本研究报道1例因双肺多发占位入院的患者，超声检查示甲状腺双侧叶实性结节，右侧叶囊实性结节；胸部计算机断层成像检查示甲状腺双叶低密度结节，双肺多发结节；结核感染T淋巴细胞斑点试验示抗原A(早期分泌抗原靶-6)孔斑点数为56个，抗原B(培养滤液蛋白10)孔斑点数为50个。行超声引导下甲状腺结节穿刺细针吸取细胞学检查，结合病理及临床病史，基本可诊断为肺结核合并甲状腺结核。经抗结核治疗，患者病情好转。本病例提示超声引导下细针吸取细胞学检查为甲状腺疾病的临床诊断提供了新思路，值得临床应用推广。

目的:评估CD27、CD38、人类白细胞抗原(HLA)-DR 3种生物标志物的表达水平在活动性结核(ATB)与潜伏性结核感染(LTBI)鉴别上的诊断效能。方法:纳入2021年3月至2022年2月复旦大学附属华山医院和无锡市第五人民医院收治的60例确诊的ATB初治患者和44例LTBI者。将两组患者的外周血单个核细胞(PBMC)经早期分泌蛋白6/培养滤液蛋白10刺激后，采用多色流式细胞术评估结核病特异性CD4 +T淋巴细胞上CD27、CD38、HLA-DR 3种生物标志物的表达情况。统计学方法采用曼-惠特尼 U检验，以受试者操作特征曲线下面积(AUROC)评价生物标志物在ATB与LTBI鉴别上的诊断效能。 结果:ATB组CD27 －、CD38 +、HLA-DR +、CD27 －CD38 +、CD27 － HLA-DR +、CD38 +HLA-DR +的表达水平均高于LTBI组，差异均有统计学意义( U＝26.00、451.00、384.00、8.00、7.00、184.00，均 P<0.001)。CD27 －CD4 +γ干扰素(IFN-γ) + T淋巴细胞的比例为52.31%时，AUROC为0.71，灵敏度和特异度分别为50.00%和87.20%；CD38 +CD4 +IFN-γ + T淋巴细胞的比例为30.25%时，AUROC为0.82，灵敏度和特异度分别为73.40%和89.70%；HLA-DR +CD4 +IFN-γ + T淋巴细胞的比例为36.60%时，AUROC为0.85，灵敏度和特异度分别为66.00%和94.90%；CD27 －CD38 +CD4 +IFN-γ + T淋巴细胞的比例为8.82%时，AUROC为0.80，灵敏度和特异度分别为90.60%和61.50%；CD27 －HLA-DR +CD4 +IFN-γ +T淋巴细胞的比例为18.62%时，AUROC为0.83，灵敏度和特异度分别为75.00%和79.50%；CD38 +HLA-DR +CD4 +IFN-γ + T淋巴细胞的比例为22.35%时，AUROC为0.93，灵敏度和特异度分别为79.70%和100.00%。 结论:结核病特异性CD4 + T淋巴细胞上CD27 －、CD38 +、HLA-DR +在ATB中的表达水平高于LTBI，通过流式细胞术检测这3种生物标志物的表达情况可以较好地鉴别ATB与LTBI。

