目的:探讨不同时间迷走神经电刺激（vagus nerve stimulation，VNS）对心脏骤停（cardiac arrest，CA）/心肺复苏（cardiopulmonary resuscitation，CPR）后大鼠预后的影响。方法:采用改良经皮心外膜电刺激诱导心室颤动方法建立大鼠CA模型。53只雄性SD大鼠随机（随机数字法）分成假手术组（SHAM， n=5）、CPR组（ n=12）和VNS组（ n=36）。SHAM组不经历CA/CPR；VNS治疗分别设置在CA前30 min（PRE组， n=12）、自主循环恢复（recovery of spontaneous circulation，ROSC）后5 min（POST5组， n=12）以及ROSC后30 min（POST30组， n=12），以统一的刺激参数给予迷走神经电刺激30 min。观察大鼠ROSC后24、48、72 h的神经功能缺损评分和72 h生存率。采用TUNEL染色检测ROSC后72 h的大鼠脑组织皮质区细胞凋亡情况，采用免疫荧光检测α7烟碱型乙酰胆碱受体（α7 subunit-containing nicotinic acetylcholine receptor，α7nAChR）的表达。计量资料组间比较采用单因素方差分析，生存率采用Kaplan-Meier分析和Log-rank检验。以 P<0.05为差异有统计学意义。 结果:与CPR组（生存率为33.33%）相比，CA前VNS处理（PRE，生存率为75%）和CA后VNS处理（POST5组生存率75%；POST30组生存率83.33%）均可显著提高大鼠CPR后72 h生存率（ P <0.05），降低ROSC后的神经功能缺损评分，降低脑皮质细胞凋亡阳性率，而VNS各处理组间差异无统计学意义（ P>0.05）。VNS处理后脑皮质α7nAChR的表达较CPR组增加。 结论:CA前和ROSC后5 min和30 min给予VNS处理均对CA/CPR大鼠具有脑保护的作用，其机制可能与激活α7nAChR介导的抗炎与抗凋亡效应有关。

目的:观察烟碱型胆碱受体α5（CHRNA5）在前列腺癌中的表达及对前列腺癌DU145细胞恶性转移的影响。方法:前列腺癌组织及癌旁正常前列腺组织取自2022年1月至2023年10月于天津医科大学总医院接受手术治疗的15例前列腺腺癌患者。免疫组织化学实验检测前列腺癌癌组织以及癌旁正常前列腺组织CHRNA5的表达水平；将前列腺癌细胞系DU145细胞分为3个实验组：si CHRNA5组、si NC组以及Yes相关蛋白1/PDZ结合域的转录共刺激因子（YAP1/TAZ）抑制剂组。通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测DU145细胞的增殖能力；通过Transwell实验分析DU145细胞的侵袭能力；通过细胞划痕实验分析DU145细胞的迁移能力；通过流式细胞术分析DU145细胞的凋亡率；通过蛋白免疫印迹检测YAP1/TAZ信号通路以及CHRNA5蛋白的表达水平。两组间比较采用独立样本 t检验。 结果:前列腺癌组织CHRNA5的表达水平高于癌旁正常前列腺组织（0.28±0.07比0.89±0.08， t＝12.178， P<0.05）。si CHRNA5以及YAP1/TAZ抑制剂组的DU145细胞增殖能力低于si NC组（1.72±0.06比0.83±0.01比0.81±0.05， F＝11.369， P<0.05）；si CHRNA5以及YAP1/TAZ抑制剂组的DU145细胞侵袭数低于si NC组（139.19±10.76比83.89±9.36比79.93±8.25， F＝21.328， P<0.05）；si CHRNA5以及YAP1/TAZ抑制剂组的DU145细胞迁移率低于si NC组[（88.65±6.06）%比（55.86±5.33）%比（56.23±3.88）%， F＝20.162， P<0.05]；si CHRNA5以及YAP1/TAZ抑制剂组的DU145细胞凋亡率高于si