目的:探索三阴性乳腺癌(TNBC)细胞中USP5的表达及其对细胞生物学行为的影响。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测USP5在TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549细胞中的表达。通过转染慢病毒(shRNA)敲低USP5的表达。采用免疫共沉淀(CO-IP)实验验证USP5对活化C激酶1受体(RACK1)泛素化水平的影响。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)增殖实验检测细胞增殖能力，Transwell检测细胞迁移能力的变化。两组之间的比较采用独立样本 t检验。 结果:MDA-MB-231细胞和BT-549细胞中USP5的表达(3.167±1.102，4.700±1.609)，明显高于正常乳腺细胞系MCF-10A(1.000±0.300)，差异有统计学意义( t＝3.287、3.915， P<0.05)。在USP5稳定敲低的细胞系中USP5蛋白的表达(MDA-MB-231：0.160±0.012；BT-549：0.190±0.028)显著低于阴性对照细胞(MDA-MB-231：1.000±0.179；BT-549：1.000±0.015)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝5.279， P<0.001；BT-549： t＝6.538， P<0.001)。USP5敲低的细胞中，RACK1的表达量(MDA-MB-231：0.250±0.023；BT-549：0.210±0.034)低于阴性对照细胞(MDA-MB-231：1.000±0.163；BT-549：1.000±0.036)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝6.729， P<0.01；BT-549： t＝5.172， P<0.001)。敲低USP5后RACK1泛素化水平显著增高。在CCK-8实验中，敲低USP5后细胞增殖显著弱于(MDA-MB-231：1.140±0.102；BT-549：1.100±0.073)阴性对照细胞(MDA-MB-231：1.710±0.173，BT-549：1.950±0.087)，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝4.053， P<0.05；BT-549： t＝10.550， P<0.001)。EDU实验证明，USP5敲低细胞株[阳性细胞率MDA-MB-231：(30.33±7.76)%；BT-549：(31.60±5.70)%]比阴性对照细胞[阳性细胞率MDA-MB-231：(64.33±4.50)%；BT-549：(75.42±4.10)%]细胞增殖明显降低，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝5.361， P<0.01；BT-549： t＝9.826， P<0.001)。敲低USP5后细胞迁移能力(MDA-MB-231：47.67±5.73；BT-549：51.00±8.60)较阴性对照细胞(MDA-MB-231：87.33±14.88；BT-549：93.69±6.12)显著下降，差异有统计学意义(MDA-MB-231： t＝3.517， P<0.05；BT-549： t＝5.713， P<0.01)。 结论:USP5通过调节RACK1表达促进TNBC迁移和增殖。

目的:研究亚低温对小鼠神经母细胞瘤（mouse neuro-blastoma N2a, N2a）细胞氧糖剥夺/复氧（oxygen glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R）损伤时小泛素类修饰蛋白特异性蛋白酶3（small ubiquitin-like modifier proteins specific protease 3, SENP3）表达的影响。方法:体外培养小鼠N2a细胞并予以OGD/R处理，建立模拟大脑缺血/再灌注的OGD/R模型以及亚低温模型；将N2a细胞按照随机数字表法分为3组（每组5孔）：假手术组（S组）、OGD/R组和氧糖剥夺/复氧+亚低温组（OGD/R+HT组）。细胞计数试剂盒（cell counting kit-8, CCK-8）法检测OGD/R后N2a细胞活性，乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase, LDH）释放率检测OGD/R后N2a细胞毒性，Hoechst33258染色观察N2a细胞凋亡，实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）分析SENP3 mRNA的相对表达量，Western blot法测定SENP3的蛋白水平。结果:与S组比较，OGD/R组和OGD/R+HT组细胞存活率下降、LDH释放率升高、凋亡细胞数量增多、SENP3 mRNA的相对表达量和蛋白水平升高（ P<0.05）；与ODG/R组比较，OGD/R+HT组细胞存活率升高、LDH释放率降低、凋亡细胞数量减少、SENP3 mRNA的相对表达量和蛋白水平降低（ P<0.05）。 结论:亚低温减轻N2a细胞OGD/R损伤机制与抑制SENP3的表达有关。

