目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ(ICA Ⅱ)通过调节miR-20b及其下游靶基因的表达，从而改善糖尿病性内皮细胞功能的研究。方法:利用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立高糖联合晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的糖尿病性内皮细胞功能障碍模型，分为对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和ICA Ⅱ处理组(DM+ICA Ⅱ组)，检测各组细胞中内皮功能标志蛋白表达和细胞迁移能力的变化，预测miR-20b的潜在靶基因并观察ICA Ⅱ对miR-20b及下游靶基因表达的影响。结果:与NC组相比，DM组HUVECs中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、细胞迁移能力和miR-20b表达水平明显下降( P<0.05)，而晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)表达水平明显升高( P<0.05)，经ICA Ⅱ处理后，DM+ICA Ⅱ组的上述指标较DM组均得到显著改善(均 P<0.05)。与DM组相比，DM+miR-20b激动剂类似物(miR-20b agomir)组中TXNIP基因的表达水平受到抑制( P<0.05)；miR-20b拮抗剂类似物(miR-20b antagomir)组的TXNIP的基因表达较NC组显著升高( P<0.05)，而与miR-20b antagomir组相比，miR-20b antagomir+ICA Ⅱ组中miR-20b的表达显著升高而TXNIP的表达显著下降( P<0.05)。 结论:ICA Ⅱ可通过miR-20b/TXNIP通路来改善糖尿病性内皮细胞的功能。

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)联合醋酸泼尼松片(PAT)对激素抵抗型肾病综合征(SRNS)模型大鼠的干预作用.方法 雄性SD大鼠用2次注射阿霉素(ADR)法构建SRNS模型.待建模成功后,随机分为模型组、PAT组、ICA组、联合组,每组10只;另取10只大鼠为空白组.空白组和模型组均给予0.9％NaCl;PAT 组给予 6.3 mg·kg-1·d-1 PAT;ICA 组给予 50 mg·kg-1·d-1 ICA;联合组给予6.3 mg·kg-1·d-1 PAT+50 mg·kg-1·d-1 ICA.5 组大鼠灌胃体积均为1 mL·100 g-1,每天给药1次,共给药6周.比较各组大鼠的肾功能、血脂水平,用蛋白质印迹法检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶-Ⅱα(CaMK Ⅱ α)、丝切蛋白-1(Cofilin-1)和F-肌动蛋白(F-actin)的表达情况.结果 空白组、模型组、PAT组、ICA组和联合组的第8周末尿蛋白定量分别为(6.66±1.48)、(178.38±8.96)、(161.56±5.49)、(157.13±8.32)和(96.90±5.05)mg·24 h-1,血清肌酸酐分别为(30.90±1.79)、(41.10±2.77)、(34.90±2.03)、(35.10±2.18)和(31.90±2.47)μmol·L-1,三酰甘油分别为(0.87±0.14)、(2.30±0.41)、(1.94±0.44)、(1.17±0.59)和(0.89±0.30)mmol·L-1,总胆固醇分别为(1.54±0.08)、(2.53±0.22)、(2.14±0.59)、(2.27±0.31)和(1.93±0.32)mmol·L-1,CaMK Ⅱ α 蛋白相对表达水平分别为 0.88±0.09、0.65±0.06、0.71±0.08、0.76±0.07 和 0.88±0.08,p-Cofilin-1/Cofilin-1 比值分别为 0.56±0.27、2.52±0.04、0.75±0.02、0.91±0.20 和 0.53±0.05,F-actin 蛋白相对表达水平分别为 0.93±0.01、0.64±0.01、0.75±0.02、0.80±0.01和0.85±0.00.模型组的上述指标与空白组和联合组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ICA联合PAT可通过调控CaMK Ⅱ α/Cofilin-1/F-actin通路改善SRNS大鼠的肾功能、血脂水平,改善肾组织病理结构,促进骨架蛋白重构.