NC组[（3.16±0.36）%比（12.62±0.25）%比（13.26±0.17）%， F＝13.179， P<0.05]；si CHRNA5以及YAP1/TAZ抑制剂组的DU145细胞YAP1、TAZ蛋白水平低于si NC组（0.81±0.12比0.32±0.15比0.28±0.09， F＝15.782， P<0.05；0.79±0.12比0.18±0.09比0.22±0.06， F＝17.336， P<0.05）；pcDNA3.1 CHRNA5组DU145细胞的YAP1、TAZ蛋白表达水平高于pcDNA3.1 NC组（0.32±0.06比0.78±0.03， t＝11.569， P<0.05；0.26±0.07比0.72±0.03， t＝16.238， P<0.05）。 结论:CHRNA5在前列腺癌组织中高表达，CHRNA5能够通过激活YAP1/TAZ通路促进前列腺癌DU145细胞的增殖、迁移以及侵袭。

目的:探讨迷走神经电刺激(VNS)对创伤性脑损伤(TBI)大鼠行为学及α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nAChR)、炎性因子表达的影响。方法:72只雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、TBI组、VNS组，每组24只。后2组大鼠采用改良式自由落体法制备成中度TBI模型(假手术组暴露硬脑膜但不撞击)，且VNS组造模后连续14 d给予VNS(频率30 Hz、脉宽100 μs、电流0.8 mA、刺激5 min、停止5 min，反复进行3次)。造模后第1、3、7、14、21、28天采用平衡木平衡及行走实验评估各组大鼠的神经功能；造模后第24~28天采用水迷宫实验评估各组大鼠的空间学习记忆能力；造模后第28天取各组大鼠的脑组织切片计算脑损伤灶体积；造模后第14天采用Nissel染色观察各组大鼠脑损伤区周围的神经元形态及生存情况，免疫组化染色观察海马齿状回及CA3区的神经核抗原(NeuN)阳性神经元数量，酶联免疫吸附法检测炎性因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、核因子-κB(NF-κB)的表达水平；造模后第3、7、14天采用Western blotting法检测各组大鼠脑损伤区中α7 nAChR蛋白的表达水平。结果:与TBI组比较，VNS组造模后第7、14、21、28天的平衡木平衡时间明显延长，平衡木行走时间明显缩短；造模后第27、28天的逃避潜伏期明显缩短，目标象限探索时间明显延长；造模后第28天的脑损伤体积明显减小；造模后第14天的脑损伤区周围Nissel染色阳性神经元数量明显增多，海马齿状回及CA3区NeuN阳性神经元数量明显增多，IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB表达水平明显降低；造模后第7、14天的脑损伤区中α7 nAChR蛋白表达水平明显升高，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:VNS能够促进TBI大鼠的行为学恢复，其机制与上调α7 nAChR蛋白表达，降低炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α、NF-κB释放有关。

目的:探讨激活α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor，α7nAChR)对创伤性脑损伤(traumatic brain injury，TBI)大鼠认知功能及海马小胶质细胞极化的影响。方法:取36只6～8周雄性SD大鼠，按照随机数字表法分为假手术对照组(Sham组)( n＝12)、TBI组( n＝12)、TBI＋α7nAChR激动剂组( n＝6)、TBI＋α7nAChR拮抗剂组( n＝6)。