目的:研究黄柏酮的分子特性，筛选并鉴定黄柏酮抗脓毒症的潜在靶点。方法:通过中药系统药理学数据库分析平台（TCMSP）分析黄柏酮的药理参数和分子特性；通过化合物靶标预测平台工具SwissTargetPrediction服务器和化学成分靶向蛋白服务器（DRAR-CPI），以Z'值<-0.5筛选黄柏酮抗脓毒症的潜在靶点；通过人类孟德尔遗传在线（OMIM）数据库、毒性与基因比较数据库（CTD）和药物靶标数据库（TTD）中已报道的蛋白信息与脓毒症相关疾病靶标进行匹配，筛选黄柏酮抗脓毒症的靶点；进一步通过分子对接软件鉴定黄柏酮抗脓毒症的潜在靶点。结果:黄柏酮口服生物利用度（OB）为81.58%，药物相似度（DL）为0.57，表明其口服吸收较好，具有很好的成药性。通过SwissTargetPrediction和DRAR-CPI服务器共筛选到242个黄柏酮抗脓毒症的潜在靶点，其中有13个靶点与脓毒症直接相关。经分子对接软件鉴定，组织蛋白酶G（CTSG）、胱天蛋白酶1（CASP1）、S100钙结合蛋白A9（S100A9）、蛋白C（凝血因子Ⅴa和Ⅷa抑制因子，PROC）、丝裂素活化蛋白激酶1（MAPK1）、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）、白细胞介素-10（IL-10）、巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、C5a受体1（C5AR1）、胱天蛋白酶3（CASP3）、CXC趋化因子受体2（CXCR2）、凝血酶受体（F2R）和烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）为黄柏酮抗脓毒症的潜在靶点，自由结合能分别为-32.55、1.26、-30.00、300.08、-31.88、-30.29、-21.38、-30.79、16?777.84、-21.80、6?443.36、-20.38、-23.47 kJ/mol。结论:黄柏酮通过调控PROC和F2R抑制凝血并改善炎症反应；调节MIF、S100A9、G6PD和IL-10起到免疫应答作用；调节CTSG、CASP1、MAPK1、C5AR1和CASP3起到保护脓毒症损伤器官的作用；调控CXCR2减少中性粒细胞向炎症部位过度迁移，减轻组织损伤；调控NAMPT改善细胞能量状态，减少氧化应激从而保护细胞不受损害，并通过减轻脓毒症的症状和炎症反应来发挥其抗脓毒症的作用。

目的:探讨微小核糖核酸-133a(miR-133a)和沉默交配型信息调节2同源基因1(SIRT1)在电针促进废用性肌萎缩恢复中的作用。方法:将C57BL/6小鼠30只按随机数字表法随机分为正常组、实验对照组、实验组，每组10只小鼠，将实验对照组和实验组小鼠进行尾悬吊构建废用性肌萎缩模型，实验组在尾悬吊的同时进行电针刺激，刺激穴位为阳陵泉和足三里，每日刺激1次，每次15 min，连续治疗14 d。正常组和实验对照组则常规饲养，不进行任何干预。3组大鼠均于实验组干预14 d后统一取材，测定比目鱼肌、腓肠肌的湿重比和横截面积，采用透射电镜观察其骨骼肌和线粒体结构，Western Blot检测沉默交配型信息调节2同源基因1(SIRT1)、过氧化物酶体增殖物激活受体C辅激活因子1a(PGC-1a)、尼克酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)、腺苷酸活化蛋白激酶α(AMPK-a)以及磷酸化-AMPK-a(P-AMPK-a)蛋白的表达，实时荧光聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肌肉萎缩F盒蛋白(Atrogin-1)、肌肉特异性环指蛋白1(MuRF1)、微小核糖核酸-133a(miR-133a)、SIRT1、配对盒基因(Pax7)、生肌调节因子(MyoD)和肌细胞生成素(MyoG)基因的表达，试剂盒检测尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的浓度和NAD+/还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)。结果:干预14 d后，与实验对照组比较，实验组比目鱼肌的湿重和横截面积分别增加了21.03%、30.25%( P<0.05)，腓肠肌的湿重和横截面积与实验对照组比较，分别增加了5.24%、16.96%( P<0.05)。实验组Atrogin-1、MuRF1、SIRT1、PGC-1a、NAMPT、P-AMPK-a/AMPK-a的表达和NAD+浓度、NAD+/NADH均显著低于实验对照组( P<0.05)，而实验组miR-133a的表达则较实验对照组干预14 d后增加了163.3%( P<0.05)。干预14 d后，与细胞增殖相关的Pax7、MyoD基因在实验对照组中表达的显著上调，与正常组和实验组比较，差异均有统计学意义( P<0.05)；实验组与细胞分化相关的MyoG基因则呈高表达状态，与正常组和实验对照组比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:SIRT1相关通路属于机体反射性保护机制之一，参与介导骨骼肌的自然恢复；电针刺激经miR-133a/SIRT1增强成肌细胞分化，改善线粒体能量代谢，从而促进废用性肌萎缩的恢复。

