目的:探讨血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)/整合素α vβ 3双靶向造影剂(MBD)在体内对肾细胞癌肿瘤新生血管的靶向能力。 方法:以造影剂USphere LA为模板，采用生物素-亲和素桥接法制备以VEGFR2、整合素α vβ 3为靶点的单靶向造影剂及双靶向造影剂。构建人肾脏透明细胞癌(786-O细胞株)裸鼠皮下种植瘤模型共40只，选取其中20只，每只均以任意顺序采用4种造影剂[非靶向造影剂(MBN)、VEGFR2单靶向造影剂(MBV)或整合素α vβ 3单靶向造影剂(MBI)及MBD]进行超声造影检查；另20只裸鼠行抗体阻断试验。所得声像图进行定量分析，得到以下定量参数：造影前3 min造影剂强度增量(a 1)、峰值减半速度(a 2)、曲线上升斜率(a 3)、灌注时间(t 0)、达峰时间(TTP)、峰值强度(PI)、平均渡越时间(MTT)和ROC曲线下面积(AUC)，爆破前及爆破后10 s的峰值强度(P 1及P 2)，以及二者的差值(dTE)，比较4种造影剂间及抗体阻断前后各定量参数在不同组间的差异。免疫组化染色观察肿瘤组织CD31、VEGFR2及整合素β 3表达情况。 结果:将MBN、MBV或MBI及MBD进行比较，结果显示2种单靶向造影剂间所有参数差异无统计学意义(均 P>0.05)，a 1、a 3、t 0、TTP、PI及P 2在4种造影剂间差异无统计学意义(均 P>0.05)；AUC、MTT、P1及dTE表现为双靶向造影剂>单靶向造影剂>非靶向造影剂的趋势(均 P<0.05)，与之相反，参数a 2则表现为双靶向造影剂<单靶向造影剂<非靶向造影剂的趋势(均 P<0.05)。比较双靶向造影剂MBD各定量参数在抗体阻断前后的差别显示，抗体阻断后a 2快于抗体阻断前( P<0.001)，而AUC、MTT、P 1及dTE较抗体阻断前降低(均 P<0.001)，其余参数在抗体阻断前后差异无统计学意义(均 P>0.05)。免疫组化染色结果显示人肾细胞癌组织内有明显的CD31、VEGFR2及整合素β 3表达。 结论:以VEGFR2及整合素α vβ 3为靶点的双靶向造影剂在体内对人肾细胞癌肿瘤新生血管有良好的靶向能力。

目的:探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)/整合素α vβ 3双靶超声造影剂评估肾细胞癌(RCC)生长过程中肿瘤促血管生成因子表达水平的能力。 方法:采用生物素－亲和素桥接法制备VEGFR/整合素α vβ 3双靶超声造影剂。构建20只人肾脏透明细胞癌(786-O细胞株)裸鼠皮下种植瘤模型并将其随机分为2组。第一组用于纵向评价RCC生长过程中靶向超声造影定量参数变化情况，该组10只荷瘤鼠均接受2次靶向超声造影检查，2次检查时瘤体最大径分别为5~10 mm、>10~20 mm。第二组分为A、B两个亚组，每组5只荷瘤鼠：A组裸鼠瘤体最大径为5~10 mm，B组最大径为>10~20 mm，荷瘤鼠均行靶向超声造影检查。对超声造影声像图行定量分析后获取以下靶向定量参数：造影前3 min感兴趣区峰值强度(PI)、曲线下面积(AUC)，超声爆破前及爆破后10 s各自峰值强度P 1及P 2，以及P 1与P 2的差值(dTE)。检查结束后获取第二组荷瘤鼠肿瘤组织行免疫组化染色，观察其内促血管生成因子VEGFR2、整合素α vβ 3及CD31表达情况，以横向比较各因子在不同大小RCC中的表达差异，并分析靶向载药定量参数与各因子表达量间相关性。 结果:纵向分析结果显示，不同大小RCC靶向定量参数AUC及dTE差异有统计学意义(均 P<0.001)，瘤体越大，靶向定量参数越小。横向对比结果显示，不同大小RCC间VEGFR2及整合素α vβ 3表达水平差异有统计学意义(均 P<0.05)，CD31表达水平差异则无统计学意义( P＝0.754)。此外，瘤体最大径与靶向定量参数AUC、dTE、VEGFR2、整合素α vβ 3水平呈显著负相关( rs＝－0.83、－0.81、－0.70、－0.88，均 P<0.05)，AUC与VEGFR2、整合素α vβ 3表达水平间呈显著正相关( rs＝0.76、0.72，均 P<0.05)，dTE与VEGFR2及整合素α vβ 3表达水平间呈显著正相关( rs＝0.81、0.72，均 P<0.05)，PI与CD31表达水平呈正相关( rs＝0.70， P＝0.025)。 结论:RCC内促血管生成因子VEGFR2及整合素α vβ 3表达量随肿瘤体积增大逐渐减小。VEGFR/整合素α vβ 3介导的靶向超声造影可无创评估RCC内对应促血管生成因子VEGFR2及整合素α vβ 3的表达水平。

