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木犀草素对神经性疼痛模型大鼠MCP-1/CCR2信号轴的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨木犀草素调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/CC趋化因子受体2(CCR2)信号轴,对神经性疼痛(NP)模型大鼠神经胶质细胞激活和免疫炎症的影响.方法:采用坐骨神经慢性压迫损伤法构建大鼠NP模型.将大鼠按随机数字表法分为模型组、阿魏酸钠组及木犀草素低、中、高剂量组,每组12只;另选择同期12只大鼠为假手术组.各组大鼠腹腔注射及灌胃相应药物,每天1次,连续14d.测定大鼠机械性缩足反射阈值(MWT)和热刺激缩足反射潜伏期(TWL);实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)及免疫组织化学法检测脊髓中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)及小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)mRNA及蛋白表达;流式细胞仪检测大鼠外周血中CD4+、CD8+水平;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠脊髓病理损伤情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测脊髓中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平;蛋白质印迹法(Western blotting)检测脊髓中MCP-1、CCR2蛋白表达.结果:与假手术组比较,模型组大鼠MWT、TWL、CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+比值降低,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8+T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,木犀草素低、中、高剂量组及阿魏酸钠组大鼠MWT、TWL、CD4+T细胞比例及CD4+/CD8+比值升高,Iba-1、GFAP mRNA及蛋白表达、CD8+T细胞比例、炎症因子水平(IL-6、IL-1β、TNF-α)、MCP-1及CCR2蛋白表达降低,且木犀草素作用效果呈剂量依赖性(P<0.05).结论:木犀草素具有抗炎、增强免疫、抑制胶质细胞活化,缓解NP的作用,其作用机制可能与抑制MCP-1/CCR2信号轴的激活有关.
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编辑人员丨1天前
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毛兰素对骨癌痛大鼠机械痛敏和热痛敏的影响
编辑人员丨1天前
目的:评价毛兰素对骨癌痛(bone cancer pain, BCP)大鼠的镇痛效应及其与脊髓星形胶质细胞和炎症反应的关系。方法:SPF级成年雌性SD大鼠50只,采用随机数字表法分为5组(每组10例):假手术组(Sham组)、骨癌痛组(BCP组)、骨癌痛+生理盐水组(BCP+NS组)、骨癌痛+毛兰素低剂量组[BCP+erianin(L)组]、骨癌痛+毛兰素高剂量组[BCP+erianin(H)组]。通过大鼠右后肢胫骨骨髓腔注射10 μl Walker256乳腺癌细胞混悬液(约4×10 4个)的方法构建大鼠BCP模型,Sham组注射等体积煮沸灭活的乳腺癌细胞悬液。于造模开始后第6天至第21天,每天1次,BCP+erianin(L)组和BCP+erianin(H)组腹腔注射毛兰素,BCP+NS组腹腔注射生理盐水,Sham组和BCP组不进行腹腔注射。分别于术前1 d和术后1、3、6、9、12、15、18、21 d测定机械刺激缩足反射阈值(paw mechanical withdrawal threshold, PMWT)和热刺激缩足反射潜伏期(paw withdraw thermal latency, PWTL)。于术后21 d痛行为学评估结束后处死大鼠取胫骨和脊髓组织,H-E染色检测胫骨肿瘤细胞浸润情况,采用Western blot法和免疫荧光法测定脊髓星形胶质细胞特异性标记物神经胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)水平,ELISA法测定脊髓促炎症细胞因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)水平变化。 结果:与Sham组比较:BCP组大鼠术侧胫骨H-E染色显示骨髓腔内充满肿瘤细胞,术侧后肢于术后6、9、12、15、18、21 d PMWT和PWTL降低( P<0.05),对侧后肢PMWT、PWTL差异无统计学意义( P>0.05);术后21 d BCP组大鼠脊髓GFAP水平和TNF-α、IL-6、IL-1β水平增加( P<0.05)。与BCP+NS组比较:BCP+erianin(L)组、BCP+erianin(H)组大鼠术侧后肢术后9、12、15、18、21 d PMWT和PWTL均升高( P<0.05),对侧后肢PMWT、PWTL差异无统计学意义( P>0.05);术后21 d大鼠脊髓GFAP和TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低( P<0.05)。与BCP+erianin(L)组比较:BCP+erianin(H)组大鼠术侧后肢术后12、15、18、21 d PMWT和术后9、12、15、18、21 d PWTL均升高( P<0.05),对侧后肢PMWT、PWTL差异无统计学意义( P>0.05);术后21 d大鼠脊髓GFAP和TNF-α、IL-6、IL-1β水平降低( P<0.05)。 结论:毛兰素可缓解大鼠BCP,其机制可能与抑制脊髓星形胶质细胞活化,减轻炎症反应有关。
