橄榄酸(olivetolic acid,OLA),属于单芳香族化合物,是一种经由橄榄醇合成酶(olivetol synthase,OLS)和橄榄酸环化酶(olivetolic acid cyclase,OAC)协同催化的次生代谢产物.OLA具有抗菌、抗细胞毒性、抗惊厥和光保护等药理特性.此外,OLA还是大麻素生物合成的关键前体,为大麻素提供聚酮核部分.随着对OLA应用价值的深度挖掘及在医药工业的需求增加,实现其规模化生产迫在眉睫.生物合成法因其反应条件温和可控、绿色、可循环等优点,成为合成OLA的首选方法.通过综述OLA生物合成途径和关键酶的作用机制,讨论OLA生物合成策略的研究进展,旨在探索利用合成生物学技术生产OLA的潜力,为OLA的规模化生产提供理论依据.

目的 基于磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路关键因子探讨白芍总苷对化学性肝损伤肝阴虚证大鼠的保护作用及机制.方法 将40只雄性SD大鼠按照体质量随机区组分为空白组、模型组、一贯煎组、白芍总苷组,每组10只.除空白组外,其余各组大鼠连续6周腹腔注射20％四氯化碳橄榄油溶液,并灌胃甲状腺片(30 mg/kg)以制备化学性肝损伤肝阴虚证病证结合大鼠模型.造模期间,空白组、模型组大鼠每天灌胃蒸馏水,一贯煎组及白芍总苷组大鼠分别灌胃一贯煎水煎液(635 mg/kg)及白芍总苷混悬液(50 mg/kg),连续6周.给药期间每2周检测大鼠体质量、肛温;给药结束后观察大鼠24 h摄食量和摄水量、舌面湿度;采用酶联免疫吸附测定法检测血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)含量,并计算cAMP/cGMP;采用比色法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBIL)、总胆汁酸(TBA)含量;采用Masson染色法观察肝脏纤维化程度,并计算胶原面积百分比;采用实时荧光PCR法和蛋白质印迹法检测大鼠肝脏PI3K、AKT和mTOR mRNA及蛋白表达水平.结果 与空白组比较,模型组大鼠第2、4、6周体质量降低,第2、4、6周肛温升高,24 h摄食量增加;cAMP升高、cGMP下降、cAMP/cGMP升高,IL-1、IL-6、TNF-α含量均升高,IL-10、IL-1Ra含量均降低,ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL、TBA水平均升高,肝脏胶原面积百分比增加,PI3K、AKT和mTOR mRNA及蛋白磷酸化表达升高(均P<0.05).与模型组比较,白芍总苷组大鼠第2、4、6周肛温下降,24 h摄食量和饮水量减少,舌面湿度升高;一贯煎组和白芍总苷组大鼠cAMP降低、cGMP升高、cAMP/cGMP下降,IL-1、IL-6、TNF-α均下降,IL-10升高,肝脏胶原面积百分比降低;白芍总苷组大鼠ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL均下降,PI3K、AKT和mTOR mRNA及蛋白磷酸化表达降低(均P<0.05).结论 白芍总苷对化学性肝损伤肝阴虚证大鼠具有较好的保护作用,可能是通过抑制PI3K/AKT/mTOR通路的激活,减少促炎细胞因子分泌,增加抗炎细胞因子释放,从而发挥白芍调节阴阳平衡的作用.

