目的 壳聚糖(chitosan,CTS)分子在碱性氛围(NH3)中通过链缠结以及分子间的低能键(如氢键、配位键等)的相互作用,可以逐步形成网状结构的壳聚糖水凝胶(CTS/NH3),但其力学性能较差,生物抗菌活性较低.本文拟通过加入金属铜离子以改善其相关性能.方法 以CuCl2 和CTS作为原材料,在100 mL的2%(体积分数)乙酸水溶液中加入2.5g的壳聚糖,配制浓度为 2.5%(质量分数)的壳聚糖溶液.然后向壳聚糖溶液中加入一定量的氯化铜形成壳聚糖-CuCl2 溶液.在 0.2 m3 的氨气气氛密闭环境中使壳聚糖-CuCl2 溶液交联.静置12h至水凝胶形成.将水凝胶从培养皿中取出,用蒸馏水洗涤至洗涤液呈中性.制备不同铜离子浓度的壳聚糖-铜离子水凝胶,并检测其力学性能指标和生物抗菌活性.结果 铜离子赋予壳聚糖水凝胶良好的溶胀性能和稳定的流变学性能,从而使其力学性能明显提升,且随着铜离子浓度的增加,力学性能更加优异;同时,铜离子还使得壳聚糖水凝胶表现出更好的抗菌性能,使其具有治愈该类细菌的伤口感染的潜力.结论 金属铜离子可以有效改善壳聚糖水凝胶的力学性能及抗菌性能,并使其具有可作为生物医学敷料的应用前景和在生物医学贯通伤等方面表现出潜在的应用价值.

目的 以羟丙基三甲基氯化铵壳聚糖(HACC)和三聚磷酸钠(TPP)为载体,制备载有细粒棘球绦虫表位多肽FL46的纳米颗粒(NPs),筛选最优制备条件,对包封效果及形态表征进行评价.方法 采用离子交联法,将FL46溶液缓慢滴加到HACC溶液中,以800 r/min转速搅拌并逐滴加入TPP溶液,制备FL46-HACC-NPs混悬液.使用纳米粒度电位仪检测平均粒径、多分散系数(PDI)和表明电位(Zeta),透射电子显微镜下观察其微观形态,二辛可宁酸(BCA)蛋白浓度测定试剂盒计算包封率.以HACC浓度(0.25、0.50、0.75、1.00 mg/ml)、TPP浓度(0.25、0.50、0.75、1.00 mg/ml)、HACC 与 TPP 质量比(8∶1、9∶1、10∶1、11∶1)进行三因素四水平正交实验,单因素法考察对FL46-HACC-NPs表征的影响.结果 不同的HACC和TPP质量浓度及质量比下,FL46-HACC-NPs溶液可呈澄清、乳光、沉淀状态.经单因素实验,以粒径小、包封率高为筛选条件,筛选出的最优制备条件为HACC浓度0.25 mg/ml,TPP浓度0.50 mg/ml,HACC与TPP的质量比9:1.最优条件下可制备类球形或多边形FL46-HACC-NPs,粒径为(307.37±2.17)nm,PDI为(0.228±0.008),Zeta 电位为(29.77±0.46)mV,包封率为(75.95±1.60)％.透射电镜下显示,FL46-HACC-NPs形态结构大小均匀,呈类球形或多边形.结论 离子交联法可有效制备出优化的FL46-HACC-NPs,为细粒棘球绦虫多肽疫苗保护效果的研究提供基础.

目的 探讨不同修饰度氯化壳聚糖季铵盐纳米粒对小鼠骨髓来源树突状细胞转染效率的影响,为以壳聚糖纳米粒为佐剂的树突状细胞生物免疫疫苗研究提供理论依据.方法 采用卤代法修饰合成不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐;离子交联法制备不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐/pEGFP-C1纳米粒;激光粒度仪测粒径和Zate电位,酶保护实验评价纳米粒质量.用改良Insba法,体外分离培养树突状细胞,用不同修饰度的氯化壳聚糖季铵盐纳米粒做体外转染实验,验证其细胞毒性和转染效率.结果 纳米粒粒径:(220±15)nm,Zeta电位:(29±5)mV,包封率99.8％,氯化壳聚糖季铵盐纳米粒对树突状细胞体外转染效率比壳聚糖纳米粒提高了10％.结论 氯化壳聚糖季铵盐纳米粒能有效提高pEGFP-C1质粒在树突状细胞中的转染效率.

