目的 探讨腰痹康颗粒对腰椎间盘突出症椎间孔镜术后残余症以及腰椎间盘退变的影响.方法 将76例腰椎间盘突出症椎间孔镜术后残余症患者随机分为中药组38例和对照组38例,最终中药组35例、对照组34例完成随访.对照组给予塞来昔布胶囊口服,中药组在对照组基础上给予腰痹康颗粒口服,疗程均为1个月.比较两组患者治疗前后疼痛视觉模拟量表(visual analogue scale,VAS)评分,日本骨科协会(Japanese orthopaedic associa-tion,JOA)评分,血清细胞凋亡相关指标[B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关的X蛋白(Bcl-2-as-sociated X protein,Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3,CASP3)]水平,两组患者髓核(nucleus pulposus,NP)区、纤维环(annulus fibrosus,AF)区MRIT2值.结果 与术后1 d比较,术后1周两组患者VAS评分显著降低,JOA评分显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且中药组比对照组降低或升高程度更显著(P<0.05);与术后1周比较,术后1个月两组患者VAS评分显著降低,JOA评分显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05),且中药组比对照组降低或升高程度更显著(P<0.05).与术后1 d比较,术后1个月两组患者血清Bcl-2水平均显著升高(P<0.05),且中药组血清Bcl-2水平显著高于对照组(P<0.05),两组患者血清Bax、CASP3水平显著降低(P<0.05),且中药组血清Bax、CASP3水平显著低于对照组(P<0.05).术后3个月,两组患者NP区、AF区MRI T2值较术前显著降低(P<0.05),但中药组患者NP区、AF区MRI T2值显著高于对照组(P<0.05).结论 腰痹康颗粒能有效改善腰椎间盘突出症椎间孔镜术后残余症,其作用机制可能是提高血清Bcl-2水平,降低血清Bax、CASP3水平.

目的:观察电针"夹脊"穴对软骨终板 Modic 改变(MC)模型兔软骨细胞外基质(ECM)和炎性反应的影响,探讨电针治疗软骨终板MC的作用机制.方法:将18只雄性新西兰白兔随机分为假手术组、模型组和电针组,每组 6 只.模型组和电针组实验兔基于自身免疫学说采用自体髓核填充法制备MC模型.造模成功后电针组实验兔予电针双侧L5、L6"夹脊"穴干预,疏密波,频率2 Hz/15 Hz,电流强度1 mA,每次20 min,每天1次,连续干预6 d后休息1 d,共干预4周.于造模前后及干预前后观察各组实验兔综合反应评分;于造模后和干预后采用磁共振成像(MRI)观察实验兔椎间盘及软骨终板信号强度;干预后,采用 HE 染色观察实验兔软骨终板的软骨细胞形态,免疫组化法检测实验兔软骨终板血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5(ADAMTS5)和聚集蛋白聚糖(Aggrecan)阳性表达,ELISA 法检测实验兔软骨终板炎性因子[白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量,Western blot法检测实验兔软骨终板ADAMTS5、Aggrecan、基质金属蛋白酶-13(MMP-13)、IL-1β和TNF-α蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组实验兔综合反应评分降低(P＜0.01);L5/L6 椎间盘及软骨终板下椎体松质骨出现低信号,分界不清;软骨终板的软骨细胞明显增多,细胞肿大而肥厚,细胞核皱缩、坏死,聚集排列;软骨终板ADAMTS5阳性表达及IL-1β、TNF-α含量升高(P＜0.01),Aggrecan阳性表达降低(P＜0.01);软骨终板 ADAMTS5、MMP-13、IL-1β和 TNF-α蛋白表达升高(P＜0.01),Aggrecan 蛋白表达降低(P＜0.01).与模型组比较,电针组实验兔综合反应评分升高(P＜0.01);L5/L6 椎间盘及软骨终板下椎体松质骨信号增强;软骨终板的软骨细胞减少,细胞核轻度皱缩,散在分布;软骨终板ADAMTS5阳性表达及IL-1β和TNF-α含量降低(P＜0.05,P＜0.01),Aggrecan阳性表达升高(P＜0.01);软骨终板ADAMTS5、MMP-13、IL-1β和TNF-α蛋白表达降低(P＜0.05,P＜0.01),Aggrecan蛋白表达升高(P＜0.05).结论:电针"夹脊"穴能延缓软骨终板MC,其机制可能与抑制软骨细胞ECM降解和炎性因子分泌、修复变性的软骨终板有关.

