例1 　男，33岁，因诊断寻常型天疱疮11个月，气喘2周于2020年7月就诊。患者于2019年确诊为寻常型天疱疮，予甲泼尼龙60 ~ 100 mg/d与硫唑嘌呤200 mg/d治疗。因病情反复改为利妥昔单抗联合甲泼尼龙治疗，于2020年5月21日和2020年6月5日分别静脉滴注利妥昔单抗1.0 g。甲泼尼龙初始剂量为100 mg/d，第3、11、16、30天分别减量至80、60、48、40 mg/d，30 d时皮损基本消退。第1次应用利妥昔单抗5周后（此时甲泼尼龙40 mg/d），患者出现气喘，活动后明显，偶伴有干咳。家族史和既往史无特殊。体检：体温36.6 ℃，全身未见水疱。各系统检查无异常。胸部高分辨率CT示：两肺间质性肺炎，两肺上叶局限性肺气囊。实验室检查：利妥昔单抗治疗前CD4 + T细胞429.45个/μl（参考值200 ~ 1 820个/μl，下同），CD19 + B细胞481.45个/μl（50 ~ 670个/μl），免疫球蛋白（Ig）M浓度为0.63 g/L（0.4 ~ 2.3 g/L），治疗后CD4 + T细胞354.54个/μl，CD19 + B细胞0.49个/μl，IgM 0.629 g/L。淋巴细胞计数0.59 × 10 9/L[（1.1 ~ 3.2） × 10 9/L]；乳酸脱氢酶604 U/L（120 ~ 250 U/L）；真菌β-D-葡聚糖试验236.1 pg/ml（< 60 pg/ml，阴性）；病毒8项（乙肝表面抗原定量、乙肝表面抗体定量、乙肝e抗原、乙肝e抗体、乙肝核心抗体、HIV抗原/抗体联合检测、丙肝抗体、梅毒螺旋体）和曲霉菌免疫学试验均阴性；动脉血气分析正常。送检支气管肺组织特殊染色：阿新蓝染色阴性，吉姆萨染色阴性，六胺银染色（+/-），过碘酸雪夫染色（PAS）阴性；肺泡灌洗液二代测序结果提示，可疑致病菌主要有耶氏肺孢子菌、白念珠菌、人类疱疹病毒4型（EB病毒）。

目的:观察运脾泻肺化痰汤对哮喘模型大鼠气道黏液高分泌的影响，以及对表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor, EGFR) /黏蛋白5AC (mucin5ac, MUC5AC）信号通路的调控作用。方法:将70只SD大鼠按随机数字表法分为正常组、模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、西药组、联合组，每组10只。除正常组外，其余各组予卵清白蛋白、氢氧化铝混合液1 ml致敏建立哮喘大鼠模型。实验第16天开始灌胃，运脾泻肺化痰汤高、中、低剂量组分别灌胃40、20、10 g/kg运脾泻肺化痰汤，西药组灌胃羧甲斯坦片150 mg/kg，联合组灌胃运脾泻肺化痰汤20 g/kg、羧甲斯坦片150 mg/kg, 1次/d，连续灌胃4周。采用ELISA法检测大鼠血清TNF-α、IL-13含量；行瑞氏-姬姆萨染色观察大鼠肺泡灌洗液中白细胞总数及细胞分类情况；行过碘酸雪夫染色（PAS)观察肺组织病理学改变；Western blotting检测肺组织EGFR、MUC5AC蛋白表达；RT-PCR法检测EGFR、MUC5AC mRNA水平。结果:与模型组比较，中药高、中、低剂量组及西药组、联合组大鼠IL-13、TNF-α水平降低( P < 0.05) ，大鼠肺泡灌洗液中白细胞总数及嗜酸性粒细胞、中性粒细胞比例降低( P <0.05) ，肺组织EGFR [(0.466±0.023)、(0.354±0.047)、(0.667±0.066)、(0.553±0.065)、(0.290±0.033）比（0.782± 0.047) ]、MUC5AC [(0.424±0.022)、(0.313±0.033)、(0.603±0.051)、(0.495±0.041)、(0.243±0.024)比（0.806±0.090)]蛋白表达降低( P<0.05) ，EGFR[(2.302±0.321)、(2.549±0.623)、(3.084±0.453)、(2.585± 0.314)、(1.810±0.379）比（4.101±0.567) ]、MUC5AC [(3.243±0.742)、(3.283±1.064)、(4.419±0.572)、(3.817±0.637)、(2.469±0.424)比（5.840±0.661) ]mRNA水平降低( P<0.05)。 结论:运脾泻肺化痰汤可抑制哮喘大鼠气道黏液高分泌状态，其机制可能与EGFR/MUC5AC信号通路相关。