目的 基于Qβ噬菌体装甲RNA技术构建内含A群轮状病毒(Rotavirus,RV)检测靶标的装甲RNA(Rotavirus armored RNA,AR-RV),并开展系统的初步定值、均匀性、稳定性研究.方法 人工合成核酸片段QβSNRV,该片段5'端至3'端依次为Qβ噬菌体成熟酶编码基因、衣壳蛋白编码基因、包装位点序列、RV检测靶标cDNA序列、多克隆位点序列,并将其克隆到pET-28a(+)载体中构建重组质粒pET-QβSNRV.将pET-QβSNRV转化大肠埃希菌BL21 (DE3)并诱导表达,利用氯化铯密度梯度超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析纯化AR-RV后电镜观察,并参照GB/T 15000.3-2008《标准样品工作导则(3)标准样品定值的一般原则和统计方法》规定的方法与原则对制备的AR-RV开展定值、均匀性和稳定性研究.结果 十二烷基硫酸钠-聚丙稀酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果证实重组质粒在大肠埃希菌中有目的条带表达,大小约为14.1 kDa;经氯化铯密度梯度超速离心、丙烯葡聚糖凝胶层析纯化的AR-RV无杂蛋白干扰;电镜下可见结构完整的病毒样颗粒,大小约为25 nm;定值结果显示,AR-RV中检测靶标RNA的含量为(1.02±0.3)×107 copies/μl;均匀性分析结果为F=0.66＜F005(9.20),表明样品均匀性良好;稳定性结果表明,AR-RV在37℃可保存15d、25℃可保存15d、4℃可保存50 d、-20℃至少可保存270 d、-80℃至少可保存360 d.结论 本研究基于Qβ噬菌体制备的AR-RV拷贝数高,均匀性和稳定性良好,可为RV分子检测提供安全、稳定的标准参考样品.

目的 在前期试验成功制备纯化出抗诺如和轮状病毒的双价特异性P-VP8* IgY基础上,本研究作者制备海藻酸钠-壳聚糖P-VP8* IgY微胶囊并优化最佳制备工艺.方法 以海藻酸钠-壳聚糖为微胶囊囊材,采用复凝聚技术“一步法”制备P-VP8 * IgY微胶囊.以微胶囊的成囊效果和包封率为评价指标,通过单因素分析和L9(34)正交试验优化微胶囊的最佳制备工艺.并运用SDS-PAGE和ELISA法评价海藻酸钠-壳聚糖P-VP8* IgY微胶囊的释放性能和生物学活性.结果 海藻酸钠-壳聚糖P-VP8* IgY微胶囊的最佳制备工艺条件为:海藻酸钠浓度为3.0％、壳聚糖浓度为0.4％、氯化钙浓度为2％(均为质量分数)、壳聚糖与氯化钙溶液(成囊液)的pH值为5.5,IgY投药量为10 g·L-1.制备的海藻酸钠-壳聚糖P-VP8* IgY微胶囊大部分呈规则球形,表面较为光滑圆整,包封率可达到85％.制备的微胶囊在胃液2h后的释放率为7％,肠液6h后的释放率高达86％,且生物活性良好.结论 本工艺制备的海藻酸钠-壳聚糖P-VP8* IgY微胶囊能够保护特异性P-VP8* IgY不被胃酸环境破坏,具有较好的缓释作用.

目的 制备脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)与温敏氯化壳聚糖(chitosan chloride,CSCl)凝胶复合物,研究其生物相容性及对大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复的可行性.方法 取SPF级6周龄雄性SD大鼠皮下脂肪组织,采用酶原消化并差速贴壁法制备ADSCs.将CSC1、β-甘油磷酸钠和羟乙基纤维素按8∶2∶2.5比例混合,制作温敏CSCl凝胶;采用Live/Dead染色和细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法观察ADSCs在其中的存活和增殖情况.取SPF级8周龄雄性SD大鼠72只,采用开水接触烫伤法制备深Ⅱ度烫伤创面模型,随机分为3组,每组24只,A组为空白对照组,B组用温敏CSC1凝胶涂抹创面,C组用ADSCs/温敏CSCl凝胶复合物涂抹创面.术后3、7、14、21 d观察创面闭合情况并计算创面闭合率;术后7d行HE染色观察炎性细胞数,21 d行HE染色观察新生表皮厚度;同时于术后7d行CD31免疫组织化学染色观察新生微血管情况.结果 CSC1有温度敏感性,4℃为液态,37℃时成凝胶.Live/Dead染色和CCK-8法结果 显示ADSCs在温敏CSCl凝胶中存活并持续增殖.大体观察示,术后各时间点C组创面闭合率均高于A、B组(P＜0.05).HE染色示,术后7d,3组大鼠创面修复进入纤维增生期,各组可见胶原沉积,真皮层可见炎性细胞浸润,C组炎性细胞数显著小于A、B组,B组小于A组(P＜0.01).术后21d,B、C组新生上皮及真皮层纤维结缔组织排列整齐,可见成纤维细胞及新生毛细血管;A组亦可见新生表皮覆盖,但真皮层纤维结缔组织排列较紊乱,见零星毛细血管.C组新生表皮厚度显著大于A、B组,B组大于A组(P＜0.01).术后7d,CD31免疫组织化学染色示各组均可见新生微血管,C组大鼠创面新生微血管数显著高于A、B组,B组高于A组(P＜0.05).结论 ADSCs/温敏CSC1凝胶复合物具有良好的组织相容性,并且能加快大鼠深Ⅱ度烫伤创面修复.