目的:观察脉冲电磁场(PEMF)联合A 2A腺苷受体激动剂CGS-21680对大鼠椎间盘退变髓核细胞凋亡及炎性反应的影响。 方法:采用随机数字表法将48只SD大鼠分为假手术组、模型组、A 2A腺苷受体激动剂CGS-21680治疗组(简称激动剂组)和PEMF联合CGS-21680治疗组(简称观察组)。除假手术组外，其余各组均制成椎间盘退行性病变(IDD)大鼠模型。制模后激动剂组向L 5-6椎间盘注射100 μl CGS-21680(100 μg/kg)，观察组注射CGS-21680后再给予PEMF干预，磁场强度1.5 mT，磁场频率75 Hz，脉宽150 μs，暴磁30 min/次/d，连续干预14 d，假手术组及模型组同期注射等量生理盐水。于实验进行8周后采用HE染色观察椎间盘组织病理形态变化，采用免疫组化法检测Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)蛋白表达，采用ELISA及RT-PCR法检测炎性因子白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量及mRNA表达，采用Western blot及RT-PCR法检测A 2AR、NLRP3、Caspses-3蛋白含量及mRNA水平。 结果:模型组髓核及纤维环退变明显，观察组髓核细胞皱缩、坏死及纤维环断裂情况显著缓解。干预后观察组椎间盘髓核Col Ⅱ阳性表达、A 2AR蛋白含量及mRNA相对表达量均较模型组、激动剂组明显增加( P<0.05)；而促炎因子IL-6、TNF-α水平及mRNA表达量均较模型组、激动剂组显著降低( P<0.05)；另外观察组大鼠椎间盘组织NLRP3、Caspase-3蛋白含量及mRNA相对表达量亦较模型组、激动剂组明显降低( P<0.05)。 结论:PEMF联合A 2A腺苷受体激动剂CGS-21680能协同上调IDD模型大鼠A 2AR活性，下调促炎因子IL-6、TNF-α及NLRP3、Caspase-3表达，抑制髓核细胞凋亡，减轻炎性反应，有助于椎间盘退变病情缓解。

目的:观察脉冲电磁场(PEMF)对椎间盘退行性病变(IDD)大鼠髓核组织及离体髓核细胞神经肽Y(NPY)的调控作用，并探讨其对髓核细胞凋亡及基质降解的影响。方法:采用随机数字表法将18只SD大鼠分为对照组、IDD模型组(简称模型组)和PEMF组。将模型组及PEMF组大鼠制成IDD动物模型，PEMF组于造模后给予PEMF干预，每天曝磁1次，连续干预14 d。同期体外培养大鼠原代髓核细胞并分为对照组、TNF-α模型组(简称模型组)和TNF-α＋PEMF组(简称PEMF组)，分别向模型组、PEMF组细胞培养板内注入25 μL TNF-α(终浓度为50 ng/ml)，PEMF组随后给予曝磁处理，每天曝磁1次，连续干预6 d，对照组则同期向细胞培养板内注入25 μL磷酸盐缓冲液(PBS)。于造模8周后采用番红固绿染色评估各组大鼠椎间盘组织病理形态学改变；同时检测各组大鼠椎间盘及离体髓核细胞NPY、神经肽Y2受体(NPY2R)、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2因子(Bcl-2)、Ⅱ型胶原(Col-Ⅱ)、基质金属蛋白酶-3(MMP3)的表达水平。结果:模型组椎间盘纤维组织出现断裂、褶皱，且多糖、蛋白质等成分明显减少，骨纤维增多。PEMF组椎间盘纤维组织断裂较少，软骨组织增多，纤维环与髓核边界较清晰。模型组大鼠椎间盘纤维环及髓核组织中均有NPY表达，且NPY、NPY2R表达量均较对照组明显增加( P<0.05)，PEMF组NPY、NPY2R表达量较模型组进一步升高( P<0.05)。与对照组比较，模型组Bax含量显著增加( P<0.05)，Bcl-2表达明显减少( P<0.05)，而PEMF组Bax含量较模型组明显降低( P<0.05)。模型组Col-Ⅱ水平显著低于对照组( P<0.05)，MMP3蛋白表达则明显增强( P<0.05)；PEMF组Col-Ⅱ mRNA表达较模型组显著升高( P<0.05)，MMP3蛋白表达明显降低( P<0.05)。各组离体髓核细胞上述指标检测结果与在体实验观察结果基本一致。 结论:PEMF干预可能通过上调NPY表达，阻滞Bax/Bcl-2信号通路抑制髓核细胞凋亡，并通过增加Col-Ⅱ含量，减少MMP3表达以逆转ECM代谢失衡，有助于延缓IDD退变进程。