目的:探讨婴儿全肺灌洗治疗肺泡蛋白沉积症的安全性、可行性及操作要点。方法:报道2018年11月上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心重症医学科收治的1例肺泡蛋白沉积导致呼吸衰竭的患儿的临床表现、基因检查及全肺灌洗治疗方法；并以"whole lung lavage""pediatric""pulmonary alveolar proteinosis""全肺灌洗""儿童""肺泡蛋白沉积"为检索词，检索PubMed、Springer Link、中国知网、维普、万方数据库建库至2019年4月相关文献并进行总结。结果:患儿男，3月龄，因"咳嗽、气促伴口唇青紫1周"入院。查体示肝脾肿大。血常规示轻度贫血（血红蛋白96 g/L），白细胞、血小板及C反应蛋白正常。白蛋白偏低（31 g/L），天冬氨酸转氨酶轻度升高（115 U/L）；乳酸脱氢酶显著升高（>6 600 U/L），铁蛋白显著升高（>4 500 μg/L），血氨轻度升高（165 μmol/L）。胸部CT显示两肺透光度减低，斑片状高密度影及磨玻璃样影。基因检查显示SLC7A7基因存在突变（c.625+1G>A）。支气管肺泡灌洗液过碘酸希夫反应（PAS染色）阳性。患儿诊断为重症肺炎、呼吸衰竭、赖氨酸尿性蛋白耐受不良、肺泡蛋白沉积症。行左右肺全肺灌洗治疗后患儿顺利撤机，脱离吸氧并出院。文献检索共11篇，中文0篇、英文11篇，纳入21例患者，进行全肺灌洗后呼吸功能好转者占76%（16/21）。结论:全肺灌洗可有效改善婴儿肺泡蛋白沉积导致的呼吸衰竭，改善患儿呼吸功能；且操作具有可行性及安全性。

探究楹树皂苷对乙醇致大鼠急性胃溃疡的保护作用及其机制.SD大鼠实验前 24 h禁食不禁水,正常对照组和模型组灌胃水,阳性药组灌胃雷贝拉唑钠溶液(40 mg·kg-1),受试物组灌胃不同剂量的楹树皂苷溶液(3、10、30 mg·kg-1),30 min后正常对照组灌胃 1.5 mL水,其余各组均灌胃等体积 95%乙醇造模,6 h后颈椎脱臼法处死大鼠取胃.统计出血面积,计算溃疡指数;苏木素-伊红(HE)染色检测胃组织病理改变;高碘酸-席夫(PAS)染色检测胃黏膜表面黏液分布;酶联免疫吸附法(ELISA)检测胃黏膜磷脂和氨基己糖含量;Western blot检测胃组织碳酸氢根转运体、基质金属蛋白酶和细胞间紧密连接相关蛋白表达量;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色检测分泌型黏蛋白和紧密连接相关蛋白阳性细胞.结果显示正常对照组大鼠胃组织表面光滑无出血点,模型组大鼠胃溃疡指数为 35±11,楹树皂苷在 3、10、30 mg·kg-1剂量下对大鼠胃溃疡的抑制率分别为 46%(P<0.01)、85%(P<0.001)、100%(P<0.001).模型组大鼠胃黏膜结构破坏严重,无法观察到黏液层.与模型组相比,楹树皂苷组大鼠胃黏膜表面黏液层完整,黏液中磷脂和氨基己糖含量显著增加,分泌型黏蛋白MUC5AC阳性细胞数明显增多,碳酸氢根转运体SLC26A3 和CFTR的表达水平显著提高,应激活化蛋白激酶c-Jun氨基末端激酶(JNK)和核转录因子c-Jun磷酸化显著减少,基质金属蛋白酶(MMP)-8 表达量明显降低,同时检测到MMP-8 内源性抑制剂(TIMP-1)表达升高,紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达量明显增加.结果表明楹树皂苷一方面通过上调分泌型黏蛋白MUC5AC以及磷脂和氨基己糖含量,同时提高碳酸氢根转运体SLC26A3 和CFTR的表达水平来增强黏液-碳酸氢盐屏障功能;另一方面通过抑制JNK信号通路,阻止MMP-8过度活化,从而减少Occludin和ZO-1的降解来增强黏膜屏障功能.即楹树皂苷在黏液屏障和黏膜屏障 2 个方面共同发挥抗胃溃疡的作用.

