目的 探究长链非编码RNA LINC00649对乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭及微小RNA-524-5p/环指域蛋白1(miR-524-5p/UHRF1)轴的影响.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测各乳腺细胞中LINC00649,miR-524-5p和UHRF1 mRNA的表达水平;将人乳腺癌细胞MCF-7分为NC组(未转染质粒)、si-NC组(转染LINC00649阴性对照)、si-LINC00649组(转染si-LINC00649)、si-LINC00649+inhibitor-NC 组(共转染 si-LINC00649 和 miR-524-5p 抑制剂阴性对照)和 si-LINC00649+miR-524-5p inhibitor 组(共转染 si-LINC00649 和 miR-524-5p inhibitor),转染培养48 h后检测各转染组细胞中LINC00649,miR-524-5p和UHRF1 mRNA表达水平;采用CCK-8法和克隆形成实验检测各转染组细胞的存活率及克隆形成能力;采用Transwell实验检测各组细胞的迁移及侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组转染细胞中UHRF1表达水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-524-5p与LINC00649,UHRF1之间的靶向关系.多组间比较采用单因素方差分析,两两组间多重比较采用Tukey's事后检验.结果 乳腺癌细胞系中LINC00649(1.57±0.12 比 0.98±0.02,t=11.879,P＜0.01)和 UHRF1 mRNA(1.63±0.14 比 0.99±0.01,t=11.169,P＜0.01)表达水平高于正常乳腺上皮细胞,miR-524-5p表达水平则低于正常乳腺上皮细胞(0.39±0.02 比 1.00±0.01,t=66.822,P＜0.01);si-LINC00649 组细胞存活率[(69.36±1.86)％比(98.33±2.55)％,t=22.483,P＜0.01]、细胞克隆形成数量[(162.35±6.02)个 比(207.27±8.21)个,t=10.808,P＜0.01]、迁移细胞数[(105.22±7.26)个比(178.57±6.20)个,t=18.819,P＜0.01]、侵袭细胞数[(98.27±3.77)个比(152.05±5.17)个,t=20.588,P＜0.01]以及细胞中LINC00649(0.57±0.04 比 0.96±0.05,t=14.919,P＜0.01)、UHRF1(0.37±0.02 比 0.95±0.10,t=13.931,P＜0.01)和 UHRF1 mRNA(0.63±0.05 比 0.97±0.04,t=11.859,P＜0.01 表达水平低于 si-NC 组,而 miR-524-5p(1.37±0.09 比 0.97±0.03,t=10.328,P＜0.01)表达水平高于 si-NC组;回补实验结果显示,si-LINC00649+miR-524-5p inhibitor 组细胞中 UHRF1 mRNA(0.83±0.07 比0.65±0.05,t=5.125,P＜0.01)和 UHRF1(0.65±0.04 比 0.41±0.02,t=13.145,P＜0.01)表达水平、细胞存活率[(82.11±2.29)％比(65.36±1.53)％,t=14.897,P＜0.01]、克隆形成数量[(183.60±7.22)个比(158.35±5.36)个,t=40.429,P＜0.01]、发生迁移[(160.50±5.89)个比(110.22±6.59)个,t=13.934,P＜0.01]及侵袭[(139.55±4.60)个比(100.02±3.71)个,t=16.385,P＜0.01]的细胞数高于 si-LINC00649+inhibitor-NC 组,而 miR-524-5p 表达水平低于si-LINC00649+inhibitor-NC 组(1.15±0.08 比 1.33±0.10,t=3.443,P＜0.05);双荧光素酶活性验证miR-524-5p 和 LINC00649、UHRF1 均存在靶向结合位点,且 LINC00649-WT 或 UHRF1-WT 和miR-524-5p mimic共转染后细胞相对荧光素酶活性低于共转染mimic-NC的细胞(0.44±0.03比1.01±0.02、0.39±0.02 比 1.00±0.05,t=38.724、27.746,P＜0.01).结论 敲低 LINC00649 能够通过上调miR-524-5p,下调UHRF1的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭.

