目的:评价核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)在小鼠脓毒症相关性脑病中的作用及其与小胶质细胞焦亡的关系。方法:SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠24只，6~8周龄，体质量18~22 g，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：假手术组(Sham组)、脓毒症相关性脑病组(SAE组)和脓毒症相关性脑病+NLRP3抑制剂MCC950组(SAE+MCC950组)。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症相关性脑病模型。SAE+MCC950组小鼠造模后1 h时腹腔注射MCC950 20 mg/kg，余组注射等容量生理盐水。造模后1 d时行旷场实验，记录站立次数和中央区停留时间；造模后2~3 d行新物体识别实验，记录探索指数。造模后3 d行为学实验结束后，处死小鼠取脑海马组织，采用Western blot法检测NLRP3的表达，采用免疫荧光技术计数NLRP3与小胶质细胞特异性离子钙结合衔接分子1(Iba-1)共表达细胞，采用ELISA法检测caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量。 结果:与Sham组比较，SAE组和SAE+MCC950组站立次数减少，中央区停留时间缩短，探索指数降低，海马NLRP3表达上调，NLRP3 +-Iba-1 +细胞计数增加，caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量升高( P<0.05)；与SAE组比较，SAE+MCC950组站立次数增多，中央区停留时间延长，探索指数升高，NLRP3表达下调，NLRP3 +-Iba-1 +细胞计数减少，caspase-1活性、IL-1β和IL-18含量降低( P<0.05)。 结论:NLRP3参与了小鼠脓毒症相关性脑病的发生，与其介导小胶质细胞焦亡有关。

目的:探讨微RNA（microRNA，miRNA）-223在乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）X蛋白（HBV X protein，HBx）诱导的HBV相关性肾炎（HBV-associated glomerulonephritis，HBV-GN）足细胞焦亡中的潜在功能及相关机制。方法:采用人肾足细胞中过表达 HBx基因来模拟HBV-GN的发病机制。实时荧光定量PCR和Western印迹分别检测焦亡相关蛋白［核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）、胱天蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD，ASC）］及炎性因子［白细胞介素1β、白细胞介素18］mRNA和蛋白的表达水平；双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-223的下游靶标；TUNEL染色和流式细胞术检测细胞焦亡情况；免疫荧光检测足细胞损伤标志物Desmin和Nephrin的表达；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定检测Caspase-1活性。将足细胞分为以下9组：对照组（不予特殊处理）、空质粒组（转染空质粒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+miRNA-223 mimic组（共转染HBx过表达慢病毒和miRNA-223模拟物）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor组（共转染HBx过表达慢病毒和miRNA-223抑制剂）、HBx过表达+miRNA-223 mimic+NLRP3组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223模拟物和NLRP3过表达质粒）、HBx过表达+miRNA-223 mimic+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223模拟物和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor+NLRP3组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223抑制剂和NLRP3过表达质粒）、HBx过表达+miRNA-223 inhibitor+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒、miRNA-223抑制剂和NLRP3 siRNA）。 结果:与对照组相比，HBx过表达组miRNA-223表达较低（ P < 0.05）。TUNEL染色和免疫荧光结果显示，敲低NLRP3减弱HBx过表达引起的足细胞损伤和焦亡（ P < 0.05）。双荧光素酶报告基因实验证明NLRP3是miRNA-223的下游靶点之一。功能回复实验证明，NLRP3过表达削弱了miRNA-223对足细胞损伤的保护作用（ P < 0.05）。miRNA-223 mimic和NLRP3 siRNA的共同加入使HBx过表达诱导升高的NLRP3炎症小体及炎性因子表达下降，焦亡细胞数量减少（均 P < 0.05）；而同时引入miRNA-223 inhibitor和NLRP3过表达质粒则使足细胞中NLRP3炎症小体和炎性因子的表达上调，Caspase-1活性升高，焦亡细胞数量增加（均 P < 0.05）。 结论:HBx可能通过下调miRNA-223靶向NLRP3炎症小体促进HBV-GN足细胞焦亡。miRNA-223有望成为治疗HBV-GN的潜在靶点。

