目的:探讨水通道蛋白3（AQP3）在皮肤光老化过程中的作用及机制。方法:将正常人皮肤成纤维细胞（NHDF）分为NHDF组（未转染）、AQP3 cDNA组（转染AQP3 cDNA）、AQP3 siRNA组（转染AQP3 siRNA）、核内不均一核糖核蛋白Q（hnRNPQ）cDNA组（转染hnRNPQ cDNA）、hnRNPQ siRNA组（转染hnRNPQ siRNA）、AQP3-hnRNPQ cDNA组（转染AQP3 cDNA和hnRNPQ cDNA）、AQP3-hnRNPQ siRNA组（转染AQP3和hnRNPQ siRNA）、cDNA空载体组（转染cDNA空载体）、siRNA空载体组（转染siRNA空载体）。用长波紫外线（UVA，10 J·cm -2·d -1）连续照射已经转染或未转染的NHDF 3 d来建立细胞衰老模型，同时以未接受UVA照射的NHDF作为对照。用细胞计数法评估各实验组细胞增殖活性，衰老相关-β半乳糖苷酶染色试剂盒对各实验组进行染色来评估HDF的衰老水平，用荧光素酶报告基因技术检测p53转录调控活性，用Western印迹分析NHDF中AQP3、hnRNPQ及衰老相关蛋白p53、p21的表达水平。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用ANOVA检验。 结果:用UVA连续照射各组NHDF 3 d后，NHDF中p53、p21的表达水平和β半乳糖苷酶阳性细胞百分率明显高于未照射的对照组（ P<0.05），但是AQP3的表达水平和照射后第5、6、7天细胞增殖活性明显低于对照组（ P<0.05）。在接受UVA连续照射3 d后，AQP3 siRNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型较siRNA空载体组明显加重，两组间p53、p21、hnRNPQ的表达水平和β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性、细胞增殖活性差异均有统计学意义（均 P<0.05），进一步沉默hnRNPQ能够逆转上述反应。与siRNA空载体组相比，hnRNPQ siRNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显减轻，两组间p53、p21表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性差异均有统计学意义（均 P<0.05）。在接受UVA连续照射3 d后，cDNA空载体组中p53、p21、hnRNPQ的表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性分别为0.56 ± 0.08、0.70 ± 0.07、0.92 ± 0.03、（81.53 ± 7.62）%、7.16 ± 0.25、（2.15 ± 0.23）× 10 6/ml，而AQP3 cDNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显轻于cDNA空载体组，其上述指标分别为0.25 ± 0.06、0.23 ± 0.06、0.82 ± 0.09、（31.23 ± 6.54）%、2.52 ± 0.36、（2.93 ± 0.33）× 10 6/ml，两组比较，差异均有统计学意义（均 P<0.05），进一步过表达hnRNPQ能够逆转上述效应。在接受UVA连续照射3 d后，hnRNPQ cDNA组中p53、p21的表达水平、β半乳糖苷酶阳性细胞百分率、p53转录调控活性和细胞增殖活性分别为1.41 ± 0.09、1.42 ± 0.06、（91.06 ± 4.24）%、12.35 ± 0.88、（1.23 ± 0.41）× 10 6/ml，与cDNA空载体组相比，hnRNPQ cDNA组中UVA诱导的NHDF的衰老相关表型明显加重，两组比较，上述指标差异均有统计学意义（均 P<0.05）。 结论:AQP3可能通过调控hnRNPQ下调p53的表达来减缓UVA诱导的NHDF衰老。

目的:胫前黏液性水肿(pretibial myxedema, PTM)是以真皮大量透明质酸(hyaluronan, HA)沉积和血清促甲状腺激素受体的抗体(TSH receptor antibody, TRAb)升高为特征的一种局限性甲状腺相关皮肤病。本研究探讨TRAb及其两种亚型[刺激型抗体TSAb(M22)和抑制型抗体TBAb(K1-70)]对PTM原代真皮成纤维细胞合成透明质酸的影响。方法:分离培养正常人及胫前黏液性水肿真皮成纤维细胞，用M22、K1-70及患者IgG分别刺激原代成纤维细胞，利用ELISA检测刺激原代成纤维细胞前后上清液中HA浓度，Western Blot检测细胞CEMIP、HAS2、PI3K-AKT通路蛋白及其磷酸化的变化。结果:患者IgG(TRAb 8.4 IU/L)可显著刺激PTM患者原代成纤维细胞的透明质酸胞外累积。同样，M22、K1-70处理PTM患者原代成纤维细胞均可上调上清液透明质酸含量，还显示K1-70刺激作用显著高于M22。IgG、M22及K1-70处理后，原代成纤维细胞HAS2表达增加，CEMIP表达减少；同时，p-PI3K及p-AKT增加。其中，对K1-70进一步研究，通过调控PI3K-AKT信号通路促进HA产生可被PI3K抑制剂(LY294002)抑制。结论:TRAb尤其是TBAb，通过活化成纤维细胞PI3K-AKT信号途径，促进HA的酶(HAS2)增加，HA分解酶(CEMIP)减少，造成HA在成纤维细胞外聚集，从而导致PTM皮损的发生。

