目的:探讨野黄芩素通过miRNA-496（miR-496）、基质细胞衍生因子1（SDF-1）对子宫颈癌细胞株HCC94细胞增殖及迁移能力的影响。方法:取对数生长期的HCC94细胞，分别加入20 μmol/L野黄芩素溶液（野黄芩素组）和二甲基亚砜（DMSO）（对照组）。分别采用CCK-8法和Transwell实验检测两组HCC94细胞增殖和迁移能力，实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测miR-496和SDF-1 mRNA的相对表达量。采用生物信息学软件TarBase预测miR-496的靶基因，并用双荧光素酶报告基因实验进行验证。采用蛋白质印迹法检测相关蛋白的表达情况。结果:与对照组比较，培养第3、4、5天，野黄芩素组HCC94细胞增殖能力均降低（均 P<0.05）。野黄芩素组和对照组HCC94细胞的穿胶细胞数分别为（25±5）个和（134±19）个，野黄芩素组细胞迁移能力较对照组降低（ t=5.61， P<0.01）。对照组和野黄芩素组miR-496相对表达量分别为1.07±0.12和11.24±2.75，差异有统计学意义（ t=3.68， P<0.01）。双荧光素酶报告基因实验结果证实SDF-1是miR-496的下游靶基因。野黄芩素组和对照组HCC94细胞中SDF-1 mRNA相对表达量分别为0.29±0.05和1.01±0.07，差异有统计学意义（ t=7.22， P<0.01）。与对照组比较，野黄芩素促进miR-496表达后，SDF-1蛋白、细胞增殖蛋白细胞周期蛋白依赖激酶3（CDK3）、细胞迁移蛋白Slug和Zeb-2表达均降低。 结论:野黄芩素可通过miR-496-SDF-1轴抑制子宫颈癌HCC94细胞的增殖及迁移。

