目的:了解舟山海岛地区蜱类所携带的病原体多样性及其基因同源性。方法:2020年4—11月，采用布旗法收集舟山海岛地区发热伴血小板减少征病例居住地周围环境中的游离蜱，采用畜体检查法采集家畜身上的寄生蜱。蜱样本提取RNA或DNA进行荧光RT-PCR检测，以嗜吞噬细胞无形体、立克次体、查菲埃里克体、新型布尼亚病毒、汉坦病毒、汉城病毒、沃尔巴克体、山羊无形体为引物进行PCR扩增初筛。扩增序列测序后进行同源性分析，以邻接法构建系统进化树。结果:共采集蜱样本99只，其中游离蜱样本39只，寄生蜱样本60只。在蜱样本中检出嗜吞噬细胞无形体、立克次体、沃尔巴克体和山羊无形体核酸阳性。此次检出的沃尔巴克体与日本报道的沃尔巴克体（AB025965）同源性为98.70%；立克次体与中国云南立克次体03（KY433580）、日本立克次体LA16同源性为99.83%；嗜吞噬细胞无形体有2个进化分支：一个进化分支与安徽桐城（MK045683）及韩国济州岛（GU064903）的嗜吞噬细胞无形体同源性为100.00%，另一个进化分支与安徽金寨的嗜吞噬细胞无形体（MK045694）同源性为99.70%。结论:舟山海岛地区是嗜吞噬细胞无形体、山羊无形体和日本立克次体的自然疫源地，暴露居民存在感染风险。

目的:建立汉城病毒(Seoul virus, SEOV)L99株特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法，验证其检测性能，为双价肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome, HFRS)疫苗研制、生产和检定过程中Ⅱ型病毒抗原含量检测提供有效手段。方法:小鼠体内诱生法制备L99病毒单克隆抗体(monoclonal antibody, McAb)腹水，Protein-A亲和层析纯化腹水抗体，SDS-PAGE鉴定纯化抗体纯度，间接ELISA法测定McAb效价，Western blot鉴定其特异性；叠加ELISA法对4株McAb进行抗体配对。用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase, HRP)标记单抗后，通过正交试验优化包被和标记抗体使用浓度，建立双抗体夹心ELISA病毒抗原检测方法。以Ⅱ型HFRS疫苗标准品作为定量标准，验证方法的检测限、线性范围、专属性、准确性、精密度；通过检测3批Ⅱ型病毒疫苗灭活原液验证方法适用性。结果:4株McAb腹水效价均>1∶10 6，抗体纯度均>98%；经Western blot鉴定，1D5、3A4、5B7特异识别Ⅱ型L99株出血热病毒核衣壳蛋白，2E3与Ⅰ型PS-6株出血热病毒存在交叉反应；经抗体配对筛选后，选择3A4为包被抗体，1D5为标记抗体；棋盘滴定法确定包被抗体工作浓度为20 μg/ml，HRP标记抗体工作浓度为1∶4 000。该方法对SEOV L99抗原最低检测限为0.078 1 μg/ml；线性范围为0.078 1~2.500 0 μg/ml， R2>0.99；专属性验证其对Ⅱ型HFRS疫苗具有检测特异性；抗原回收率在95.8%~108.7%之间，精密度验证变异系数<10%。用该方法检测3批Ⅱ型HFRS灭活疫苗原液结果均呈剂量依赖性。 结论:成功建立了SEOV L99株型特异性双抗体夹心ELISA抗原检测方法，为地鼠肾双价肾综合征出血热疫苗生产及检定过程中，SEOV L99株病毒抗原含量测定提供了检测方法。

目的:研究深圳市啮齿动物所携带的汉坦病毒分子流行病学特征，分析汉坦病毒基因型别。方法:采用笼日法布点捕鼠，收集鼠肺标本后研磨提取RNA。运用实时荧光PCR方法进行分型检测，进一步采用反转录-巢式PCR扩增部分M片段G2区和S片段核苷酸序列，并进行同源性和系统进化树分析。结果:共捕获200只鼠类动物，包含褐家鼠189只、黄胸鼠9只和小家鼠2只。汉坦病毒检出率为21.0%（42/200），均为汉城病毒，其中宝安区鼠肺检出率最高，达45.7%（ χ2=25.60， P<0.05）。从阳性鼠肺标本中分别扩增出25条汉坦病毒M片段G2区和S片段序列，核苷酸同源性分别为95.3%~100.0%和97.6%~100.0%，与来自广州市的参考序列核苷酸相似性较高。系统进化树显示此次研究深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒均为汉城病毒的S2亚型。氨基酸突变位点分析发现，在S基因编码的核衣壳蛋白中存在1个位点突变，为BA-111第973位由丙氨酸（Ala）变为苏氨酸（Thr）。 结论:深圳市鼠类动物所携带的汉坦病毒为汉城病毒的S2亚型，与深圳市历年以及周边省市汉坦病毒代表病毒毒株相比变异不大。