目的 观察益气逐瘀解毒颗粒对四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)诱导的肝纤维化模型大鼠的抗纤维化作用及其对与Gα相互作用的囊泡相关蛋白(Gα-interacting vesicle-associated protein,GIV)、下游信号通路蛋白激酶 A(protein kinase A,PKA)/环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cyclic adenosine monophosphate response element binding protein,CREB)表达水平的影响并探讨其作用机制.方法 SD雄性大鼠予以CCl4橄榄油混合物腹部皮下注射7 周诱导肝纤维化模型,造模成功后随机分为益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组,扶正化瘀组及模型对照组,另设阴性对照组,共6组,每组大鼠8 只.益气逐瘀解毒颗粒高、中、低剂量组分别予益气逐瘀解毒颗粒 10.8 g/(kg·d)、5.4 g/(kg·d)、2.7 g/(kg·d)灌胃给药,扶正化瘀组予扶正化瘀胶囊 0.405 g/(kg·d)灌胃给药,其余组等量蒸馏水灌胃,持续 5 周后处死大鼠收集标本.检测外周血丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST);肝组织苏木精—伊红(hematoxylin-eosin,HE)、MASSON染色检测肝纤维化程度;免疫组化法检测肝组织α-平滑肌激动蛋白(alpha smooth muscle actin,α-SMA)含量,并采用实时荧光定量 PCR 法(real time quantitative PCR,RT-qPCR)和蛋白免疫印迹法分别检测大鼠肝组织中Ⅰ型胶原α1 链(collagen type I alpha 1 chain,Col1A1)、Ⅰ型胶原α2 链(collagen type I alpha 2 chain,Col1A2)、GIV、PKA、CREB mRNA和蛋白表达水平.结果 益气逐瘀解毒颗粒可减少肝纤维化模型大鼠胶原纤维增生及肝细胞损伤,且与模型对照组相比,益气逐瘀解毒颗粒各剂量组α-SMA含量显著下降(P<0.05),Col1A1、Col1A2、GIV表达显著下调(P<0.05),益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组PKA表达上调(P<0.05),中剂量组CREB表达显著上调(P<0.05);与扶正化瘀组比较,益气逐瘀解毒颗粒高、中剂量组α-SMA含量显著下降(P<0.05),高剂量组GIV表达下调(P<0.05),中剂量组PKA表达上调(P<0.05).结论 益气逐瘀解毒颗粒对CCl4诱导的肝纤维化模型大鼠具有抗肝纤维化作用,可能与调节GIV表达及其下游信号通路PKA/CREB的表达有关.

目的 在建立肝阴虚证病证结合实验模型的基础上,研究白芍多糖对大鼠化学性肝损伤肝阴虚证证候表征及内分泌/能量代谢的影响.方法 SPF级雄性SD大鼠,体质量(200±20)g,适应性喂养一周后,根据体质量随机区组法分为空白组、模型组、一贯煎组、白芍多糖组.除空白组外,其余各组大鼠腹腔注射浓度 20%四氯化碳(carbon tetrachloride,CCl4)橄榄油溶液,联合甲状腺片30 mg/kg同时灌胃给药,连续6 周.6 周后观察大鼠体质量、易激惹程度、毛发光泽度、小便颜色、大便颜色及质地等并进行评分,测量体质量、肛温、舌面干湿度、摄食量、摄水量,测定血清环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)、环磷酸鸟苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)含量,计算cAMP/cGMP比值.测定血清谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)、谷草转氨酶(aliquot aminotransferase,AST)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transpeptidase,γ-GT)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、总胆红素(total bilirubin,TBIL)、总胆汁酸(total bile acid,TBA)的含量变化并取肝脏进行苏木精—伊红染色病理切片检查;测定血清睾酮(testosterone,T)、雌二醇(estradiol,E2)、皮质类固醇(crticosteroid,COR)水平,测定肝脏Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性.结果 与模型组相比,白芍多糖组大鼠大便评分升高(P<0.01),其余体征评分均显著下降(P<0.01);白芍多糖组体质量均有所上升,但差异无统计学意义(P>0.05);实验第 2、4 周,白芍多糖组肛温下降(P<0.01);白芍多糖组舌面干湿度上升(P<0.01),24 小时摄食量、饮水量无统计学差异(P>0.05);白芍多糖组血清cAMP降低,cGMP升高,cAMP/cGMP下降(P<0.01),ALT、AST、γ-GT、ALP、TBIL均下降(P<0.01),TBA含量降低但无统计意义(P>0.05);病理染色显示肝组织结构中度异常,视野内部分肝细胞轻度脂肪变性,胞质内可见大量小空泡,部分肝细胞气球样变性,肝实质内少量炎症细胞浸润,且未见明显炎症细胞浸润,肝脏组织病理状态有所恢复.白芍多糖组血清 E2 水平降低,COR水平升高(P<0.05,P<0.01),T 水平升高但差异无统计意义(P>0.05);白芍多糖组肝脏Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性均降低(P<0.01).结论 白芍多糖能有效保护肝阴虚型化学性肝损伤,调节环核苷酸、内分泌紊乱和能量代谢亢进,这可能是白芍发挥保护肝损伤肝阴虚证的作用机制之一,从一定程度上揭示了白芍养肝阴的科学内涵.

