目的:探讨淫羊藿次苷Ⅱ(ICA Ⅱ)通过调节miR-20b及其下游靶基因的表达，从而改善糖尿病性内皮细胞功能的研究。方法:利用人脐静脉内皮细胞(HUVECs)建立高糖联合晚期糖基化终末产物(AGEs)诱导的糖尿病性内皮细胞功能障碍模型，分为对照组(NC组)、糖尿病组(DM组)和ICA Ⅱ处理组(DM+ICA Ⅱ组)，检测各组细胞中内皮功能标志蛋白表达和细胞迁移能力的变化，预测miR-20b的潜在靶基因并观察ICA Ⅱ对miR-20b及下游靶基因表达的影响。结果:与NC组相比，DM组HUVECs中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、细胞迁移能力和miR-20b表达水平明显下降( P<0.05)，而晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)表达水平明显升高( P<0.05)，经ICA Ⅱ处理后，DM+ICA Ⅱ组的上述指标较DM组均得到显著改善(均 P<0.05)。与DM组相比，DM+miR-20b激动剂类似物(miR-20b agomir)组中TXNIP基因的表达水平受到抑制( P<0.05)；miR-20b拮抗剂类似物(miR-20b antagomir)组的TXNIP的基因表达较NC组显著升高( P<0.05)，而与miR-20b antagomir组相比，miR-20b antagomir+ICA Ⅱ组中miR-20b的表达显著升高而TXNIP的表达显著下降( P<0.05)。 结论:ICA Ⅱ可通过miR-20b/TXNIP通路来改善糖尿病性内皮细胞的功能。

目的:探讨在放射性膀胱炎模型中淫羊藿次苷Ⅱ(ICAⅡ)对膀胱的保护作用和机制。方法:2021年7月至2022年3月取10周龄SD雄性大鼠18只，采用随机数字表法分为对照组、模型组、治疗组，每组各6例。模型组和治疗组予单一剂量为20 Gy的X线盆腔区域辐照，照射后24 h，治疗组予ICAⅡ 4.5 mg/(kg·d)灌胃，对照组和模型组予相同体积的溶剂(10%无水乙醇、20%异丙醇、30%聚乙二醇和40%去离子水的混合物)灌胃，连续4周，药物洗脱1周。采用多导电生理仪检测3组大鼠的膀胱容量和膀胱漏尿点压力，评估膀胱功能。取3组大鼠的膀胱标本行HE染色、Masson染色、ELISA、TUNEL法和蛋白质印迹法检测，比较3组大鼠膀胱组织的病理变化(膀胱黏膜厚度、平滑肌与胶原纤维的比值)、氧化应激水平(超氧化物歧化酶SOD、丙二醛)、细胞凋亡率、炎症因子(IL-6、NF-kB)和抗氧化应激信号通路因子(Nrf2、HO-1)蛋白表达量的变化。结果:建模4周后，模型组的膀胱容量[(1.01±0.12)ml与(1.58±0.21)ml， P＝0.001]、膀胱漏尿点压力[(38.79±4.12)cmH 2O(1 cmH 2O＝0.098 kPa)与(60.59±3.81)cmH 2O， P＝0.001]、膀胱壁平滑肌与胶原纤维比值[1.78±0.17与3.15±0.57， P＝0.001]、SOD[(6.31±0.73)U/mg与(14.67±1.04)U/mg， P＝0.001]低于对照组，差异均有统计学意义。模型组的膀胱黏膜厚度[(47.33±1.78)μm与(20.83±2.33)μm， P＝0.001]、丙二醛[(1.01±0.13)nmol/mg与(0.49±0.03)nmol/mg， P＝0.001]、IL-6(0.87±0.11与0.33±0.10， P＝0.001)、NF-kB(0.71±0.14与0.29±0.07， P＝0.001)、细胞凋亡率[(11.60±3.04)%与(3.91±1.40)%， P＝0.007]高于对照组，差异均有统计学意义。治疗组的膀胱容量[(1.27±0.13)ml， P＝0.030]、膀胱漏尿点压力[(47.83±2.50)cmH 2O， P＝0.004]、平滑肌与胶原纤维比值(2.78±0.68， P＝0.015)、SOD [(10.48±0.85) U/mg， P＝0.001]高于模型组，膀胱黏膜厚度[(31.94±3.20)μm， P＝0.001]、丙二醛[(0.64±0.09)nmol/mg， P＝0.001]、IL-6(0.69±0.11， P＝0.035)、NF-kB(0.45±0.06， P＝0.002)、细胞凋亡率[(6.05±0.60)%， P＝0.030]低于模型组。模型组Nrf2蛋白表达量(0.73±0.08与0.58±0.11， P＝0.023)高于对照组，但下游抗氧化因子HO-1蛋白表达量差异无统计学意义(0.50±0.14与0.35±0.06， P＝0.060)。治疗组Nrf2蛋白表达量(0.88±0.03， P＝0.027)和HO-1蛋白表达量(0.68±0.07， P＝0.026)均高于模型组。 结论:ICAⅡ可减轻放射性膀胱炎损伤，其作用机制可能与抗氧化应激和减轻炎症反应有关。