目的:探讨线粒体自噬对脂多糖(LPS)诱导的髓核(NP)细胞NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法:以大鼠椎间盘NP细胞为研究对象，首先以LPS(200 μg/ml)分别干预髓核细胞0、24、48 h，通过蛋白质印迹法(Western blot)检测LPS对NLRP3炎症小体活化和线粒体自噬的影响；通过免疫荧光观察LPS对线粒体自噬水平的影响；组间比较采用单因素方差分析。进一步利用线粒体自噬抑制剂Mdivi-1阻断线粒体自噬，实验分组为对照组(con)、LPS(24 h)+Mdivi-1、LPS(24 h)。通过Western blot检测Mdivi-1对LPS诱导的NLRP3炎症小体活化的影响；通过免疫荧光评估各实验组Mito Tracker Red探针标记的线粒体与LC3B及NLRP3的细胞内共定位；通过免疫荧光评估各实验组Mito Tracker Red探针标记的线粒体与LC3B的细胞内共定位；通过免疫荧光检测分析Mdivi-1对LPS诱导的NP细胞线粒体膜电位(ΔΨm)及线粒体ROS的影响；组间比较采用 t检验。 结果:与对照组比较，随着LPS干预时间延长(24、48 h)，NLRP3( F＝175.147， P<0.01)、GSDMD ( F＝398.479， P<0.01)、裂解的GSDMD(cleaved-GSDMD， F＝327.951， P<0.01)和白细胞介素(IL)-1β ( F＝228.902， P<0.01)的蛋白表达逐渐上调；与对照组比较，在LPS(24 h)组p62蛋白表达明显降低( t＝14.336， P<0.01)而LC3B Ⅱ蛋白表达明显升高( t＝10.909， P<0.01)；对比分析LPS(24 h)组和LPS(48 h)组发现，LPS(48 h)组p62蛋白表达明显升高( t＝－13.972， P<0.01)而LC3B Ⅱ蛋白表达明显降低( t＝6.247， P<0.05)；免疫荧光观察线粒体和LC3B共定位显示，与对照组比较，在LPS干预24 h后线粒体自噬增强( t＝－11.408， P<0.01)，而在LPS干预48 h后线粒体自噬逐渐减弱( t＝9.869， P<0.05)；利用Mdivi-1阻断线粒体自噬后显示，与LPS(24 h)组比较，在Mdivi-1预处理组NLRP3 ( t＝－7.551， P<0.05)、GSDMD( t＝－7.089， P<0.05)、cleaved-GSDMD( t＝－4.396， P<0.05)和IL-1β ( t＝－10.451， P<0.01)的表达明显升高，ΔΨm丢失更加严重( t＝－6.213， P<0.05)，线粒体ROS产生增加( t＝－6.496， P<0.05)。 结论:阻断线粒体自噬进一步活化了LPS诱导的NLRP3炎症小体，表明线粒体自噬在LPS诱导NP细胞死亡中具有保护作用。

目的:观察白藜芦醇对白细胞介素(IL)-1β诱导的椎间盘髓核细胞增殖及炎性反应的影响。方法:通过酶序贯消化法获得大鼠椎间盘髓核细胞，并将细胞分为正常组、IL-1β组(20 μg/L)、白藜芦醇低、中、高剂量组(IL-1β＋12.5、25.0、50.0 μmol/L白藜芦醇)。细胞计数试剂盒(CCK-8)实验检测细胞活力、流式细胞术检测细胞凋亡率，实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、IL-6 mRNA表达，蛋白质印迹法(Western blot)检测核因子-κB(NF-κB)蛋白表达量，组间比较采用LSD- t检验。 结果:白藜芦醇低、中、高剂量组与IL-1β组比较，细胞活力(0.396±0.040、0.435±0.043、0.517±0.052比0.362±0.036， t＝5.856、6.437、6.893， P均<0.05)显著提高；细胞早期[(15.23±1.53)%、(9.54±1.05)%、(3.56±0.36)%比(18.63±1.86)%， t＝5.587、6.394、6.885， P均<0.05]及晚期凋亡率[(14.29±1.43)%、(8.34±0.83)%、(4.39±0.44)%比(19.56±1.96)%， t＝5.136、6.483、6.679， P均<0.05]，TNF-α(3.63±0.36、2.89±0.29、1.96±0.20比4.56±0.36， t＝5.436、6.135、5.378， P均<0.05)，IL-6(2.98±0.29、2.16±0.22、1.86±0.19比3.78±0.38， t＝5.842、5.689、6.234， P均<0.05) mRNA表达量及p-NF-κB p65(0.29±0.03、0.169±0.01、0.065±0.01比0.66±0.06， t＝5.632、6.137、6.841， P均<0.05)蛋白表达量均显著降低。 结论:白藜芦醇通过降低NF-κB活性抑制IL-1β诱导的椎间盘髓核细胞增殖及炎性反应。

