目的 分析槟榔提取物通过上调MYC关联因子X(Max)蛋白对口腔鳞癌细胞迁移、侵袭的影响.方法 将口腔鳞癌细胞分为对照组、低浓度槟榔提取物(低浓度)组、中浓度槟榔提取物(中浓度)组、高浓度槟榔提取物(高浓度)组,体外培养CAL127人口腔鳞癌细胞.采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法测定Max相对表达量;通过进行划痕实验来检验胃癌细胞株的迁移能力;通过Transwell小室对口腔鳞癌细胞的侵袭个数进行观察;采用Western印迹测定血小板源性生长因子(PDGF)B、磷酸化血小板源性生长因子(p-PDGFR)β、细胞周期蛋白(Cyclin)D1蛋白相对表达量.结果 与低、中浓度组相比,高浓度组Max表达均明显升高,口腔鳞癌细胞迁移能力及侵袭个数均明显降低(P＜0.05).高浓度组口腔鳞癌细胞处于G0/G1期均明显高于对照组、低、中浓度组(P＜0.05);高浓度组口腔鳞癌细胞处于S期均明显低于对照组、低、中浓度组(P＜0.05);高浓度组口腔鳞癌细胞处于G2/M期明显低于对照组、低、中浓度组(P＜0.05).高浓度组口腔鳞癌细胞增值率较对照组及低、中浓度组明显降低,凋亡率较对照组、低、中浓度组明显升高(P＜0.05).高浓度组口腔鳞癌细胞PDGFB、p-PDGFRβ、CyclinD1蛋白表达较对照组及低、中浓度组明显降低(P＜0.05).结论 槟榔提取物可能通过上调Max蛋白的表达而显著抑制口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭.

目的 通过槟榔提取物构建大鼠口腔溃疡模型,观察口腔内菌群结构变化及多样性特征,探索口腔菌群和局部炎性因子参与槟榔提取物诱发大鼠口腔溃疡的发病作用机制研究,为临床防治口腔溃疡提供理论支持.方法 将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物治疗组(桂林西瓜霜,8mg/d,连续7d),10只/组.大鼠口腔黏膜经皮下注射10 g/mL的槟榔提取物,复制大鼠口腔溃疡模型.通过观察溃疡面积、溃疡评分、局部组织口腔肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-8 水平,并取口腔黏膜组织进行HE染色,观察其组织形态学的变化,采用高通量测序方法分析口腔微生物菌群结构分布及微生物群落多样性.结果 与正常组比较,模型组大鼠溃疡面积显著增大,溃疡评分显著上升(P＜0.01),口腔黏膜组织TNF-α、IL-2、IL-8水平均显著升高(P＜0.01),大鼠口腔唾液的链球菌属(Streptococcus,P＜0.05)、韦荣球菌属(Veillonella,P＜0.001)均显著减少,模型组大鼠口腔黏膜上皮细胞增生或局灶性坏死,黏膜固有层水肿、出血,并伴有大量的中性粒细胞和单核细胞浸润;与模型组比较,药物治疗组大鼠溃疡面积显著减少(P＜0.05,P＜0.01),溃疡评分显著减少(P＜0.05),口腔黏膜组织TNF-α(P＜0.01)、IL-2(P＜0.05)、IL-8(P＜0.05)水平均显著降低,大鼠口腔唾液的链球菌属(Streptococcus,P＜0.001)、韦荣球菌属(Veillonella,P＜0.01)显著增加,葡萄球菌属(Staphylococcus,P＜0.01)显著减少,口腔黏膜组织病变程度有明显改善.结论 槟榔提取物可成功复制大鼠口腔溃疡模型,其发病机制可能与口腔正常菌群水平降低,潜在致病菌水平升高,破坏其口腔菌群微生物平衡,进而破坏机体免疫系统,引起局部促炎因子升高有关.