目的 评价淫羊藿低糖苷组分的安全性并研究其中 5 种低糖苷成分的药代动力学.方法 4 组KM小鼠分别灌胃玉米油溶媒以及 1 968、2 625、3 500 mg·kg-1 淫羊藿低糖苷组分后,连续 7d观察小鼠的毒性反应和死亡情况,观察结束后解剖.计算各组小鼠的脏体比和脏脑比,ELISA法测定血浆中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的含量,苏木精-伊红(HE)染色法观察小鼠肝脏病理变化.C57BL/6J小鼠分别尾静脉注射或灌胃宝藿苷Ⅰ、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、箭藿苷B和箭藿苷C后于不同时间点采血,超高效液相色谱-串联质谱(UHPLC-MS/MS)法测定 5 种低糖苷的血药浓度并计算药动学参数.结果 与空白对照组相比,小鼠灌胃不同剂量淫羊藿低糖苷组分后体质量、脏体比、脏脑比及血浆中ALT和AST含量均无显著性差异,肝脏病理切片也无显著变化.静脉注射后,5 种低糖苷的药时曲线下面积(AUC0-t)分别为 4.82、82.54、276.64、88.77、178.02 min·μg·mL-1,半衰期(t1/2)分别为 60.42、115.27、67.63、131.61、129.87 min.灌胃后,5 种低糖苷的AUC0-t分别为 31.64、18.59、3.48、2.41、2.42 min·μg·mL-1,峰浓度(Cmax)分别为 147.23、86.76、15.58、24.34、26.12 ng·mL-1,达峰时间(tmax)分别为 21.00、78.00、78.00、30.00、28.00 min.宝藿苷Ⅰ、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、箭藿苷B、箭藿苷C口服生物利用度分别为 1.91%、0.51%、0.05%、0.06%、0.04%.结论 淫羊藿低糖苷组分安全性高,在 3 500 mg·kg-1 剂量下仍没有观察到肝毒性,其中 5 种低糖苷成分在小鼠体内吸收快、消除快,生物利用度低.

目的:探究淫羊藿苷-黄芪甲苷-葛根素(淫黄葛)合剂(YHG)对铁调素(hepcidin,HAMP)基因敲除的APPswe/PS1dE9(APP/PS1 HAMP-/-)小鼠认知功能及铁死亡氨基酸代谢通路的影响.方法:实验分为阴性对照(C57BL/6小鼠)组、APP/PS1组、APP/PS1 HAMP-/-组、APP/PS1+YHG组、APP/PS1 HAMP-/-+YHG组、APP/PS1+地拉罗司(DFX)组和APP/PS1 HAMP-/-+DFX组,每组6只.YHG(淫羊藿苷、黄芪甲苷和葛根素的剂量分别为120、80和80 mg/kg)和DFX(100 mg/kg)灌胃给药,C57组、APP/PS1组和APP/PS1 HAMP-/-组小鼠给予等体积蒸馏水灌胃,每日一次,用药2个月.采用组织铁试剂盒检测小鼠脑组织铁离子含量;透射电镜检测小鼠海马神经元线粒体形态学变化;Morris水迷宫检测小鼠学习记忆能力;免疫荧光法检测各组小鼠脑组织神经元核抗原(NeuN)的含量;生化试剂盒检测小鼠脑组织谷胱甘肽(GSH)表达情况;Western blot检测小鼠脑组织谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)和谷氨酰胺酶2(GLS2)的表达情况.结果:与C57BL/6小鼠相比,APP/PS1小鼠脑铁含量显著升高(P＜0.01),线粒体形态破坏严重,学习记忆能力显著下降(P＜0.05),脑组织神经元损伤严重(P＜0.01),GSH、GCLC和GLS2表达水平均显著降低(P＜0.01);与APP/PS1小鼠相比,APP/PS1 HAMP-/-小鼠脑铁含量显著升高(P＜0.01),线粒体形态破坏严重,学习记忆能力显著下降(P＜0.05),脑组织神经元损伤严重(P＜0.01),GSH、GCLC和GLS2表达水平显著降低(P＜0.05);使用YHG和DFX后各组小鼠脑铁含量显著降低(P＜0.01),线粒体形态破坏减轻,学习记忆能力显著升高(P＜0.05),脑组织神经元损伤减轻(P＜0.01),GSH、GCLC和GLS2表达水平显著升高(P＜0.05).结论:YHG可改善APP/PS1 HAMP-/-小鼠学习记忆能力,其机制可能与调节铁死亡氨基酸代谢、增强抗氧化能力有关.

