目的 对一起热带紫褐裸伞中毒事件进行快速毒素筛查和对患者临床症状及治疗进行讨论,以期为此类事件的处置及临床救治提供参考.方法 利用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱对中毒事件剩余的毒蘑菇进行检测,根据流行病学调查方法,收集病例资料,并结合调查结果和患者的肝肾功能指标进行分析.结果 从中毒患者食用的热带紫褐裸伞中检测出裸盖菇素及毒蝇碱,患者症状与裸盖菇素和毒蝇碱中毒症状相似,表现为幻觉、恶心、呕吐、腹痛、腹泻等,肝肾功能指标正常.结论 此次中毒事件是由热带紫褐裸伞中的裸盖菇素及毒蝇碱引起.

从蘑菇中提取的活性物质捕蝇蕈(muscimol)、环丝氨酰(cycloserin)和鹅膏蕈氨酸(ibotenic acid)都含有异噁唑药效团结构,本文以捕蝇蕈(蕈毒碱)为结构模型,采用分子重组法,通过1,3-偶极环加成反应,合成了3-(1',2'-二-O-异亚丙基二氧乙基)-5-芳基-3a,6a-二氢-4,6-二氧代氮杂茂并[3',4'-d]异噁唑啉的蕈毒碱类似物,其结构经UV-Vis、1HNMR、IR和元素分析进行了表征.对合成的化合物进行了体外药物活性筛选,发现结构中的药效团作为潜在的非共价DNA结合体,显示了不同程度的抗癌、抗炎及免疫性疾病活性.初步体外抗癌活性结果表明,当样品浓度为20 μg·mL-1时,化合物3a～3o对细胞分裂周期25B磷酸酯酶(Cdc25B)的抑制率为56.99％～99.94％,甚至当样品浓度为5μg·mL-1时,除了3f、3h、3i、3m、3o无活性外,其余化合物的抑制率仍为66.85％～99.84％,值得进一步研究. 此外,体外白细胞共同抗原(CD45)活性实验结果表明,当样品浓度为20 μg.mL-1时,除了3i无活性外,其余化合物对白细胞共同抗原CD45蛋白酪氨酸磷酸酶A具有良好的抑制活性,其抑制率为63.08％～92.09％.这些具有活性的目标化合物是潜在的Cdc25B和CD45蛋白酪氨酸磷酸酶A抑制剂,在癌症、炎性及免疫性疾病治疗方面具有很好的应用前景.

为探讨甲维盐、多杀菌素和高效氯氟氰菊酯亚致死剂量对斑翅果蝇和黑腹果蝇解毒酶的影响,本研究在3种杀虫剂亚致死剂量胁迫下,测定了两种果蝇体内乙酰胆碱酯酶(AchE)、谷胱甘肽转移酶(GSTs)、羧酸酯酶(CarE)和多功能氧化酶(MFO)的活性.结果表明,甲维盐可诱导斑翅果蝇体内(AchE)和(GSTs)的活性,而对黑腹果蝇则具有抑制作用;在乙基多杀菌素和高效氯氟氰菊酯亚致死剂量的处理下,两种果蝇体内CarE的活性升高,而黑腹果蝇体内的GSTs活性在剂量为LC20时会显著下降;另外,3种亚致死剂量的杀虫剂均可抑制斑翅果蝇的MFO的活性,而对黑腹果蝇的MFO活性具有明显的促进作用.由此可见,在亚致死剂量杀虫剂的处理下,两种果蝇体内的解毒酶活性均会发生变化,但应激反应并不相同,这为两种果蝇抗药性以及综合防治的差异分析提供了重要的指导作用.