目的 研究经过不同剂量紫外线中波(UVB)照射不同时间后正常人皮肤成纤维细胞(HSF)中衰老标记蛋白30 (SMP30)基因的表达改变,探讨UVB诱导HSF衰老可能的机制. 方法 以未采用UVB照射的HSF为对照组,经过不同剂量UVB(100、200、300 mJ/cm2)处理不同时间(1、2、3 d后)的HSF为实验组,四唑盐比色法(MTT)观察HSF的生长活性,流式细胞仪检测HSF的凋亡率,实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)检测实验组和对照组中SMP30基因的表达. 结果 不同照射时间组和不同剂量组之间,随着UVB照射时间延长和剂量的增加,HSF细胞增殖抑制率逐渐增高,细胞的凋亡率也逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05); UVB处理后实验组中SMP30基因的相对表达水平(0.66± 0.19)明显低于对照组(1.15± 0.11),差异有统计学意义(P<0.01);SMP30基因的表达水平随着UVB作用的时间和剂量的不同而变化,呈明显的时间依赖性和浓度剂量依赖性,不同照射时间组和不同剂量组之间基因表达的差异有统计学意义(P<0.05). 结论 经过不同剂量UVB处理不同时间后可以抑制HSF细胞生长,促进细胞凋亡,大剂量长时间UVB照射可诱导HSF发生衰老改变.

本文主要研究了冰川水和白雪茶提取物对正常人真皮成纤维细胞的抗衰老作用及其潜在的机制.用冰川水和白雪茶提取物处理正常人真皮成纤维细胞,检测了不同处理对细胞活性、细胞外基质成分及其水解酶表达水平的影响.结果显示,冰川水和白雪茶提取物可以提高人真皮成纤维细胞的增殖活性和能量代谢水平,促进透明质酸和弹性蛋白的表达;此外,白雪茶提取物还可以促进I型胶原蛋白的表达和下调弹性蛋白酶的mRNA表达水平;两者共同作用时影响更显著.以上研究表明,冰川水和白雪茶提取物有延缓皮肤衰老的作用,作用机制与两者可增强成纤维细胞活力,提高外基质成分的表达水平并抑制部分成分的降解有关.

目的 构建一种体外维持时间长、有利于后续测试研究的胶原基质皮肤模型.方法 将猪胶原和正常人皮肤成纤维细胞混合接种于培养皿,培养得到真皮层结构后,将第3～7代正常人角质形成细胞接种于真皮层表面,培养得到双层皮肤模型.通过HE和Masson染色评估皮肤模型的形态和组织结构,使用电镜观察模型的超微结构,并通过免疫组化和免疫荧光染色观察模型中各层的主要标记物表达情况.结果 HE和Masson染色发现,皮肤模型与正常人皮肤组织有相近的真皮及表皮结构,且模型收获后仍具有稳定良好的真表皮结构,可在体外继续培养14d.电镜下显示,皮肤模型中可见角质层中脂质、颗粒层中透明角质颗粒、角化桥粒、桥粒、基底膜等超微结构.免疫组化及免疫荧光显示,皮肤模型在表皮层中具有与正常皮肤一致的转谷氨酰胺酶、丝聚合蛋白、角蛋白10、Ki67的表达,基底膜具有与正常皮肤一致的Ⅳ型胶原和层黏连蛋白5表达,真皮层具有一致的Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及原纤维蛋白表达.结论 本研究构建的三维皮肤模型组织结构和多种蛋白的表达与正常人体皮肤相似,模型收获后体外可继续稳定培养至少14d.

目的 观察过氧化氢(H2O2)对正常人皮肤成纤维细胞(NHSF)β-链蛋白(β-catenin)和衰老标记蛋白30(SMP30)基因表达的影响,探讨H2O2可能诱导NHSF衰老的机制.方法 将传至2～4代的NHSF细胞随机分为2组:对照组和实验组.对照组NHSF细胞未作任何处理.实验组将NHSF细胞培养24 h后,分别给予50(实验1组)、100(实验2组)、150(实验3组)μmol·L-1的H2O2.在1、2、3h后,采用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)法检测各组α-catenin、SMP30基因表达的水平,并计算α-catenin mRNA、SMP30 mRNA值.结果 与对照组比较,实验组β-catenin、SMP30基因表达水平和实验1、2、3组1、2、3h时α-catenin mRNA、SMP30 mRNA水平均明显降低(均P＜0.05);与实验2组比较,实验1组1、2、3h时α-catenin mRNA、SMP30 mRNA水平均明显升高,实验3组1、2、3h时 β-catenin mRNA、SMP30 mRNA水平均明显降低(均P＜0.05).β-catenin、SMP30基因的表达对H2O2诱导有较为明显的时间依赖性和浓度剂量依赖性.结论 H2O2处理后NHSF细胞中β-catenin、SMP30基因表达水平明显降低,H2O2可能在诱导NHSF衰老中起重要作用.