目的:探讨Brahma相关基因1（BRG1）在皮肤鳞状细胞癌（cSCC）组织及细胞中的表达，及其与激活转录因子2（ATF2）相互作用调控cSCC细胞增殖、迁移、侵袭的分子机制。方法:收集2015—2021年南通大学第二附属医院皮肤科经病理确诊为日光性角化病（AK）、cSCC（含原位鳞癌）患者的石蜡组织标本分别66例和80例，同时收集皮肤美容手术修整下的正常皮肤组织石蜡标本35例作为正常对照组。采用免疫组化染色法检测BRG1在cSCC、AK及正常皮肤组织中的表达，分析BRG1表达与cSCC患者临床病理参数之间的相关性。收集cSCC患者和健康对照新鲜组织标本各12例，常规培养cSCC细胞株A431和Scl-1及人永生化角质形成细胞株HaCaT，实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测组织及细胞中BRG1 mRNA的表达，通过免疫共沉淀和细胞免疫荧光染色分析BRG1与ATF2的相互作用。通过RNA干扰法敲低A431、Scl-1细胞中BRG1（BRG1 siRNA1 ~ 5组）和ATF2表达（ATF2-shRNA组），并分别转染阴性对照siRNA或shNC作为对照（control siRNA组、shNC组），采用细胞计数（CCK8）实验、克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测敲低BRG1、ATF2对cSCC细胞增殖、迁移及侵袭的影响。多组间计量资料的比较采用单因素方差分析，两两多重比较采用Dunnett- t检验。 结果:免疫组化染色显示，BRG1蛋白在cSCC、AK组织中的表达强度显著低于正常皮肤组织（ χ2 = 44.40， P < 0.001）。qRT-PCR显示，cSCC组织中BRG1 mRNA表达水平（1.345 ± 0.956）显著低于正常皮肤组织（2.499 ± 1.501， t = 2.25， P = 0.035），A431、Scl-1细胞中BRG1 mRNA表达水平（0.041 ± 0.002、0.026 ± 0.003）亦显著低于HaCaT细胞（0.135 ± 0.033， t = 4.95、5.73， P = 0.008、0.005）。BRG1的低表达与cSCC患者癌组织位于曝光部位（ P = 0.041）、肿瘤低分化程度（ P = 0.001）、Broder高分级（ P < 0.001）有关。BRG1 siRNA1组和BRG1 siRNA2组A431、Scl-1细胞克隆形成数、迁移细胞数、侵袭细胞数及细胞迁移率均显著高于control siRNA组（均 P < 0.05）。免疫共沉淀实验表明，在A431、Scl-1细胞中BRG1蛋白与ATF2蛋白能相互结合，免疫荧光法显示二者存在共定位；与control siRNA组相比，A431（BRG1 siRNA1、2组）和Scl-1细胞（BRG1 siRNA1组）中敲低BRG1表达可促进ATF2磷酸化激活（均 P < 0.05）；与shNC组相比，shATF2组A431、Scl-1细胞克隆形成数（均 P = 0.001）、24 ~ 96 h细胞增殖活性（均 P < 0.001）、迁移细胞数及侵袭细胞数均显著降低（均 P ≤ 0.001）。 结论:BRG1在cSCC及AK组织中低表达，且BRG1可抑制cSCC细胞增殖、迁移及侵袭；ATF2促进cSCC细胞增殖、迁移及侵袭；BRG1可能通过与ATF2蛋白相互作用并抑制ATF2磷酸化激活，从而发挥抑癌作用。

目的:研究生理及尿毒症状态下剪切力对静脉内皮细胞中，KLF2和eNOS表达的影响，探讨导致静脉内皮细胞功能紊乱的机制。方法:分别在生理状态和尿毒症状态下，在平行板流动腔内模拟不同剪切力，用剪切力作用各组静脉内皮细胞4、12、24 h。采用免疫组化荧光染色技术和实时荧光定量PCR技术检测KLF2及eNOS的表达情况。结果:在生理状态下，KLF2明显受剪切力作用调节，高强度剪切力和生理强度剪切力会上调KLF2的表达，而低强度剪切力和振荡剪切力会下调KLF2的表达，但随作用时间的延长，KLF2的表达也会有所上调。在尿毒症状态下，KLF2表达明显被抑制，即使再给予高剪切力作用，KLF2水平也不及正常生理状态；在低剪切力及振荡剪切力作用下，KLF2表达更明显地被抑制。KLF2主要在细胞核内表达，随着剪切力的作用，KLF2也在细胞质中表达，而eNOS主要在细胞质和细胞核内呈颗粒样表达。结论:动静脉内瘘术后在尿毒症环境及振荡剪切力的多重因素作用下，KLF2和eNOS的表达受到抑制，可能是导致静脉内皮细胞功能紊乱、内膜增生、自体动静脉内瘘失功发生和发展的主要机制。