目的 阐明东莨菪碱发挥抗抑郁作用的可能脑区和靶点.方法 明确东莨菪碱的抗抑郁样作用:将正常SpragueDawley(SD)大鼠采用数字表法随机分为东莨菪碱组和0.9％(质量分数)氯化钠注射液对照组,腹腔注射25 μg/kg东莨菪碱或等体积0.9％(质量分数)氯化钠注射液,24 h后进行旷场实验和强迫游泳实验以评价东莨菪碱对大鼠抑郁样行为的影响;明确东莨菪碱发挥抗抑郁效应的脑区:在腹腔注射25 μg/kg东莨菪碱前1h向大鼠内侧前额叶皮质(medial prefrontal cortex,mPFC)立体定位注射γ-氨基丁酸-A(γ-aminobutyric acid-A,GABA-A)受体激动剂蝇蕈醇(Muscimol) 1.25 μg,24 h后观察东莨菪碱的行为学效应是否被阻断;探索东莨菪碱抗抑郁的作用靶点:通过微量给药系统分批次分别向大鼠侧脑室注射毒蕈碱型乙酰胆碱受体2(muscarinic acetylcholine receptor 2,M2)选择性拮抗剂(methoctramine,MCT)0.5、1和2μg,对照组均给予2μL 0.9％(质量分数)氯化钠注射液,24 h后利用旷场实验和强迫游泳测试评价大鼠行为学变化.结果 腹腔注射东莨菪碱24 h后,大鼠强迫游泳不动时间低于对照组(P＜0.05),旷场总路程差异无统计学意义(P＞0.05);向mPFC注射Muscimol可明显增加东莨菪碱组大鼠的不动时间(P＜0.01),旷场总路程差异无统计学意义(P＞0.05);与侧脑室注射0.9％(质量分数)氯化钠注射液相比,0.5μg MCT不影响大鼠在强迫游泳实验中不动时间(P＞0.05),1μg MCT可明显降低影响大鼠不动时间(P＜0.01),而2μg MCT则可明显增加影响大鼠不动时间(P＜0.05).结论 东莨菪碱可能通过阻断mPFC的M2受体发挥抗抑郁作用.

[目的]紫茎泽兰是我国危害严重的恶性入侵杂草.比较专一性天敌泽兰实蝇对该杂草入侵前后植株的适应性,是揭示外来植物入侵后适应性机制的重要科学问题之一.[方法]比较泽兰实蝇对原产地和入侵地紫茎泽兰植株的寄主选择性,并测定寄生于2类植株的上泽兰实蝇卵巢蛋白质含量及乙酰胆碱酯酶、羧酸酯酶、谷胱甘肽S-转移酶活性.[结果]泽兰实蝇对原产地和入侵地紫茎泽兰的选择无显著性差异;寄生在紫茎泽兰入侵地植株上的卵巢蛋白质含量较原产地植株上更高.解毒酶活力比较表明,入侵地紫茎泽兰上泽兰实蝇的羧酸酯酶活性低于原产地上的,但谷胱甘肽S-转移酶(雌虫)活性比较则相反,乙酰胆碱酯酶活性比较均无显著性差异.[结论]紫茎泽兰入侵后,专一性天敌泽兰实蝇的适应性有所下降,丰富了外来植物入侵机制中天敌逃逸假说的内涵.

目的 建立同时快速检测血液中5种蘑菇毒素(α-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽、蝇蕈醇、毒蝇碱和赛洛新)的超高压液相色谱-高分辨质谱联用(ultra-high performance liquid chromatography-high resolu?tion mass spectrometry,UPLC-HRMS)分析方法.方法 血液样品经乙腈-水溶液(V乙腈:V水=3:1)提取、PAX粉末净化后,在ACQUITY Premier C18色谱柱上分离,梯度洗脱.采用FullMS-ddMS2/正离子扫描模式对5种蘑菇毒素进行监测,根据一级母离子和二级碎片离子的精确质量数进行定性定量分析.结果 5种蘑菇毒素在各自线性范围内线性关系良好,决定系数(R2)≥0.99;检出限0.2～20 ng/mL;定量限0.5～50 ng/mL;低、中、高3个添加水平的回收率89.6％～101.4％,相对标准偏差1.7％～6.7％,准确度90.4％～101.3％,日内精密度0.6％～9.0％,日间精密度1.7％～6.3％,基质效应42.2％～129.8％.结论 本研究建立的方法操作简便快捷、回收率高,可同时对生物检材中多种蘑菇毒素进行快速准确的定性筛选和定量分析,为蘑菇中毒案事件的鉴定提供依据.

以樱桃果蝇成虫为材料,进行了苦参碱、毒死蜱、鱼藤酮、阿维菌素和高效氯氟氰菊酯5种药品的3个浓度(800、1000、1200倍稀释液)对其胃毒与触杀作用的研究.实验结果表明:1)同一药剂不同稀释倍数下,苦参碱、阿维菌素、高效氯氟氰菊酯800倍稀释液对樱桃果蝇成虫胃毒效果最好,其死亡率均达到100％.2)相同稀释倍数下,800倍稀释液高效氯氟氰菊酯、苦参碱、阿维菌素对樱桃果蝇成虫胃毒的效果最好,其校正死亡率均达到了100％;1000倍稀释液阿维菌素对樱桃果蝇成虫胃毒效果最好,校正死亡率达到83.33％;1200倍稀释液阿维菌素对樱桃果蝇成虫胃毒效果最好,其校正死亡率达到89.29％.3)5种药品最适浓度对樱桃果蝇成虫的触杀效果由大到小为阿维菌素＞苦参碱＞高效氯氟氰菊酯＞鱼藤酮＞毒死蜱.综合分析,建议在生产实践中,早晨通过向地面喷洒高效氯氟氰菊酯800倍稀释液或阿维菌素800倍稀释液,以及向树上喷洒苦参碱800倍稀释液防治果蝇虫害.