目前在国内皮肤疾病的临床诊疗中,皮肤三维成像仍然是一个未被解决的问题,我们因而提出用甚高频超声对皮肤三维成像.用中心频率为50 MHz的机械三维超声探头采集正常人前臂上侧皮肤切片,用光线投射算法和可视化工具包重建前臂上侧皮肤.重建100张576x760像素的图像所需的时间为1.1 s,三维重建图能够清晰的显示皮肤的表皮、真皮、真皮纤维和皮下组织,通过体数据的任意切面可以清晰的观察到血管的形态、走向及血管内红细胞散射斑点.甚高频超声皮肤三维成像克服了传统成像方式在皮肤成像中的不能兼顾深度和精度的缺点,对于皮肤疾病的诊断以及皮肤手术指导具有重要意义.

目的 研究经过不同剂量紫外线中波(UVB)照射正常人皮肤成纤维细胞(HSF)不同时间后β-链蛋白(βcatenin)基因的表达改变,探讨UVB诱导HSF衰老可能的机制.方法 未经UVB照射的HSF为对照组;经过不同剂量(100、200、300) mJ/cm2 UVB处理不同时间(1、2、3)天后的HSF为实验组.实时荧光定量PCR技术(FQ-PCR)检测实验组和对照组中β-catenin基因的表达;四唑盐比色法(MTT)观察HSF的生长活性改变,流式细胞仪检测HSF的凋亡率变化.结果 UVB照射对HSF细胞的生长有明显抑制作用,并且随着UVB照射时间延长和剂量的增加,HSF细胞生长率逐渐下降;UVB处理后实验组中β-catenin基因的相对表达水平明显低于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05);β-catenin基因的表达水平随着UVB作用的时间和剂量的不同而变化,存在较为明显的时间依赖性和剂量依赖性.结论 经过UVB处理的HSF细胞中调控皮肤衰老的基因β-catenin表达明显降低,大剂量长时间UVB照射可诱导HSF发生衰老改变.

目的 研究碱性调宁蛋白(CNN1)在系统性硬化症(SSc)中的表达及其对成纤维细胞的作用.方法 收集SSc患者皮肤活检组织19例,正常人的皮肤活检组织21例.通过Real-time PCR方法检测皮肤组织中CNN1和α-SMA的基因表达;通过免疫组化方法检测皮肤组织中CNN1的蛋白表达;利用RNA干扰方法降低成纤维细胞中CNN1的基因表达,通过Real-time PCR检测细胞中CNN1及纤维化相关基因α-SMA、CTGF、COL1A1、COL1A2、COL3A1的mRNA相对表达量;应用细胞实时增殖检测系统(xCELLigence系统)检测细胞增殖.结果 与正常对照相比,SSc患者皮肤组织中CNN1的表达水平显著升高(P<0.05);皮肤组织中,CNN1的表达和α-SMA存在正相关,具有统计学意义(r=0.7219,P<0.0001);与正常对照组相比,SSc患者皮肤组织中CNN1的蛋白表达升高;原代皮肤成纤维细胞中,CNN1的表达和α-SMA、COL1A1均存在正相关,具有统计学意义(r=0.6547,P<0.05;r=0.6438,P<0.05);同时,原代皮肤成纤维细胞中干扰CNN1后,可显著抑制细胞增殖,降低纤维化相关基因(CTGF、COL1A2等)表达,降低胶原蛋白的表达.结论 CNN1在SSc患者中表达升高,且干扰CNN1可降低成纤维细胞活性,提示CNN1与SSc纤维化密切相关.

目的 检测硬脂酰辅酶A去饱和酶1(stearoyl-CoA desaturase 1,SCD1)在乳腺癌细胞中的表达,分析抑制SCD1对乳腺癌MCF-7细胞增殖和周期的影响及机制.方法 采用蛋白质印迹法检测乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-2 31及正常人皮肤成纤维细胞株HSF中SCD1的表达.应用SCD1特异性抑制剂MF-438干预MCF-7细胞,采用MTS法测定细胞增殖的抑制率,计算IC50值;采用PI染色流式细胞术分析细胞周期分布,蛋白质印迹法检测特异性周期蛋白Cyclin D1、Akt、pAkt、pAMPK、pACC蛋白的表达.结果 乳腺癌MCF-7、MDA-MB-231细胞中SCD1的表达高于人皮肤成纤维细胞HSF细胞(P＜0.05).MF-438在100 nmol/L～100 μmol/L浓度范围内,抑制低血清培养下的MCF-7细胞的增殖,并显示出显著的剂量依赖性,IC50值为(3.9±0.45) μmol/L.5 μmol/L MF-438干预MCF-7细胞后,处于细胞周期中S期和G2/M期的细胞比例减少(P＜0.01),G0/G1期细胞比例增加(P＜0.01),Cyclin D1的表达水平降低(P＜0.01);同时,pAkt及pAkt/Akt表达下降(P＜0.05),pAMPK及pACC表达水平升高(P＜0.05).结论 SCD1在乳腺癌的发生和发展中发挥重要作用,抑制SCD1活性能通过下调Akt通路、活化AMPK通路,阻滞乳腺癌细胞周期进展,抑制细胞增殖.