目的:探讨野黄芩苷（Scu）对脓毒症相关性急性肾损伤（SA-AKI）的保护作用及其机制。方法:①体内实验：将36只雄性C57BL/6小鼠按随机数字表法分为生理盐水（NS）对照组、脂多糖（LPS）致SA-AKI模型组（LPS组）、20 mg/kg Scu对照组（Scu 20对照组）及5、10、20 mg/kg Scu预处理组，每组6只。腹腔注射10 mg/kg LPS制备SA-AKI小鼠模型；NS对照组给予等量NS；Scu预处理组于注射LPS前腹腔注射不同剂量Scu，每日1次、持续1周；Scu 20对照组仅给予20 mg/kg Scu，持续1周。各组于LPS处理24 h后处死小鼠取肾脏，观察肾组织损伤情况；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测核转录因子-κB（NF-κB）信号通路相关分子、凋亡相关蛋白及富含半胱氨酸蛋白61-结缔组织生长因子-肾母细胞瘤过表达基因1（CCN1）的蛋白表达。②体外实验：体外培养人肾小管上皮细胞株HK-2，待细胞融合至80%时用于实验。在未经LPS处理和经过100 g/L的LPS处理后的细胞中，分别转染pcDNA3.1-CCN1过表达CCN1或小干扰RNA（siRNA）抑制CCN1表达，观察CCN1是否参与了NF-κB信号通路激活和细胞凋亡；同时在转染和未转染CCN1 siRNA的HK-2细胞中加入100 g/L的LPS及20 μmol/L的Scu，观察Scu对LPS诱导HK-2细胞损伤保护作用的机制。结果:①体内实验结果：LPS诱导SA-AKI小鼠肾功能显著下降，肾小管严重受损；Scu可呈剂量依赖性缓解肾功能及组织学损伤。Western blotting条带分析进一步证实，Scu预处理可呈剂量依赖性降低AKI小鼠肾组织中NF-κB信号通路相关分子及CCN1的蛋白表达，并对细胞凋亡具有显著的缓解作用，说明CCN1参与了NF-κB信号通路激活和细胞凋亡。②体外实验结果：在未经LPS处理的HK-2细胞中，过表达CCN1对凋亡相关蛋白及NF-κB信号通路促炎因子表达无显著影响。而在经过LPS处理的HK-2细胞中，过表达CCN1可显著抑制促炎因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的mRNA表达，与单纯LPS刺激细胞比较差异有统计学意义〔IL-1β mRNA（2 -ΔΔCT）：3.20±0.57比4.88±0.69，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCT）：2.99±0.44比5.00±0.81，MCP-1 mRNA（2 -ΔΔCT）：2.81±0.50比5.41±0.75，均 P<0.05〕，并使凋亡相关蛋白显著下调；当用siRNA抑制CCN1表达时，促炎因子的mRNA表达则较单纯LPS刺激细胞上调〔IL-1β mRNA（2 -ΔΔCT）：6.01±1.13比4.88±0.69，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCT）：5.15±0.86比5.00±0.81，均 P<0.05〕，同时凋亡相关蛋白显著上调。在LPS诱导的细胞模型中，经过Scu处理后HK-2细胞中促炎因子的mRNA表达显著下调，与单纯LPS刺激细胞比较差异有统计学意义〔IL-1β mRNA（2 -ΔΔCT）：2.55±0.50比6.15±1.04，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCT）：2.58±0.40比3.95±0.52，MCP-1 mRNA（2 -ΔΔCT）：2.64±0.44比6.21±0.96，均 P<0.05〕，而且凋亡相关蛋白显著下调；当用siRNA抑制CCN1表达时，则削弱了Scu对细胞的保护作用，表现为细胞中促炎因子的mRNA表达较未抑制CCN1表达的细胞显著上调〔IL-1β mRNA（2 -ΔΔCT）：5.34±0.76比2.55±0.50，TNF-α mRNA（2 -ΔΔCT）：3.66±0.54比2.58±0.40，MCP-1 mRNA（2 -ΔΔCT）：5.15±0.79比2.64±0.44，均 P<0.05〕，且凋亡相关蛋白表达亦显著上调。 结论:Scu能保护SA-AKI小鼠的肾功能，该保护作用与NF-κB信号通路和CCN1有关；Scu可能通过CCN1调节NF-κB信号通路以减轻LPS诱导的肾损伤。

目的 建立一测多评法同时测定止得咳颗粒中黄芩苷、射干苷、野鸢尾苷、汉黄芩苷、黄芩素、次野鸢尾黄素及汉黄芩素的含量.方法 采用henomenex Kinetex XB-C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5 μm),柱温25℃;流动相为甲醇(A)-0.2％磷酸(B),梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1,检测波长为270 nm,以黄芩苷为内参物,建立射干苷、野鸢尾苷、汉黄芩苷、黄芩素、次野鸢尾黄素和汉黄芩素的相对校正因子,并考察相对校正因子的耐用性.比较外标法和一测多评法对止得咳颗粒中7种成分含量的测定结果.结果 7种成分分别在0.239 0～1.195 0 mg,0.006 0～0.030 2 mg,0.016 0～0.080 0 mg,0.032 6～0.163 0 mg,0.005 5～0.027 6 mg,0.002 9～0.014 3 mg 和 0.003 6～0.017 8 mg 范围内有良好线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率(RSD)分别为 97.11％(0.94％)、97.87％(1.33％)、97.44％(1.34％)、97.85％(0.89％)、97.24％(1.16％)、101.90％(2.24％)和 99.46％(0.71％),一测多评法测定结果与外标法测定结果无显著性差异.结论 方法稳定可靠,可用于止得咳颗粒的质量控制.