通过"自由落体撞击"建立TBI模型，造模后第4～6天，TBI＋α7nAChR激动剂组大鼠腹腔注射α7nAChR激动剂PNU-282987(3 mg/kg)，TBI＋α7nAChR拮抗剂组大鼠先腹腔注射α7nAChR拮抗剂甲基牛扁亭柠檬酸盐(5 mg/kg)，45 min后再注射α7nAChR激动剂PNU-282987 (3 mg/kg)，TBI组和Sham组大鼠腹腔注射等体积0.9%氯化钠溶液。采用Morris水迷宫实验评估大鼠的学习记忆功能，采用免疫荧光染色观察小胶质细胞标记蛋白离子钙结合接头蛋白1(ionized calcium binding adaptor molecule 1，Iba-1)及M2型小胶质细胞标志物精氨酸酶1(arginase 1，Arg-1)，采用Western blot检测海马组织Arg-1水平。使用GraphPad Prism 9软件进行统计分析。两组间比较采用独立样本 t检验，多组间比较采用单因素方差分析，采用Tukey进行多重检验。 结果:水迷宫结果显示，造模后第7天，4组大鼠的逃避潜伏期差异有统计学意义( F＝6.134， P<0.05)，TBI组和TBI＋α7nAChR拮抗剂组大鼠逃避潜伏期差异无统计学意义( P>0.05)，但均高于Sham组(均 P<0.05)，TBI＋α7nAChR激动剂组大鼠逃避潜伏期[(31.87±9.01)s]短于TBI组[(56.75±2.62)s]和TBI＋α7nAChR拮抗剂组[(60.00±0.00)s)](均 P<0.05)。免疫荧光染色结果显示，4组大鼠Arg-1 ＋/Iba-1 ＋荧光强度和Arg-1 ＋/Iba-1 ＋细胞数均差异有统计学意义( F＝17.37，9.33，均 P<0.05)。TBI＋α7nAChR激动剂组大鼠Arg-1 ＋/Iba-1 ＋细胞免疫荧光强度(0.27±0.03)和细胞数[(21.67±4.41)个]均高于TBI组[(0.14±0.03)，(11.33±2.60)个]和TBI＋α7nAChR拮抗剂组[(0.10±0.03)，(7.67±1.20)个](均 P<0.05)。Western blot结果显示，4组大鼠海马组织Arg-1蛋白表达水平差异有统计学意义( F＝8.323， P＝0.001)。TBI组和TBI＋α7nAChR拮抗剂组大鼠Arg-1蛋白表达差异无统计学意义( P>0.05)；TBI＋α7nAChR激动剂组大鼠Arg-1蛋白表达(1.06±0.22)高于TBI组(0.60±0.13)和TBI＋α7nAChR拮抗剂组(0.35±0.10)(均 P<0.05)。 结论:激活α7nAChR能够促进大鼠海马组织中M2型小胶质细胞表达，并改善TBI大鼠的学习记忆功能。

目的 探讨α5-烟碱型乙醜胆碱受体(alpha5-nicotinic acetylcholine receptor,α5-nAChR)与主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(major histocompatibility complex class Ⅰ molecule,MHC-Ⅰ)在肺腺癌中的表达及相关性.方法 TC-GA数据库分析CHRNA5(编码α5-nAChR基因)与HLA-B(编码MHC-Ⅰ基因)在肺腺癌中的表达、相关性及其临床意义.运用免疫组织化学技术检测人肺腺癌临床样本、裸鼠肺腺癌异种移植瘤组织中α5-nAChR与MHC-Ⅰ的表达及相关性.在人A549细胞、小鼠LLC细胞中,Western blotting检测在α5-nAChR不同表达水平下的FHIT与MHC-Ⅰ表达及相关性.结果 数据库分析表明,CHRNA5高表达或HLA-B低表达肺腺癌患者的生存率降低,CHRNA5与HLA-B的表达呈负相关(P＜0.05).α5-nAChR与MHC-Ⅰ在人肺腺癌、裸鼠肺腺癌异种移植物中的表达呈负相关(P＜0.05).在肺腺癌细胞中,α5-nAChR的表达分别与FHIT、MHC-Ⅰ的表达呈负相关(P＜0.05),FHIT和MHC-Ⅰ在肺腺癌细胞中的表达呈正相关(P＜0.05).结论 α5-nAChR与MHC-Ⅰ的表达呈负相关,并参与肺腺癌的发生.