目的 运用"均匀设计法"从"肾衰Ⅱ号方"中筛选抗肾纤维化中药有效单体组方(淫羊藿苷合迷迭香酸配伍,简称IR方),并进行验证.方法 采用5/6(Ablation and infarction,A/I)慢性肾衰大鼠模型,将肾衰Ⅱ号方中已知的5种抗肾纤维化有效单体(淫羊藿苷、迷迭香酸、阿魏酸、苦杏仁苷、大黄素)作为研究对象,按照均匀设计法"5因素8水平"分组,共设8种配比组方.造模后4周,组1～组8给予相应配比的组方药液,假手术组和模型组给予生理盐水,连续干预8周.末次给药后,检测各组大鼠血清肌酐(Serum creatinine,Scr)水平,苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)和马松(Masson)染色观察肾组织病理形态,Western Blot法检测纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)表达.以各药物组大鼠Scr为筛选指标,通过多元逐步回归分析筛选中药单体成分组方并确定特定配比.再用5/6(A/I)大鼠模型,以氯沙坦钾、母方"肾衰Ⅱ号方"和淫羊藿苷(20 mg·kg-1·d-1)作为对照,有效成分组方(淫羊藿苷20 mg·kg-1·d-1+迷迭香酸2.1 mg·kg-1· d-1)作为实验药物,连续干预8周.通过各组大鼠Scr、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、病理染色(HE和Masson)和FN、Col-Ⅰ蛋白表达比较各组大鼠肾功能和肾纤维化程度.体外构建转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导肾小管细胞(NRK-52E)损伤和肾成纤维细胞(NRK-49F)活化模型,以有效成分组方和相应单一成分作为干预药物,Western Blot法检测FN、Col-Ⅰ、CTGF蛋白表达.结果 筛选实验结果提示,组1～组8均可不同程度降低5/6(A/I)大鼠Scr水平,结合病理染色和Western Blot分析,组8效果最优.经过多元逐步回归分析,得到方程为:(y)=88.381-0.539X1-0.473X2+0.01X1X2(X1淫羊藿苷,X2迷迭香酸),提示淫羊藿苷和迷迭香酸配伍为最佳,量比为9.6∶1.验证实验结果提示,IR方可以明显改善5/6(A/I)大鼠肾功能,减轻肾小管间质损伤和纤维化,抑制FN和Col-Ⅰ蛋白表达,其表现的肾保护效应与肾衰Ⅱ号方相当,并优于西药对照.体外实验发现,IR方可以明显抑制TGF-β1刺激的NRK-52E细胞和NRK-49F细胞FN、Col-Ⅰ、CTGF蛋白表达,并优于淫羊藿苷或迷迭香酸单独干预.结论 基于均匀设计法筛选的有效单体IR方具有改善慢性肾衰大鼠肾功能和抗肾纤维化的效应.

目的:探究淫羊藿苷对少弱精症的治疗作用及其作用机制.方法:以奥硝唑(800 mg/kg)所致少弱精症大鼠为动物模型,以淫羊藿苷(50、100 mg/kg)及左卡尼汀(100 mg/kg)干预.称量生殖器官质量,统计生育能力实验产仔率,分析附睾精子密度和精子活力;Elisa试剂盒检测血清睾酮含量;苏木精-伊红(HE)观察各组大鼠睾丸组织病理学;免疫荧光染色检测生精小管 Sertoli 细胞数量.试剂盒测定血清 NO 含量;Western Blot 检测睾丸 p-PLCγ1、p-AKT、p-eNOS 表达.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01).与模型组比较,淫羊藿苷 100 mg/kg组和左卡尼汀组大鼠睾丸指数、附睾指数、产仔率、附睾精子密度、附睾精子活力、血清睾酮含量、睾丸组织NO含量、生精小管直径及Sertoli细胞数量和睾丸组织PLCγ1、AKT、eNOS蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05 或P<0.01).