目的:探讨自噬抑制剂Spautin-1对小鼠创伤性颅脑损伤(TBI)后焦虑样行为的影响及其机制。方法:36只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为假手术组、TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组，每组12只。后2组小鼠采用改良的Feeney自由落体硬膜外撞击法建立TBI模型。造模后10 min，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠侧脑室注射2 μL Spautin-1溶液(10 mmol/L)，另外2组注射等量溶剂。造模后1、7、14 d采用神经系统症状评分(NSS)评估小鼠的运动、感觉和反射功能。造模后15、16 d分别采用旷场实验、高架十字迷宫实验评估小鼠的焦虑样行为。造模后16 d采用尼氏染色检测小鼠杏仁核区尼氏小体的数量，免疫荧光染色检测小鼠杏仁核区神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数、白细胞介素(IL)-18及IL-1β阳性星形胶质细胞数，Western blotting实验检测小鼠杏仁核区自噬、焦亡相关蛋白的表达。结果:(1)造模后1、7 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的NSS评分增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)造模后15、16 d，与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠旷场实验的跨格次数、中央区停留时间百分比下降，高架十字迷宫实验的进入开放臂次数(OE)百分比、开放臂停留时间(OT)百分比下降；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠的跨格次数、中央区停留时间百分比、OE百分比、OT百分比升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数减少；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区尼氏小体、NeuN阳性细胞数增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比增加；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区IL-1β、IL-18阳性星形胶质细胞百分比减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。(5)与假手术组比较，TBI组、TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、成孔蛋白D-N末端片段(GSDMD-N)、泛素特异性肽酶(USP)13及B淋巴细胞瘤-2相互作用蛋白(Beclin1)的表达上调，微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ/LC3Ⅰ值升高；与TBI组比较，TBI+自噬抑制剂Spautin-1组小鼠杏仁核区NLRP3、活化Caspase-1、GSDMD-N、USP13、Beclin1蛋白的表达下调，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:自噬抑制剂Spautin-1能够改善小鼠TBI后的焦虑样行为，其机制可能与抑制小鼠杏仁核区星形胶质细胞的自噬依赖性焦亡相关。

