目的 研究灯盏花乙素对子宫内膜癌Ishikawa细胞的影响,并分析与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路的相关性.方法 将Ishikawa细胞分为空白组及低、中、高剂量实验组,分别用含0、5、10及20μmol·L-1的灯盏花乙素的完全培养基处理.用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验检测细胞活力;用平板克隆实验检克隆形成能力;用划痕及Transwell实验检测转移及侵袭能力;用流式细胞术检测凋亡;用蛋白质印迹法检测蛋白表达情况.结果 空白组和低、中、高剂量实验组48 h的细胞活力分别为(100.00±0.00)％、(78.51±7.54)％、(52.93±4.91)％和(41.62±5.33)％;克隆形成率分别为(100.00±0.00)％、(56.59±6.34)％、(35.23±4.62)％和(10.66±1.91)％;划痕愈合率分别为(53.70±6.19)％、(40.59±4.75)％、(34.25±4.40)％和(15.78±2.14)％;侵袭细胞数分别为(189.70±14.06)、(106.82±12.67)、(84.37±8.13)和(53.74±6.78)个;基质金属蛋白酶-2(MMP-2)蛋白相对表达水平分别为0.96±0.10、0.73±0.06、0.68±0.08 和0.42±0.05;MMP 抑制药-1(TIMP-1)蛋白相对表达水平分别为 0.35±0.04、0.51±0.05、0.74±0.08和 1.20±0.14;细胞凋亡率分别为(4.21±0.53)％、(15.83±2.42)％、(22.72±3.85)％和(34.41±4.67)％;B 淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平分别为 1.38±0.15、0.90±0.10、0.56±0.06 和 0.24±0.03;Bcl-2 相关 X 蛋白(Bax)表达水平分别为 0.31±0.02、0.44±0.04、0.93±0.11 和 1.26±0.14;PI3Kp85 蛋白表达水平分别为 0.67±0.05、0.42±0.04、0.36±0.02 和0.28±0.03;磷酸化 Akt(p-Akt)蛋白表达水平分别为 0.78±0.06、0.53±0.04、0.46±0.05和0.42±0.03;低、中、高剂量实验组上述指标与空白组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 灯盏花乙素可以通过调控PI3K/Akt信号通路抑制Ishikawa细胞增殖、转移及侵袭,并诱导其凋亡.

目的 评价灯盏花乙素磷脂复合物脂微球质量.方法 HPLC法测定灯盏花乙素含量,观察脂微球外观形态,测定其pH值、粒径、酸值、甲氧基苯胺值、游离脂肪酸含量、过氧化值,再进行有关物质检查.结果 灯盏花乙素在 1～128 μg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 8),加样回收率为 89.85%～97.52%,RSD为 0.35%～1.87%,3 批样品中其平均含量为(35.77±0.14)μg/g.所得脂微球呈乳白色,呈球形或类球形,pH值为 7.00～7.05,平均粒径为 160.59 nm,酸值为 0.94 mg/g,游离脂肪酸含量为 3.57 mmol/L,甲氧基苯胺值为 0.80,过氧化值为 0.45 mmol/kg,均符合相关规定.在规定条件下的破坏性试验中,未发现相关杂质产生.结论 该方法稳定可行,所制得的灯盏花乙素磷脂复合物脂微球相关指标均符合国家质量标准检查项目要求.