目的:观察淫羊藿苷(ICA)通过一氧化氮(NO)-环磷酸鸟苷(cGMP)-蛋白激酶G(PKG)通路对射血分数保留型心衰(HFPEF)大鼠心室重塑的影响.方法:建立醋酸脱氧皮质酮(DOCA)敏感型HFPEF大鼠模型,造模成功后,随机分成Model组、ICA低、中、高剂量组、抑制剂组,随机选取 12 只大鼠作为control组,各组灌胃相应药物,每天 1 次,连续 6 周.超声心动图检测大鼠心功能;心导管法测定血流动力学参数;HE染色观察大鼠心肌组织病理损伤;试剂盒检测NO、cGMP、活性氧(ROS)、白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α 水平;免疫荧光染色观察血小板-内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达;Western blot检测PKG、内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)、诱导性一氧化氮合酶(iNOS)、可溶性鸟苷酸环化酶α(sGCα)蛋白表达.结果:与control组比较,Model组大鼠左室射血分数(LVEF)、左心室缩短分数(LVFS)、二尖瓣舒张早期/舒张晚期血流速度最大峰值(E/A)、左心室收缩压(LVSP)、左室压力最大上升速率(+dp/dt max)、左室压力最大下降速率(-dp/dt max)、NO、cGMP水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平降低(P＜0.05),左心室前壁厚度(LVAM)、左心室后壁厚度(LVPW)、左心室舒张末期内径(LVEDD)、左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期压力(LVEDP)、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平升高(P＜0.05).与Model组比较,ICA低、中、高剂量组大鼠LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max、NO、cGMP水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平升高(P＜0.05),LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平降低(P＜0.05),其中ICA高剂量组变化更显著(P＜0.05).与ICA高剂量组比较,抑制剂组大鼠LVEF、LVFS、E/A、LVSP、+dp/dt max、-dp/dt max、NO、cGMP水平、CD31 及PKG、eNOS、sGCα蛋白表达水平降低(P＜0.05),LVAM、LVPW、LVEDD、LVESD、LVEDP、ROS、IL-6、IL-1β、TNF-α水平、iNOS蛋白表达水平升高(P＜0.05).结论:ICA可能通过激活NO-cGMP-PKG通路,减轻炎症反应、改善心室重塑.

目的 研究淫羊藿、女贞子配伍对自噬激活剂雷帕霉素(rapamycin,RAP)诱导的气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMCs)自噬、凋亡及增殖活性的调节作用.方法 培养大鼠原代ASMCs,随机分为正常组、RAP组、淫羊藿组、女贞子组、配伍组.根据分组分别加入正常大鼠血清或含药大鼠血清;除正常组外,其余各组同时加入RAP诱导的ASMCs,48h后进行检测.电镜观察细胞超微结构;MTT法检测细胞活力;免疫细胞化学法检测增殖蛋白ki-67蛋白表达,评价细胞增殖活性;Annexin V-FITC/PI 法检测细胞凋亡活性;Western blot 法和细胞免疫荧光法检测 LC3、Beclin-1、mTOR、p-mTOR、Bax、Bcl-2、caspase-3及p53蛋白表达.结果 淫羊藿、女贞子配伍能显著抑制RAP诱导的ASMCs自噬,下调LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(P＜0.05)及Beclin-1蛋白表达(P＜0.01);改善RAP诱导的细胞活力、增殖活性降低(P＜0.01);抑制凋亡水平升高(P＜0.01),且优于淫羊藿、女贞子单用组(P＜0.05或P＜0.01).此外,配伍组能上调caspase-3蛋白表达(P＜0.05),下调p53蛋白表达(P＜0.01);但对mTOR及p-mTOR、Bax及Bcl-2蛋白表达无显著影响.结论 淫羊藿、女贞子配伍能抑制RAP诱导的ASMCs的过度自噬/凋亡水平,恢复ASMCs的细胞活力及增殖活性,避免ASMCs过度损伤.