环烯醚萜合酶(IS)是环烯醚萜类成分合成途径的关键酶,催化10-oxogeranial生成烯醇化物中间体epi-iridodial.该文通过同源比对,在地黄转录组中筛选出4条与长春花CrIS同源的cDNA序列,长度分别为1 527,1 743,1 425,1 718 bp,依次命名为RgIS1,RgIS2,RgIS3,RgIS4.它们编码389～392个氨基酸残基,蛋白质相对分子质量44.30～44.74 kDa,等电点pI在5.30～5.87,亚细胞定位预测均分布在细胞质中.序列分析表明地黄4个环烯醚萜合酶的氨基酸序列均包含6个保守的短链脱氢酶/还原酶(SDR)基序,其三维结构包含N端Rossmann结构域和C端伸展结构域.进化分析表明,RgIS3与CrIS、橄榄OeIS聚在同一类群,另外3个环烯醚萜合酶与其他植物的15个蛋白亲缘关系较近.实时荧光定量PCR分析表明,RgIS1和RgIS3在展开叶中表达量均最高,RgIS2在茎中表达量最高,而RgIS4在块根中表达量最高.RgIS1和RgIS2在QH1的非菊花心部位表达量较高,RgIS3在2个品种的非菊花心部位表达量均较高,而RgIS4在QH1菊花心有较高的表达量.RgIS1,RgIS2和RgIS3在MeJA处理后的毛状根均显著上调表达.因此,该研究为进一步研究地黄环烯醚萜合酶的分子功能奠定基础,同时有助于揭示地黄环烯醚萜类成分的合成机制.

目的 探讨麻黄连翘赤小豆汤对 α-萘异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积性肝损伤模型大鼠的防护作用.方法 取大鼠50只,按体质量随机分为正常对照组(A组,等体积0.9％氯化钠溶液),模型组(B组,等体积0.9％氯化钠溶液)、麻黄连翘赤小豆汤低、中、高剂量(0.14,0.28,0.56 g/mL)组(C1组、C2组、C3组),各10只,连续灌胃给药(15 mL/kg)7 d,第5天时,除A组予橄榄油外,其各组均予ANIT灌胃,建立大鼠胆汁淤积肝损伤模型.收集胆汁,计算胆汁流量;取肝脏,称定质量并计算肝脏指数;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织病理形态学变化;检测大鼠血清天门冬酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转移酶(GGT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(TBil)、直接胆红素(DBil)水平;Western Blot法和逆转录聚合酶链(RT-PCR)法检测核转录因子-kappaB(NF-κB)p65、环氧合酶-2(COX-2)的蛋白和mRNA表达水平.结果 与A组比较,B组大鼠不同时间段胆汁流量减少,肝脏系数显著升高,肝脏病理病变明显,血清中AST,ALT,γ-GGT,ALP,TBil,DBil水平均显著升高,肝组织中NF-κB p65及COX-2的蛋白和mRNA表达水平均明显升高(P<0.05);与B组比较,C1组,C2组和C3组大鼠的胆汁流量增加,肝脏病变程度明显减轻,血清中AST,ALT,γ-GGT,ALP,TBil,DBil等肝功能指标均显著降低,肝组织中NF-κBp65及COX-2的蛋白和mRNA表达水平均显著降低,且除胆汁流量外,其他几项指标均呈剂量依赖型(P<0.05).结论 麻黄连翘赤小豆汤对ANIT诱导的大鼠胆汁淤积性肝损伤有一定的防护作用,作用机制可能与抑制NF-κB/COX-2信号通路有关.