目的:探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)联合血清糖类抗原125(CA125)、γ干扰素诱导蛋白10(IP-10)对肺结核合并糖尿病的诊断价值.方法:选取2021年1月～2023年1月上海中医药大学附属第七人民医院收治的480例疑似肺结核患者,根据诊断结果分为A组(肺结核合并糖尿病患者)166例、B组(单纯肺结核患者)214例、C组(非结核分枝杆菌感染和非糖尿病患者)100例.所有研究对象均进行T-SPOT.TB,并采用酶联免疫吸附法检测血清CA125、IP-10水平.通过绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析T-SPOT.TB联合血清CA125、IP-10水平对肺结核合并糖尿病的诊断价值.结果:A组T-SPOT.TB阳性率低于B组,但高于C组,B组T-SPOT.TB阳性率高于C组(P＜0.05);A组抗原培养滤液蛋白10(CFP10)、早期分泌性抗原靶蛋白6-kD(ESAT-6)原值高于B组、C组,B组抗原CFP10、抗原ESAT-6原值高于C组(P＜0.05).A组血清CA125、IP-10水平高于B组和 C,B 组血清 CA125、IP-10 水平高于 C 组(P＜0.05).ROC 曲线分析显示,T-SPOT.TB、CA125、IP-10、T-SPOT.TB+CA125、T-SPOT.TB+IP-10、三项联合诊断肺结核合并糖尿病的曲线下面积(AUC)分别为0.771、0.769、0.779、0.880、0.885、0.937;三项联合诊断肺结核合并糖尿病的AUC大于T-SPOT.TB、CA125、IP-10单独和联合诊断.结论:肺结核合并糖尿病患者T-SPOT.TB阳性率和血清CA125、IP-10水平升高,T-SPOT.TB联合血清CA125、IP-10能提升肺结核合并糖尿病的诊断价值.

目的:探讨幽门螺杆菌代谢物拮抗宿主先天免疫的潜在机制.方法:RNA测序及通路富集分析测定仅LPS刺激的胃黏膜细胞GES-1、LPS与幽门螺杆菌培养上清共同处理的GES-1细胞及未经处理的GES-1细胞.3KD超滤管过滤幽门螺杆菌培养上清,并以过滤的滤液(代谢物部分)和截留的溶液(蛋白部分)处理LPS刺激的GES-1细胞,检测NF-κB通路活性、NF-κB的磷酸化水平、NF-κB通路效应因子TNF-α、IL-6和IL-8的分泌水平.非靶向代谢质谱鉴定关键代谢物.结果:相较于仅LPS刺激的GES-1细胞,LPS与幽门螺杆菌培养上清共同处理后,多种基因的表达水平受到调控,并趋于未处理的GES-1细胞水平,主要存在于NF-κB通路.LPS与幽门螺杆菌培养上清共同处理后,NF-κB通路活性受到抑制(P<0.05).幽门螺杆菌代谢物能够抑制NF-κB通路活性,抑制NF-κB磷酸化,抑制NF-κB通路效应因子TNF-α、IL-6和IL-8的分泌(P<0.05).1、5和25 μmol/L的幽门螺杆菌代谢物2-D-Glucopyranose(2DG)处理后,胃黏膜细胞GES-1中NF-κB通路活性均受到抑制,NF-κB磷酸化受到抑制,NF-κB通路效应因子TNF-α、IL-6和IL-8的分泌受到抑制(P<0.05).2DG处理后,TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8、TLR9、TLR10敲除的GES-1细胞中NF-κB活性显著降低(P<0.05);而TLR1和TLR2敲除的GES-1细胞中NF-κB活性无显著变化.2DG处理后,GES-1细胞中TLR1和TLR2的相互作用均减弱.分子对接发现2DG能够与TLR2氨基酸残基R321、K347、F349结合,结合能为-12 kcal/mol.构建TLR2野生型和突变型质粒(R321K、K347R、F349A),并分别转染TLR2敲除的GES-1细胞,发现2DG处理并不能减少转染了TLR2突变型的GES-1细胞的NF-κB活性.结论:幽门螺杆菌代谢物2DG能够与TLR2相互作用,减少TLR2与TLR1异源二聚体的形成,抑制先天免疫NF-κB通路活性.