目的:探讨感觉神经元外泌体（sensory neuron-derived exosomes，nExo）介导椎间盘退变的作用及分子机制。方法:构建大鼠椎间盘退变（intervertebral disc degeneration，IDD）模型，将nExo注入椎间盘，4周后应用组织学染色评估椎间盘退变程度及免疫荧光染色评估组织中髓核干细胞的衰老表型。应用nExo或外源性硫氧还蛋白1（thioredoxin 1，TXN）处理髓核干细胞24 h，利用免疫印迹、流式细胞周期分析、衰老相关β-半乳糖苷酶染色评估细胞的衰老表型。转录组学分析筛选并验证介导nExo调控细胞衰老的关键分子。向大鼠椎间盘退变模型中注入nExo和TXN，4周后评估椎间盘退变程度。结果:nExo提高了大鼠椎间盘组织退变等级，IDD组髓核组织中TEK +p16 +及TEK +p21 +双阳细胞比例分别为36.32%±4.04%和33.69%±4.56%，IDD+nExo组提升至56.41%±5.26%和50.14%±8.49%（ t=7.420， P<0.001； t=4.184， P<0.002）；nExo促进髓核干细胞的p16及p21蛋白表达，并提高了衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率，自7.32%±1.73%提高至58.22%±11.38%（ t=7.658， P=0.002）；nExo下调了G2/M期细胞百分比，从18.10%±1.32%下调至1.60%±0.67%（ t=19.290， P<0.001）。转录组学分析显示空白对照组和nExo组差异基因与细胞衰老密切相关，与数据库中的衰老基因集交集筛选出关键基因，即TXN。nExo下调髓核干细胞中的TXN，而补充外源性TXN下调了衰老相关蛋白的表达，降低衰老相关β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率从58.84%±3.99%降低至21.68%±8.16%（ t=7.048， P=0.021）；将G2/M期细胞百分比从1.21%±0.34%上调至15.26%±2.60%（ t=9.259， P=0.001）。TXN降低了椎间盘组织退变等级，nExo组退变组织学评分为（14.33±0.82）分，nExo+TXN组为（ 8.17±1.17）分，差异有统计学意义（ t=10.590， P<0.001）；增加细胞外基质的含量，nExo组为（10.94±4.35） μg/mg，nExo+TXN组提高至（50.55±12.16） μg/mg，差异有统计学意义（ t=7.512， P<0.001）；减少组织中TEK +p16 +及TEK +p21 +双阳细胞比例，nExo组分别为54.92%±4.21%和60.31%±9.02%，nExo+TXN组下降至27.93%±3.26%和33.75%±8.07%，差异有统计学意义（ t=12.430， P<0.001； t=5.375， P<0.001）。 结论:nExo通过下调髓核干细胞中的TXN，促进细胞衰老和椎间盘退变。

机械敏感性离子通道是细胞表面机械力学刺激转化为细胞内电信号或化学信号的机械感受器。近年来，在真核生物中Piezo蛋白作为机械敏感性阳离子通道逐渐成为研究热点，Piezo1和Piezo2蛋白在哺乳动物不同器官和组织中表达，而骨关节等组织与力学传导直接相关，机械力的传导及引起的细胞内效应对骨科疾病的治疗和预防起着非常重要的作用。就Piezo蛋白机械敏感性离子通道在骨组织、软骨组织、骨髓组织、椎间盘组织以及在骨科疾病中的研究进展进行综述。