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编辑人员丨1天前
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大鼠背根神经节持续受压后膜联蛋白A2表达及分布的变化
编辑人员丨1天前
目的:探讨大鼠背根神经节(DRG)持续受压(CCD)后DRG中膜联蛋白A2(ANXA2)的表达及分布规律。方法:成年雄性Wistar大鼠102只按随机数字表法分为对照组(24只)、CCD模型后7 d组(30只)、CCD模型后14 d组(24只)及CCD模型后28 d组(24只)。后3组大鼠采用"U"形棒制备CCD模型。采用机械痛刺激仪和热痛刺激仪测量各组大鼠的机械缩足反射阈值(MWT)和热辐射缩爪反应潜伏期(TWL)。采用Western blotting和免疫荧光染色检测各组大鼠DRG中ANXA2蛋白的表达。采用免疫荧光双标染色检测CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2和神经元标志物微管蛋白β3(TUBB3)的表达。结果:与对照组比较,CCD模型后7 d组、CCD模型后14 d组大鼠的MWT与TWL均明显下降,差异均有统计学意义( P<0.05)。Western blotting检测显示,与对照组比较,CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2蛋白的表达升高,差异有统计学意义( P<0.05)。免疫荧光染色检测显示CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2的免疫反应性较对照组增强。免疫荧光双标染色检测显示CCD模型后7 d组大鼠DRG中ANXA2主要表达于神经元的细胞膜中。 结论:CCD模型大鼠的机械痛阈与热痛阈下降,受压侧DRG内ANXA2蛋白表达上调及免疫反应性增强,ANXA2可能参与CCD后神经病理性疼痛的发生发展。
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编辑人员丨1天前
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高乌甲素对坐骨神经慢性压迫性损伤大鼠背根神经节P2X3受体转运介导神经病理性疼痛的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨高乌甲素(LA)对坐骨神经慢性压迫性损伤(CCI)大鼠背根神经节(DRG)神经元轴突中嘌呤能P2X3受体(P2X3R)转运介导神经病理性疼痛(NPP)的影响。方法:选择72只健康SD雄性大鼠,采用手术结扎右侧坐骨神经造成坐骨神经CCI的方法构建NPP模型。按随机数字法表分为CCI组、CCI+LA组和正常对照组,每组24只。正常对照组仅暴露右侧坐骨神经不结扎。CCI+LA组行CCI组相同处理后给予2 g/L的LA(4 mg/kg,腹腔注射,1次/d,共1次),其余两组以同样方式注射等量生理盐水。三组大鼠分别于伤前、伤后2,6,12,24 h测定机械缩足反射阈(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL),评价神经损伤引起的神经痛症状。收集3组大鼠神经结扎点近端和远端的神经片段,通过Western blot检测各组大鼠伤后2,6,12,24 h P2X3R表达量和伤后24 h神经生长因子(NGF)及酪氨酸激酶受体A(TrkA)表达量,以评估LA对P2X3R、NGF和TrkA的影响。结果:伤前各组间MWT、TWL差异无统计学意义( P均>0.05);与正常对照组比较,伤后2,6,12,24 h CCI组和CCI+LA组MWT、TWL明显降低( P<0.05或0.01);伤后2,6 h CCI组和CCI+LA组MWT、TWL差异无统计学意义( P均>0.05),伤后12,24 h CCI+LA组MWT、TWL明显高于CCI组( P<0.05或0.01)。Western blot结果显示,伤后2,6,12,24 h在近端坐骨神经片段中,各组P2X3R表达量差异无统计学意义( P均>0.05)。伤后2,6,12,24 h在远端坐骨神经片段中,CCI组P2X3R表达量高于正常对照组( P均<0.01);伤后2,6,12 h CCI+LA组P2X3R表达量高于正常对照组( P均<0.05),伤后24 h与正常对照组差异无统计学意义( P>0.05);伤后2,6 h CCI组和CCI+LA组P2X3R表达量差异无统计学意义( P均>0.05),而伤后12,24 h CCI+LA组P2X3R表达量低于CCI组( P<0.05或0.01)。伤后24 h在近端和远端坐骨神经片段中,正常对照组NGF表达量低于CCI组和CCI+LA组( P<0.05或0.01),CCI组和CCI+LA组NGF表达量差异无统计学意义( P>0.05)。伤后24 h在近端和远端坐骨神经片段中,各组间TrkA表达量差异无统计学意义( P均>0.05)。 结论:伤后早期给予LA可以缓解NPP大鼠的机械性和热性痛觉过敏,该作用可能与LA减少P2X3R在DRG神经元中的逆向轴突转运有关。