目的 选取3种海洋赤潮甲藻为研究对象,从广西涠洲岛海域来源细菌中筛选出高效溶藻的菌株,研究菌株的溶藻效果和初步作用机制,为开展赤潮的防治工作奠定基础.方法 采用细菌发酵液与甲藻共培养来测定菌株的溶藻活性,检测藻细胞中丙二醛和抗氧化相关酶系统的响应规律,分析甲藻胞外溶解性有机物组成,并通过KEGG和CAZy数据库预测目标菌株合成溶藻物质的能力.结果 从24株细菌中筛选到15株对至少一种甲藻表现出溶藻活性的菌株,总阳性率为62.5％,菌株M026对3种甲藻均表现出显著的溶藻效果.添加10％的M026发酵无菌滤液,共培养3d后,3种甲藻细胞死亡率均高达95.0％.生理生化响应表明,在M026发酵无菌滤液胁迫下,甲藻细胞膜脂过氧化损伤严重,3种抗氧化相关酶(SOD、CAT和APX)活性先增加后下降,且三维荧光光谱检测到藻细胞内溶产物为类富里酸和类蛋白类物质.通过全基因组分析,菌株M026含有溶藻活性的次级代谢产物生物合成基因,及多种降解植物细胞壁的酶.结论 菌株M026可作为微生物溶藻菌剂的候选菌株.

目的 筛选并验证主要组织相容性复合物-Ⅰ (MHC-Ⅰ)限制性结核抗原肽作为结核感染γ干扰素释放测定(IGRA)试剂在HIV感染人群结核诊断中的临床应用价值.方法 以RD区编码蛋白为候选抗原,利用计算机软件预测与HIV感染人群MHC-Ⅰ高频分子高度亲和的CD8+T淋巴细胞表位,人工合成含有CD8+T淋巴细胞表位的多肽进行体外筛选试验,用筛选所得混合多肽池为IGRA试剂,与相对分子质量为6 000的早期分泌抗原靶(ESAT-6)和相对分子质量为10 000的培养滤液蛋白(CFP-10)比较,在HIV感染人群中的灵敏度和特异度.结果 最终获得8个重叠多肽池,Rv0222176-191、Rv1980c122-138、Rv1985c105-120、Rv3425141-165、Rv3873133-151、Rv3873158-166、Rv387878 86和Rv3879c673-690,可刺激结核患者外周血CD8+T淋巴细胞产生γ干扰素,但对健康对照PBMC无刺激效应.在检测25例结核分枝杆菌合并HIV感染者血样时,由这8个重叠多肽池混合而成的IGRA刺激剂(CP)的灵敏度与rESAT 6/CFP10 (CE)的灵敏度均较低(68％比48％,x2=2.052,P=0.152),但二者共同作为IGRA刺激剂(CP+CE)时灵敏度达92％,显著高于rESAT6/CFP10(x2=11.523,P＜0.01),且不影响特异度.结论 筛选出来的含CD8表位的RD区合成肽可提高IGRA试剂盒检测HIV感染/艾滋病患者的灵敏度,进而提高该人群的结核病检出率.

目的 探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)测定抗原培养滤液蛋白10(CFP10)对于早期诊断结核性胸腔积液的临床价值.方法 选择106例结核性胸腔积液病例与40例非结核性胸腔积液病例的胸腔积液标本.建立TRFIA法检测胸腔积液中CFP10抗原,并与酶联免疫吸附法(ELISA)的检测结果比较.结果 TRFIA法对CFP10抗原的平均回收率为96.87％,标准曲线相关系数r2=0.998,平均批内变异系数(CV)与批间CV分别为2.98％及4.20％,TRFIA法检测观察组CFP10的Log浓度为(1.924±0.57) μg·L-1,对照组为(0.108±0.03) μg·L-1,两组比较差异有统计学意义(t=24.72,P＜0.01).观察组ROC曲线的AUC=0.923.取临界值为11.86μg·L-1时,灵敏度与特异度分别为95.28％与92.50％,均高于ELISA法.结论 TRFIA法测定结核性胸腔积液中CFP10蛋白具有很高的灵敏度与特异度,有利于早期诊断结核性胸腔积液.