肺纤维化是一种慢性、进行性、不可逆的间质性肺疾病,目前尚无治疗肺纤维化的特效药.许多中药单体表现出对肺纤维化具有潜在的治疗价值,其中以黄酮类化合物为主要代表.黄芪总黄酮、灯盏花乙素等可通过干预转化生长因子-β/果蝇MAD蛋白信号通路减轻炎症细胞浸润,减轻肺损伤和细胞外基质(ECM)沉积;镰形棘豆总黄酮、红景天苷可通过介导JAK/信号转导及转录激活因子信号通路抑制肺组织炎症反应,阻止上皮间质转化(EMT)进程;槲皮素、银杏叶提取物等可通过抑制核因子κB信号通路来减少巨噬细胞凋亡,发挥抗肺纤维化作用;漆黄素、原花青素可通过磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路,促使肌成纤维细胞形态学恢复,减少ECM沉积;柚皮素、木犀草素可通过NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3信号通路抑制巨噬细胞焦亡和炎症反应,改善肺功能及肺组织损伤;余甘子醇提物、毛蕊异黄酮可通过激活核转录因子红系2相关因子2/抗氧化响应元件信号通路,改善肺组织炎症损伤和纤维化;异甘草素则可通过抑制胞外信号调节激酶信号通路阻止上皮细胞表型转化,逆转EMT进展.后续学者可考虑开发适当的药物载体,提高其生物利用度,深入研究药物的作用靶点和途径,为黄酮类中药单体走向临床实践提供依据.

目的 探讨灯盏花乙素(Scu)改善创伤性脑损伤(TBI)大鼠神经炎症的作用及机制.方法 采用改良Feeney法构建TBI大鼠模型.将成模大鼠随机分为TBI组、Scu低剂量组(40 mg/kg)、Scu高剂量组(80 mg/kg)和环鸟苷酸-腺苷酸合成酶(cGAS)抑制剂组(cGAS抑制剂RU.521,450 μg/kg),每组24只;另取24只大鼠作为假手术组.采用改良神经功能缺损评分(mNSS)法评估大鼠神经功能;以干/湿比重法测定大鼠脑含水量;以苏木素-伊红、原位末端标记染色法观察大鼠脑组织病理学变化和细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附检测法测定大鼠脑组织中β干扰素(IFN-β)、CXC趋化因子配体10(CXCL10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)含量;以Western blot法检测大鼠脑组织中cGAS/干扰素基因刺激蛋白(STING)信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与假手术组比较,TBI组大鼠的mNSS,脑含水量,脑组织细胞凋亡率,IFN-β、CXCL10、TNF-α、IL-6含量和cGAS、STING蛋白相对表达水平均显著升高(P＜0.05);脑组织存在水肿、出血、神经元病理学损伤.与TBI组比较,各给药组大鼠的上述指标及病理变化均显著改善(P＜0.05),且Scu的作用具有剂量依赖性(P＜0.05),而Scu高剂量组和cGAS抑制剂组大鼠上述指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 Scu可能通过抑制cGAS/STING信号通路激活来减轻TBI大鼠神经炎症,减少其脑组织损伤及细胞凋亡,促进其神经功能恢复.

目的 以LPS致敏的小鼠巨噬细胞J774A.1作为炎症细胞模型,研究灯盏花乙素对ATP诱导的炎症小体活化和细胞焦亡的影响及其机制.方法 利用碘化丙锭(PI)染色法检测LPS+ ATP诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞发生细胞焦亡的情况;免疫印迹法检测细胞裂解液和上清中IL-1β、caspase-1、HMGB1等蛋白的表达水平;基于微珠的免疫测定法(CBA)检测细胞上清中IL-1β的分泌水平.结果 ATP能够明显诱导LPS致敏的J774A.1巨噬细胞中caspase-1活化、成熟IL-1β(17 ku)和HMGB1释放至培养上清中,并诱导细胞焦亡;而灯盏花乙素预处理能够剂量依赖性地抑制ATP诱导的caspase-1活化以及成熟IL-1β、HMGB1的释放,并抑制细胞焦亡;同时,经腺苷酸环化酶抑制剂MDL12330A和蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89处理,可以逆转灯盏花乙素对ATP诱导的细胞焦亡的抑制作用.结论 灯盏花乙素通过调节PKA活性,抑制NLRP3炎症小体的活化与细胞焦亡,从而发挥抗炎作用.