背景:随着干细胞治疗及组织工程的发展,利用生物相容性好的生物高分子材料结合脂肪间充质干细胞构建肝脏组织工程微单元成为治疗肝脏疾病的新策略.目的:探讨脂肪间充质干细胞复合多孔壳聚糖微球对急性肝损伤的修复能力.方法:将SD乳鼠脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球在体外复合培养,分别在培养第1,3,5天观察细胞在微球上增殖情况.取36只SD大鼠(北京市维通利华实验技术有限公司提供),随机分为3组(n=12):空白对照组,腹腔注射生理盐水;急性肝损伤组,腹腔注射10％四氯化碳-橄榄油;脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组,腹腔注射10％四氯化碳-橄榄油,于注射后第1天通过手术将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球平铺于肝脏表面.分别于注射后第1,2,3,7天进行大体、血清学及组织学评价.结果与结论:①脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球复合后第1,3,5天,经过活/死染色观察到细胞可在微球上正常生长(死细胞数量远远少于活细胞数量),且细胞在不断增殖;②注射后第1,2,3,7天,脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组的大体形态、肝功能及组织学评价均优于急性肝损伤组,从第3天开始脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组与空白对照组已无明显差异;③结果表明,将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球移植入肝脏表面可加速肝损伤的修复.

目的 分析低聚壳聚糖溶液在气管插管机械通气患者口腔护理中的应用效果.方法 选择苏州大学附属常熟医院(常熟市第一人民医院)2016年6月至2017年4月收治的气管插管机械通气的患者120例为研究对象,采用随机数字表法分为对照组、试验组各60例,对照组采用0.9％氯化钠注射液+氯己定溶液进行口腔护理,试验组在对照组基础上分别在两侧颊部、上颚、舌部四个方向外喷低聚壳聚糖溶液.比较两组护理前后的口腔表现、口腔溃疡以及呼吸机相关性肺炎(VAP)发生率.结果 试验组舌及舌苔阳性率为3.3％ (2/60),口臭阳性率为6.7％ (4/60),口腔溃疡发生率为31.7％ (19/60),VAP发生率为5.0％ (3/60),均明显低于对照组的13.3％ (8/60)、21.7％ (13/60)、68.3％ (41/60)、21.7％ (13/60),两组差异均有统计学意义(x2 =4.83、5.17、5.39、5.57,均P＜0.05).结论 在ICU气管插管机械通气患者中采用低聚壳聚糖溶液进行口腔护理可有效改善口腔不良表现,抑制口腔溃疡与VAP发生率,具有良好临床应用价值.

目的:研究海藻酸钠-壳聚糖微胶囊(alginate-chiotsan-alginate,ACA)包埋小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后细胞的成骨分化能力.方法:C57小鼠采用全骨髓法进行骨髓间充质干细胞的原代提取.配制1.5％海藻酸钠溶液(sigma,A0682)、0.05％海藻酸钠溶液、1.1％氯化钙溶液(沪试)、0.6％壳聚糖溶液(solarbio,C8320,pH6.3)和55mmol/L柠檬酸钠溶液(沪试,pH5.6),用高压静电微囊法制取包埋小鼠骨髓间充质干细胞的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊.海藻酸钠-壳聚糖微囊包埋的小鼠BMSCs通过茜素红(solarbio,G8550)染色及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)(sigma)活性检测细胞成骨向分化能力.结果:获得均匀一致、直径约300μm的包埋小鼠BMSCs的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊.茜素红染色及ALP检测发现小鼠BMSCs可在细胞体外贴壁培养及ACA中均有良好的成骨分化能力.结论:小鼠BMSCs在体外贴壁培养和ACA微胶囊中均可进行成骨分化,为细胞微胶囊应用于各生物医学领域提供理论依据.

目的 探究海藻酸钠-壳聚糖微胶囊(alginate-chiotsan-alginate,ACA)包封小鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)后细胞生长及增殖能力.方法 C57小鼠采用全骨髓法进行骨髓间充质干细胞的原代提取.配制1.5％和0.05％海藻酸钠溶液、1.1％氯化钙溶液、0.6％壳聚糖溶液(pH 6.3)和55 mmol/L柠檬酸钠溶液(pH 5.6)用高压静电微囊法制取包封小鼠骨髓间充质干细胞的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊,并对微囊进行强度及通透性检测.通过Calcein-AM/PI进行ACA包封BMSCs的活死细胞染色,CCK8检测ACA包封BMSCs的细胞增殖能力.结果 获得均匀一致,直径约300μm的包封BMSCs的海藻酸钠-壳聚糖微胶囊,Calcein-AM/PI染色及CCK8检测发现BMSCs可在ACA中存活及稳定增殖.结论 海藻酸钠-壳聚糖微胶囊具有良好的生物相容性,可使BMSCs在微胶囊中生长及增殖,为细胞微胶囊应用于各生物医学领域提供便利.