目的 探讨α7亚基N型乙酰胆碱受体(α7nAchRs)激动剂烟碱对小鼠中枢神经炎症和认知行为的改善作用及其机制.方法 取雌性C57BL/6J小鼠60只,采用随机数字表法分为正常组、模型组、烟碱组、甲基牛扁亭柠檬酸盐(MLA)组,每组各15只.模型组、烟碱组和MLA组腹腔注射多聚肌苷酸—多聚胞苷酸[Poly(I∶C)]12 mg/kg制备中枢神经炎症模型,正常组腹腔注射等量生理盐水.烟碱组于造模前30 min腹腔注射烟碱1 mg/kg;MLA组于造模前1 h腹腔注射α7nAchR拮抗剂MLA 5 mg/kg,造模前30 min腹腔注射烟碱1 mg/kg;模型组和正常对照组在同一时间点注射等量生理盐水.造模后3 h,采用水迷宫实验观察小鼠空间学习记忆能力,记录小鼠穿越原平台次数和逃避潜伏期;采用旷场实验观察小鼠自主运动能力,记录小鼠平均运动速度和运动距离;小鼠处死,取脑组织,采用免疫组化法观察海马及前额叶小胶质细胞激活度,评价中枢神经炎症改变程度;采用qPCR法检测脑组织炎症因子IL-6、TNF-α、INF-β、INF-α、IL-1β mRNA,Western blotting法检测脑组织NF-κB p65蛋白磷酸化水平.结果 与正常组比较,模型组水迷宫实验潜伏期延长、穿越平台次数减少,旷场实验平均运动速度和运动距离减少,海马及前额叶小胶质细胞激活度增加,脑组织IL-6、TNF-α、INF-β、INF-α、IL-1β表达增加,脑组织NF-κB p65磷酸化水平增加(P均<0.05);与模型组比较,烟碱组水迷宫检测示潜伏期延长并穿越平台次数增加,旷场实验示平均运动速度以及运动距离均增加,海马及前额叶小胶质细胞激活度降低,脑组织IL-6、TNF-α、INF-β、INF-α、IL-1β表达降低,脑组织NF-κB p65磷酸化水平降低(P均<0.05);与烟碱组比较,MLA组水迷宫检测示潜伏期延长并穿越平台次数减少,旷场实验示平均运动速度以及运动距离均减少,海马及前额叶小胶质细胞激活度增加,脑组织IL-6、TNF-α、INF-β、INF-α、IL-1β表达增加,脑组织NF-κB p65磷酸化水平增加(P均<0.05).结论 烟碱能够改善Poly(I∶C)所引起的小鼠中枢神经炎症和认知行为改变,其机制与烟碱作用于α7nAchR后减少NF-κB p65磷酸化,进而减少炎症因子释放有关.

目的 分析益肺宣肺降浊方对星形胶质细胞-神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的缓解作用,并基于胆碱乙酰转移酶(ChAT)、α7 烟碱型乙酰胆碱受体(α7-nAChR)及炎症因子探讨其可能的作用机制.方法 (1)制备对照血清及益肺宣肺降浊方含药血清.(2)分离培养新生大鼠海马星形胶质细胞和神经元.将细胞分为对照组、OGD组、OGD +YFXF组、OGD + YFXF +山莨菪碱组.在对照组中,常规培养原代海马神经元和星形胶质细胞;在OGD组、OGD + YFXF组、OGD + YFXF +山莨菪碱组中,建立星形胶质细胞-神经元OGD模型,并分别使用含5%对照血清的高糖DMEM、含5%益肺宣肺降浊方含药血清的高糖DMEM、含5%益肺宣肺降浊方含药血清及100 μg/mL山莨菪碱的高糖DMEM进行培养.(3)干预 24h后,观察各组细胞形态,检测星形胶质细胞和神经元的标志物表达情况,星形胶质细胞活性氧簇含量、ChAT 活性、α7-nAChR 和ChAT的mRNA和蛋白表达量,以及上清液乳酸脱氢酶(LDH)、白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和IL-6 水平.结果 与对照组相比,OGD组星形胶质细胞及神经元标志物荧光强度减弱,神经元形态异常,星形胶质细胞的活性氧簇含量及上清液LDH、IL-1β、TNFα、IL-6 水平增加,星形胶质细胞的ChAT活性降低且α7-nAChR、ChAT的mRNA和蛋白表达量下调(P<0.05).与OGD组相比,OGD +YFXF组星形胶质细胞及神经元标志物荧光强度增强,神经元形态有所改善,星形胶质细胞的活性氧簇含量及上清液LDH、IL-1β、TNF-α、IL-6 水平降低,星形胶质细胞的ChAT活性增强且α7-nAChR、ChAT的mRNA和蛋白表达量上调(P<0.05).与OGD +YFXF组相比,OGD +YFXF +山莨菪碱组的星形胶质细胞和神经元的标志物荧光强度减弱,神经元形态异常,星形胶质细胞的活性氧簇含量及上清液LDH、TNF-α水平增加,星形胶质细胞的α7-nAChR mRNA和蛋白表达量降低(P<0.05).结论 益肺宣肺降浊方可能通过上调海马星形胶质细胞中α7-nAChR的表达、增强ChAT活性、抑制炎症反应,来缓解星形胶质细胞-神经元OGD损伤,这或许是该方改善缺血再灌注损伤介导的血管性痴呆的作用机制.