目的:探讨小干扰RNA（siRNA）沉默烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）基因表达对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制。方法:在体外合成针对NAMPT基因的siRNA并转染U266细胞，实验分为si-NAMPT组（转染siRNA-NAMPT的U266细胞）、si-NC组（转染阴性对照siRNA的U266细胞），采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测转染后U266细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况，蛋白质印迹法检测转染后各组细胞NAMPT、蛋白激酶B（AKT）、磷酸化AKT（p-AKT）、糖原合成酶激酶3β（GSK-3β）、磷酸化GSK-3β（p-GSK-3β）、β-catenin表达水平。结果:si-NAMPT组转染48、72 h后与si-NC组比较，对U266细胞增殖抑制作用（570 nm处吸光度值）增加（48 h：0.78±0.06比1.62±0.11；72 h：1.23±0.14比2.37±0.18），差异均有统计学意义（ t=3.54， P=0.034； t=4.72， P<0.01）。si-NAMPT组与si-NC组相比，细胞早期凋亡率升高[（53.42±0.25）%比（25.98±3.18）%]，差异有统计学意义（ t=4.41， P<0.01）。与si-NC组相比，si-NAMPT组p-AKT、p-GSK-3β、NAMPT、β-catenin蛋白水平均降低（均 P<0.05）。 结论:沉默NAMPT基因可明显抑制U266细胞增殖并诱导细胞凋亡，其可能通过抑制AKT-GSK-3β-β-catenin信号通路发挥作用。

目的:观察烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）通过延缓主动脉血管平滑肌细胞（VSMC）衰老对腹主动脉瘤的保护作用。方法:用组织贴壁法培养正常人和腹主动脉瘤患者原代VSMC细胞，将细胞分为正常人来源VSMC组（Ctrl-VSMC组）、腹主动脉瘤患者来源VSMC组（AAA-VSMC组）、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外建立腹主动脉瘤模型组（AngⅡ-VSMC组，100 nmol/L AngⅡ处理正常人来源VSMC 48 h）、NAMPT激动剂P7C3干预后的AngⅡ+P7C3组和AAA+P7C3组（分别在AngⅡ-VSMC组和AAA-VSMC组基础上加入5 μmol/L P7C3）。采用免疫荧光染色法鉴定VSMC；采用细胞增殖相关抗原Ki67染色检测细胞增殖能力；采用衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色检测各组细胞衰老情况；采用蛋白质免疫印迹试验（Western blotting）检测各组细胞衰老相关蛋白p21、p16及NAMPT的蛋白表达水平。结果:与Ctrl-VSMC组相比，AAA-VSMC组和AngⅡ-VSMC组衰老细胞SA-β-gal染色阳性率及衰老相关蛋白p21、p16表达量均明显升高〔SA-β-gal染色阳性率：（74.1±4.4）%、（68.6±5.5）%比（36.8±10.3）%，p21/GAPDH：0.61±0.07、0.51±0.03比0.31±0.03，p16/GAPDH：0.77±0.03、0.72±0.06比0.33±0.26，均 P<0.01〕，NAMPT表达量均明显降低（NAMPT/GAPDH：0.88±0.07、0.79±0.14比1.29±0.02，均 P<0.01）。与AngⅡ-VSMC组相比，AngⅡ+P7C3组衰老细胞SA-β-gal染色阳性率及衰老相关蛋白p21、p16表达量均明显降低〔SA-β-gal染色阳性率：（49.1±3.2）%比（68.6±5.5）%，p21/GAPDH：0.35±0.06比0.51±0.03，p16/GAPDH：0.47±0.08比0.72±0.06，均 P<0.05〕，NAMPT表达量明显升高（NAMPT/GAPDH：1.15±0.06比0.79±0.14， P<0.01）。与AAA-VSMC组相比，AAA+P7C3组衰老细胞SA-β-gal染色阳性率及衰老相关蛋白p21、p16表达量均明显降低〔SA-β-gal染色阳性率：（54.1±6.0）%比（74.1±4.4）%，p21/GAPDH：0.38±0.02比0.61±0.07，p16/GAPDH：0.50±0.13比0.77±0.03，均 P<0.05〕，NAMPT表达量明显升高（NAMPT/GAPDH：1.25±0.28比0.88±0.07， P<0.01）。 结论:P7C3可激动NAMPT，延缓VSMC衰老，进而发挥对腹主动脉瘤的保护作用。