目的:研究五倍子酸对瘢痕疙瘩成纤维细胞的形态、增殖、细胞周期、胶原收缩程度及对转化生长因子β（TGF-β）/Sma和Mad相关蛋白（Smads）信号通路的影响，探讨五倍子酸治疗瘢痕疙瘩的作用及机制。方法:2022年8 - 12月在武汉市第一医院皮肤外科获取术中切除的经临床及病理确诊的瘢痕疙瘩组织标本3份，采用组织块培养法进行原代成纤维细胞培养，取第3 ~ 8代细胞进行实验。设置低、中、高剂量五倍子酸组（分别用0.025、0.05、0.1 mg/ml五倍子酸干预细胞）及对照组（仅用含10%胎牛血清的DMEM培养细胞）。培养24、48、72 h后，细胞计数（CCK8）法检测各组细胞增殖活性，三维培养观察胶原收缩情况。按上述分组培养细胞24 h后，在微分干涉倒置荧光显微镜下拍照并使用流式细胞仪分析各组细胞周期变化。使用0.1 mg/ml五倍子酸干预细胞作为实验组（高剂量五倍子酸组），与对照组细胞分别培养24 h后，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定两组TGF-β1、2、3浓度变化，实时荧光定量PCR检测TGF-β1、2、3，Smad2、3、4及α平滑肌肌动蛋白（SMA）mRNA相对表达水平。统计学分析采用 t检验、单因素方差分析及两因素方差分析，两两多重比较采用LSD- t检验。 结果:与对照组相比，随五倍子酸剂量增加，镜下瘢痕疙瘩成纤维细胞形态发生改变，逐渐出现胞体缩小、细胞间距变大、萎缩、凋亡细胞增多现象。CCK8结果显示，随五倍子酸剂量增加及作用时间延长，细胞增殖活力变化显著（ F组别 = 78.31， P < 0.001； F时间 = 4.17， P = 0.037），其中高剂量五倍子酸组24、48、72 h时瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖活力均显著低于对照组（均 P < 0.05）。三维培养显示，随培养时间延长，各组胶原均发生收缩，但收缩程度不同，对照组胶原明显收缩，各浓度五倍子酸组胶原收缩程度较低；作用24、48、72 h，中、高剂量五倍子酸组胶原收缩指数均显著低于对照组（均 P < 0.05）。流式细胞仪检测显示，处理24 h后，低、中、高剂量五倍子酸组细胞凋亡率（38.68% ± 3.05%、41.82% ± 2.19%、43.56% ± 3.58%）均显著高于对照组（12.58% ± 1.56%，均 P < 0.001）；与对照组相比，中、高剂量五倍子酸组G0/G1期细胞比例显著较低（均 P < 0.01），而S期和G2/M期细胞比例则显著较高（均 P < 0.05）。ELISA结果显示，高剂量五倍子酸组TGF-β1浓度[（758.58 ± 31.42）pg/ml]显著低于对照组[（1 081.30 ± 44.72）pg/ml， t = 11.81， P < 0.001]，TGF-β2浓度[（71.05 ± 7.40）pg/ml]与对照组[（76.43 ± 6.51）pg/ml]相比差异无统计学意义（ t = 1.09， P = 0.317），而TGF-β3浓度[（5.70 ± 3.87）pg/ml]高于对照组[（0.00 ± 0.00）pg/ml， t = 2.94， P = 0.026]。实时荧光定量PCR显示，与对照组相比，高剂量五倍子酸组TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad4、α-SMA mRNA表达量均较低（均 P < 0.05），TGF-β3 mRNA表达量较高（ t = 6.78， P = 0.002），而TGF-β2 mRNA表达量无明显变化（ t = 0.05， P = 0.962）。 结论:五倍子酸可通过改变瘢痕疙瘩成纤维细胞周期，抑制其增殖，促进其凋亡，改变细胞形态，从而减少瘢痕形成及挛缩，其机制可能与抑制TGF-β/Smads信号通路有关。

