目的:探讨新疆栽培荒漠肉苁蓉醇提物（EECCD）的免疫调节活性。方法:以卵清蛋白（OVA）为抗原，将ICR小鼠分为9 g/L NaCl组（空白对照组）、EECCD组（1 200 μg EECCD）、OVA组（10 μg OVA）、低剂量EECCD/OVA组（400 μg EECCD+10 μg OVA）、中剂量EECCD/OVA组（800 μg EECCD+10 μg OVA）、高剂量EECCD/OVA组（1 200 μg EECCD+10 μg OVA）和铝佐剂（Alum）/OVA组（200 μg Alum+10 μg OVA）。皮下免疫小鼠，初免14 d后加强免疫1次。采用间接酶联免疫吸附测定法检测OVA特异性抗体水平，噻唑蓝法检测脾淋巴细胞增殖水平，流式细胞术检测白细胞介素-4（IL-4）和γ-干扰素（IFN-γ）水平，并检测EECCD对树突状细胞（DCs）共刺激分子的表达和CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞的影响。 结果:EECCD可提高抗体水平，具体表现为：低、中、高剂量EECCD/OVA均提高了OVA特异性IgG抗体滴度，中剂量EECCD/OVA组抗体滴度达25万，与Alum/OVA组相当；中剂量EECCD/OVA明显提高了OVA特异性IgG1水平（ P<0.01），且与Alum/OVA组相比差异无统计学意义（ P>0.05）；中剂量和高剂量EECCD/OVA明显提高了IgG2a水平（均 P<0.01），且中剂量EECCD/OVA组明显高于Alum/OVA组（ P<0.01）。由此筛选出中剂量EECCD为最佳剂量。中剂量EECCD/OVA能明显提高脾淋巴细胞的增殖水平（ P<0.05），促进CD4 + T细胞分泌IL-4和IFN-γ（均 P<0.01），还可明显提高DCs表面分子（CD40、CD80、CD86、MHCⅡ）的表达（均 P<0.05），降低CD4 +CD25 +Foxp3 +调节性T细胞的表达（ P<0.05）。 结论:EECCD具有良好的免疫调节活性，能促进偏向Th1型免疫应答，对疾病的预防和治疗具有潜在的作用。

采用田间农艺观察、单因素方差分析、相关性分析和分子鉴定等方法对我国梭梭属2个物种梭梭和白梭梭的主要生物学性状以及肉苁蓉寄生情况进行比较分析.结果表明梭梭和白梭梭在形态特征、农艺性状及花粉结构方面均存在显著差异,其中成熟的梭梭种子果翅长度和千粒重显著低于白梭梭,但发芽率和发芽势显著高于白梭梭;梭梭花粉网眼较深,网脊颗粒结构的数量显著少于白梭梭,且花粉体积小于白梭梭.相关分析表明梭梭和白梭梭农艺指标与气温和相对湿度等气候因子显著相关,其中梭梭对水分及光照等环境因子变化适宜能力较强,分布较广;而白梭梭受水分等因子限制,仅在新疆准噶尔盆地长势较好.核基因内转录间隔区(ITS,internal transcribed spacer)分子鉴定技术可以有效鉴别梭梭和白梭梭,并且证明二者均可被肉苁蓉寄生,但二者寄生的肉苁蓉持续成活率存在差异.根据梭梭和白梭梭生物学性状特征和肉苁蓉寄生情况,适宜推广梭梭作为寄主植物生产肉苁蓉药材.本研究为我国梭梭属植物的分类鉴定、引种栽培以及肉苁蓉优良寄主种质筛选提供科学依据.

目的 探讨新疆栽培荒漠肉苁蓉粗多糖(cultivated C. deserticola crude polysaccharides,CCDCP)作为模式抗原卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)佐剂的免疫增强作用.方法 将低、中、高3 个剂量的CCDCP 分别配伍OVA 蛋白,肌肉免疫小鼠,免疫2 次,间隔2 周,阳性对照为铝佐剂组,ELISA法检测小鼠血清中的IgG 及其分型IgG1、IgG2a 抗体的表达水平;MTT 法检测脾细胞增殖;并观察免疫后小鼠的生长状况.结果 高剂量CCDCP 组在免疫后7 d 就可以显著提高IgG 的水平(P<0. 05),在免疫后的21 d 和28 d 可极显著提高IgG 的抗体水平(P<0. 01),与铝佐剂组相比差异有统计学意义(P<0. 05);高剂量CCDCP 组可以显著提高IgG1 和IgG2a 的抗体水平(P<0. 05),与铝佐剂组相当;中剂量和低剂量的CCDCP 显著增强脾细胞的增殖水平(P<0. 05),与铝佐剂组相比差异有统计学意义(P<0. 01);CCDCP 对小鼠体重的影响差异无统计学意义(P>0. 05).结论 CCDCP 作为OVA 蛋白的佐剂能够增强Th1 型和Th2 型的免疫应答,尤其可以诱导早期抗体的产生和Th1 型的免疫应答,为CCDCP 作为疫苗佐剂的研究提供参考.