目的:探讨泛素特异性蛋白酶7（USP7）在瘢痕溃疡癌变过程中的生物学作用及其临床意义。方法:采用回顾性观察性研究结合生物信息学分析方法。从癌症基因组图谱（TCGA）数据库和基因表达综合数据库中获取USP7在肿瘤和/或其对应癌旁正常组织中的RNA表达谱数据，并将RNA测序数据进行log 2转化。通过多维度癌症基因集cBioPortal数据库分析 USP7基因变异情况，并分析其突变位点。通过TIMER 2.0数据库中“差异表达”模块获得TCGA数据库中肿瘤、癌旁正常组织USP7 mRNA表达情况。使用基因表达谱交互分析2（GEPIA2）数据库分析皮肤黑色素瘤（SKCM）、宫颈鳞状细胞癌（CESC）、肺鳞状细胞癌（LUSC）和头颈鳞状细胞癌（HNSC）中高表达USP7患者与低表达USP7患者的生存率并绘制Kaplan-Meier生存曲线。利用Sangerbox数据库分析USP7在泛癌中的表达与微卫星不稳定性（MSI）或肿瘤突变负担（TMB）的相关性。通过GEPIA2数据库中“相关性分析”模块，评估USP7在泛癌中的表达与5种DNA错配修复基因（ MLH1、 MSH2、 MSH6、 PMS2和 EPCAM）表达水平和3种必需DNA甲基转移酶（DNMT）——DNMT1、DNMT3A、DNMT3B表达水平的相关性。通过TIMER 2.0数据库中“免疫-基因”模块分析USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中表达及其与免疫细胞（B细胞、CD4 +T细胞、CD8 +T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞和树突状细胞）浸润的相关性。利用GEPIA2数据库的“相似基因检测”模块获得与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集。将前述蛋白集与利用STRING数据库获得的与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集进行交集分析。通过DAVID数据库对上述2个蛋白集进行京都基因与基因组百科全书（KEGG）和基因本体论（GO）富集分析。收集2018年10月—2022年10月武汉大学附属同仁医院暨武汉市第三医院病理科有相应临床病理特征的正常皮肤、增生性瘢痕、瘢痕溃疡、瘢痕癌的术后标本，采用免疫组织化学法检测组织中USP7表达情况，样本数为6。对数据行Log-rank检验、单因素方差分析及Bonferroni检验。 结果:在泛癌中， USP7的主要基因变异类型为突变和扩增，变异频率（>6%）居前3位的肿瘤依次为膀胱尿路上皮癌、SKCM和子宫内膜癌。 USP7基因在泛癌中的主要突变为错义突变。在突变频率最高的SKCM中，主要突变类型是USP7_ICP0_bdg结构域的错义突变。USP7 mRNA在乳腺浸润癌、胆管癌、结肠癌、食管癌、HNSC、肾嫌色细胞癌、肝细胞肝癌、肺腺癌、LUSC、前列腺癌和胃癌肿瘤组织中的表达均明显高于其对应的癌旁正常组织（ P<0.05），在多形成性胶质细胞瘤、肾透明细胞癌、肾乳头状细胞癌和甲状腺癌中的表达均明显低于其对应的癌旁正常组织（ P<0.05）；此外，USP7 mRNA在SKCM转移组织中的表达远高于其原发肿瘤组织（ P<0.05）。生存曲线显示，在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中，高表达USP7患者与低表达USP7患者的存活率比较，差异均无统计学意义（Log-rank P>0.05，风险比分别为1.00、0.99、1.00、1.30）。USP7在结肠癌、结直肠癌、胸腺癌、甲状腺癌中的表达均与TMB呈显著负相关（Pearson相关系数分别为-0.26、-0.19、-0.19和-0.11， P<0.05）；USP7在神经胶质瘤、CESC、肺腺癌、混合肾癌、LUSC中的表达均与MSI呈显著正相关（Pearson相关系数分别为0.22、0.14、0.15、0.08和0.14， P<0.05），在结肠癌、结直肠癌、乳腺浸润癌、前列腺癌、HNSC、甲状腺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达均与MSI呈显著负相关（Pearson相关系数分别为-0.31、-0.27、-0.13、-0.19、-0.16、-0.18和-0.53， P<0.05）。USP7在CESC中的表达与MSH2和MSH6的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.51和0.44， P<0.05），在HNSC中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6、PMS2的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.39、0.14、0.49、0.54和0.41， P<0.05），在LUSC中的表达与EPCAM、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.20、0.36、0.40和0.34， P<0.05），在SKCM中的表达与EPCAM、MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表达均呈明显正相关（Spearman相关系数分别为0.11、0.33、0.42、0.55和0.34， P<0.05）；USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达与DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的表达均呈显著正相关（Spearman相关系数分别为0.42、0.34和0.22，0.45、0.52和0.22，0.36、0.36和0.22，0.38、0.46和0.21， P<0.05）。USP7在CESC、HNSC、LUSC和SKCM中的表达仅与CD4 +T细胞浸润呈显著正相关（Partial相关系数分别为0.14、0.22、0.13、0.16， P<0.05）。与USP7表达模式相似且排名前100的蛋白集中，排名前5的蛋白依次是C16orf72、BCLAF1、UBN、GSPT1、ERI2（Spearman相关系数分别为0.83、0.74、0.73、0.73和0.72， P值均<0.05）。与USP7有直接物理结合作用且排名前50的蛋白集与前述蛋白集的交集仅有1个蛋白，即为甲状腺激素受体相互作用因子12。KEGG富集分析显示，USP7相关基因涉及细胞周期、剪接体、细胞衰老和p53信号通路等。GO富集分析显示，USP7相关基因涉及转录调控、蛋白质泛素化、DNA修复和细胞质模式识别受体信号通路等。临床样本分析显示，USP7在增生性瘢痕（0.35±0.05）、瘢痕溃疡（0.43±0.04）和瘢痕癌（0.61±0.03）中的表达均明显高于正常皮肤（0.18±0.04）， P<0.05。 结论:USP7可能为临床瘢痕溃疡癌变恶化的生物标志物。

目的:评价miR-188-5p在N2a细胞氧糖剥夺-复糖复氧(OGD/R)损伤中的作用及其与SUMO特异性蛋白酶3(SENP3)的关系。方法:小鼠N2a细胞采用随机数字表法分为5组( n＝23)：对照组(C组)、OGD/R组、NC组、转染miR-188-5p激动剂组(M组)和转染miR-188-5p抑制剂组(I组)。C组细胞常规培养，NC组、M组和I组分别转染试剂miR-188-5p阴性对照miRNA、激动剂及抑制剂后。氧糖剥夺3 h后复糖复氧制备N2a细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤模型，于复糖复氧后24 h时采用CCK-8法检测细胞活力，检测LDH漏出量，采用RT-qPCR法检测miR-188-5p和SENP3 mRNA表达，采用Western blot法检测SENP3表达。采用双荧光素酶实验检测miR-188-5p与SENP3 mRNA的靶向关系。 结果:与C组比较，其余4组细胞活力降低，LDH漏出量增加，SENP3及其mRNA表达上调，OGD/R组和I组miR-188-5p表达下调，M组miR-188-5p表达上调( P<0.05或0.01)；与OGD/R组比较，I组细胞活力降低，LDH漏出量增加，SENP3及其mRNA表达上调，miR-188-5p表达下调，M组细胞活力增加，LDH漏出量下降，SENP3及其mRNA表达下调，miR-188-5p表达上调( P<0.05或0.01)。双荧光素酶实验报告表明：miR-188-5p直接作用于SENP3。 结论:miR-188-5p参与了N2a细胞氧糖剥夺-复糖复氧损伤的过程，与靶向下调SENP3表达有关。