目的 鉴定结核分枝杆菌早期分泌靶向抗原6 (ESAT-6)样蛋白esxN特异性HLA-A* 0201限制性细胞毒性T细胞(CTL)表位并用于肺结核诊断.方法 采用SYFPEITHI软件预测esxN中受HLA-A* 0201限制性的CTL表位并合成候选表位;采用主要组织相容性复合体(MHC)-肽复合物稳定性实验检测候选表位与HLA-A* 0201分子结合力;采用酶联免疫斑点实验(ELISPOT)研究候选表位在HLA-A*0201转基因小鼠中的免疫原性;基于鉴定的CTL表位、ESAT-6和培养滤液蛋白10(CFP-10),采用ELISPOT检测肺结核患者体内表位及蛋白特异性CTL的水平.结果 6条候选CTL表位中,esxN15-24(AMIRAQAASL)和esxN48-57 (VACQEFITQL)与HLA-A* 0201分子有较高结合力;候选表位免疫HLA-A* 0201转基因小鼠,esxN48-57诱导产生可分泌γ干扰素(IFN-γ)的T细胞反应;在HLA-A* 0201阳性肺结核患者中检测到esxN15-24、esxN48-57、ESAT-6、CFP-10特异性分泌IFN-γ的T细胞;esxN15-24、esxN48-57诊断肺结核的敏感率与ESAT-6、CFP-10相近.结论 从结核分枝杆菌esxN中鉴定出两条HLA-A*0201限制性CTL表位,其有望用于辅助肺结核病的诊断.

目的 对基于时间分辨荧光免疫分析技术(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)诊断结核性胸腔积液的新方法进行临床评价.方法 共收集191例疑似结核性胸腔积液标本.采用TRFIA检测胸腔积液标本中结核分枝杆菌培养滤液蛋白-10(CFP10),并与培养、涂片及T.SPOT.TB进行比较.结果 有效检测标本174例,其中100例临床综合诊断为结核性胸腔积液,74例诊断为非结核性胸腔积液.以临床综合诊断为金标准,CFP10蛋白时间分辨荧光免疫分析法(CFP10-TRFIA)检测结核性胸腔积液患者的敏感度为42％ (42/100)高于细菌学方法(P＜0.05),特异性为90.5％(67/74)优于T.SPOT.TB(P＜0.05),阳性预测值为84％(42/50),阴性预测值为53.2％ (66/124).其中24例培养阳性患者中,CFP10-TRFIA共检测出24例.结论 CFP10-TRFIA可提高结核性胸腔积液的检出率,可作为结核性胸腔积液的快速诊断工具并为临床及时治疗提供参考.

目的 探讨结核分枝杆菌早期分泌性抗原靶-6(ESAT-6)、滤液培养蛋白10(CFP-10)和脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)联合检测对结核性脑膜炎的诊断价值.方法 选取2013年1月至2015年12月在台州市第一人民医院住院的结核性脑膜炎36例(结脑组)和病毒性脑膜炎30例(非结脑组)为研究对象,用常规和生化方法检测脑脊液的细胞计数、葡萄糖、蛋白质和氯化物,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑脊液中ESAT-6、CFP-10和LAM浓度,并用SPSS 14.0软件对两组数据进行t检验.结果 结脑组脑脊液细胞计数和蛋白质浓度明显高于非结脑组,差异有统计学意义(t值分别为11.38、9.62,P＜0.05),葡萄糖和氯化物浓度明显低于非结脑组,差异均有统计学意义(t值分别为-6.90、-11.92,P＜0.05);结脑组ESAT-6、CFP-10和LAM浓度[分别为(36.50±9.14) pg/ml、(298.71±31.56) pg/ml、(8.62±2.35) mg/ml]明显高于非结脑组[分别为(7.84±0.86) pg/ml、(35.32±11.80) pg/ml、(5.13±1.74) mg/ml],差异均有统计学意义(P＜0.05);ESAT-6、CFP-10、LAM检测阳性率偏低,联合检测能提高诊断效能,其灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和约登指数分别为88.89％ 、93.33％、94.12％、87.50％和0.822 2.结论 脑脊液中ESAT-6、CFP-10和LAM联合检测对结核性脑膜炎的早期诊断具有一定的实用价值.