目的 探讨淫羊藿苷(ICA)联合醋酸泼尼松片(PAT)对激素抵抗型肾病综合征(SRNS)模型大鼠的干预作用.方法 雄性SD大鼠用2次注射阿霉素(ADR)法构建SRNS模型.待建模成功后,随机分为模型组、PAT组、ICA组、联合组,每组10只;另取10只大鼠为空白组.空白组和模型组均给予0.9％NaCl;PAT 组给予 6.3 mg·kg-1·d-1 PAT;ICA 组给予 50 mg·kg-1·d-1 ICA;联合组给予6.3 mg·kg-1·d-1 PAT+50 mg·kg-1·d-1 ICA.5 组大鼠灌胃体积均为1 mL·100 g-1,每天给药1次,共给药6周.比较各组大鼠的肾功能、血脂水平,用蛋白质印迹法检测钙/钙调素依赖性蛋白激酶-Ⅱα(CaMK Ⅱ α)、丝切蛋白-1(Cofilin-1)和F-肌动蛋白(F-actin)的表达情况.结果 空白组、模型组、PAT组、ICA组和联合组的第8周末尿蛋白定量分别为(6.66±1.48)、(178.38±8.96)、(161.56±5.49)、(157.13±8.32)和(96.90±5.05)mg·24 h-1,血清肌酸酐分别为(30.90±1.79)、(41.10±2.77)、(34.90±2.03)、(35.10±2.18)和(31.90±2.47)μmol·L-1,三酰甘油分别为(0.87±0.14)、(2.30±0.41)、(1.94±0.44)、(1.17±0.59)和(0.89±0.30)mmol·L-1,总胆固醇分别为(1.54±0.08)、(2.53±0.22)、(2.14±0.59)、(2.27±0.31)和(1.93±0.32)mmol·L-1,CaMK Ⅱ α 蛋白相对表达水平分别为 0.88±0.09、0.65±0.06、0.71±0.08、0.76±0.07 和 0.88±0.08,p-Cofilin-1/Cofilin-1 比值分别为 0.56±0.27、2.52±0.04、0.75±0.02、0.91±0.20 和 0.53±0.05,F-actin 蛋白相对表达水平分别为 0.93±0.01、0.64±0.01、0.75±0.02、0.80±0.01和0.85±0.00.模型组的上述指标与空白组和联合组相比,在统计学上差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论 ICA联合PAT可通过调控CaMK Ⅱ α/Cofilin-1/F-actin通路改善SRNS大鼠的肾功能、血脂水平,改善肾组织病理结构,促进骨架蛋白重构.

目的:研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICS Ⅱ)对阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习和记忆能力的影响及其分子机制.方法:将 7 月龄APP/PS1 双转基因小鼠随机分为模型组、ICS Ⅱ组和阳性对照药组,每日灌胃给药 1 次,连续 30 d.用Morris水迷宫与筑巢实验检测小鼠学习记忆和生活能力;用免疫荧光化学法检测脑内β淀粉样蛋白(Aβ)沉积与细胞凋亡情况;用蛋白质免疫印迹法(Western blot)探究其抗凋亡作用与磷脂腺肌醇 3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的相关性.结果:与模型组比较,ICS Ⅱ组小鼠的学习记忆及生活能力都明显提高(P<0.01),其海马与皮层的Aβ荧光强度和裂解的半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)阳性细胞数均明显降低(P<0.05,P<0.01),说明ICS Ⅱ能抑制Aβ沉积、减少神经细胞凋亡,保护脑组织;同时ICS Ⅱ组小鼠海马PI3K蛋白质表达水平和p-Akt/Akt显著升高(P<0.05,P<0.01),而Bax/Bcl-2 明显降低(P<0.01),说明ICS Ⅱ抗凋亡作用的机制与激活海马PI3K/Akt信号通路,降低促凋亡蛋白、提高抗凋亡蛋白的表达水平有关.结论:ICS Ⅱ对AD小鼠脑内神经细胞有明显的保护作用,能改善小鼠的认知功能,其机制可能与激活海马PI3K/Akt信号通路有关.