目的 探究组织桥接整合因子1(BIN1)、Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1A1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)表达与三阴性乳腺癌(TNBC)术后复发关系及联合检测意义.方法 选取2019年5月至2020年5月上海市第八人民医院行手术治疗的TNBC病人80例,根据术后2年是否复发分为复发组、未复发组,比较两组临床资料、组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达,复发的相关影响因素采用单因素与多因素logistic回归分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达预测术后复发的价值采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达与复发时间关系采用Pearson分析,比较不同组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达病人无复发生存期(RFS).结果 复发组T分期、N分期与未复发组比较,差异有统计学意义(P＜0.05);复发组组织BIN1 mRNA表达为0.24±0.07,低于未复发组的0.35±0.10(P＜0.05),复发组组织COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA表达分别为2.07±0.62、2.91±0.84,高于未复发组的1.48±0.43、1.85±0.60(P＜0.05);T分期、N分期、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA均是复发相关独立危险因素,BIN1 mRNA是复发相关独立保护因素(P＜0.05);BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA的AUC分别为0.76、0.80、0.78,三者联合的AUC为0.94;BIN1 mRNA与复发时间呈负相关(r=-0.79,P＜0.001),COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA与复发时间呈正相关(r=0.77、0.78,均P＜0.001);BIN1 mRNA高水平病人RFS长于低水平病人,COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA高水平病人RFS短于低水平病人(P＜0.05).结论 BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA与TNBC术后复发风险、复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,为临床治疗提供重要的参考信息.

目的:分析桥接整合因子1 (bridging integrator-1,Bin1去甲基化对Bin1基因表达和食管鳞状细胞癌EC109细胞增殖能力的影响,并初步探讨其可能的作用机制.方法:甲基化特异性PCR(methylation specific polymerase chain reaction,MSP)法检测去甲基化药物5-氮杂-2'脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-dc)处理后EC109细胞Bin1启动子区域的甲基化状态,用qPCR、Westem blotting和MTT法分别检测单独5-Aza-dc和5-Aza-dc加转染Bin1基因干扰片段(Bin1 siRNA)处理对EC109细胞Bin1 mRNA及其蛋白表达和细胞增殖能力的影响,流式细胞术和Western blotting检测5-Aza-dc处理后EC109细胞周期和细胞周期相关蛋白(CyclinDl与CDK4)表达的变化.结果:去甲基化药物5-Aza-dc处理后,EC109细胞Bin1基因启动子区域发生去甲基化.5-Aza-dc处理的Bin1去甲基化EC109细胞Bin1 mRNA和蛋白表达明显上调(均P＜0.05),细胞增殖能力明显下降(P＜0.05),细胞阻滞在G0/G1期,表现为S期细胞比例显著减少,细胞周期相关蛋白CyclinD、CDK4表达均明显下调(均P＜0.05).Bin1去甲基化EC109细胞转染Bin1 siRNA后,Bin1 mRNA和蛋白表达明显下调,细胞增殖能力增强(均P＜0.05).结论:Bin1基因启动子区域在EC109细胞中呈完全甲基化状态,5-Aza-dc去甲基化可使食管鳞癌细胞EC109细胞Bin1表达升高,通过降低细胞周期相关蛋白表达诱导细胞周期阻滞抑制EC109细胞增殖.证实表观遗传学变化可能与食管癌细胞恶性增殖有关,可为食管癌治疗提供新的思路.