目的 建立液相色谱-串联质谱技术(LC-MS/MS)测定野生菌中5种急性肝衰竭型(α-鹅膏毒肽、β-鹅膏毒肽、γ-鹅膏毒肽、羧基二羟鬼笔毒肽和二羟鬼笔毒肽)和4种神经-精神紊乱型(鹅膏蕈氨酸、毒蝇母、毒蝇碱和裸盖菇素)蘑菇毒素的分析方法.方法 样品经干燥后采用0.5％(V/V)甲酸50％(V/V)甲醇-水溶液提取、乙腈沉淀蛋白质、水稀释后,采用XBridgeTM BEH C18柱(150 mm×3.0 mm,2.5 μm)分离、0.005％(V/V)甲酸水溶液-甲醇流动相体系梯度洗脱,MS/MS多反应监测(MRM)模式测定.结果 通过优化样品提取、稀释倍数和色谱条件,实现基于纯溶剂标准校正的不同野生菌中9种蘑菇毒素的定性和定量测定.样品基质中9种蘑菇毒素的检出限(LOD)和定量限(LOQ)分别为 6～15 mg/kg 和 20～50 mg/kg,线性范围为 0.004～2 mg/L,相关系数 r 在 0.997 3～0.999 5 之间.50、500和5 000 mg/kg三水平加标平均回收率为78.6％～109.7％,相对标准偏差(RSD)为2.7％～9.0％.多起中毒事件中采集的不同野生菌毒素组成和含量差异大.结论 本方法操作简便、快速,结果准确,已应用于常见有毒野生菌中蘑菇毒素检测和中毒应急事件处置,可以为中毒病因的鉴定和患者的及时救治提供快速、准确的技术支持.

误食毒蘑菇导致的中毒事件是食物中毒中引起死亡的主要原因,我国农村山区误食毒蘑菇中毒的事件时有发生.这些毒蘑菇中主要的毒素包括鹅膏毒肽类、鬼笔毒肽类、毒伞素类、丝膜菌毒素、毒蝇碱、鹿花菌素、鹅膏蕈氨酸、蝇蕈醇、毒蝇蕈腙、裸盖菌素类、鬼伞菌素、邻苯二甲酸二丁酯等,不同的毒素作用于机体的机制不尽相同.根据中毒的症状大体可分为肝脏损害型、肾脏损害型、神经精神型、光过敏性皮炎型、胃肠类型、溶血型和横纹肌溶解型7种类型.主要对蘑菇毒素毒性作用机制的研究进展进行综述,为深入了解毒蘑菇、蘑菇毒素及其蘑菇中毒机制提供参考依据.

[目的]CYP6G1是黑腹果蝇Drosophila melanogaster体内重要的P450酶,其底物谱广泛,除了介导黑腹果蝇对DDT的抗性之外,还与其对新烟碱类和氨基甲酸酯类杀虫剂的抗性密切相关,但目前CYP6G1的代谢功能与黑腹果蝇抗药性之间的因果关系还缺乏一些直接证据.[方法]本研究通过建立Bac-to-Bac昆虫杆状病毒真核表达系统,功能性地表达了果蝇细胞色素P450酶CYP6G1,以吡虫啉为阳性对照,利用超高效液相色谱(ultra-performance liquid chromatography,UPLC)和超高效液相色谱串联质谱(ultra-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)分析CYP6G1对噻虫啉和噻虫嗪的体外代谢情况.[结果]孵育2 h后,重组CYP6G1能够羟基化吡虫啉和噻虫啉,使它们的含量分别减少17.6％±7.1％和4.2％±2.3％;重组CYP6G1可以促进噻虫嗪转化为噻虫胺,使噻虫嗪含量减少5.8％±2.1％.[结论]本研究结果为果蝇CYP6G1的结构功能研究提供一定理论依据.