目的 优化参莲草颗粒成型工艺,并建立其理化指纹图谱.方法 湿法制粒后单因素试验筛选辅料,PB试验筛选潜在关键工艺参数.以辅(糊精)药比、乙醇体积分数、润湿剂(乙醇)用量为影响因素,成型率、吸湿率、休止角、溶化率的综合评分为评价指标,Box-Behnken 试验结合AHP-CRITIC混合加权法优化成型工艺.采用物理指纹图谱、HPLC指纹图谱评价不同批次样品的质量一致性,并进行化学模式识别.结果 最佳条件辅药比 0.98∶1,乙醇体积分数 84%,润湿剂用量 28%,在 70℃下干燥 60 min,综合评分为95.18 分.10 批样品物理指纹图谱相似度均大于 0.95;HPLC指纹图谱中有 18 个共有峰,相似度均大于 0.95.各批样品聚为 3 类,野黄芩苷、去乙酰基车叶草苷酸甲酯、木犀草素、芦丁、去乙酰基车叶草苷酸为关键质量差异物.结论 该方法稳定可行,可用于评价参莲草颗粒的质量一致性,为该制剂质量标准研究奠定基础,也为同类中药制剂相关研究提供思路.

目的 基于血清药理学和网络药理学探究清感童饮的体外抗炎作用.方法 采用血清药理学评价方法,验证清感童饮含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)释放一氧化氮(NO)、细胞坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素 6(IL-6)的影响.利用液质联用(UHPLC-MS/MS)技术对清感童饮指标性成分进行含量测定,并根据这些成分进行网络药理学分析,对清感童饮有效成分发挥抗炎作用的潜在靶点及作用通路进行预测.结果 细胞实验证明清感童饮可明显降低NO、TNF-α、IL-6 水平(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001).清感童饮中含量较高的成分为连翘酯苷A、牛蒡苷、绿原酸、野黄芩苷、没食子酸、迷迭香酸、芍药内酯苷、连翘苷.清感童饮中 17 个活性成分与炎症的交集靶点共 215 个,主要涉及ALB、VEGFA、IL-6、TNF-α等 31 个核心靶点,调节AGE-RAGE、PI3K-Akt、MAPK信号通路等多种通路发挥抗炎作用.结论 清感童饮具有多成分-多靶点发挥抗炎作用的特点.

黄芩提取物是舒肝宁注射液中重要的组分之一.该研究建立了一种超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定舒肝宁注射液及方中黄芩提取物的5种成分在大鼠胆汁、尿液和粪便中含量的方法,揭示舒肝宁注射液与单味黄芩提取物在大鼠体内的排泄过程差异,探讨黄苓配伍前后5种成分的体内排泄过程规律.大鼠分别尾静脉注射4.2 mL·kg-1的舒肝宁注射液和黄芩提取物,观察48 h内大鼠胆汁、尿液和粪便中黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、千层纸素A-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷和野黄芩苷的动态排泄情况.结果显示,大鼠静脉注射舒肝宁注射液和黄芩提取物后,除黄芩苷外,其余4种指标成分均以较高的比例以原型成分排泄.各成分在尿液中排泄量较大,在粪便和胆汁中的排泄量较少.黄芩提取物经配伍后,5种指标成分在大鼠体内的累积排泄量均降低.其中,黄苓素在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了26.67％、48.11％、31.01％;黄芩苷在胆汁、尿液和粪便的累积排泄量显著降低了70.69％、19.43％、31.22％.研究表明,黄芩提取物中的5种指标成分主要经肾脏排泄,且注射液中其他组分可能会延缓其排泄过程,延长在体内的滞留时间.该研究对阐明舒肝宁注射液配伍合理性具有重要的意义.