目的 探讨灯盏花乙素(scutellarin,SCU)对正常及缺氧再给氧(hypoxia reoxygenation,HR)处理时人心脏微血管内皮细胞(human cardiac microvascular endothelial cells,HCMECs)中PKCε蛋白及mRNA表达的调控作用.方法 以正常与缺氧再给氧2种方式培养HCMECs,实验分组为:在正常培养实验中分为正常对照(Control)组、SCU (0.1 μM,1μM,10 μM)3种剂量组;HR培养实验中分为Control组、Model (HR)组、HR处理的SCU(0.1 μM, 1μM, 10 μM)3种剂量组.分别以Western blot与RT-PCR方法检测HCMECs中p-PKCε与PKCε蛋白与mRNA表达的变化.结果 在正常培养的HCMECs中,SCU (0.1 μM,lμM, 10μM)剂量组均可显著上调PKC ε的蛋白及mRNA的表达(P＜0.05),对p-PKCε也有上调趋势;在HR培养的细胞实验中,Model组PKC￡有下调趋势,而SCU 10 μM组可显著上调PKC￡的蛋白及mRNA的表达(P＜0.05),并且SCU 10 μM亦可显著上调p-PKC￡(P＜0.05).结论 SCU对正常及HR处理时HCMECs中PKC ε蛋白及mRNA的表达有明显的上调作用.

采用密度泛函理论B3LYP方法对灯盏花乙素及其苷元分子进行几何结构全优化,获得两个化合物的最低能量结构.从分子的几何结构、NBO电荷、酚羟基解离能BDE、绝热电离势IP和前线分子轨道等方面分析了两个化合物的结构与抗氧化活性之间的关系.计算结果表明,C6位的酚羟基为灯盏花乙素及其苷元的最大反应活性位点,灯盏花乙素的抗氧化活性弱于其苷元的抗氧化活性,计算结果与实验结果吻合.天然的糖苷类物质水解为苷元后,其抗氧化活性增强.此外,还考虑了溶剂效应,考察溶剂极性对抗氧化活性的影响.在所有环境中,抽氢反应机制是化合物自由基清除反应的最主要机制.

缺血性心脑血管疾病是由于高脂血症、血液黏稠、动脉粥样硬化、高血压等导致心脏、大脑及全身组织发生的缺血性心血管和脑血管疾病.灯盏花乙素具有舒张血管、降低血管张力、增加脑血流量、改善微循环和抗血小板聚集等多种药理作用,在临床已广泛治疗各种心脑血管疾病,现综述灯盏花乙素防治缺血性心脑血管疾病的分子机制.

黄酮类化合物灯盏花乙素(scutellarin,SCU)为我国传统中药灯盏花的主要活性成分,其副作用小,安全性高,在临床中广泛应用于中风后遗症,冠心痛,心绞痛,以及防治其它类型的缺血性心脑血管疾病.现代药理学研究表明,SCU等黄酮类化合物具有多靶点的药理作用特点,但其靶点相关分子作用机制并不清楚.近年来基于生物信息技术发展起来的网络药理学,适用于研究多靶点药物作用机制,可以预测药物作用靶点,构建药物-靶点-疾病的相互作用网络,为后续的实验研究提供线索和新思路.本文对近年来采用网络药理学方法,研究探讨黄酮类化合物以及SCU网络药理学机制的研究进行综述,为SCU及其他黄酮类化合物后续的分子机制研究提供思路和参考.

认知功能障碍相关疾病的防治对延缓阿尔茨海默病(alzheimer'disease,AD)即老年性痴呆的发生发展至关重要,但由于其病因复杂,目前仍缺乏有效的治疗手段.灯盏花乙素(又名野黄芩苷)是中药灯盏细辛的主要有效成分,已有研究表明灯盏花乙素对认知障碍相关疾病具有较好的治疗作用和广泛的应用前景.本文详细综述了近5年来灯盏花乙素治疗认知障碍相关疾病的疗效及其作用机制l,包括改善认知功能损伤,减轻β淀粉样蛋白(Amyloid beta protein,Aβ)毒性,改善脑组织能量代谢,抑制炎症反应,改善中枢胆碱能系统、抗氧化、活化星形胶质细胞,调节神经递质含量与神经信息传递,促进神经细胞分化,抗神经细胞凋亡等方面,以期为灯盏花乙素防治认知障碍相关疾病的实验研究与临床应用提供理论依据和参考.