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编辑人员丨1天前
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桔梗皂苷D对大鼠神经病理性疼痛及脊髓小胶质细胞活化的影响
编辑人员丨1天前
目的:探讨桔梗皂苷D(platycodin D, PD)对大鼠神经病理性疼痛模型的镇痛作用及其对脊髓小胶质细胞活化的影响。方法:将60只雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为6组(每组10只):假手术组(Sham组)、脊神经结扎(spinal nerve ligation, SNL)组(SNL组)、SNL+生理盐水组(SNL+NS组)、SNL+PD低剂量组(PDl组)、SNL+PD中剂量组(PDm组)、SNL+PD高剂量组(PDh组)。SNL大鼠结扎和剪断左L 5脊神经,Sham组大鼠只分离神经不进行结扎剪断处理;SNL+NS组、PDl组、PDm组和PDh组大鼠于造模后当天开始分别经口灌胃生理盐水或PD(1、5、10 mg/kg)至术后7 d。分别于术前1 d和术后1、3、5、7、10、14 d测定各组大鼠机械刺激缩足反射阈值(paw mechanical withdrawal threshold, PMWT)和热刺激缩足反射潜伏期(paw withdraw thermal latency, PWTL)。于术后7 d取大鼠脊髓,采用免疫荧光和Western blot法检测脊髓小胶质细胞离子钙接头蛋白分子1(ionized calcium-binding adaptor molecule1, Iba-1)的表达,ELISA法检测脊髓促炎症细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-6的含量变化。 结果:与Sham组比较:SNL组、SNL+NS组、PDl组、PDm组和PDh组大鼠术侧PMWT于术后1、3、5、7、10、14 d明显降低,术侧PWTL于术后3、5、7、10、14 d明显降低( P<0.05);术后7 d SNL组大鼠脊髓Iba-1的表达和TNF-α、IL-6、IL-1β含量均明显升高( P<0.05)。与SNL+NS组比较:PDm组、PDh组大鼠术后3、5、7、10、14 d术侧PMWT升高( P<0.05),PDm组大鼠术后5、7、10、14 d术侧PWTL升高( P<0.05);术后7 d PDm组大鼠脊髓Iba-1的表达和TNF-α、IL-6、IL-1β含量均明显降低( P<0.05)。与PDm组比较,PDl组和PDh组大鼠术侧PMWT于术后3、5、7、10、14 d降低,术侧PWTL于术后5、7、10、14 d降低( P<0.05)。 结论:PD能够缓解SNL大鼠的机械痛敏和热痛敏,其作用机制可能与其抑制大鼠脊髓小胶质细胞活化,进而减少炎性细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的含量有关。
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编辑人员丨1天前
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高压氧治疗对神经病理性疼痛的影响及其机制研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨高压氧(HBO)治疗减轻神经病理性疼痛的机制。方法:96只成年健康雄性C57BL/6J小鼠,采用随机数字表法分为假手术组(S组)、模型组(C组)和高压氧组(H组),每组32只。C组和H组采用坐骨神经慢性压迫损伤法建立神经病理性疼痛模型,S组仅行假手术。H组于术后第1天给予HBO处理,1次/d,连续处理5 d;S组和C组单纯放入氧舱,不接受HBO处理。造模后分别于术后第1、3、7、14、21、28天检测各组小鼠的机械反射阈值(WMT)和热反射潜伏期(TWL)。每组于术后第7、14、21、28天各处死8只小鼠,取右侧背根神经节,RT-qPCR法测定各组小鼠的背根神经节低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、精氨酸酶1(Arg-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10 mRNA的表达水平。结果:与S组比较,C组小鼠各时点的MWT明显降低,TWL明显缩短( P<0.001),HIF-1α、iNOS、TNF-α、IL-6 mRNA的表达水平明显升高,而Arg-1、IL-10 mRNA的表达水平明显降低( P<0.05、 P<0.01或 P<0.001)。与C组相比较,H组小鼠术后第1、3、7、14天的MWT明显升高,TWL明显延长( P<0.001),术后第7、14天的HIF-1α、iNOS、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平明显降低,Arg-1、IL-10 mRNA表达水平明显升高( P<0.01或 P<0.001)。 结论:HBO治疗对小鼠神经病理性疼痛短时程有效,其机制可能是通过调控HIF-1α介导的巨噬细胞极化、发挥抗炎作用有关。