目的:研究人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞中桥接整合因子-1 (bridging intergrator-1,BINl)对程序性死亡受体-配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达的影响及其机制.方法:采用qRT-PCR和Western blotting方法检测A549细胞和正常人胚肺成纤维细胞2BS中BIN1与PD-L1基因和蛋白表达情况,通过基因转染技术、利用阳离子脂质体将含有人全长BIN1基因序列的真核表达质粒CMV-MCS-GFP-SV40-Neomycin-BIN1转染到A549细胞中(BIN1+组),构建过表达BIN1的细胞株,采用RNA干扰技术将干扰骨髓细胞瘤病毒癌基因(cellular-myelocytomatosis viral oncogene,c-MYC)的c-MYC-siRNA转染到A549细胞中(c-MYC-siRNA组)以敲低c-MYC基因表达,通过qRT-PCR和Western blotting方法验证转染效果及过表达BIN1基因或敲低c-MYC基因对A549细胞中c-MYC和PD-L1表达的影响.结果:与2BS细胞相比,A549细胞中BIN1基因和蛋白均呈低表达状态,而PD-L1呈高表达状态(均P＜0.05).将携带BIN1基因的真核表达质粒转染到A549细胞后,BIN1基因和蛋白表达水平较对照组显著升高(P＜0.05),而PD-L1表达显著降低(P＜0.05).c-MYC-siRNA转染到A549细胞后,细胞内c-MYC表达显著降低(P＜0.01),PD-L1表达明显下调(P＜0.01).结论:BIN1过表达可以通过失活c-MYC通路降低PD-L1表达,从而抑制A549细胞的免疫逃逸.

心脏缺血缺氧导致的T管重构是引起胞内Ca2+紊乱的重要机制.主要就T管系统以及桥接整合因子1(BIN1)、2型junctophilin蛋白(JP-2)、窖蛋白-3(caveolin-3)等T管重构相关蛋白对心肌细胞Ca2+调节的研究进展进行综述.

目的 探讨吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine-2,3-dioxygenase,IDO)和桥接整合因子1(bridging integrator 1,Bin1)在膀胱尿路上皮癌中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 收集2016年11月～ 2017年8月昆明医科大学第三附属医院行膀胱肿瘤切除并经病理确诊为膀胱尿路上皮癌及癌旁新鲜标本21例,采用Real-time qPCR检测IDO和Bin1的mRNA表达.结果 在21例膀胱尿路上皮癌组织中,IDO mRNA明显高于癌旁组织(Z=-4.084,P＜0.001);Bin1 mRNA明显低于癌旁组织(Z=-4.508,P＜0.001).膀胱尿路上皮癌组织中IDO表达强度与Bin1表达呈负相关(r=-0.588,P＜0.05).IDO及Bin1的表达与患者组织学分类、组织分级和TNM分期均有相关性(P＜0.05);与患者性别、年龄、肿瘤大小均无相关性(P＞0.05).结论 在膀胱尿路上皮癌中IDO高表达、Bin1低表达或表达缺失,两者有望成为膀胱尿路上皮癌预后评估和治疗的新靶点.