目的:评价核因子E2相关因子2/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nrf2/NLRP3)信号通路在丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤中的作用。方法:原代培养孕16~18 d Wistar大鼠胎鼠海马神经元7 d，采用随机数字表法分为4组( n＝42)：对照组(C组)正常培养；氧糖剥夺-复糖复氧组(O组)氧糖剥夺1 h后复糖复氧；丙泊酚后处理组(P组)复糖复氧即刻加入丙泊酚(终浓度1.2 μg/ml)孵育2 h，更换为正常培养液；Nrf2 siRNA(-)转染组(N组)原代神经元培养第3天行携带Nrf2基因敲除的慢病毒转染，24 h后更换为正常培养液，第7天进行模型制备及丙泊酚后处理。于继续培养24 h时收集细胞，采用流式细胞术检测神经元凋亡率，RT-PCR法检测Nrf2和NLRP3 mRNA表达，Western blot法检测Nrf2和NLRP3表达，ELISA法测定TNF-α、IL-6和IL-1β浓度；试剂盒法检测还原性谷胱甘肽(GSH)、SOD和过氧化氢酶(CAT)活性。 结果:与C组比较，O组和P组神经元凋亡率升高，TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高，GSH、SOD和CAT水平降低，Nrf2、NLRP3及其mRNA表达上调，Nrf2细胞核/浆比例增加( P<0.05)；与O组比较，P组神经元凋亡率降低，TNF-α、IL-6和IL-1β浓度降低，GSH、SOD和CAT水平升高，Nrf2及其mRNA表达上调，Nrf2细胞核/浆比例增加，NLRP3及其mRNA表达下调( P<0.05)；与P组比较，N组神经元凋亡率升高，TNF-α、IL-6和IL-1β浓度升高，GSH、SOD和CAT水平降低，Nrf2及其mRNA表达下调，Nrf2细胞核/浆比例降低，NLRP3及其mRNA表达上调( P<0.05)。 结论:Nrf2/NLRP3信号通路参与了丙泊酚后处理减轻氧糖剥夺-复糖复氧大鼠海马神经元损伤的过程。

目的:报告4例核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族pyrin域3（NLRP3）基因突变自身炎症性疾病，总结该病临床特点、基因型及其治疗过程，提高临床儿科医生对该病认识。方法:回顾性分析2016—2021年安徽省儿童医院确诊4例NLRP3突变自身炎症性疾病病例，结合临床特点、基因报告、文献复习回顾性分析NLRP3相关自身炎症性疾病临床特点、治疗进展。结果:① 4例患儿均为男性，例1、2、3例患儿出生后即起病，例4患儿出生后6个月起病。均表现周期性发热、反复荨麻疹样皮疹、突额、鞍鼻，发作期WBC、ESR、CRP升高，发作间期正常，抗感染治疗无效。②4例患儿基因检测均为NLRP3突变，例1、2、3患儿均为自身杂合突变，父母为野生型，例1患儿变染色体位置为Chr1：247587658，外显子c913（exon3）G>A，蛋白质第305位天冬氨酸（Asp）转变为天冬酰胺（Asn）。例2、3患儿突变染色体位置均为Chr1：247588072，核酸改变为c1327（exon3）T>C，氨基酸改变为p.Y443H；例4患儿为体细胞杂合突变，父母为野生型，突变染色体位置为Chr1：247587658，外显子c913（exon3）G>A，蛋白质第305位Asp转变为Asn。③例1、2、3患儿初期接受糖皮质激素、NSAIDs治疗，但作用有限，后期接受IL-1拮抗剂治疗后无发热、皮疹、关节肿痛，复查炎性指标基本正常；例4患儿接受NSAIDs、甲氨蝶呤治疗，无效，接受托珠单抗治疗后效果不佳,接受卡纳单抗治疗后，无发热、皮疹，无关节痛。结论:①NLRP3相关自身炎症性疾病可出现周期性发热、荨麻疹、关节受累，严重可累及中枢神经系统及脏器淀粉样变性。早期易被误诊为全身型幼年特发性关节炎。② NLRP3基因突变相关自身炎症性疾病为IL-1介导自身炎症性疾病，NSAIDs、糖皮质激素、慢性抗风湿药物作用有限，IL-1拮抗剂治疗该病疗效明确。

