0.406)％,t=21.77,P＜0.01.(2)对照组小鼠伤后1～4d创面周围有明显的炎症反应;伤后5～8d,创面面积仍较大.Vγ4 T淋巴细胞清除组小鼠伤后1～4d创面周围炎症反应较轻;伤后5～8d,创面面积明显缩小.伤后3～7d,Vγ4 T淋巴细胞清除组小鼠剩余创面面积百分比明显低于对照组(t=5.92、5.74、7.17、5.38、5.57,P＜0.01);培养1、2、8d,2组小鼠剩余创面面积百分比相近(t =1.46、3.17、3.10,P＞0.05).(3)伤后3d,与对照组比较,Vγ4T淋巴细胞清除组小鼠创缘表皮组织的IL-17A蛋白表达明显下降,IGF-Ⅰ蛋白表达明显升高(t=8.47、19.24,P＜0.01).(4)小鼠表皮细胞角蛋白14阳性细胞率为94.7％.(5)培养5d后,对照组小鼠表皮细胞角蛋白14阴性细胞率明显高于IGF-Ⅰ组,明显低于IL-17A组(t=7.25、5.64,P＜0.01).培养10d后,对照组小鼠表皮细胞角蛋白10阳性细胞率明显高于IGF-Ⅰ组,明显低于IL-17A组(t=3.99、10.82,P＜0.05或P＜0.01).(6)相较于对照0d组,对照7d组、IGF-Ⅰ组和IL-17A组小鼠表皮细胞培养7d后CFSE荧光波峰左移.相较于对照7d组,IGF-Ⅰ组和IL-17A组小鼠表皮细胞培养7d后CFSE荧光波峰均左移.(7)培养5d后,对照组CFSE阳性小鼠表皮细胞角蛋白14阴性细胞率明显高于IGF-Ⅰ组(t=9.91,P ＜0.01),对照组CFSE阳性小鼠表皮细胞角蛋白14阴性细胞率明显低于IL-17A组(t=6.49,P＜0.01). 结论 在创面愈合过程中,DETC分泌的IGF-Ⅰ促进小鼠角蛋白14阳性表皮细胞增殖并抑制其终末分化,Vγ4T淋巴细胞分泌的IL-17A促进其增殖及终末分化,从而影响创面愈合.

目的 探讨调节性T淋巴细胞(Treg细胞)在人表皮生长因子受体2(HER2)阳性乳腺癌患中的免疫作用机制.方法 梯度离心方法分离健康献血者(对照组)、HER2阳性未转移乳腺癌患者、HER2阳性转移乳腺癌患者外周血单个核细胞(PBMC).各组均加入刀豆蛋白A(ConA)刺激增殖分化(5μg/mL).各组作用60 h后采用EdU检测各组细胞增殖情况,流式细胞学检测各组CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg细胞比例和树突状细胞(DC)比例,实时荧光定量聚合酶链反应检测每组细胞中FoxP3 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组上清液中细胞因子血清转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)的水平.结果 Co-nA可以刺激各组细胞增加,与对照组相比,HER2阳性未转移乳腺癌组、HER2阳性转移乳腺癌组细胞增殖显著(P＜0.01),CD4+ CD25+ FOXP3+ Treg细胞占CD4+T淋巴细胞的比例和FoxP3 mRNA的表达增加(P＜0.01).与对照组相比,HER2阳性未转移乳腺癌组、HER2阳性转移乳腺癌组DC中CD86分子表达下调(P＜0.01).与对照组相比,HER2阳性未转移乳腺癌组、HER2阳性转移乳腺癌组上清液中TGF-β和IL-10的水平明显升高(P＜0.01).结论 通过促进Treg细胞及细胞因子的高表达,从而HER2阳性乳腺癌患者发挥免疫抑制作用.

三阴性乳腺癌(TNBC)由于缺乏雌激素受体、孕激素受体和人表皮生长因子受体2的表达,常规治疗效果欠佳.免疫疗法是一种通过增强机体对抗癌症的天然防御能力来治疗癌症的方法.TNBC的免疫疗法方案包括免疫检查点抑制剂(抗程序性死亡受体-1/程序性死亡配体-1抗体、抗细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体、抗CD47抗体)、肿瘤疫苗(肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体受体2疫苗、树突状细胞疫苗、多价肽疫苗)、T细胞(肿瘤浸润淋巴细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞、嵌合抗原受体T细胞)、溶瘤病毒(T-Vec、CF189)等,可提高TNBC患者的生存率和预后,提高免疫特异性和免疫记忆能力,为TNBC的治疗提供一个新的契机.

皮肤含有多种免疫细胞,如T淋巴细胞、皮肤郎格罕细胞、真皮树突状细胞及角朊细胞等。其中角朊细胞能产生IL-1、IL-6、IL-7、IL-8、IL-10、α-肿瘤坏死因子、集落刺激因子及生长因子等多种细胞因子。皮肤免疫细胞及其细胞因子以及表皮血管系统的细胞粘附分子,不仅与皮肤的炎症反应有关,而且在银屑病的免疫发病机制中还起着重要的作用。