目的:研究蒙药蓝刺头对去卵巢大鼠骨代谢标志物P1 NP、β-CTX的影响.方法:将 72 只 4 月龄 SD系清洁级雌性大鼠随机分为六组,每组 12 只,分别为假手术组、去卵巢骨质疏松模型组、蓝刺头高剂量组、中剂量组、低剂量组及淫羊藿组.除假手术组外,其余各组大鼠均采用卵巢摘除去势法建立绝经后骨质疏松模型.术后正常饲养 90 d,假手术组和模型组大鼠灌胃等体积 0.9%氯化钠溶液,各治疗组大鼠灌胃相应药物,每天 1 次,连续 90 d.末次给药 24h后,处死大鼠,采用 Micro-CT 测定大鼠股骨骨密度,酶联免疫法检测大鼠血清中 P1 NP、β-CTX、TNF-α、IL-1β、IL-6 的含量.结果:与假手术组比较,模型组大鼠股骨近端 BMD 明显降低,血清中 P1 NP、β-CTX、TNF-α及 IL-1β和 IL-6 的浓度明显升高(P<0.05).与模型组比较,蓝刺头组的BMD升高,血清中 P1 NP、β-CTX、TNF-α及 IL-1β和 IL-6 的浓度下降(P<0.05).结论:蒙药蓝刺头可降低去卵巢大鼠的P1NP和β-CTX的含量,同时减少TNF-α、IL-1β、IL-6 的浓度,进而达到增加骨含量,减少骨吸收的作用.

目的 构建负载淫羊藿苷(ICA)和盐酸米诺环素(MH)的明胶微球/骨水泥(GMs/CPC)材料并对其性能进行研究,为种植体周围炎的治疗提供一种骨替代材料.方法 制备GMs及负载ICA的GMs(ICA)、负载MH的GMs(MH)和同时负载两种药物的 GMs(ICA+MH),将 GMs(ICA+MH)与 CPC 复合构建 CPC/GMs(ICA+MH)材料,将 GMs(ICA)和 GMs(MH)按照质量比1:1的比例混合后与CPC复合构建CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)材料.通过扫描电镜实验观察材料表面形态,X射线衍射实验分析材料物相.将各组材料浸提液作用于骨髓间充质干细胞(BMSCs),通过CCK-8实验检测材料浸提液对BMSCs增殖作用的影响,通过茜素红染色及钙含量定量分析实验检测材料浸提液及含浸提液的矿化液对BMSCs矿化作用的影响.结果 扫描电镜观察显示,CPC/GMs、CPC/GMs(ICA+MH)和CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)中的明胶微球被CPC基质包裹并随机散在分布于骨水泥中;X射线衍射分析结果显示以上3种材料中明胶微球与CPC结合后并未发生化学反应产生新的物质.CCK-8实验结果显示,BMSCs在材料浸提液中培养7 d后,CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)组BMSCs的增殖率显著升高,与CPC/GMs组和CPC/GMs(ICA+MH)组比较差异具有统计学意义(P＜0.05).BMSCs在材料浸提液及含浸提液的矿化液中培养21 d 后,CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)组矿化能力显著高于 CPC/GMs 组和 CPC/GMs(ICA+MH)组(P＜0.05).结论 CPC/GMs(ICA+MH)和CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)材料对BMSCs的成骨分化均具有促进作用,其中CPC/GMs(ICA)+GMs(MH)的作用较强是一种优选的骨替代材料.