目的:探讨通过诱导蛋白质广泛去类泛素化修饰途径抑制子宫内膜癌的干性维持潜能，达到子宫内膜癌侧群细胞化疗增敏的目的。方法:流式细胞术分选培养CD133 +CD44 +的KLE子宫内膜癌侧群细胞克隆球，Western blot法检测小泛素相关修饰蛋白1(SUMO1)及肿瘤侧群细胞干性维持基因八聚体结合转录因子4(Oct4)和性别决定区Y-box2(Sox2)蛋白的表达情况。慢病毒介导KLE侧群细胞稳定转染SUMO特异性蛋白酶1(SENP1)基因，Western blot法检测SENP1、SUMO1、Oct4和Sox2的蛋白表达；比较过表达与未过表达SENP1基因的KLE侧群细胞克隆形成率，流式细胞术检测细胞周期变化，四甲基偶氮唑蓝实验和流式细胞术检测子宫内膜癌侧群细胞对顺铂的化疗敏感性，子宫内膜癌荷瘤鼠模型检测SENP1过表达对顺铂的化疗敏感性影响。 结果:CD133 +CD44 +和CD133 -CD44 -子宫内膜癌KLE细胞克隆形成率分别为(23.64±5.03)%和(4.64±1.25)%，差异有统计学意义( P＝0.003)，CD133 +CD44 +子宫内膜癌KLE细胞中SUMO1、Oct4和Sox2蛋白表达水平高于CD133 -CD44 -子宫内膜癌KLE细胞(均 P<0.05)。与未转染SENP1基因的KLE侧群细胞比较，SENP1过表达的KLE侧群细胞SUMO1、Oct4、Sox2蛋白表达水平降低，细胞克隆形成率由(25.67±5.44)%下降至(7.46±1.42)%，细胞周期发生由G 0/G 1期向G 2期的偏移，顺铂半数抑制浓度由(55.46±6.14) μg/ml下降至(11.55±3.12) μg/ml，细胞凋亡率由(9.76±2.09)%上升至(16.79±3.44)%，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。过表达SENP1能够降低KLE侧群细胞增殖能力，增加化疗敏感性。 结论:通过过表达SENP1能够诱导蛋白质去SUMO化修饰，抑制子宫内膜癌侧群细胞的干性维持潜能，进而增强其化疗敏感性。

目的:探讨HBV感染患者外周血干扰素刺激基因（ISGs）表达水平变化及其与干扰素治疗疗效的关系。方法:选取首都医科大学大兴教学医院2018年4月至2023年5月收治的80例HBV感染患者纳入HBV组，另选取同期进行健康体检者80例作为对照组。对比两组外周血黏病毒抗性蛋白A（MxA）mRNA、泛素特异性蛋白酶18（USP18）mRNA、细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）mRNA表达水平，HBV组患者均给予重组人干扰素α-2b持续治疗24周，依照干扰素应答情况，分为干扰素应答组（n=38）与干扰素无应答组（n=42）两个亚组，通过Logistic回归分析外周血指标与干扰素应答的关系，并观察HBV组患者干扰素治疗前后MxA mRNA、USP18 mRNA、SOCS3 mRNA水平变化。结果:HBV组治疗前外周血MxA mRNA水平低于对照组，USP18 mRNA、SOCS3 mRNA水平高于对照组（P<0.05）；干扰素应答组治疗前外周血MxA mRNA水平高于干扰素无应答组，USP18 mRNA、SOCS3 mRNA水平低于干扰素无应答组（P<0.05）；Logistic回归分析显示USP18 mRNA、SOCS3 mRNA高表达是HBV感染患者干扰素无应答危险因素，MxA mRNA高表达是干扰素应答保护因素；干扰素应答组治疗前、治疗2周、12周、24周后外周血MxA mRNA表达水平高于干扰素无应答组，USP18 mRNA、SOCS3 mRNA表达水平低于干扰素无应答组（P<0.05）。结论:HBV感染者应用干扰素治疗中，MxA高表达、USP18、SOCS3低表达者具有较佳的干扰素应答疗效。