目的:探究补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴对髓核细胞增殖和胞外基质合成的影响。方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常及椎间盘退变(IDD)髓核细胞中circ_0036763、miR-583表达水平；将IDD髓核细胞分为pcDNA组、pcDNA circ_0036763组、pcDNA circ_0036763＋mimic NC组、pcDNA circ_0036763＋miR-583 mimic组，采用qRT-PCR检测各组髓核细胞circ_0036763、miR-583表达水平，MTT检测细胞增殖(A值)，蛋白免疫印迹法(Western blot)检测髓核细胞增殖细胞核抗原(PCNA)、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达，双荧光素酶报告实验验证circ_0036763与miR-583靶向关系。将27只小鼠分为假手术组、IDD组、补肾活血方组，除假手术组外均建立IDD模型。建模成功后，假手术组、IDD灌胃生理盐水，补肾活血方组灌胃1.5 g/ml补肾活血方，连续灌胃3周。采用qRT-PCR检测各组小鼠髓核细胞circ_0036763、miR-583表达水平，MTT检测细胞增殖，Western blot检测PCNA、collagen Ⅰ、collagen Ⅱ蛋白表达。结果:IDD髓核细胞中circ_0036763表达水平降低，miR-583表达水平升高(均 P<0.05)；过表达circ_0036763可促进髓核细胞增殖和胞外基质合成(均 P<0.05)；circ_0036763靶向调控miR-583，上调miR-583可逆转过表达circ_0036763对IDD髓核细胞增殖和胞外基质合成能力。与假手术组相比，IDD组collagen Ⅰ蛋白表达、miR-583表达水平增加(均 P<0.05)，细胞A值、PCNA及collagen Ⅱ蛋白表达、circ_0036763表达水平降低(均 P<0.05)；与IDD组相比，补肾活血方组collagen Ⅰ蛋白表达、miR-583表达水平降低(均 P<0.05)，细胞A值、PCNA及collagen Ⅱ蛋白表达、circ_0036763表达水增加(均 P<0.05)。 结论:补肾活血方可能通过调控circ_0036763/miR-583轴诱导髓核细胞增殖和胞外基质合成。

目的:探讨周期性牵张微应变对人髓核细胞生物学功能和退变的影响。方法:收集人椎间盘髓核组织，酶消化法分离、培养髓核原代细胞，显微镜下观察细胞生长状态。Mechano Culture FX2加载周期性牵张微应变，应力10万μ?，10%拉伸应变，频率0.1 Hz，8 640个循环周期。MTT法检测牵张微应变对髓核细胞增殖的影响；流式细胞仪检测牵张微应变对髓核细胞周期和凋亡的影响。基因表达谱芯片检测牵张微应变组和对照组表达差异的基因，生物信息学分析表达差异基因在髓核细胞的功能。荧光定量PCR法检测牵张微应变对髓核细胞表达炎症相关因子、TGF-β、基质降解酶类、ECM分子等的影响。结果:牵张微应变组髓核细胞生长状态较好。牵张微应变促进髓核细胞增殖和周期进程，两组细胞S期（ t=5.336， P< 0.05）和G2/M期（ t=7.288， P< 0.01）百分比的差异均有统计学意义。牵张微应变抑制髓核细胞凋亡（牵张微应变组8.56%±0.48%，对照组10.63%±0.32%， t=4.474， P< 0.05)。基因表达谱芯片检测到866个差异表达基因，基因本体（gene ontology）分析其在细胞中的作用，主要包括focal adhesion、extracellular matrix，membrane raft、condensed chromosome kinetochore、cytoskeleton等。牵张微应变影响髓核细胞表达炎症相关因子、TGF-β基因、基质降解酶、细胞外基质分子等的表达。与对照组相比，牵张微应变组炎症相关因子IL15（ t=5.379， P< 0.05）、IGF1（ t=5.454， P< 0.05）、IGFBP7（ t=13.57， P< 0.01）的表达降低；TGF-β相关基因TGFB1（ t=6.931， P< 0.05）、TGFB2（ t=15.56， P< 0.01）、TGFB3（ t=7.744， P< 0.05）的表达增高；基质降解酶类ADAMTS3（ t=5.241， P< 0.05）和MMP19（ t=24.72， P< 0.01）的表达降低，TIMP3（ t=8.472， P< 0.01）的表达增高；ECM分子COL2A1（ t=5.871， P< 0.05）、FLRT2（ t=5.216， P< 0.05）、FN1（ t=4.289， P< 0.05）的表达增高。 结论:周期性牵张微应变促进髓核细胞周期和增殖，抑制髓核细胞凋亡，可能通过调节髓核细胞表达炎症相关因子、TGF-β、基质降解酶类、ECM分子等改善髓核细胞退变。