目的 研究红景天苷对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的保护作用,并探讨其作用机制.方法 将24只雄性KM小鼠随机分为正常组、高脂饮食(HFD)组、HFD+空白对照组、HFD+红景天苷组,每组6只,正常组小鼠予以普通饲料喂养,其余各组高脂饮食,造模14周开始给予100 mg·kg-1·d-1红景天苷灌胃给药,22周末取材.酶联免疫法测定血清ALT、AST、TG、TC、HDL-C、LDL-C等相关生化指标;HE染色和NAFLD活动评分(NAS)观察小鼠肝组织病理.Western Blot检测肝组织内烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT)、Sirt1、AMPKα、SREBP1的表达变化.多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验.结果 与正常组比较,HFD组小鼠肝组织存在广泛较大的脂肪滴,脂肪变性明显,NAS评分升高(P<0.01),外周血AST、ALT、TG、TC、LDL-C的含量明显增高(P值均<0.05),HDL-C含量降低(P<0.05),肝组织内NAMPT、AMPKα、Sirt1的表达降低(P值均<0.05),SERBP1的表达增加(P<0.01).而HFD+红景天苷组较HFD组、HFD+空白对照组肝组织空泡状脂滴分布、小叶内炎症减少,肝细胞气球样变减轻,NAS评分下降(P<0.01),外周血AST、ALT、TG、LDL-C的含量明显降低(P值均<0.05),HDL-C含量升高(P<0.05),NAMPT、AMPKα、Sirt1的表达增加(P值均<0.05),SERBP1的表达减少(P<0.01).结论 红景天苷能明显改善高脂饮食诱导小鼠NAFLD的病理状态,并通过增加NAMPT、Sirt1、AMPKα的表达,减少SERBP1的表达,发挥其对 NAFLD的保护作用.

目的:探讨在乳腺癌组织中烟酰胺磷酸核糖基转移酶(NAMPT)及沉默信息调节因子 2 同源蛋白 1(SIRT-1)的表达率及与患者临床病理特征的关系.方法:选取手术成功切除乳房的 381 例乳腺癌患者为研究对象,均随访 5 年或随访至患者死亡,采用免疫组织化学方法检测三阴性乳腺癌患者、非三阴性乳腺癌患者 NAMPT 及SIRT-1 的蛋白表达,并分析其与临床病特征的关系及 NAMPT 表达与 SIRT-1 表达的关系,分析 NAMPT、SIRT-1表达与临床特征之间的相关性.结果:三阴性乳腺癌患者 NAMPT高表达率高于非三阴性乳腺癌患者(P<0.05);年龄≥56 岁、有淋巴结转移、无病生存期<55 个月的乳腺癌患者 NAMPT高表达率高于年龄<56 岁、无淋巴结转移、无病生存期≥55 个月的乳腺癌患者(均P<0.05);有淋巴结转移、无病生存期<55 个月的乳腺癌患者 SIRT-1高表达率高于年龄<56 岁、无病生存期≥55 个月的乳腺癌患者(均 P<0.05);NAMPT 高表达的乳腺癌患者SIRT-1 高表达率高于 SIRT-1 低表达率(P<0.05),乳腺癌患者 NAMPT、SIRT-1 表达与淋巴结转移、无病生存期呈正相关(r=0.079、0.505;0.462、0.497,P<0.05).结论:NAMPT 在三阴性乳腺癌中表达上调,NAMPT 可影响SIRT-1 的表达,同时年龄可影响 NAMPT及 SIRT-1 的表达,且两者高表达预示患者可能出现淋巴结转移、预后差.

目的 分析2型糖尿病血浆内脂素和脂联素水平与糖尿病颈动脉内膜中膜厚度(IMT)的相关性. 方法 回顾性分析,2015年8月至2016年8月在我院诊治的2型糖尿病老年患者100例和体检的健康老年人30例为对照组.根据颈动脉超声检查结果,糖尿病患者分为颈动脉IMT增厚组40例和颈动脉IMT非增厚组60例.分析各组受试者的血浆内脂素和脂联素的水平及其与颈动脉IMT的相关性. 结果 颈总动脉IMT增厚组血清内脂素水平为(40.6±3.9)μg/L,颈动脉IMT非增厚组为(28.9±3.6)μg/L,均高于对照组(19.1±2.8)μg/L(P＜0.05),且颈总动脉IMT增厚组高于颈动脉IMT非增厚组(P＜0.05);颈动脉IMT增厚组血清脂联素水平为(610±170)mg/L,颈动脉IMT非增厚组为(930±210)mg/L,均低于对照组(1 590±330)mg/L(P＜0.05),且颈总动脉IMT增厚组血清脂联素水平低于颈动脉IMT非增厚组(P＜0.05).关性分析结果显示,2型糖尿病患者血浆内脂素水平与颈动脉IMT呈正相关(r=0.721,P＜0.05),血浆脂联素水平与颈动脉IMT呈负相关(r=-0.688,P＜0.05). 结论 血浆内脂素和脂联素水平与2型糖尿病颈动脉IMT相关,可能成为预测2型糖尿病患者发生早期动脉粥样硬化的血浆标志物.