槟榔(Areca catechu L.)作为被广泛使用的精神活性物质之一,被全世界约10%人口食用.其提取物包括多种化学成分,如生物碱、没食子酸、多酚、碳水化合物等.癫痫是一种慢性神经系统疾病,以反复发作的自发性癫痫为特征,与神经生物学和神经行为过程的改变有关.研究表明,槟榔提取物可能通过多种机制发挥对癫痫的防治作用:①改善乙酰胆碱脂酶的活性,对中枢胆碱能系统产生影响.②影响体内活性氧(ROS)的产生,通过增加体内过氧化氢酶(CAT)的活力和谷胱甘肽(GSH)的水平,降低丙二醛(MDA)水平来增强其抗氧化活性并显示出对神经的保护能力.③ 对神经递质表现出一定的保护作用,γ-氨基丁酸(GABA)是一种主要的抑制性神经递质,在癫痫和记忆功能中起重要作用,谷氨酸(Glu)是一种兴奋性神经递质,在癫痫发作的开始和扩散中起重要作用,槟榔提取物可增加GABA水平和降低Glu水平,从而对癫痫的发作表现出保护活性.本文综述了槟榔提取物在防治癫痫方面的潜在作用及机制,以期为癫痫提供潜在的治疗选择.

目的 研究槟榔无水醇提物对低氧H9C2心肌细胞的作用及其保护机制.方法 建立H9C2心肌细胞低氧模型,CCK-8法检测槟榔无水醇提物对H9C2细胞存活率的影响;通过检测细胞内丙二醛(MDA)含量,过氧化物歧化酶(SOD)、还原型谷胱甘肽(GSH)活力,研究槟榔无水醇提物对H9C2细胞的保护作用;RT-PCR法检测细胞内Nrf2、Caspase-3 mRNA水平的表达,从分子水平研究槟榔无水醇提物对低氧H9C2细胞的保护机制.结果 与常氧对照组相比,低氧24 h时细胞存活为28.46％(P<0.01),细胞内MDA含量升高44.33％(P<0.05),SOD、GSH活力分别下降16.18％、30.64％(P<0.05或P<0.01).RT-PCR实验结果表明,Nrf2被激活,其mRNA表达上升1.74倍(P<0.05).与低氧模型组相比,槟榔无水醇提物处理组H9C2细胞存活率明显升高(P<0.01),且呈现剂量依赖性,槟榔无水醇提物处理组细胞内SOD、GSH活力分别增加14.90％、28.94％(P<0.05),Nrf2基因mRNA相对表达下降66％(P<0.05).结论 槟榔无水醇提物对低氧H9C2细胞有显著的保护作用,其保护机制可能与提高细胞内抗氧化物酶活力,减轻细胞氧化应激损伤,提高细胞耐低氧能力有关.

本文研究了槟榔(Piper betle,PB)水提取物对癌细胞转移能力的调节作用及其对微管蛋白结构和网络的影响.采用亚毒剂量对PB和5-氟尿嘧啶(5-FU)处理的癌细胞进行抗迁移研究,观察细胞迁移20小时.在所有处理组中,100μg/mL PB处理的癌细胞均显示出最大的抗迁移作用(P=0.016).总体上,PB对癌细胞的抗迁移作用高于5-FU.通过细胞形态观察发现,PB处理的细胞表现出与标准微管抑制剂(紫杉醇)相似的细胞特征,并在PB和紫杉醇处理的癌细胞中发现M期细胞群.通过对微管结构和网络进一步研究,我们发现PB和紫杉醇处理的癌细胞表现出长期破坏的纺锤体.因此,我们认为PB具有对癌细胞的抗迁移作用,并可能改变蛋白结构和网络.

目的 探索扶正活血解毒方对槟榔碱提取物(areca nut extract,ANE)诱导的口腔黏膜下纤维化(oral submucous fibro-sis,OSF)Wnt/β-catenin信号通路的作用机制.方法 体外培养大鼠口腔黏膜上皮细胞(epithelial cell,EC),分为正常组、模型组、中药高/中/低剂量组和IWR-1组.以ANE为诱导剂,扶正活血解毒方含药血清为干预药物,以Wnt/β-catenin信号通路抑制剂IWR-1为阳性对照物,采用CCK8检测EC细胞增殖;PCR检测Wnt1、β-catenin、Axin、cylinD1基因的表达;Western blot检测Wnt1、β-catenin、Axin、cylinD1蛋白的表达.结果 与正常组相比,模型组EC增殖水平提高,Wnt1、β-catenin、cylinD1基因及蛋白表达增加,Axin基因及蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,中药高、中剂量组EC增殖水平降低,Wnt1、β-catenin、cylinD1基因及蛋白表达降低,Axin基因及蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,IWR-1组EC增殖水平降低,Wnt1、β-catenin、cylinD1基因及蛋白表达降低,Axin基因及蛋白表达升高(P<0.05).结论 扶正活血解毒方可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,抑制ANE刺激的EC增殖,逆转OSF癌前病变的形成.