目的 研究白芍总苷对大鼠化学性肝损伤肝阴虚证候模型的影响和作用机制.方法 SPF级雄性SD大鼠适应性喂养后,随机分为对照组、模型组、一贯煎组和白芍总苷组.除对照组外,其余各组大鼠ip 20％ CCl4橄榄油溶液,后期ig给予附子、干姜、肉桂温热中药复方制备化学性肝损伤肝阴虚证模型.一贯煎组、白芍总苷组造模同时给药,1次/d,连续6周.6周后测定大鼠体质量、肛温,观察其一般状态;测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)、6-酮-前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)、血浆血栓素B2 (TXB2)、层黏连蛋白(LN)、透明质酸(HA)水平及肝组织白细胞介素-6 (IL-6)、IL-10、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;检测肝脏磷脂酰肌醇激酶(PI3k)mRNA、蛋白激酶B(Akt) mRNA和蛋白表达水平,并取肝脏进行HE病理切片检查.结果 与模型组比较,白芍总苷组大鼠体征评分有明显改善(P＜0.05),体质量显著升高(P＜0.05),血清ALT、AST水平显著降低(P＜0.01、0.001),cAMP/cGMP显著升高(P＜0.01),LN、HA水平均显著降低(P＜0.05、0.001),肝组织TNF-α、IL-6水平显著降低(P＜0.001),Akt蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),PI3K、Akt mRNA表达水平显著降低(P＜0.05、0.001),同时肝脏病理损伤有所改善.结论 白芍总苷具有保护化学性肝损伤肝阴虚证的功效,可能是白芍养肝阴的物质基础,其作用机制可能与抗炎、减轻微循环障碍、通过抑制PI3K-Akt通路来调节细胞因子IL-6和IL-10平衡有关.

目的 探究大麻二酚(CBD)对四氯化碳(CCl4)诱导小鼠急性肝损伤的防治作用及机制.方法 42只6～8周龄C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(9只)、模型组(9只)、CBD对照组(9只)、还原型谷胱甘肽(GSH)干预组(6只)、CBD干预组(9只),其中CBD对照组、GSH干预组、CBD干预组分别腹腔注射CBD 5 mg/kg、GSH 200 mg/kg、CBD 5 mg/kg,对照组、模型组注射相同剂量的生理盐水.2 h后模型组、GSH干预组、CBD干预组分别腹腔注射含20％CCl4橄榄油5 mL/kg建立急性肝损伤模型,24 h后取血清检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;HE染色观察小鼠肝组织病理变化;肝组织匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和GSH水平;Western blot检测肝组织过氧化物增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)、环氧合酶-2(COX-2)蛋白的表达.结果 与对照组比较,模型组细胞损伤坏死严重,ALT、AST、MDA水平及COX-2蛋白表达水平明显升高,SOD、GSH水平及PPAR-γ蛋白表达水平明显降低(均P<0.05);与模型组比较,GSH干预组、CBD干预组肝脏病理损伤明显减轻,ALT、AST、MDA水平及COX-2蛋白表达水平明显降低,SOD、GSH水平及PPAR-γ蛋白表达水平明显升高(均P<0.05).结论 CBD对CCl4所致小鼠急性肝损伤有一定的预防作用,其机制可能与激活PPAR-γ抑制COX-2的表达,发挥抗炎抗氧化作用有关.