基于糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)/酪氨酸激酶 1(janus activated kinase 1,JAK1)/信号转导和转录激活因子3(signal transduction and activator of transcription 3,STAT3)信号通路探讨红景天苷对糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)小鼠肾损伤的保护作用.采用高糖高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)建立小鼠DN模型,随机分为正常组、模型组、红景天苷低剂量(20 mg·kg-1)组、红景天苷高剂量(100 mg·kg-1)组、二甲双胍(140 mg·kg-1)组,每组12只.造模成功后每日灌胃相应药物或溶剂1次,持续10周,每2周测定体质量、日饮水量,检测空腹血糖(fasting blood glucose,FBG).末次给药结束后,进行口服糖耐量测试,收集24 h尿液、血清及肾组织样本.采用生化法检测 24 h 尿蛋白(24 hours urinary total protein,24 h-UTP),血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)、甘油三酯(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;过碘酸雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色观察肾组织病理形态变化;免疫组织化学染色检测肾脏α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)表达;试剂盒检测肾组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-PX)活力以及丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平;酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清 AGEs、羧乙基赖氨酸(carboxyethyllysine,CEL)、羧甲基赖氨酸(carboxymethyllysine,CML)水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织RAGE蛋白表达以及JAK1、STAT3蛋白的磷酸化水平.结果显示,与正常组比较,模型组小鼠FBG,血糖曲线下面积(area under the curve of glucose,AUCG),饮水量,肾脏指数,24 h-UTP,肾小管损伤评分,肾小球细胞外基质占比,血清中Scr、BUN、TG、LDL-C、AGEs、CEL、CML水平,肾组织中MDA含量,α-SMA、vimentin、AGEs、RAGE蛋白表达及JAK1、STAT3蛋白的磷酸化水平显著增加(P＜0.01);血清HDL-C水平,肾组织SOD、CAT、GSH-PX活力显著降低(P＜0.01).与模型组比较,红景天苷高剂量组小鼠上述指标变化均显著逆转(P＜0.05或P＜0.01).该研究表明,红景天苷可通过抑制AGEs介导的RAGE/JAK1/STAT3信号轴活性减轻氧化应激反应和肾脏纤维化,发挥治疗DN的作用.

解毒活血汤出自王清任《医林改错》,是国医大师张琪教授根据急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)热毒瘀滞病机从古方中筛选出应用临床数十年的有效方剂,该文拟从调控铁死亡(ferroptosis)角度阐释解毒活血汤对AKI的治疗作用及其潜在机制.将 32 只雄性C57BL/6 小鼠随机分为 4 组:正常组、模型组及解毒活血汤低、高剂量组,每组 8 只.由于临床AKI的治疗普遍以支持或替代疗法为主,尚无特效药,故该实验未设置阳性药物组.解毒活血汤低剂量组对应 0.5 倍的临床等效剂量,高剂量组则对应临床等效剂量,予以每日晨间灌胃,连续干预 7 d;正常组及模型组小鼠分别灌以相应体积的纯水.给药第 5 天时,除正常组外其余各组小鼠均按 20 mg·kg-1 的剂量腹腔注射顺铂溶液进行造模,正常组给予生理盐水注射.造模72 h后取材,留取小鼠血清及肾脏组织,检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平以评价小鼠肾脏功能变化;酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清肾损伤分子 1(kidney injury molecule 1,KIM-1)的表达水平;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察小鼠肾组织病理学改变;过碘酸雪夫(periodic acid-Schiff,PAS)染色法观察肾脏糖原沉积变化;普鲁士蓝染色观察肾组织铁沉积水平;生化比色法检测肾组织中还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)以及过氧化氢酶(catalase,CAT)活力.采用Wes-tern blot法检测小鼠肾组织中酰基辅酶A合成酶长链家族成员 4(acyl-CoA synthetase long chain family member 4,ACSL4)、溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶 3(lysophosphatidylcholine acyltransferase 3,LPCAT3)及Hippo通路关键分子Yes相关蛋白(Yes-asso-ciated protein,YAP)蛋白表达;免疫组化法检测YAP在肾组织中的定位与相对表达;再采用实时荧光定量PCR法检测ACSL4及谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)mRNA表达.结果显示,与正常组相比,顺铂诱导的AKI小鼠血清中Scr、BUN、KIM-1水平显著升高;肾组织病理显示,模型组小鼠肾小管上皮细胞发生显著萎缩坏死脱落,肾小管刷状缘消失,管内大量蛋白管型填充,小管空泡样变性,肾间质增宽且可见水肿,肾脏结构严重损伤,肾小管损伤评分显著升高;肾组织部分区域有明显的铁沉积;肾组织GSH含量、SOD及CAT活力显著降低;同时,肾组织中铁死亡标志分子ASCL4、LPCAT3 显著升高,GPX4 显著降低,YAP显著上调.与模型组相比,高剂量解毒活血汤可有效保护肾脏功能,降低Scr、BUN、KIM-1水平,减轻肾脏病理损伤及糖原沉积和铁沉积;提升肾组织中GSH含量、SOD及CAT活力.进一步的机制研究表明,解毒活血汤组AC-SL4、LPCAT3 及YAP蛋白表达较模型组显著降低,而GPX4 水平显著升高.综上,解毒活血汤可以通过调控YAP/ACSL4 信号通路抑制铁死亡,对顺铂诱导的AKI发挥保护作用.