目的:评价NF-E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)信号通路在艾司氯胺酮减轻小鼠内毒素性急性肺损伤中的作用及其与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体介导细胞焦亡的关系。方法:SPF级雄性野生型(WT)及Nrf2敲除型(KO)C57BL/6J小鼠各18只，体质量20~25 g，6~8周龄，采用随机数字表法分别将两种小鼠分为3组( n＝6)：对照组(WT+C组、KO+C组)、内毒素性急性肺损伤组(WT+ALI组、KO+ALI组)和内毒素性急性肺损伤+艾司氯胺酮组(WT+ALI+E组、KO+ALI+E组)。采用尾静脉注射脂多糖(LPS)15 mg/kg制备小鼠内毒素性急性肺损伤模型。WT+ALI+E组和KO+ALI+E组于注射LPS 30 min后腹腔注射艾司氯胺酮10 mg/kg，6 h后重复给药1次，其余组给予等容量生理盐水。于注射LPS后12 h时麻醉小鼠，心脏穿刺取血样，采用ELISA法测定血清IL-1β、IL-18浓度；取双侧肺脏组织，光镜下观察病理学损伤情况并进行肺损伤评分，微板法测定还原型谷胱甘肽(GSH)含量，采用Western blot方法测定Nrf2、HO-1、NLRP3炎性小体介导的细胞焦亡相关蛋白[NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、pro-caspase-1、cleaved-caspase-1、消皮素D(GSDMD)]的表达。 结果:与相应的C组(WT+C组或KO+C组)比较，WT+ALI组和KO+ALI组肺损伤评分、血清IL-1β和IL-18浓度升高，肺组织GSH含量降低，NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleved-caspase-1和GSDMD表达上调，WT+ALI组肺组织Nrf2和HO-1表达上调( P<0.05)；与相应的ALI组(WT+ALI组或KO+ALI组)比较，WT+ALI+E组、KO+ALI+E组肺损伤评分、血清IL-1β和IL-18浓度降低，肺组织GSH含量升高，NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleved-caspase-1和GSDMD表达下调，WT+ALI+E组肺组织Nrf2和HO-1表达上调( P<0.05)。与WT+ALI+E组比较，KO+ALI+E组肺损伤评分、血清IL-1β和IL-18浓度升高，肺组织GSH含量降低，Nrf2和HO-1表达下调，NLRP3、ASC、pro-caspase-1、cleved-caspase-1和GSDMD表达上调( P<0.05)。 结论:艾司氯胺酮减轻小鼠内毒素性急性肺损伤的机制可能与激活Nrf2/HO-1信号通路，进而抑制NLRP3炎性小体介导细胞焦亡有关。

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含Pyrin结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体在高糖诱导人视网膜色素上皮细胞ARPE-19增生及凋亡中的作用及机制。方法:将体外培养的ARPE-19细胞分为正常对照组和高糖组，分别用常规培养液和含终浓度30 mmol/L葡萄糖培养液培养48 h，采用荧光探针检测各组细胞活性氧簇(ROS)含量，采用生物化学检验法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力值及丙二醛(MDA)浓度。取正常对照组和高糖组细胞分别加入0、2、5、10、15和20 μmol/L NLRP3抑制剂CY-09培养48 h，采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞的增生率，选取CY-09作用的适宜浓度。将细胞分为正常对照组、正常+CY-09组、高糖组和高糖+CY-09组，其中正常+CY-09组和高糖+CY-09组细胞培养液中添加15 μmol/L CY-09进行培养，采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率，采用Western blot法检测各组NLRP3、凋亡相关点状蛋白(ASC)、半胱氨酸蛋白水解酶1前体(pro-Caspase-1)及活化片段(cleaved-Caspase-1)，凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2(Bcl-2)，Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白水解酶3前体(pro-Caspase-3)及活化片段(cleaved-Caspase-3)的相对表达量。结果:高糖组细胞中ROS荧光强度值为120 020±3 245，MDA浓度为(4.92±0.09)nmol/mg，明显高于正常对照组的35 426±811和(1.78±0.03)nmol/mg，高糖组细胞中SOD活力值为(35.65±1.22)μmol/(min·mg)，明显低于正常对照组的(74.96±1.41)μmol/(min·mg)，差异均有统计学意义( t＝35.760、46.960、29.830，均 P<0.05)。高糖组细胞增生率明显低于正常对照组，差异有统计学意义( t＝18.820， P<0.05)。高糖组中随着CY-09浓度的增加细胞增生率逐渐升高，其中10、15和20 μmol/L CY-09处理细胞的增生率明显高于0 μmol/L CY-09处理细胞，差异均有统计学意义(均 P<0.05)，正常对照组中15 μmol/L CY-09处理细胞与0 μmol/L CY-09处理细胞的增生率比较，差异无统计学意义( P>0.05)。高糖组细胞凋亡率为(21.68±0.41)%，明显高于正常对照组的(6.67±1.05)%和高糖+CY-09组的(13.96±0.07)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。高糖组NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、cleaved-Caspase-3和Bax蛋白相对表达量较正常对照组明显升高，Bcl-2蛋白相对表达量较正常对照组明显下降，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；正常+CY-09组和高糖+CY-09组与正常对照组和高糖组比较，NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、Bax、cleaved-Caspase-3蛋白相对表达量下降，Bcl-2蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。 结论:NLRP3炎症小体通过ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路介导了体外高糖环境诱导RPE细胞的凋亡过程。