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编辑人员丨1天前
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加减旋覆花汤对坐骨神经损伤大鼠疼痛行为及p38MAPK信号通路介导的脊髓神经炎症的影响
编辑人员丨1天前
目的:观察加减旋覆花汤对坐骨神经损伤大鼠疼痛行为及磷酸化p38有丝分裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)信号通路介导的脊髓神经炎症的影响,并探讨其作用机制。方法:将108只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、普瑞巴林组及汤药低、中、高剂量组,每组18只。除假手术组外,其余各组采用结扎坐骨神经法建立坐骨损伤(CCI)模型。汤药低、中、高剂量组分别灌胃2.5、5.0、10.0 g/kg的加减旋覆花汤浓缩液,普瑞巴林组灌胃15 mg/kg的普瑞巴林,假手术组与模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d,连续15 d。分别于给药前及给药第3、7、11、15 d进行疼痛行为学检测;采用ELISA法检测脊髓中IL-1β、TNF-α、IL-10水平,采用免疫组化染色检测TLR4、NF-κB p65表达,采用Western blot法检测磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)表达。结果:与模型组比较,汤药高剂量组自发性疼痛评分降低( P<0.05),热辐射缩足潜伏期(TWL)延长( P<0.05),机械缩足反射阈(MWT)升高;汤药低、中、高剂量组脊髓组织IL-1β、TNF-α水平降低( P<0.05),IL-10水平升高( P<0.05);脊髓组织TLR4、NF-κB p65平均灰度值降低( P<0.05),p-p38MAPK蛋白表达降低( P<0.05)。 结论:加减旋覆花汤可有效改善CCI大鼠神经源性疼痛,其机制可能与抑制p38MAPK-TLR4信号通路激活介导的脊髓神经炎症有关。
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编辑人员丨1天前
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NIPBL基因新发变异导致的1例德朗热综合征的临床特征及基因分析
编辑人员丨1天前
患儿,女,5月26天,以"发现运动发育落后3月"入院。现病史:患儿3月龄起,家属发现患儿运动发育落后,表现为竖头不稳,未予治疗。随月龄增长患儿运动发育落后明显。面容异常主要表现为:低额头、发际线低、双手通贯掌、连眉、双手小(见图1)、听力弱。现患儿竖头稳、不会翻身、不会坐、无主动伸手抓物意识,偶尔能发"a,o"等喉音,能逗笑出声,追物循声反应差,表情欠丰富。病程中否认有频繁呕吐、喂养困难及反复抽搐史。无发育倒退现象。专科查体:四肢肌力V-级,四肢肌张力增高;拉起反射未见明显异常,立位悬垂反射:肩后缩,双侧拇指内收,双下肢硬性支撑,尖足;腱反射正常;病理征阴性。辅助检查:头颅核磁共振:双侧额、颞脑外间隙增宽;视觉诱发电位:双眼潜伏期延长,双眼振幅降低。听性脑干反应电位:双耳BAEP异常。心脏B超:卵圆孔未闭。双侧髋关节发育Ⅰ型。血尿筛未见异常;染色体核型:46,XX。家族史:父母均体健。
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编辑人员丨1天前
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二甲双胍对2型糖尿病并发神经病理性疼痛大鼠的抗痛觉异常作用及机制研究
编辑人员丨1天前
目的:探讨二甲双胍对2型糖尿病并发神经病理性疼痛(DNP)大鼠的影响及其可能机制。方法:将80只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组( n=15)和高脂高糖组( n=65),分别给予正常饲料、高脂高糖饲料喂养,于喂养前、喂养8周后称大鼠体质量、采用血糖仪检测大鼠空腹血糖,采用ELISA法检测大鼠空腹胰岛素水平并计算胰岛素敏感指数(ISI)。喂养8周后测量高脂高糖组大鼠机械缩足反射痛阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)(基础值),禁食12 h后腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(35 mg/kg),3 d后测量随机血糖,STZ注射后14 d再次称体质量并测量大鼠的MWT和TWL,当MWT和TWL均≤基础值的85%时视为DNP造模成功( n=45),否则归为糖尿病无痛组( n=15)。采用随机数字表法将造模成功大鼠分为DNP组、DNP+二甲双胍组、DNP+溶剂组,每组15只。