目的:探讨瘢痕疙瘩中microRNA-27b(miR-27b)、miR-221和miR-222的表达及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法:选取2021年1月至2022年1月新疆维吾尔自治区人民医院皮肤性病科手术切除的瘢痕疙瘩组织(瘢痕疙瘩组)及对应瘢痕旁正常组织(正常对照组)各36例，另选择同期符合诊断标准的扁平瘢痕(扁平瘢痕组)12例。采用免疫组织化学法测定3组中VEGF蛋白表达情况和微血管密度，通过实时荧光定量PCR检测miR-27b、miR-221和miR-222表达水平。采用SPSS 27.0统计软件进行分析，正态分布的计量资料以 ± s表示，多组间比较采用单因素方差分析，两两多重比较采用LSD法；非正态分布的计量资料以 M( Q1， Q3)表示，组间比较采用Kruskal-Wallis H检验；数据间的相关性分析采用Spearman相关分析法，所有检验均为双侧检验， P<0.05为差异有统计学意义。 结果:瘢痕疙瘩组VEGF蛋白表达水平和微血管计数[0.28±0.08、(47.78±14.06)条/400倍视野]明显高于正常对照组[0.09±0.05、(10.25±5.08)条/400倍视野]和扁平瘢痕组[0.19±0.06、(23.75±7.94)条/400倍视野]，差异有统计学意义( P<0.01)。瘢痕疙瘩组miR-27b表达水平[0.50(0.32，0.64)]显著低于正常对照组[0.69(0.37，1.69)]和扁平瘢痕组[1.35(1.25，1.74)]，差异有统计学意义( P<0.01)；而3组miR-221及miR-222的表达水平差异无统计学意义( P>0.05)。相关性分析显示，瘢痕疙瘩组中miR-27b、miR-221、miR-222与VEGF蛋白表达均呈正相关关系( r＝0.36、0.41、0.37， P均<0.05)。 结论:miR-27b在瘢痕疙瘩、扁平瘢痕及正常组织中表达具有差异性，瘢痕疙瘩中miR-27b、miR-221和miR-222与VEGF表达呈正相关，提示miRNA/VEGF轴可能在瘢痕疙瘩发生和进展中起到关键性作用。

目的:分析广州市2017－2018年流感疫情的流行特征，为流感疫情的防控提供参考依据。方法:采集2017－2018年流感疫情标本，采用多重实时荧光定量PCR方法检测流感病毒核酸。使用EXCEL 2010和SPSS 16.0软件进行数据统计和分析。结果:2017—2018年共采集流感疫情标本4 298份，流感病毒核酸阳性率为41.14 %。2017年和2018年均呈现双峰流行的特点，其中2017年流行高峰出现在5—8月和10月—次年1月，2018年流行高峰较2017年提前1至2个月，出现在3—6月和10—次年2月。2017年疫情流行株为甲型H3N2亚型和B型流感病毒，2018年疫情流行株为甲型H1N1流感病毒。0~19岁年龄组B型流感病毒为主要流行病原，20~29岁年龄组A型流感病毒为主要病原。幼儿园中A型流感病毒为主要病原，小学和初高中B型流感病毒为主要病原。不同年龄组的流感病毒核酸阳性率有统计学意义（ P<0.01），不同性别组流感病毒核酸阳性率差异无统计学意义（ P=0.373）。 结论:广州市2017—2018年流感疫情呈双峰流行，高峰期出现在4—7月和10—12月，不同流感型别交替流行，不同年龄组感染情况差异有统计学意义。

目的:基于微滴式数字PCR（ddPCR）技术，构建针对肾移植术后监测病毒的多联检测方法，评估其检测性能，探讨临床应用前景。方法:构建多瘤病毒1型（BKV）、多瘤病毒2型（JCV）和细环病毒（TTV）联合检测的ddPCR检测方法，对符合率、重复性、检测下限等指标进行性能评价。2023年6—9月在上海交通大学医学院附属仁济医院收集69份临床尿液标本，同时应用实时荧光定量PCR（qPCR）和ddPCR方法进行检测。应用Spearman相关性分析、Bland-Altman分析和Wilcoxon配对秩和检验分析2种方法学的检测结果。