目的:探讨miR-28-3p在三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer,TNBC)组织和细胞系中的表达及其对MDA-MB-468细胞恶性生物学行为的影响.方法:收集2013年1月至2014年1月河北医科大学第四医院乳腺中心手术切除的、经病理证实的83例女性TNBC患者的癌组织和癌旁组织标本,以及TNBC细胞系MDA-MB-468、HCC-1937、MDA-MB-231、MDA-MB-436、MDA-MB-453和人正常乳腺上皮细胞MCF10A,用qPCR检测组织和细胞系中miR-28-3p的表达水平并分析其表达与患者临床病理特征的相关性.用miR-28-3p抑制剂转染MDA-MB-468细胞后,用CCK-8、流式细胞术、细胞划痕和Transwell实验分别检测miR-28-3p抑制剂对MDA-MB-468细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的影响,用Western blotting检测MDA-MB-468细胞中桥接整合因子1 (bridging integrator-1,BIN1)蛋白的表达水平.通过生物信息学工具预测miR-28-3p的靶基因BIN1,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-28-3p对BIN1的调控作用.结果:TNBC组织及细胞系中miR-28-3p表达水平显著高于癌旁组织及MCF10A细胞(均P＜0.01);83例TNBC组织中共有56例(67.47％)高表达miR-28-3p,其高表达与患者的Ki-67表达水平、肿瘤大小和TNM分期密切相关(均P＜0.05或P＜0.01).与miR-NC组比较,miR-28-3p抑制剂组MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力降低,凋亡率升高(均P＜0.05或P＜0.01).双荧光素酶报告基因和实验证实BIN1是miR-28-3p的靶基因,miR-28-3p抑制剂可上调MDA-MB-468细胞中BIN1蛋白的表达(P＜0.05).结论:miR-28-3p在TNBC组织及细胞中呈高表达状态,miR-28-3p抑制剂上调BIN1表达进而抑制MDA-MB-468细胞的增殖、迁移和侵袭能力,并促进其凋亡.

目的 制备以肿瘤血管内皮生长因子受体2 (VEGFR2)及整合素αv β3 (Integrinαv β3 )为靶点的双靶向超声造影剂,评价造影剂的物理性质,并检测其超声成像能力及体外寻靶能力.方法 利用生物素‐亲和素桥接法,将未接靶的超声造影剂USphere LA分别与VEGFR2单抗、 Integrinαv β3 单抗及VEGFR2单抗+Integrinαv β3 单抗结合,制备以VEGFR2 、 Integrinαv β3 为靶点的单靶向造影剂及同时以二者为靶点的双靶向造影剂,以未连接抗体的非靶向微泡USphere LA作为对照组.观察所得微泡形态并测量微泡大小,将微泡置于4℃保存,并在不同时间节点(1 h、3 h、12 h、3 d、5 d、7 d、14 d)观察微泡并评价其稳定性.对比VEGFR2／Integrinαv β3 及SonoVue在制备时及制备后3 d超声成像特点,计算其灰度值.将非靶向、单靶及双靶造影剂分别与细胞表面高表达VEGFR2及Integrinαv β3 的小鼠肝癌细胞Hepa1‐6及两者低表达的小鼠纤维细胞C3H10结合,观察各组细胞与微泡结合情况;采用抗体阻断试验重复以上操作,再次观察细胞与微泡结合情况.结果 新鲜制备的双靶向造影剂平均粒径为1 289 nm ,4℃条件下保存的微泡在制备后 3 d 内浓度下降缓慢, 5 d后浓度下降明显. VEGFR2／Integrinαv β3 双靶向微泡初制备时与相同浓度SonoVue超声成像灰度值差异无统计学意义( P ＝0 .113) , 3 d后双靶向微泡灰度值高于SonoVue ( P ＜0 .001 ) . Hepa1‐6细胞与微泡结合量呈现以下趋势:双靶向造影剂＞单靶向造影剂＞非靶向造影剂(均 P ＜0 .05) , C3H10细胞与各组造影剂结合量差异无统计学意义(均 P ＞0 .05) ;预先行抗体阻断后,单靶及双靶向造影与 Hepa1‐6细胞结合量较抗体阻断前减低(均 P ＜0 .05) ,各组细胞与微泡结合数量差异无统计学意义( P ＞ 0 .05) .结论 以 VEGFR2及Integrinαv β3 为靶点的双靶向造影剂物理性质稳定,在体外有良好的超声成像能力及寻靶能力.

心力衰竭(心衰)发病率和病死率居高不下.心肌兴奋收缩障碍是心衰的重要病理生理基础,明确心肌兴奋收缩障碍的机制对于心衰的早期诊断和治疗意义重大.近年来研究发现桥接整合因子1(BIN1)在调节钙离子信号和心肌兴奋收缩耦联中发挥重要作用,同时心衰时心脏中BIN1表达显著减少,提示其可能是心衰的潜在生物标志物.本文对BIN1的结构、功能及其在心衰中的病理生理作用作一综述.