目的 评估达格列净在高尿酸血症肾病(HN)小鼠中的保护作用和潜在的机制.方法 选用8 周龄雄性ICR背景小鼠,利用高腺嘌呤饲料诱导HN模型,予以达格列净干预.小鼠分为以下 4 组:正常组(n=8)、腺嘌呤组(n=8)、正常+达格列净组(n=8)和腺嘌呤+达格列净组(n=6).检测血清肌酐、尿素氮、尿酸和乳酸脱氢酶的水平;过碘酸-希夫(PAS)染色和MASSON染色观察肾病理改变;免疫组化染色和蛋白质免疫印迹检测肾纤维化和NLRP3 炎症小体通路的表达水平.结果 与正常组相比,腺嘌呤诱导的HN小鼠组的血肌酐、尿素氮、尿酸和乳酸脱氢酶的水平均显著升高(P<0.05);而给予达格列净治疗的腺嘌呤肾病小鼠的血肌酐、尿素氮、尿酸和乳酸脱氢酶均显著下降(P<0.05).通过蛋白免疫印迹和免疫组化染色均发现,腺嘌呤诱导的HN小鼠肾中α-SMA表达显著上调,经过达格列净的治疗,肾中α-SMA得到明显抑制(P<0.05).MASSON染色显示,腺嘌呤肾病小鼠肾间质纤维化(13.25±0.21)较正常组(1.49±0.12)严重(P<0.05),经过达格列净的治疗,肾间质纤维化程度(8.66±0.78)较腺嘌呤组明显缓解(P<0.05).腺嘌呤诱导的HN小鼠肾中NLRP3 和Caspase-1 表达显著上调和活化(P<0.05),经过达格列净的治疗,肾中NLRP3 和Caspase-1 的活化得到明显抑制(P<0.05).结论 达格列净可有效减轻HN小鼠肾功能的恶化、肾间质纤维化和炎症浸润,这种保护效应可能是通过抑制NLRP3 炎症小体的活化而发挥作用.

目的 探究白花丹素通过沉默信息调节因子 2 相关酶(sirt)1-叉头框蛋白(FOX)O1 通路对糖尿病肾病(DN)大鼠氧化应激损伤的影响.方法 120 只SD大鼠随机分为对照组、DN组、白花丹素低剂量组、白花丹素高剂量组、EX-527 组(sirt1 抑制剂,5 mg/kg)、白花丹素高剂量+EX-527 组,每组 20 只.检测大鼠 24 h尿蛋白、空腹血糖(FBG)、血肌酐(SCr)、血β2 微球蛋白(β2-MG)及肾组织匀浆中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6水平;测定大鼠左肾指数;过碘酸雪夫(PAS)染色观测肾脏病理变化;TUNEL法检测肾组织细胞凋亡;Western印迹法检测sirt1-FOXO1 通路相关蛋白表达.结果 与对照组相比,DN组 24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1 蛋白均显著降低(P<0.05).与DN组相比,白花丹素低、高剂量组 24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6 水平均显著降低,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1 蛋白显著升高(P<0.05);EX-527 组 24 h尿蛋白、FBG、Scr、β2-MG水平、左肾指数、MDA、IL-1β、IL-6 水平均显著升高,肾组织匀浆SOD、CAT水平、肾组织sirt1、FOXO1 蛋白均显著降低(P<0.05);EX-527 可部分削弱白花丹素高剂量对DN大鼠氧化应激损伤的缓解作用.结论 白花丹素可能通过激活sirt1-FOXO1 通路,缓解DN大鼠氧化应激损伤.