建立淫羊藿Epimedium brevieornu中13种化学成分新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的一测多评法,考察该方法在评价不同产地和不同品种的淫羊藿药材质量中具有一定的可行性和准确性.通过对实验方法的科学性及准确性考察,采用外标法测定淫羊藿中13种化学成分的含量,同时,以淫羊藿苷为内标,分别建立淫羊藿苷与新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的相对较正因子,计算淫羊藿中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的含量,实现用一测多评法测定其含量,最后比较实测值与计算值的差异,来验证一测多评法在测定中的准确性及科学性.各成分相对校正因子重复性较好,外标法测定结果与一测多评测定结果无显著性差异.以淫羊藿苷为内标,同时测定新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、木兰花碱、金丝桃苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅱ、箭藿苷A、淫羊藿次苷Ⅰ、宝藿苷Ⅰ的一测多评法可用于淫羊藿的定量分析.

卵巢癌是女性生殖系统三大癌症之一,其病死率位居妇科恶性肿瘤之首.淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿的功效,临床常用于生殖系统疾病的治疗.本文通过综述国内外相关文献,发现淫羊藿主要活性成分淫羊藿苷、淫羊藿素和淫羊藿次苷Ⅱ,主要从促进细胞凋亡、影响细胞的侵袭和转移、阻滞细胞周期、诱导细胞自噬、促进细胞焦亡等5个方面发挥抗卵巢癌作用,可见淫羊藿可以通过多靶点、多途径治疗卵巢癌.

目的 运用"均匀设计法"从"肾衰Ⅱ号方"中筛选抗肾纤维化中药有效单体组方(淫羊藿苷合迷迭香酸配伍,简称IR方),并进行验证.方法 采用5/6(Ablation and infarction,A/I)慢性肾衰大鼠模型,将肾衰Ⅱ号方中已知的5种抗肾纤维化有效单体(淫羊藿苷、迷迭香酸、阿魏酸、苦杏仁苷、大黄素)作为研究对象,按照均匀设计法"5因素8水平"分组,共设8种配比组方.造模后4周,组1～组8给予相应配比的组方药液,假手术组和模型组给予生理盐水,连续干预8周.末次给药后,检测各组大鼠血清肌酐(Serum creatinine,Scr)水平,苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)和马松(Masson)染色观察肾组织病理形态,Western Blot法检测纤维化标志蛋白Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,Col-Ⅰ)、纤维连接蛋白(Fibronectin,FN)、结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)表达.以各药物组大鼠Scr为筛选指标,通过多元逐步回归分析筛选中药单体成分组方并确定特定配比.再用5/6(A/I)大鼠模型,以氯沙坦钾、母方"肾衰Ⅱ号方"和淫羊藿苷(20 mg·kg-1·d-1)作为对照,有效成分组方(淫羊藿苷20 mg·kg-1·d-1+迷迭香酸2.1 mg·kg-1· d-1)作为实验药物,连续干预8周.通过各组大鼠Scr、血尿素氮(Blood urea nitrogen,BUN)、病理染色(HE和Masson)和FN、Col-Ⅰ蛋白表达比较各组大鼠肾功能和肾纤维化程度.体外构建转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导肾小管细胞(NRK-52E)损伤和肾成纤维细胞(NRK-49F)活化模型,以有效成分组方和相应单一成分作为干预药物,Western Blot法检测FN、Col-Ⅰ、CTGF蛋白表达.结果 筛选实验结果提示,组1～组8均可不同程度降低5/6(A/I)大鼠Scr水平,结合病理染色和Western Blot分析,组8效果最优.经过多元逐步回归分析,得到方程为:(y)=88.381-0.539X1-0.473X2+0.01X1X2(X1淫羊藿苷,X2迷迭香酸),提示淫羊藿苷和迷迭香酸配伍为最佳,量比为9.6∶1.验证实验结果提示,IR方可以明显改善5/6(A/I)大鼠肾功能,减轻肾小管间质损伤和纤维化,抑制FN和Col-Ⅰ蛋白表达,其表现的肾保护效应与肾衰Ⅱ号方相当,并优于西药对照.体外实验发现,IR方可以明显抑制TGF-β1刺激的NRK-52E细胞和NRK-49F细胞FN、Col-Ⅰ、CTGF蛋白表达,并优于淫羊藿苷或迷迭香酸单独干预.结论 基于均匀设计法筛选的有效单体IR方具有改善慢性肾衰大鼠肾功能和抗肾纤维化的效应.