目的 探讨不同炙法加工对大腹皮中总黄酮、总酚、鞣质以及槟榔碱等活性成分含量与抗氧化活性的影响,为后续开发利用提供理论依据.方法 通过DPPH法、ABTS法和FRAP法对大腹皮提取物体外抗氧化活性进行综合评价.结果 经不同炙法加工后,大腹皮提取物中的总黄酮、总酚、鞣质等活性成分含量均有不同程度的提高,槟榔碱因受热时间含量下降.大腹皮清除DPPH自由基和ABTS自由基及还原Fe3+的能力均比未进行炙法加工(空白)有显著性提升(P＜0.05).其中姜炙法清除DPPH自由基和ABTS自由基及还原Fe3+的能力均与阳性对照BHT无显著性差异(P＞0.05).结论 不同炙法加工的大腹皮提取物抗氧化能力与其本身所含的总黄酮、总酚、鞣质含量呈现正相关关系,与槟榔碱含量没有明显相关性.因此,姜炙法更有利于提升大腹皮品质,为今后大腹皮精深加工提供理论依据.

采用大孔树脂、硅胶、凝胶、MCI等柱层析及RP-HPLC等色谱方法对马槟榔Capparis masaikai种子提取物反复进行分离纯化,根据化合物的理化性质和波谱数据进行结构鉴定,得到化合物21个,分别鉴定为:恶唑烷硫酮(1)、琥珀酰亚胺(2)、邻苯二酚(3)、硫单质(4)、乙醇胺(5)、3-羟基丙腈(6)、L-阿可拉伯糖(7)、甘油(8)、drummondol (9)、spionoside B(10)、腺苷(11)、(6S,9S)-长寿花糖苷(12)、松柏苷(13)、紫丁香苷(14)、顺式丁香苷(15)、二氢丁香苷(16)、3-吲哚甲酸(17)、吲哚-3-甲酸-β-D-吡喃葡萄糖苷(18)、6-hydroxyindole-3-carboxylic acid β-D-glucopyranosyl ester (19)、亚油酸单甘油酯(20)和油酸甘油三酯(21).其中化合物2-10和12-21为首次从该植物中分离得到.

目的 观察miR-21-5p在口腔黏膜下纤维化癌变细胞中的表达及其生物信息学分析.方法 将大鼠原代口腔黏膜上皮细胞分为实验组和正常对照组,实验组加入50 μg/ml槟榔提取物诱导,构建口腔黏膜下纤维化癌变细胞模型.采用RT-qPCR技术检测两组miR-21-5p的表达,利用miRDB、TargetScan等30个数据库预测hsa-miR-21-5p的靶基因,并进行功能富集分析和信号通路富集分析.结果 RT-qPCR结果显示,实验组miR-21-5p的表达高于正常对照组,差异有高度统计学意义(P＜0.01).生物信息分析结果显示,miR-21-5p靶基因预测中综合得分排前三的是Smad7、PLAG1、TGF-β1.miR-21-5p靶基因主要富集于细胞大分子代谢、细胞内细胞器等组分及蛋白质酶聚集中,信号通路则显著富集于MAPK等信号通路.结论 miR-21-5p在口腔黏膜下纤维化癌变细胞中高表达.Smad7可能通过串话miR-21-5p与TGF-β介导口腔黏膜下纤维化癌变.

目的 建立槟榔多酚提取物中总多酚和儿茶素类含量的测定方法,为槟榔多酚提取物的质量控制提供参考.方法 采用紫外分光光度法对槟榔提取物中总多酚的含量进行测定;高效液相色谱法对儿茶素类物质进行含量测定.结果 紫外分光光度法测定槟榔提取物中总多酚含量在9.8～58.8μg/ml范围内线性关系良好,平均加样回收率为98.44％,RSD为1.4％;在高效液相色谱测定中,儿茶素、表儿茶素和原儿茶酸3种主要成分完全分离,在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为99.17％～101.67％,RSD为1.2％～2.5％.结论 建立的含量测定方法简单、稳定可靠,可用于槟榔多酚提取物的定量分析,为槟榔多酚提取物的质量控制提供实验依据.