结直肠癌发生转移的患者预后差、5年生存率低.泛素连接酶(E3)是泛素蛋白酶体系统的重要组成部分,可特异性识别蛋白质底物,从而依赖泛素化降解多种蛋白质以维持体内蛋白质稳态.E3通过调控细胞增殖、凋亡及细胞周期等细胞生命活动在多种肿瘤转移相关生物学过程中发挥重要作用,归属于相同类别的E3可对结直肠癌转移起促进或抑制作用.

目的:通过5'-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)/自噬相关蛋白5(ATG5)信号通路,探讨白花蛇舌草提取物减轻急性胰腺炎(AP)大鼠肺损伤的机制.方法:建立AP肺损伤大鼠模型,随机分为模型组、提取物(白花蛇舌草提取物)组、3-MA(自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤)组、AICAR(AMPK激活剂)组、提取物+AICAR组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组;ELISA检测血清淀粉酶(AMY)、IL-1β、IL-6、IL-18水平;检测大鼠腹水量及肺湿/干重比(W/D);HE观察胰腺及肺组织病理损伤;Western blot检测溶酶体相关膜蛋白2(LAMP2)、自噬底物p62、IL-1β前体蛋白(pro-IL-1β)、胰蛋白酶原活化肽(TAP)、AMPK、p-AMPK、ATG5、自噬标志物LC3-Ⅱ/Ⅰ、泛素特异性蛋白酶10(UPS10)表达.结果:与假手术组相比,模型组大鼠腹水量、肺W/D、胰腺和肺组织病理损伤评分、血清AMY、IL-1β、IL-6、IL-18水平、胰腺组织p62、TAP、pro-IL-1β表达、肺组织p-AMPK/AMPK、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ、UPS10、pro-IL-1β表达均升高(P<0.05),胰腺和肺组织LAMP2蛋白表达降低(P<0.05);模型大鼠经白花蛇舌草提取物或自噬抑制剂3-MA干预后,上述指标均得到显著改善(P<0.05),且白花蛇舌草提取物的改善效果优于3-MA(P<0.05);而AMPK激活剂AICAR可削弱白花蛇舌草提取物对AP大鼠肺损伤的改善作用(P<0.05).结论:白花蛇舌草提取物可通过抑制AMPK/ATG5信号通路减轻炎症反应、降低自噬水平改善AP大鼠肺损伤.

目的 研究泛素特异性蛋白酶 26(ubiquitin-specific protease 26,USP26)通过调控 RLR信号通路影响肠道病毒 71 型(EV71)感染的机制和功能,深入了解 EV71 感染及其逃逸免疫防御关系,为临床治疗 EV71 感染提供依据.方法 利用RT-PCR和Western blot分别检测EV71 感染横纹肌肉瘤细胞(RD)0、2、4、8、12、24 h后的USP26 mRNA、VP1 mRNA及其蛋白质的表达水平;在RD细胞中设置转染USP26-siRNA(实验组)和转染阴性对照siRNA(对照组),再用EV71 感染RD细胞,收集感染 8、12 和 24h时的mRNA样本,RT-PCR检测VP1 mRNA的表达情况;收集感染 8h时的蛋白质样本,Western blot检测细胞中MDA5、p-IRF3、IRF3 蛋白的表达水平并计算 p-IRF3/IRF3 的相对比值;利用空斑试验检测病毒滴度水平.结果Western blot和RT-PCR结果表明,EV71 感染过程中USP26 的表达上调(P＜0.05);RD细胞转染后实验组EV71 中VP1 mRNA的表达水平明显低于同一时间的对照组(P＜0.05),感染 8h实验组中MDA5 蛋白和p-IRF3 蛋白的表达水平均显著高于对照组(P＜0.05);两组IRF3 总蛋白的表达水平差异无统计学意义;空斑试验中实验组EV71 的病毒滴度显著低于对照组(P＜0.05).结论 USP26 可通过负性调控RLR信号通路参与抗病毒免疫反应,敲减USP26 可抑制EV71 在细胞中的复制.