目的 比较新疆野生与栽培荒漠肉苁蓉粗多糖(wild/cultivate Cistanehe deserticola Po-lysaccharids,WCDPS/CCDPS)的免疫增强效果.方法 不同剂量(低、中、高)的WCDPS和CCDPS与卵清蛋白(ovalbumin,OVA)皮下共免疫 ICR小鼠,ELISA法检测 OVA特异性抗体 IgG及抗体亚型IgG1和IgG2a,MTT法检测OVA特异性的淋巴细胞增殖活性,流式细胞术检测CD4+T细胞和CD8+T细胞的表达水平.结果 WCDPS和CCDPS均能够显著提高OVA特异性抗体IgG及抗体分型IgG1和IgG2a的表达水平(P<0.05),且WCDPS和CCDPS相同剂量之间差异无统计学意义(P>0.05);WCDPS和CCDPS能显著促进OVA特异性的淋巴细胞增殖,且相同剂量之间差异无统计学意义(P>0.05);WCDPS和CCDPS也能显著提高CD4+T和CD8+T细胞的百分含量(P<0.05),且相同剂量之间差异无统计学意义(P>0.05),WCDPS和CCDPS对免疫后的小鼠体重没有影响.结论 WCDSP和CCDPS均能显著增强OVA特异性的体液和细胞免疫应答,两者之间差异无统计学意义,并具有较好的安全性.

对新疆塔中栽培荒漠肉苁蓉Cistanche deserticola干燥肉质茎的化学成分进行研究.采用正相硅胶、凝胶Sephadex LH-20、MCI、ODS以及半制备高效液相色谱等方法进行分离纯化,运用NMR,MS等波谱方法以及结合文献数据对分离得到的化合物进行结构鉴定.从塔中栽培荒漠肉苁蓉干燥肉质茎85％乙醇提取物中分离得到4个化合物,其结构鉴定为顺式管花苷B(1)、顺式肉苁蓉苷K(2)、顺式肉苁蓉苷J(3)、顺式异肉苁蓉苷C(4).化合物1～4为新的顺式苯乙醇苷类化合物,该文为首次报道4个新化合物的1 H-NMR和13C-NMR波谱数据,为全面分析本种栽培品的化学成分提供了一定的科学数据.

目的:基于DNA条形码技术建立肉苁蓉样品的高分辨率熔解曲线(HRM)鉴定方法.方法:通过聚合酶链式反应(PCR)对肉苁蓉的ITS和ITS2序列进行扩增;利用MEGA 6.06软件通过建树法进行NJ树聚类分析;通过ITS2序列利用Primer Premier 5软件进行引物设计;对经设计、合成的8对引物通过HRM实验进行筛选;建立肉苁蓉的HRM鉴定方法.结果:通过ITS和ITS2序列的NJ树聚类分析可以有效区分3种肉苁蓉(肉苁蓉、管花肉苁蓉及采自乌兹别克斯坦的肉苁蓉相近种),且肉苁蓉和管花肉苁蓉各自的栽培品与野生品不存在明显差异;经过Primer Premier 5软件进行引物设计共选出8对引物进行合成;通过HRM预实验筛选出引物Ysr-2为最佳实验引物;确立了有效鉴定3种肉苁蓉样品的HRM方法.结论:通过DNA条形码和HRM技术均能有效鉴定3种肉苁蓉样品,且结果一致,起到互相验证的作用,为肉苁蓉及其他中药民族药品种的快速鉴定提供了可以参考的依据.

目的:UPLC分析不同产地荒漠肉苁蓉苯乙醇苷类成分,MALLS测定肉苁蓉粗多糖分子量分布,离子色谱测定单糖组成,全面比较不同产地荒漠肉苁蓉内在品质的差异,为荒漠肉苁蓉的综合评价提供方法依据和数据参考.方法:UPLC色谱条件:色谱柱:Waters Acquity UPLC(R) BEH C18(2.1mm×100 mm,1.7 μm);流动相:乙腈(A)-0.1％甲酸水(B),梯度洗脱条件:(～8 min,2％A;8～16 min,12％A;16～19 min,16％A;19～22 min,16％～22％A;22～25 min,19％ A;25～30 min,19％～25％ A;30～32 min,25％ A;32～35 min,25％～30％ A;35～38 min,30％～40％ A;38～40 min,40％～50％A.离子色谱分离条件:色谱柱:Carbo PacTMPA20(3mm×150 mm)Analytical;梯度洗脱条件:A为水,B为250 mmol·L-1的氢氧化钠,C为1 mol·L-1的醋酸钠;0～20 min,94％A,6％B,0C;20～20.1 min,89％A,6％ B,5％ C;20.1～35 min,74％ A,6％ B,20％ C;35.1～45 min,20％ A,80％ B,0 C;45.1～55 min,94％ A,6％ B,0 C.MALLS测定条件:色谱柱:TSK Gel G4000PWxl;流动相:0.1 mol·L-1氯化钠溶液;流速:0.5 mg·min-1;进样量:200μL;样品浓度:1 mg·mL-1.结果:通过对不同产地荒漠肉苁蓉UPLC图峰面积进行积分,得到5种苯乙醇苷类峰面积,并进行相对比较;MALLS检测得到不同产地荒漠肉苁蓉粗多糖的分子量及分布,同时离子色谱法检测到其均有7种单糖组成.结论:UPLC测定结果显示,不同产地荒漠肉苁蓉苯乙醇苷类成分相对含量差别较大,人工栽培肉苁蓉在秋季采收时含量较高;MALLS检测结果显示,不同产地荒漠肉苁蓉的多糖分子量大小、分布及单糖组成差异明显.