[目的]探究白纹伊蚊Aedes albopictus烟碱型乙酰胆碱受体α5(nicotinic acetylcholine receptorα5,nAChR-α5)亚基是否是双氧木脂素A(haedoxan A,HA)潜在的作用靶标,为白纹伊蚊的有效防治提供参考.[方法]利用PCR克隆白纹伊蚊nAChR-α5编码区(coding sequence,CDS)序列并构建系统发育树;利用RT-qPCR检测白纹伊蚊nAChR-α5在不同发育阶段(1-4龄幼虫、蛹和未吸血的雌成蚊)的表达量;利用壳聚糖/dsRNA纳米颗粒介导RNAi技术敲减白纹伊蚊2龄幼虫nAChR-α5的表达量;生物测定RNAi后的白纹伊蚊3龄幼虫对HA[LC30(0.3 mg/L)和LC50(0.4 mg/L)]的敏感性.[结果]白纹伊蚊nAChR-α5的CDS长1 296 bp,编码431个氨基酸,具有nAChR的典型半胱氨酸环(Cys-loop).蛋白序列比对和系统发育树表明白纹伊蚊nAChR-α5与埃及伊蚊A.aegypti的nAChR-α5同源性最高,亲缘关系最近.nAChR-α5在白纹伊蚊4龄幼虫中的表达量最高,其次是在雌成虫中的;饲喂壳聚糖/dsnAChR-α5纳米颗粒(dsRNA浓度为0.3％w/w)后24h时对白纹伊蚊2龄幼虫nAChR-α5的干扰效率最高,达到70％.生测结果表明,与饲喂不含dsRNA饲料的空白对照和饲喂含有壳聚糖/dsGFP纳米颗粒饲料的阴性对照相比,在LC30和LC50的HA处理下,敲减nAChR-α5组的白纹伊蚊3龄幼虫死亡率显著下降9.89％～15.45％,表明敲减nAChR-α5使白纹伊蚊对HA的敏感性显著降低.[结论]白纹伊蚊nAChR-α5可能是HA潜在的作用靶标之一,HA可能通过干扰白纹伊蚊nAChR-α5的功能进而影响神经兴奋传导.