目的:评价汉黄芩素对低氧诱导的肺动脉高压(HPH)的保护作用及其相关分子机制.方法:在体内采用成年雄性野生型C57BL/6小鼠建立HPH模型,将小鼠随机分为3组:对照组(N)、低氧(H+Saline)组、低氧+汉黄芩素(H+w)组.造模3周后,使用压力传感器系统采集小鼠血流动力学指标;肺小动脉管壁直径/管总直径(WT/TT)、肺小动脉管壁面积/管总面积(WA/TA)来评估肺动脉结构重塑;基于网络药理学方法筛选汉黄芩素作用于HPH潜在靶点及分子信号通路.在体外采用小鼠肺动脉平滑肌细胞(MPASMCs),将细胞分为5组:常氧(N)组、低氧(H+PBS)组、低氧+低剂量汉黄芩素(H+40 μmol/L w)组、低氧+高剂量汉黄芩素(H+80 μmol/L w)组、低氧+高剂量汉黄芩素+740Y-P(H+80 μmol/L w+740Y-P)组.N组在常氧(5%CO2,21%O2,74%N2,37℃)环境中培养48 h,H+PBS、H+40 μmol/L w、H+80 μmol/L w、H+80 μmol/L w+740Y-P组在低氧(5%CO2,3%O2,92%N2,37℃)环境中培养48 h.通过CCK-8、EdU法检测评估细胞增殖能力,Transwell和伤口愈合/划痕实验用于检测评估细胞迁移能力,Western blot检测PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路的主要蛋白(P-PI3K、PI3K、P-AKT、AKT、RXRA、Bcl-2)的表达,并利用PI3K通路激活剂740Y-P进行功能回补实验;RT-qPCR检测汉黄芩素对miR-451表达水平的影响,Western blot检测汉黄芩素对PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2通路上游调控因子CAB39和MIF表达的影响.结果:与对照组相比,低氧组MPASMCs的增殖、迁移能力以及小鼠右心室压力(RVSP)显著增加(P＜0.05),肺动脉结构发生显著重构,经汉黄芩素干预后MPASMCs的增殖、迁移能力以及小鼠RVSP显著下降(P＜0.05),肺动脉结构重塑得到显著改善.与对照组相比,低氧组中PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、RXRA、Bcl-2表达显著升高;与低氧组相比,汉黄芩素干预组中PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路相关的蛋白表达水平显著下调(P＜0.05);功能回补实验证实在缺氧条件下,激活PI3K通路能够显著削弱汉黄芩素对MPASMCs增殖抑制效应.与对照组相比,低氧组中CAB39和MIF表达水平显著上升,miR-451表达水平显著减少(P＜0.05);与低氧组相比,汉黄芩素干预组中CAB39和MIF表达水平显著下降,miR-451表达水平显著上升(P＜0.05);miR-451 inhibitor干预能够部分逆转汉黄芩素对MPASMCs增殖和迁移能力的抑制效应(P＜0.05).结论:汉黄芩素可能通过上调miR-451的表达靶向调控CAB39和MIF进而抑制PI3K/AKT/RXRA/Bcl-2信号通路,抑制低氧诱导的MPASMCs的增殖和迁移、改善HPH小鼠右心室压力和肺动脉结构重塑,最终缓解肺动脉高压.

目的:基于"优形优质"探究不同栽培方式对党参品质的影响,为优质党参生态种植模式研究提供参考.方法:测量党参外观性状指标,测定水分、醇溶性浸出物含量,HPLC测定党参样品紫丁香苷、党参苷Ⅰ、党参炔苷及苍术内酯Ⅲ的含量,HPGPC测定党参果聚糖含量.结果:普通、搭架、套种和仿野生 4 种不同栽培方式中,套种与仿野生栽培有利于党参芦下直径粗、皮部宽度、芦头直径和干重的形成.搭架、仿野生栽培的党参木部色泽偏黄色、皮部色泽偏黄棕色.搭架和套种栽培的药材紫丁香苷和党参苷Ⅰ含量显著高于普通和仿野生栽培.套种栽培的药材党参炔苷含量最高(0.5459 mg/g),显著高于其他栽培方式,搭架栽培的药材党参炔苷含量最低(0.2940 mg/g).苍术内酯Ⅲ含量在仿野生栽培药材中最高(0.1526 mg/g),显著高于其他栽培方式.4 种栽培方式下党参的水分(≤16%)、浸出物(≥55%)均符合药典标准,仿野生栽培党参含水量为 7.80%,显著低于其他栽培方式.普通栽培的党参果聚糖含量最高(38.66%),搭架栽培党参含量最低(16.66%).党参色泽越深,含水量越高,党参果聚糖含量与色泽的明亮度L?呈正相关(P<0.01).结论:综合考虑党参性状和指标成分、管理成本和土地资源等多种因素,党参-黄芩套种和仿野生栽培为较高效的党参种植模式,具有推广种植前景,为党参药材合理栽培和资源开发利用提供参考依据.