目的:通过HPLC-MS对新疆塔中荒漠栽培肉苁蓉Cistanche deserticola药材60％甲醇提取物的色谱图进行鉴定.方法:采用Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-水(含0.1％的甲酸)为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长254 nm,柱温25℃,进样量10 μL.结果:在相同色谱条件下,通过与已分离得到的对照品的保留时间、相对分子质量以及碎片离子进行比较,对新疆塔中荒漠栽培肉苁蓉药材的16个色谱峰中的17个成分进行了准确的鉴定,分别确定为松柏苷,去甲紫丁香苷,紫丁香苷,松果菊苷,肉苁蓉苷A,类叶升麻苷(管花苷A),肉苁蓉苷B,异类叶升麻苷,2'-乙酰基肉苁蓉苷A,肉苁蓉苷C,异肉苁蓉苷C,2'-乙酰基类叶升麻苷,管花苷B,epimeridinoside A,肉苁蓉苷K,肉苁蓉苷J.结论:该研究方法适用于肉苁蓉60％甲醇提取物色谱峰的鉴定,为全面分析该药材的化学成分提供了一定的科学数据.

管花肉苁蓉素有“沙漠人参”之称,为著名补益类中药.为了缓解管花肉苁蓉的资源问题并有效保护野生资源,我国在新疆的南疆地区大力推广管花肉苁蓉的人工栽培,目前已取得了可喜的成果.该文利用1 H-NMR技术能够全面提供定性和定量信息的优点,深入地比较管花肉苁蓉野生品和栽培品的化学成分组,以期为栽培品替代野生品使用的科学性提供直接证据.野生品和栽培品药材提取后,平行采集1H-NMR图谱;通过直观比较,发现2组图谱间相似度较高;通过与对照品及数据库(如HMDB,BMRB等)比对,从典型图谱中初步鉴定了28个化学成分;利用多元统计学手段比较野生品和栽培品的1H-NMR图谱,发现两组样品间并不存在显著差异.统计结果表明,从化学成分组成而言,管花肉苁蓉的野生品与栽培品相似度高,一定程度上证明栽培品可以替代野生品使用.同时,1H-NMR技术能够反映中药提取物等复杂体系的定量化学成分组,在中药化学成分定性和定量分析领域具有较为广泛的应用前景.

目的 研究新疆栽培荒漠肉苁蓉水提物(aqueous extracts of cultivated Cistanche deserticola Y. C. Ma in Xinjiang,AECCD)对小鼠T细胞应答和抗体持久性的影响,探讨其对小鼠的免疫增强作用.方法 选取ICR雌性小鼠60只(共两批小鼠,每批30只),每批随机分为6组,每组5只,分别将低、中、高3个剂量的AECCD配伍模式抗原卵清白蛋白(ovalbumin,OVA)为实验组,0. 9% NaCl为空白对照组, OVA单独免疫组为阴性对照组,铝佐剂(aluminium adjuvant,Alum)作为阳性对照组,肌肉免疫2次,间隔2周.采用流式细胞术检测T 细胞亚群、细胞因子及树突状细胞( dendritic cells,DC)表面分子的表达水平;间接ELISA法检测小鼠血清中的IgG抗体水平.结果 AECCD能够显著增强脾细胞中CD4+、CD8+T细胞亚群的比例(P<0. 05),显著提高CD4+CD44+和CD8+CD44+效应性T细胞的表达水平(P<0. 05);促进T细胞IFN-γ的分泌,也能够促进DC表面分子CD40和CD80的表达水平(P<0. 05);ELISA检测结果表明高剂量AECCD可以显著提高OVA诱导的IgG抗体表达水平的持久性(P<0. 05).结论 AECCD能增强OVA 蛋白诱导的 T 细胞免疫应答,保持抗体的持久性,从而提高机体的免疫应答水平.