结果:构建的ddPCR方法对7个参考品的检出符合率为7/7；对精密度参考品R1、R2分别检测10次，其变异系数均小于10%；检测下限为10 拷贝/μl。ddPCR与qPCR检测BKV和JCV的符合率达95%（66/69；68/69）以上；相关性分析显示2种方法检测BKV和JCV病毒载量的相关系数 R分别为0.874和0.840；Bland-Altman分析显示2种方法对BKV和JCV病毒载量检测的平均差异分别为?0.34和?0.187；Wilcoxon配对秩和检验显示2种方法对多瘤病毒的检测结果差异无统计学意义（ P>0.05）。 结论:成功构建基于ddPCR的肾移植术后病毒多联检测方法，确证该方法具有高正确度、高灵敏度、多重检测的优点，可用于临床尿液样本中BKV、JCV和TTV的定量检测。

目的:探究中药化纤方用于放射性肺纤维化的疗效及作用机制。方法:在体内实验中，36只6~8周龄雄性无特定病原（SPF）级C57BL/6小鼠被随机分为对照组、放射组（全肺17 Gy照射）、放射+化纤方组（全肺17 Gy照射+化纤方灌胃）。照射后16周，使用肺系数、HE染色和Masson染色评估肺泡炎症和肺纤维化程度，使用免疫组化染色检测肺组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达水平，使用实时荧光定量PCR（qPCR）法检测肺组织中γ干扰素（IFN-γ）的mRNA表达水平；同时，使用ELISA法测定血清及肺泡灌洗液中IFN-γ的含量。在体外实验中，使用IFN-γ刺激6 Gy照射后的成纤维细胞NIH/3T3，继续培养48 h后，通过qPCR、免疫荧光染色、蛋白质印记法（western blot，WB）检测α-SMA和Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ）转录及蛋白水平的表达。统计分析多组比较使用one-way ANOVA分析，组间多重比较采用Tukey检验。结果:与对照组相比，放射组的肺系数、肺泡炎评分、Ashcroft评分、肺组织α-SMA表达显著升高（P均<0.001）。相较于放射组，放射+化纤方组的上述指标均显著下降（P均<0.001）。qPCR检测结果显示放射+化纤方组IFN-γ mRNA表达水平显著高于放射组（ P=0.001）；ELISA检测结果显示，与放射组相比，放射+化纤方组小鼠血清及肺泡灌洗液IFN-γ含量明显升高（ P=0.032、0.037）。在体外实验中，放射后NIH/3T3细胞的α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白的mRNA及蛋白表达显著升高，而在IFN-γ刺激后其表达明显降低。 结论:化纤方能够有效缓解放射性肺纤维化，其机制与上调外周及组织IFN-γ，抑制成纤维细胞活化有关。

目的:为了弥补传统大规模人群监测的不足，在新冠疫情爆发初期提供预警信号，重庆市自2023年起开展城市污水新冠病毒监测工作。方法:新冠病毒"乙类乙管"后，选择了重庆主城4个区5个有自动样本采集设施的污水处理厂作为监测点，每周每个污水处理厂各采集2份污水，用铝盐沉淀法进行富集浓缩，应用多重实时荧光RT-PCR方法对新冠病毒进行检测和分析。结果:2023年1月16日至12月31日累计监测城市污水496份，其中新冠病毒核酸检测阳性285份，总检出率57.46%。第3～5周、18～21周、40～47周新冠病毒检出率均为100.00%。城市污水中新冠病毒核酸浓度在第18周达到高峰，随后开始下降，进入低水平、波动流行期，污水监测新冠病毒核酸日均浓度与传染病监测系统显示的每日新增新冠感染者数、发热门诊新冠阳性检出率的变化趋势基本吻合。结论:重庆市城市污水中新冠病毒的检出率较高，尤其是4～5月份，污水监测可以间接反映新冠病毒感染状况。