目的 探讨老年2型糖尿病患者(T2DM)发生轻度认知功能障碍(MCI)与内脏脂肪素(visfatin)和糖脂代谢的相关性.方法 选取2016年2月至2017年1月本院收治的91例T2DM患者,采集空腹血检测相关实验室指标,使用蒙特利尔认知评估量表(MoCA)测定认知功能.结果 91例T2DM患者中有50例发生MCI.与菲MCI组相比,MCI组年龄、总胆固醇、胰岛素、胰岛素抵抗指数、visfatin、MoCA评分和糖尿病性视网膜病变等指标比较差异有统计学意义(P＜0.05).MoCA评分与visfatin、胰岛素抵抗指数均呈负相关(r=-0.38,-0.22,P＜0.05).糖尿病性视网膜病变、胰岛素抵抗指数、年龄和visfatin是T2DM患者发生MCI的独立危险因素.结论 年龄越大、伴有糖尿病性视网膜病变、胰岛素抵抗指数越大和visfatin水平越高的T2DM患者发生MCI风险越大.

目的 验证体外Ⅱ型胶原酶消化法培养兔软骨细胞的可行性,探讨凋亡及抗凋亡基因在软骨细胞传代中的变化,寻找关节软骨退变老化研究的最适宜靶细胞.方法 在无菌条件下取6周龄新西兰大白兔双侧膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化并机械吹打的方法分离关节软骨细胞并进行原代、传代培养;形态学观察时采用甲苯胺蓝染色法对关节软骨细胞进行鉴定;RT-PCR法检测P0～P4代软骨细胞烟酰胺磷酸核糖转移酶[NAMPT)、信息沉默因子1(Sirt1)、p53、Bax基因的mRNA相对表达量,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各代关节软骨细胞增殖情况.结果 显微镜下观察兔原代软骨细胞大多呈透亮椭圆形、短梭形、多角形特征,72h全部贴壁生长.甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞细胞质染成浅蓝色,细胞核染成深蓝色;前3代软骨细胞表型稳定,增殖力良好;连续培养至P4代后,绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状.随着软骨细胞的传代,NAMPT的表达量逐渐下调.与P0代软骨细胞相比,Sirt1的表达量在P1代细胞中明显上调,在P2代细胞急剧下降至P0代以下,在P3～P4代细胞中Sirt1的表达量逐渐下调.凋亡基因p53和Bax的表达量随着软骨细胞的传代而上调.前3代软骨细胞增殖差异无统计学意义(均P＞0.05);在培养到第4～7天时,P1～P3代与P4代软骨细胞增殖差异有统计学意义(P＜0.05).结论 采用体外Ⅱ型胶原酶消化法培养兔关节软骨细胞是切实可行的.随着软骨细胞的传代,抗凋亡基因NAMPT、Sirt1的表达逐渐下调,凋亡基因p53、Bax的表达逐渐上调.P1～P3代关节软骨细胞作为研究关节软骨凋亡的细胞体系是合适的.

目的 探讨乳腺癌组织及癌旁正常乳腺组织中烟酰胺磷酸核糖基转移酶(Nampt)的表达并确定Nampt抑制剂FK866对乳腺癌细胞生长和化疗增敏的影响.方法 采用qRT-PCR法检测乳腺癌组织和癌旁正常组织中Nampt mRNA表达水平,并用MTT实验和软琼脂克隆形成实验检测Nampt抑制剂对乳腺癌细胞生长的影响和对其化疗增敏的作用.结果 乳腺癌组织内Nampt mRNA表达水平显著高于癌旁正常组织中的表达(P=0.000);FK866干预细胞48 h和72 h后,FK866即对MCF-7细胞生长产生明显的抑制作用(P=0.003;P=0.001);FK866能抑制乳腺癌细胞克隆集落形成,相邻干预浓度的2组间(0.3 nM vs 0 nM;3 nM vs 0.3 nM;30 nM vs 3 nM)差异均有统计学意义(P值分别=0.02、0.014、0.02).且FK866能增加5-FU对乳腺癌细胞的化疗敏感性.结论 Nampt抑制剂能影响乳腺癌细胞生长,其与细胞毒药物联合应用具有化疗增敏作用.