目的:分析1983—2021年淄博市肾综合征出血热（hemorrhagic fever with renal syndrome，HFRS）的流行特征，为疾病的预防和控制提供依据。方法:收集1983—2021年全市出血热疫情和宿主动物监测资料，用描述性流行病学方法进行统计分析。结果:1983—2021年全市报告肾综合征出血热17 679例，死亡95例，病死率0.54%。年发病率介于0.27/10万~76.51/10万之间。39年间共出现3个流行周期。病例主要分布在淄博市南部山区的农村地区，沂源县、淄川区和博山区，报告病例数占全市57.81%。每年发病呈明显的春季和秋冬季两个高峰。男女性别比2.08：1，2011—2021年60岁以上年龄组构成比28.62%。2006—2021年全市平均鼠密度为2.67%，平均鼠带毒率为4.92%，2006—2018年发病率与鼠带毒率之间呈线性相关性（ r=0.68）。病原学监测显示褐家鼠携带汉城型汉坦病毒，黑线姬鼠携带汉滩型汉坦病毒。 结论:39年间淄博市出血热总体呈现下降态势，病例呈现高度散发，局部聚集的特点，秋冬季发病高峰上升，高年龄组发病增长趋势明显，发病率与鼠带毒率密切相关，应持续开展疫情和宿主动物监测，落实各项综合防控措施。

目的 监测重庆市重点地区小型兽类携带5种常见鼠媒病原体的流行情况,为指导当地鼠源疾病的防控提供科学依据.方法 2021-2022年,在重庆市中心城区、万州区、涪陵区3个监测点使用笼夜法捕捉小型兽类,提取其肝、脾、肺、肾组织的核酸样本,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测问号钩端螺旋体(钩体)、莫氏立克次体、巴尔通体,反转录实时荧光定量PCR(RT-qPCR)方法检测汉坦病毒及大别班达病毒.运用Excel 2010软件进行数据汇总和整理,SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析,种群构成比、病原体携带率的比较采用x2检验进行统计分析.结果 共捕获小型兽类9种1 188只,其中褐家鼠最多,占比为33.50％,黄胸鼠占比为26.77％,四川短尾鼩占比26.01％,小家鼠占比为9.85％,其余还捕获小泡巨鼠、大足鼠、北社鼠、黑线姬鼠、灰麝鼩,不同监测点的小型兽类种类构成差异有统计学意义(x2=714.786,P＜0.001).所有检测样本中,发现汉城型汉坦病毒阳性4份(只),问号钩体阳性24份(只),巴尔通体阳性8份(只),其余均为阴性.共发现33只小型兽类呈阳性,其中2只黄胸鼠、1只褐家鼠同时携带问号钩体和汉城型汉坦病毒,病原体总体携带率为2.78％,其中汉坦病毒总携带率为0.34％,问号钩体总携带率为2.02％,巴尔通体总携带率为0.67％,3种病原体的携带率差异有统计学意义(x2=18.857,P＜0.001).结论 重庆地区小型兽类中监测到问号钩体、巴尔通体和汉坦病毒,检出阳性较多的小型兽类为褐家鼠、黄胸鼠和四川短尾鼩,主要分布于重庆城区的重点行业和万州区的农村居民区,当地应对鼠源疾病流行及防控予以重点关注.

目的 了解中国-哈萨克斯坦(中哈)边境阿拉山口口岸地区捕获小兽携带汉坦病毒(HV)情况,为该地区对HV感染流行的防控提供依据.方法 2016年1-11月采用夹捕法和弓形夹法在中哈边境铁路沿线区域捕获小兽,随机选取95份小兽肺组织提取RNA并反转录为cDNA.采用HV特异性引物进行PCR检测,阳性产物进行测序、分析并利用MEGA 6.0软件构建分子遗传进化树.结果 95份小兽样本经PCR检测及测序发现阳性样本24份(其中大沙鼠11份,红尾沙鼠、子午沙鼠和柽柳沙鼠各4份,灰仓鼠1份),阳性率为25.26％.经DNAman比对分析发现5个不同HV基因型,同源性为98.41％;BLAST序列分析均与GenBank数据库中已登录的汉城型汉坦病毒(SEOV)的同源性达98.09％～98.33％.遗传进化树显示,与汉城型DPRK08聚为一支.结论 中哈边境阿拉山口铁路沿线区域首次在大沙鼠、红尾沙鼠、子午沙鼠、柽柳沙鼠和灰仓鼠中检测出SEOV,证实该地区有5种鼠类携带感染HV.