目的:探讨泮托拉唑对肝硬化门静脉高压(PHT)大鼠Ras同源基因家族成员A/Rho相关激酶(RhoA/ROCK)通路及胃黏膜微循环的影响.方法:橄榄油和40％四氯化碳(CCl4)混合液注射,并同时猪油、胆固醇饲养建立肝硬化PTH大鼠模型,模型成功大鼠随机分为3组:模型组、泮托拉唑组(静脉滴注0.8 mg·kg-1泮托拉唑)、泮托拉唑+U-46619组(静脉滴注0.8 mg·kg-1泮托拉唑+1.5 pg·kg-1 U-46619),同时设置对照组(静脉滴注等体积生理盐水),每日1次,连续5 d.右颈动脉插管检测门静脉压力(PVP)、平均动脉压(MAP)、心率(HR);全自动生化仪检测肝功能指标天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(Alb)、球蛋白(GLO)、总蛋白(TP)水平,并计算AST/ALT、白蛋白/球蛋白(A/G);苏木精-伊红(HE)检测肝组织、胃黏膜组织形态学变化;蛋白免疫印迹(WB)检测胃黏膜组织RhoA、ROCK、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、内皮素-1(ET-1)蛋白水平.结果:模型组肝细胞多数空泡增大、肝细胞脂变、坏死严重,胃黏膜微绒毛损伤严重,细胞间稀疏,核收缩、深染,炎症浸润;泮托拉唑组肝细胞空泡症状不明显,胃黏膜微绒毛损伤得以缓解;泮托拉唑+U-46619组肝细胞脂变、坏死,胃黏膜微绒毛损伤相较于泮托拉唑组严重,细胞间隔变大、细胞核收缩、深染严重.与对照组相比,模型组PVP、HR,静脉血中AST、ALT、GLO水平,胃黏膜组织中RhoA、ROCK、AngⅡ、ET-1蛋白水平升高,MAP、AST/ALT、Alb、A/G水平降低(P<0.05);与模型组相比,泮托拉唑组PVP、HR,静脉血中AST、ALT、GLO水平,胃黏膜组织中RhoA、ROCK、AngⅡ、ET-1蛋白水平降低,MAP、AST/ALT、Alb、A/G水平升高(P<0.05);与泮托拉唑组相比,泮托拉唑+U-46619组PVP、HR,静脉血中AST、ALT、GLO水平,胃黏膜组织中RhoA、ROCK、AngⅡ、ET-1蛋白水平升高,MAP、AST/ALT、Alb、A/G水平降低(P<0.05).结论:泮托拉唑在肝硬化PHT中可以通过抑制RhoA/ROCK通路实现对胃黏膜损伤的缓解.

目的:利用网络药理学方法探索鹿茸(Cervi Cornu Pantotrichum)在治疗骨关节炎中的作用机制.方法:利用BATMAN-TCM数据库筛选出鹿茸的有效活性成分,挖掘对应的靶点信息.通过GeneCards,在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)得到骨关节炎相关靶点信息.将成分靶点和骨关节炎靶点取交集,使用STRING平台建立蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络.使用DAVID数据库对鹿茸治疗骨关节炎作用靶点进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,利用R x643.6.3软件绘制GO,KEGG富集分析高级气泡图,利用Cytoscape 3.7.2软件绘制"中药-成分-靶点-通路"网络.体外实验分别检测鹿茸对产生氧化损伤和炎症的RAW 264.7细胞的细胞活力和肿瘤坏死因子(TNF)-α水平.结果:共计得到鹿茸活性成分20种,其中神经酰胺和6'-O-β-D-葡糖基龙胆苦苷、脑苷、橄榄苦苷、鞘磷脂、胆固醇阿魏酸酯没有达到筛选条件的得分,所以共筛选出14种有效活性成分.共计303个有效成分靶点,共得到3093个骨关节炎作用靶点.将成分靶点与骨关节炎作用靶点取交集,得到活性成分-骨关节炎作用靶点92个.GO富集分析和KEGG通路分析显示,鹿茸涉及的生物过程主要有氧化还原过程,RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、炎症反应、蛋白质合成、破骨细胞分化,TNF信号通路、癌症通路、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、环磷酸腺苷(cAMP)信号通路等生物过程和信号通路.体外实验结果显示,一定浓度的鹿茸蛋白显著增加了过氧化氢(H2O2)诱导的氧化损伤RAW 264.7细胞的细胞活力(P＜0.05,P＜0.01),并且降低了脂多糖(LPS)诱导炎症RAW 264.7细胞的TNF-α水平(P＜0.05).结论:基于网络药理学方法阐释了鹿茸多成分、多靶点、多途径的治疗OA作用机制,证实了鹿茸具有抗炎及抗氧化活性,为深入研究鹿茸治疗OA提供了理论指导和科学依据.