目的 应用黄芩茎叶葡萄糖醛酸水解酶(Scutellaria baicalensis stems and leaves glucuronic hydrolase,sbsl GUS)酶解灯盏花中野黄芩苷制备野黄芩素,经分离纯化获得高纯度的野黄芩素提取物.方法 采用正交试验优选灯盏花提取工艺参数;以野黄芩苷酶解转化率为指标,对酶用量、酶解pH值、温度、时间、抗氧化剂等进行考察,优选野黄芩素制备工艺参数;采用乙醇提取、活性炭脱色和分步结晶精制纯化粗提物.结果 灯盏花提取工艺为灯盏花切段,加 10 倍水煎煮提取 2 次,每次 1h.野黄芩素制备工艺为sbsl GUS提取液和灯盏花水煎液加入量(以生药计)比为 1∶10,加 0.5%偏重亚硫酸钠,酶解pH值约 6.0,温度约 45℃,时间20 h,得到含量大于 60%的野黄芩素粗提物.经分步结晶对粗提物进行纯化,用 80%乙醇回流提取,活性炭脱色,浓缩、析晶,得到含量大于 85%的野黄芩素提取物.结论 该工艺应用sbsl GUS酶解技术制备野黄芩素,生产简便可行,为野黄芩素的生产制备提供了新的途径.

目的 基于指纹图谱和网络药理学方法,分析预测加味四逆散(Jiawei Sini Powder,JSP)(颗粒)潜在的质量标志物(quality markers,Q-Marker),并对Q-Marker成分进行含量测定,为其质量控制提供参考.方法 采用HPLC指纹图谱结合化学计量学分析JSP(颗粒)潜在Q-Marker.通过网络药理学构建物质-效应网络,进一步分析预测JSP(颗粒)药效关联的Q-Marker,并建立对预测得到的标志性成分进行含量测定的HPLC方法.结果 建立了 JSP(颗粒)的HPLC指纹图谱,标记28个共有峰,对其进行峰归属,其中1、9、11号峰来自白芍,26、27号峰来自枳实,13、28号峰来自炙甘草,2、4、10、12、16、24号峰来自代代花,15、17、22号峰来自半枝莲,25号峰来自白芍和炙甘草共有,3、5～8、14、18～21、23号峰来自枳实和代代花共有,并指认了其中的9个共有峰,分别为芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、野黄芩苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、柚皮素、甘草酸铵.相似度评价显示,10批JSP(颗粒)样品的相似度为0.954～1.000.主成分分析(principal component analysis,PCA)显示前4个主成分的累积方差贡献率为95.003％,正交偏最小二乘-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis,OPLS-DA)显示有 12 个成分变量重要性投影(variable importance projection,VIP)值较大.采用网络药理学的方法分析得出芍药内酯苷、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷5个成分可能为JSP(颗粒)潜在的Q-Marker.同时测定以上5个成分的含量,方法学考察结果良好,平均加样回收率为92.52％～96.48％,RSD为1.3％～2.6％.10批样品中芍药内酯苷、芍药苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的质量分数分别为0.107 6～0.203 6、0.475 9～1.204 6、2.310 9～5.223 8、0.410 3～0.796 8、4.311 9～8.343 3 mg/g.结论 建立了 JSP(颗粒)的HPLC指纹图谱,并结合网络药理学预测出5个Q-Marker成分及建立其定量测定方法,为JSP(颗粒)研制成古代经典名方中药复方制剂提供质量控制依据.