目的:评价甲泼尼龙减轻大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)机制与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3 (NLRP3)通路的关系。方法:清洁级雄性SD大鼠60只，体重270~320 g，4~5月龄，采用随机数字表法分为3组( n＝20)：对照组(C组)、机械通气组(V组)和甲泼尼龙组(M组)。C组不行机械通气，自主呼吸空气4 h；V组机械通气(RR 40次/min，V T 40 ml/kg，I∶E 1∶1，PEEP 0，FiO 2 21%)4 h；M组机械通气前20 min静脉注射甲泼尼龙10 mg/kg。机械通气4 h时，收集肺泡支气管灌洗液(BALF)和肺组织，测定BALF IL-1β、IL-18、TNF-α浓度与肺湿重/干重(W/D)比值，观察肺组织病理学结果。Western blot法检测肺组织p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、天门冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)的表达水平。 结果:与C组比较，V组肺组织W/D比值、BALF IL-1β、IL-18和TNF-α浓度升高，p-p38MAPK、NLRP3、ASC和caspase-1表达上调( P<0.05)，M组差异无统计学意义( P>0.05)；与V组比较，M组肺组织W/D比值、BALF IL-1β、IL-18和TNF-α浓度降低，p-p38MAPK、NLRP3、ASC和caspase-1表达下调( P<0.05)。 结论:甲泼尼龙减轻大鼠VILI的机制可能与抑制p38MAPK/NLRP3通路活性，减轻肺组织炎症反应有关。

目的:探讨乙型肝炎病毒X蛋白（hepatitis B virus X protein，HBx）是否通过调控活性氧（reactive oxygen species，ROS）/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3，NLRP3）信号通路引起足细胞焦亡。方法:采用小鼠肾足细胞过表达 HBx基因来模拟乙型肝炎相关性肾炎的发病机制。将足细胞分为以下5组：空白对照组（不予特殊处理）、阴性对照组（转染对照慢病毒）、HBx过表达组（转染HBx过表达慢病毒）、HBx过表达+NLRP3 siRNA组（共转染HBx过表达慢病毒和NLRP3 siRNA）、HBx过表达+ROS抑制剂组（转染HBx过表达慢病毒和添加ROS抑制剂）。电镜下观察足细胞的形态学改变；二氯二氢荧光素二乙酸酯（dichlorodihydrofluorescein diacetate assay，DCFH-DA）法检测ROS的生成；Hoechst 33342染色观察足细胞细胞核的形态和数量变化；酶联免疫吸附测定试验分别检测胱天蛋白酶1（Caspase-1）酶活性、乳酸脱氢酶、白细胞介素（IL）-1β和IL-18水平；实时荧光定量PCR和Western印迹法分别检测细胞焦亡相关蛋白如NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白水平的表达；TUNEL染色和流式细胞术检测焦亡细胞数量；免疫荧光染色检测Desmin和Nephrin的表达。 结果:HBx过表达慢病毒成功感染足细胞后，电镜下观察到细胞发生焦亡相关形态学改变；与阴性对照组相比，HBx过表达组ROS水平显著升高（ P<0.05）；Hoechst 33342染色发现HBx过表达后细胞核浓缩；TUNEL染色和流式细胞术证明HBx过表达后足细胞发生了焦亡；焦亡相关蛋白NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA和蛋白表达显著上调（均 P<0.05）；Caspase-1酶活性、乳酸脱氢酶和Desmin表达水平升高（均 P<0.05）。而 NLRP3敲低或ROS抑制减弱了HBx过表达引起的足细胞焦亡以及相关蛋白表达增加（均 P<0.05）。 结论:ROS/NLRP3通路在HBx过表达引起的足细胞焦亡中起着重要作用。

目的:探讨核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/转录因子GATA结合蛋白4(GATA-4)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路在新生血管性年龄相关性黄斑变性(nAMD)中的作用。方法:利用TRANSFAC转录因子数据库搜索人源和鼠源VEGF启动子及其上游序列，分析可能影响VEGF转录活性的转录因子。将小鼠巨噬细胞RAW264.7分为对照组和脂多糖(LPS)刺激组，qRT-PCR检测LPS对NLRP3炎症小体活化、GATA-4和血管内皮生长因子A(VEGFA)mRNA表达的影响；应用特异性NLRP3小分子抑制剂MCC950预处理RAW264.7细胞(LPS+MCC950组)，检测NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA基因表达水平的变化。结果:人源和鼠源VEGF启动子上游均存在多个GATA转录因子结合位点。与对照组比较，LPS组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA mRNA表达增加(均 P<0.05)；与LPS刺激组比较，LPS+MCC950组NLRP3、Caspase-1、IL-1β、GATA-4和VEGFA mRNA水平均明显降低(均 P<0.05)。 结论:NLRP3/GATA-4/VEGF信号通路可能在nAMD的病理过程中发挥重要调节作用。

糖尿病是临床上常见的内分泌系统疾病之一，其确切的发病机制至今尚未明确。核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3（nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor family pyrin domain containing 3，NLRP3）炎症小体不仅可以被上游信号通路调控激活，在细胞焦亡、凋亡、坏死、自噬等方面发挥重要作用，而且调节下游炎症因子参与疾病的慢性炎症过程。现阐明NLRP3炎症小体在糖尿病及其并发症发病机制或干预中的作用，并提供了新的研究方向，NLRP3炎症小体及其调节的细胞因子或受体可能是糖尿病及其并发症新的诊断或治疗靶点。