目的:探讨全反式视黄酸(ATRA)体外诱导人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞凋亡的信号途径。方法:采用不同浓度的ATRA处理ARPE-19细胞24 h、48 h，采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测其细胞活性；分别采用0、2.5、5、10、15和20 μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h，通过流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡水平和caspase相关蛋白相对表达量；分别采用0、2.5、5、10和20 μmol/L ATRA处理ARPE-19细胞24 h，通过流式细胞术检测其总活性氧簇(ROS)水平和多重半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(multicaspase)水平，通过实时荧光定量PCR法检测caspase相关基因mRNA相对表达量。其中0 μmol/L ATRA组作为空白对照。结果:CCK-8检测结果显示，ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后的半数抑制浓度(IC 50)分别为13.88 μmol/L和11.99 μmol/L，不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞24 h和48 h后细胞存活率总体比较，差异均有统计学意义( F＝176.60、350.30，均 P<0.01)。细胞培养24 h时，2 μmol/L、6 μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组高，12、14、16、18、20 μmol/L ATRA组细胞存活率较空白对照组低，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。流式细胞术检测结果显示，不同浓度ATRA处理ARPE-19细胞后24 h，细胞凋亡、multicaspase及ROS水平总体比较差异均有统计学意义( F＝86.39、166.84、101.40，均 P<0.01)，其中2.5 μmol/L和5 μmol/L ATRA组细胞凋亡率较空白对照组下降，10、15和20 μmol/L ATRA组较空白对照组升高，2.5、5、10、20 μmol/L ATRA组multicaspase和ROS相对表达量较空白对照组升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)；Western blot检测结果显示，与空白对照组比较，2.5、5、10、15、20 μmol/L ATRA组caspase 9蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与空白对照组比较，2.5 μmol/L ATRA组caspase 12蛋白相对表达量升高，5、10、15、20 μmol/L ATRA组逐渐降低，2.5、15、20 μmol/L ATRA组与空白对照组比较差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与空白对照组比较，5、10、20 μmol/L ATRA组caspase 3蛋白相对表达量升高，差异均有统计学意义(均 P<0.05)；与空白对照组比较，2.5、5、10、15、20 μmol/L ATRA组cleaved caspase 3蛋白相对表达量显著升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。实时荧光定量PCR结果显示，与空白对照组比较，2.5、5、10、20 μmol/L ATRA组caspase 9、caspase 12 mRNA及5 μmol/L、10 μmol/L ATRA组caspase 3 mRNA相对表达量明显升高，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。ATRA浓度小于10 μmol/L时，caspase 9和caspase 12 mRNA的相对表达量呈浓度依赖性升高，当浓度达20 μmol/L时，其相对表达量显著降低，但仍高于空白对照组。 结论:ATRA体外诱导ARPE-19细胞凋亡是通过激活ROS及内源性caspase依赖性凋亡途径导致的。