目的 通过对三峡库区重庆段2014-2016年汉坦病毒鼠类宿主的监测分析,分析鼠种构成及带毒特征,为三峡库区重庆段肾综合征出血热的防治提供依据.方法 在三峡库区重庆段设置4个监测点,每年捕获鼠类宿主动物,分类后取其肺组织应用聚合酶链反应(PCR)方法进行汉坦病毒检测分型及带毒率分析.结果 2014-2016年在各监测点总共捕鼠8种637只,其中黄胸鼠280只,占总捕获数43.96％,平均鼠密度为3.94％;鼠肺汉坦病毒检出阳性35份,均为汉城型病毒,带毒率为5.49％;室内(4.59％)和户外鼠密度(3.39％)差异有统计学意义(x2=15.32,P＜0.05);主城区鼠密度(0.88％)与区县鼠密度(6.04％)差异有统计学意义(x2 =272.88,P＜0.05).结论 三峡库区重庆段多种鼠类携带汉城型病毒,优势鼠种为黄胸鼠,主城区以外的各区县更应加强鼠患的防治.

目的 了解2012-2015年江西省啮齿动物间流行的汉坦病毒基因型别和基因亚型.方法 选取江西省肾综合征出血热疫情发生地区捕鼠,收集鼠肺标本,采用直接免疫荧光法检测鼠肺中汉坦病毒抗原,提取阳性鼠肺标本核酸,设计并采用特异性引物分别对病毒的S、M、L3个基因进行RT-PCR扩增,对扩增产物测序和分析.结果 共捕鼠2 235只,其中汉坦病毒阳性的86只,阳性率3.85％,流行的HV基因型为汉滩型(Hantaan orthohantavirus,HTNV)和汉城型(Seoul orthohantavirus,SEOV).江西省HTNV之间S、M、L3个基因核苷酸的同源性为93.4％～100％,与国内外HTNV参考株3个基因核苷酸的同源性为77.3％～ 88.0％,在3个基因系统进化树上均呈独立分支;M基因系统进化分析发现江西省SEOV分布在S3、S4亚型分支以及1个独立的进化分支,该独立分支的9株SEOV与国内外SEOV M基因核苷酸同源性仅为84.3％～88.7％.结论 江西省啮齿动物流行的HV为HTNV和SEOV 2种基因型别,其中HTNV为新的基因亚型,SEOV存在3个基因亚型:S3、S4和1个新的基因亚型.

目的 建立非洲地区较为高发的7种重要病毒病基于荧光微球的多重核酸检测方法完成初步的评价分析.方法 比较分析引起裂谷热、黄热,马尔堡,埃博拉、拉沙热、克里米亚-刚果出血热和基孔肯雅热等病原体的基因组序列,结合前期实时荧光PCR检测方法,设计合成特异性多重扩增引物和杂交探针,建立基于荧光微球的核酸检测方法,采用化学合成DNA和体外转录RNA等方法制备相关病原体模拟样本和参考品,评价检测方法的灵敏度和稳定性,利用30份登革热、汉城出血热等疑似患者标本和32份正常人血标本评价特异性.结果 所建立的基于荧光微球的针对7种非洲多发病毒病核酸检测方法可特异性检出相应病原体核酸,检测限可达102 ～105拷贝/μl,特异性为100％,组内变异系数均在12％以下,组间变异系数在15％以下,具有较高的稳定性.结论 初步建立了基于荧光微球的7种非洲多发病毒病核酸检测方法,为相关疑似传染病筛查提供了新的选择.

目的 对2014年湖北省咸宁市嘉鱼县一起流行性出血热(E H F)疫情的病例血清标本及患者居住地周围捕获的动物鼠的鼠血、鼠肺组织开展汉坦病毒病原学检测及病毒的分子进化研究.方法 采用汉坦病毒IgG和IgM抗体检测试剂对2例患者及56例密切接触者开展血清学和核酸检测.对于核酸阳性的标本进一步分型确定其基因型别.在此基础上,对M片段基因序列进行测序并构建进化树.结果 2份送检的患者血清Ig M抗体均为阳性,所有密切接触者血清Ig M和Ig G均为阴性,汉坦病毒核酸全部为阴性;在捕获的8只鼠标本中,3只鼠检出汉坦病毒核酸,阳性率为37.5％,基因分型结果为汉城型(S E O)型.M片段测序及系统发生情况表明该地鼠携带的汉坦病毒位于汉城病毒(SEOV)所在的支系,进化上同武汉分离株WuhanRf02、江西分离株JiangxiXinjianRn-07-2011D亲缘关系最近.结论 通过对病例标本及居住地动物鼠进行病原学检测与分析,发现该次出血热疫情很有可能是由SEO型汉坦病毒经鼠造成向人传播.因此,通过加强对该地区汉坦病毒宿主动物的监测对于EHF的防控十分重要.