目的 研究益肺散结丸对荷瘤小鼠骨骼肌重量、强度、病理形态、糖原和脂质含量以及代谢强度的影响,以探究益肺散结丸治疗荷瘤小鼠骨骼肌萎缩的作用机制.方法 将16只雌性ICR小鼠通过腹腔注射小鼠Lewis肺腺癌细胞建立荷瘤小鼠动物模型,随机分为模型组、益肺散结丸治疗组(4 g·kg-1·d-1,共21d),8只/组,并设正常组(n=8).记录小鼠体质量、腓肠肌重量,前肢握力试验测试肌肉强度,液质联用分析益肺散结丸入血成分,酶联免疫吸附测定血清血糖、血清胰岛素浓度和血清及腓肠肌炎症因子水平.苏木素-伊红染色和透射电子显微镜观察腓肠肌病理形态,转录组学测序分析腓肠肌病理过程中涉及的信号通路变化,过碘酸雪夫染色观察腓肠肌糖原含量,油红O染色观察腓肠肌脂质含量,腺苷三磷酸酶染色观察腓肠肌代谢强度,免疫组织化学染色观察腓肠肌炎症细胞浸润程度和P-AKT水平,试剂盒检测腓肠肌肌酸激酶、乳酸脱氢酶和肌红蛋白含量.结果 益肺散结丸增加荷瘤小鼠的骨骼肌强度及腓肠肌重量(P＜0.001),降低腓肠肌损伤标志物(P＜0.01).转录组学测序及入血成分显示,益肺散结丸改善荷瘤小鼠腓肠肌损伤的机制可能与炎症浸润、胰岛素抵抗和脂质代谢相关(P＜0.05).实验结果显示,益肺散结丸降低血清和腓肠肌炎症因子水平(P＜0.05)及腓肠肌的促炎细胞浸润,增加腓肠肌胰岛素敏感性指标P-AKT水平,提高糖原和脂质含量以及代谢水平.结论 益肺散结丸可能通过降低炎症性胰岛素抵抗缓解癌因性骨骼肌萎缩.

目的 探讨碘酸钠(NaIO3)诱导大鼠视网膜退行性改变的作用机制.方法 取雄性SD 大鼠20 只,随机分为对照组和模型组.采用30 mg.kg-1 NaIO3 尾静脉注射,建立大鼠干性年龄相关性黄斑变性病变模型.继续饲养21 d,检测大鼠视网膜电图(ERG),观察大鼠视网膜组织病理学变化,检测大鼠视网膜组织超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量,采用液相色谱-质谱联用分析差异蛋白情况.结果 ERG检测结果显示,模型组大鼠暗适应0.01ERG、暗适应3.0ERG、暗适应3.0 振荡电位以及明适应3.0ERG 和明适应3.0 闪烁光反应b 波振幅分别比对照组降低79.98％、81.64％、76.08％、61.68％、57.25％,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).与对照组相比,模型组大鼠视网膜组织细胞层数减少,尤其是外核层、内核层结构紊乱,呈现明显的波浪形变化.与对照组相比,模型组大鼠视网膜组织SOD 和CAT 活性分别下降12.51％和14.08％,MDA 含量增加57.96％,差异均有统计学意义(均为P＜0.05).GO 分析显示,模型组较对照组上调的80 个蛋白,所参与的生物学过程在调控基因表达(positive regula-tion of gene expression)、炎症反应(inflammatory response)、衰老(aging)以及对白细胞介素(IL)-6 的细胞反应(cellular response to interleukin-6)等方面具有显著性.18 个下调蛋白参与的生物学过程非常集中,主要表现在视觉感知(visual perception)、对光刺激的反应(response to light stimulus)、光转导(phototransduction).KEGG 分析结果显示,差异蛋白主要富集于光转导(phototransduction)、蛋白酶体(proteasome)、JAK-STAT 信号通路(JAK-STAT signaling pathway)、细胞内吞(endocytosis)、补体及凝血级联反应(complement and co-agulation cascades)等通路.结论 NaIO3 可通过特异性氧化应激引发炎症与免疫过程,同时抑制视网膜光转导通路,诱导视网膜退行性改变.