目的 通过UPLC-Q-TOF-MS技术,探讨不同基原淫羊藿和巫山淫羊藿的药材体外化学成分的差异,为淫羊藿及巫山淫羊藿药材鉴定及质量控制奠定基础.方法 采用Agilent SB-C18(2.1 mm×100 mm,2.7 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液-甲醇(+)及水-甲醇(-)为流动相进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min-1.质谱采用电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下进行数据采集.通过保留时间、相对分子质量及二级碎片离子对巫山淫羊藿、淫羊藿、柔毛淫羊藿、箭叶淫羊藿及朝鲜淫羊藿药材中的化学成分进行鉴定,并基于所鉴定出的化合物对不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材的化学成分通过SIMCA软件进行差异分析.结果 不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材中共鉴定出朝霍定A、朝霍定B、朝霍定C、淫羊藿苷等 37 种化学成分,经过对比发现不同基原的淫羊藿及巫山淫羊藿药材中淫羊藿定L、2''-鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ、木兰花碱等12 种成分的相对含量具有明显差异,差异化合物经鉴定主要为黄酮类化合物.结论 本试验所发现的差异化合物可以作为区分不同基原淫羊藿及巫山淫羊藿药材的指标,这5种药材的鉴别和质量控制奠定基础.

目的 研究淫羊藿次苷Ⅱ(ICS Ⅱ)改善APP/PS1双转基因小鼠认知功能的作用.方法 将30只7月龄APP/PS1小鼠随机分为模型对照组和ICSⅡ给药组,每组15只;另取15只同龄C57BL/6小鼠作为空白对照组.ICS Ⅱ给药组灌胃10 mg·kg1 ICS Ⅱ,空白对照组和模型对照组给予等量羧甲基纤维素钠(CMC-Na),每天1次,连续28 d.给药第20天,采用筑巢实验检测小鼠日常生活能力,然后采用Morris水迷宫实验检测小鼠的认知功能;苏木素-伊红(H&E)染色法及尼氏(Nissl)染色法检测小鼠海马皮层、CA3区和DG区脑组织病理损伤情况;免疫荧光染色法检测小鼠皮层及海马区Aβ淀粉样蛋白沉积情况、星形胶质细胞和小胶质细胞激活情况:分别采用TBA法、羟胺法检测小鼠脑内的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 与模型组比较,ICS Ⅱ能明显改善APP/PS1小鼠日常生活能力和认知功能,减轻脑组织病理损伤、增加神经元细胞数量,减少Aβ淀粉样蛋白沉积,抑制星形胶质细胞和小胶质细胞的过度活化,提高脑内SOD活性,降低脑内MDA的水平.结论 ICS Ⅱ能通过调节多种病理机制改善APP/PS1双转基因小鼠的认知功能.

目的 探索淫羊藿次苷Ⅱ(ICS Ⅱ)的抗缺血性脑卒中和阿尔茨海默病(AD)的药理作用及机制.方法 采用大脑中动脉阻塞法(MCAO)诱导的缺血性脑卒中动物模型观察ICS Ⅱ对缺血性脑卒中的防治作用;采用APP/PS1 AD模式小鼠和Aβ25-35导致的大鼠AD模型观察ICS Ⅱ对认识功能障碍的影响.通过转录组学、分子对接、等离子表面共振和Western印迹等技术探究ICS Ⅱ抗缺血性脑卒中与AD的作用机制.结果 ICS Ⅱ可作为新型天然来源的PDE5抑制剂抗MCAO诱导的缺血性脑卒中动物模型神经功能损伤,其机制与通过GSK-3β信号途径抑制细胞过度自噬及抑制MMP9减少血脑屏障损伤有关;ICS Ⅱ能够通过调控Nrf2/ARE信号途径抑制铁死亡发挥预防缺血性脑卒中作用并有助于MCAO诱导的缺血性脑卒中动物模型的长期神经功能恢复.此外,我们还发现,ICS Ⅱ还可改善APP/PS1 AD模式小鼠和Aβ25-35 导致的大鼠AD模型的认识功能障碍,其作用机制与抑制Aβ产生及降低PDE5含量有关.结论 以上研究结果表明ICS Ⅱ具有良好的抗缺血性脑卒中与AD的神经保护作用.