目的:探讨表达狂犬病毒糖蛋白(RVG)的重组LaSota株新城疫病毒(recombinant LaSota strain NDV ex-pressing the rabies virus glycoprotein,rL-RVG)是否通过α7烟碱型乙酰胆碱受体(α7 nicotinic acetylcholine receptor,α7-nAChR)影响胃癌细胞HGC的增殖与凋亡.方法:将rL-RVG、新城疫病毒(newcastle disease virus,NDV)和PBS分别感染胃癌HGC细胞24 h后,采用蛋白质印迹法检测RVG、NDV、pro-caspase 3蛋白和α7-nAChR在HGC细胞中的表达,免疫荧光检测α7-nAChR在HGC细胞中的表达,MTT检测HGC细胞的增殖情况.将HGC细胞随机分为rL-RVG组、rL-RVG+α7-nAChR抑制剂组、rL-RVG+α7-nAChR激动剂组,NDV组、NDV+α7-nAChR抑制剂组、NDV+α7-nAChR激动剂组,PBS组、PBS+α7-nAChR抑制剂组、PBS+α7-nAChR激动剂组;倒置显微镜下观察各组细胞形态,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白pro-caspase 3、bax、bcl-2表达水平.结果:蛋白质印迹结果显示,病毒感染HGC细胞24 h后,NDV、pro-caspase 3蛋白和α7-nAChR在rL-RVG组、NDV组的表达均显著高于PBS组(P均<0.01),RVG蛋白在rL-RVG组表达显著高于NDV组和PBS组(P均<0.01);免疫荧光显示α7-nAChR在rL-RVG组中明显高于NDV组和PBS组.MTT结果显示两种病毒浓度大于10-5 mmol/L对细胞的增殖有明显抑制作用(P<0.05).倒置显微镜下可见NDV+α7-nAChR抑制剂组、PBS+α7-nAChR抑制剂组HGC细胞分别较NDV组、PBS组皱缩、凋亡更明显,但rL-RVG组与其α7-nAChR抑制剂组相比细胞皱缩、凋亡差异不明显;rL-RVG+α7-nAChR激动剂组、NDV+α7-nAChR激动剂组、PBS+α7-nAChR激动剂组HGC细胞皱缩、凋亡分别较rL-RVG组、NDV组、PBS组明显减弱.蛋白质印迹显示bcl-2、bax和pro-caspase 3蛋白在rL-RVG+α7-nAChR抑制剂组的相对表达量与rL-RVG组无显著性差异(P均>0.05),但在NDV+α7-nAChR抑制剂组、PBS+α7-nAChR抑制剂组的相对表达量分别较NDV组、PBS组显著上调(P均<0.01);rL-RVG+α7-nAChR激动剂组、NDV+α7-nAChR激动剂组、PBS+α7-nAChR激动剂组的bax、pro-caspase 3蛋白相对表达量分别较rL-RVG组、NDV组和PBS组明显下调(P均<0.01),bcl-2蛋白相对表达量则明显上调(P均<0.01).结论:rL-RVG感染HGC后稳定表达,可能通过拮抗α7-nAChR途径促进胃癌细胞的凋亡和抑制其增殖.

目的 探讨右美托咪定及褪黑素协同防治大鼠谵妄的作用及右美托咪定及褪黑素对α7 烟碱型乙酰胆碱受体(α7AchR)的调节作用.方法 雄性 SD大鼠 30 只,6~8 周龄,随机分为六组:对照组(C组)、东莨菪碱诱导谵妄模型组(S组)、右美托咪定组(D组)、褪黑素组(M组)、α-银环蛇毒素(α-BGT)拮抗组(BM组)和右美托咪定+褪黑素组(DM组),每组 5 只.S组腹腔注射 0.5 %东莨菪碱 1.8 mg/kg建立谵妄大鼠模型;C组用等容量生理盐水代替建模药物;D 组及 DM组于建模前1 5 min腹腔注射右美托咪定40 μg/kg;BM组于建模前1 5 min腹腔注射α-BGT 1 μg/kg;M组、BM组及DM组建模后立即在对侧腹腔注射褪黑素 5 mg/kg.分别于造模前 1 5 min 及造模后 1 0 min进行旷场实验.实验结束后处死大鼠,经内眦取血,采用 ELISA 法检测大鼠血清α7nAchR 浓度.结果 与C组比较,S组周围格路程、旷场总路程明显延长,周围格速度、旷场总速度明显加快(P<0.05);与S组比较,D组、M组、DM组周围格路程、旷场总路程明显缩短,周围格速度、旷场总速度明显减慢(P<0.0 1 ).与D组比较,DM组周围格路程、旷场总路程明显缩短(P<0.05).与 C组比较,S组α7nAChR浓度明显降低(P<0.05);与 S 组比较,D 组α7nAChR 浓度明显升高(P<0.0 1 ).结论 右美托咪定可改善谵妄症状,可能是通过提高α7nAChR 表达.而褪黑素可能增强右美托咪定的谵妄防治效果.