于STZ注射后14 d,DNP+二甲双胍组大鼠腹腔注射二甲双胍(200 mg/kg),每天1次,连续14 d。DNP组不做任何处理,DNP+溶剂组大鼠腹腔注射等量生理盐水。STZ注射后14 d及给药后3、7、14、21 d测量各组大鼠的MWT和TWL。给药后7、14、21 d ELISA法检测各组大鼠脊髓白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。给药后21 d免疫荧光染色检测各组大鼠脊髓离子钙接头蛋白-1(Iba-1)的表达;Western blotting检测各组大鼠脊髓Toll样受体4(TLR4)、核转录因子-κB(NF-κB)、磷酸化(p)-NF-κB、腺苷酸活化蛋白激酶( AMPK)、p-AMPK、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)蛋白的表达。 结果:(1)喂养8周后高脂高糖组大鼠的体质量高于正常对照组,STZ注射后14 d高脂高糖组大鼠的体质量低于正常对照组,差异均有统计学意义( P<0.05)。STZ注射后3 d高脂高糖组大鼠的随机血糖高于正常对照组,差异有统计学意义( P<0.05)。喂养8周后高脂高糖组大鼠的胰岛素水平高于正常对照组,ISI低于正常对照组,差异均有统计学意义( P<0.05)。(2)与正常对照组、糖尿病无痛组比较,DNP组和DNP+溶剂组大鼠各时间点的MWT、TWL明显降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。给药后3 d、7 d、14 d、21 d,与DNP组和DNP+溶剂组比较,DNP+二甲双胍组大鼠的MWT明显升高,TWL延长,差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)给药后7 d、14 d、21 d,与正常对照组和糖尿病无痛组比较,DNP组和DNP+溶剂组大鼠脊髓内IL-6、IL-1β和TNF-α水平显著增加;与DNP组、DNP+溶剂组比较,DNP+二甲双胍组大鼠脊髓内IL-6、IL-1β和TNF-α水平明显下降,差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)与正常对照组和糖尿病无痛组比较,DNP组和DNP+溶剂组脊髓组织中Iba-1荧光强度和Iba-1阳性细胞数量增加;与DNP组和DNP+溶剂组比较,DNP+二甲双胍组大鼠脊髓组织中Iba-1荧光强度和Iba-1阳性细胞数量降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。(5)与正常对照组、糖尿病无痛组比较,DNP组、DNP+溶剂组大鼠脊髓组织中TLR4、p-NF-κB蛋白的表达及p-NF-κB/NF-κB值增加;与DNP组和DNP+溶剂组比较,DNP+二甲双胍组大鼠脊髓组织中TLR4、p-NF-κB蛋白的表达及p-NF-κB/NF-κB值降低,差异均有统计学意义( P<0.05)。与正常对照组、糖尿病无痛组,DNP组和DNP+溶剂组大鼠脊髓组织中p-AMPK/AMPK值及PGC-1α蛋白表达水平降低;与DNP组和DNP+溶剂组比较,DNP+二甲双胍组大鼠脊髓组织中p-AMPK/AMPK值和PGC-1α蛋白的表达增加,差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:二甲双胍可能通过激活AMPK/PGC-1α信号通路来抑制TLR4/NF-κB表达的上调、降低小胶质细胞的活化及减少炎性因子的表达,从而缓解DNP。
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编辑人员丨1天前
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经TRPV1/TRPA1-cGMP信号通路探究推拿对minor CCI模型大鼠背根神经节镇痛启动机制
编辑人员丨1个月前
目的 探究三法三穴推拿手法对minor CCI模型大鼠的镇痛启动机制.方法 将56只SD大鼠随机分为8组,即正常组、假手术组、模型1组、模型2组、推拿1组、推拿2组、推拿1+TRPV1拮抗剂组和推拿2+TRPA1拮抗剂组.模型组、推拿组和推拿+拮抗剂组建立minor CCI模型.推拿组和推拿+拮抗剂组在造模后7 d进行1次三法(点法、拨法、揉法)三穴(殷门穴、承山穴、阳陵泉穴)干预,模型组与假手术组进行抓握束缚,正常组不予干预.干预结束后各组先后进行机械缩足反射阈值(MWT)和热缩足反射潜伏期(TWL)测试不同性质痛觉的变化;采用硝酸还原酶法观察各组造模侧DRG中NO含量,ELISA、Western blot、qPCR等方法观察各组造模侧DRG内TRPV1/TRPA1-NO-cGMP-PKG信号通路蛋白、基因表达的变化情况.结果 与模型组比较,行为学检测显示推拿1组、推拿2组MWT、TWL均有不同程度的延长;推拿1组、推拿2组、推拿1+TRPV1拮抗剂组、推拿2+TRPA1拮抗剂组DRG内TRPV1、TRPA1、NO、sGCβ、cGMP、PKG1的表达量均明显降低.结论 推拿干预1次后即可有效改善周围神经损伤引起的温度觉、机械痛觉过敏症状;推拿可通过TRPV1/TRPA1-NO-cGMP-PKG信号通路发挥即刻镇痛和持续镇痛作用.
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编辑人员丨1个月前
