研究乳源性外泌体与脂质体进行膜融合得到的杂化外泌体装载青藤碱(sinomenine,SIN)后对胶原诱导性关节炎(CIA)大鼠的治疗效果.通过蔗糖密度梯度离心法从鲜牛乳中提取外泌体,采用乳化蒸发-低温固化法制备脂质体,共孵育法进行膜融合后对杂化外泌体进行表征:透射电镜检测形貌,纳米粒度电位仪检测粒径与电位,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测膜融合前后外泌体膜表面特征蛋白CD63和TSG101的表达.超声法装载青藤碱后,酶标仪检测其载药量与包封率.胶原抗体诱导法建立CIA大鼠模型,药效实验设对照组、模型组、SIN组、SIN-脂质体组、SIN-乳外泌体组、SIN-杂化外泌体组及阳性药(地塞米松)组.记录给药期间大鼠体质量变化,以足肿胀度、免疫器官指数、关节炎指数、微循环指标变化、滑膜组织病理学检查、血清炎症因子水平变化为指标进行药效学研究.透射电镜结果显示,杂化外泌体与乳外泌体外观均呈茶托状,共孵育后外泌体粒径由(97.92±3.42)nm 增长到(132.70±4.07)nm,Zeta 电位由(-2.01±0.33)mV 变为(-17.90±2.13)mV,WB结果显示CD63与TSG101蛋白在乳外泌体及杂化外泌体中均正常表达.酶标仪测定乳外泌体包封率31.64％±2.48％、载药量2.35％±0.52％,杂化外泌体包封率48.21％±3.12％、载药量3.17％±0.36％.药效学结果显示,与模型组相比,各给药组一般情况及足肿胀度、关节炎指数及免疫器官指数均得到显著改善(P＜0.05,P＜0.01),微血管综合评分及血管阻力显著下降(P＜0.05,P＜0.01),血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)炎症因子水平显著降低(P＜0.01),滑膜组织的病变得到一定程度的改善.同时与SIN组、SIN-脂质体组及SIN-乳外泌体组相比,SIN-杂化外泌体组具备更平稳持久的药效.该研究将乳源性外泌体与脂质体共孵育得到的杂化外泌体成功改善了外泌体载药量小与脂质体生物相容性差等问题,负载青藤碱的杂化外泌体对CIA大鼠有着良好的疗效,可有效解决青风藤等疗效佳但生物半衰期短的问题,为传统中药的新发展及类风湿性关节炎等疾病的治疗提供了新思路.

目的:探讨牛乳-紫草素纳米载药体系对肝癌细胞的杀伤作用。方法:采用实验研究方法。采用差速离心法分离出牛乳外泌体，制备牛乳-紫草素纳米载药体系，分光光度法测定并计算紫草素含量。采用磺酰罗丹明B比色法评价细胞毒性，Annexin V-FITC/碘化丙啶检测法测定细胞凋亡情况，Western blot法检测肝癌细胞中Bax和Bcl-2蛋白表达水平。单纯紫草素溶液处理人肝癌细胞系HepG2细胞为紫草素组，牛乳-紫草素纳米载药体系处理人肝癌细胞系HepG2细胞为牛乳-紫草素纳米载药体系组。观察指标：（1）牛乳-紫草素纳米载药体系中紫草素载量百分比。（2）人肝癌细胞系HepG2细胞毒性评价。（3）人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡情况分析。（4）人肝癌细胞系HepG2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平检测。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检查。 结果:（1）牛乳-紫草素纳米载药体系中紫草素载量百分比：牛乳-紫草素纳米载药体系中紫草素载量百分比为22.8%。（2）人肝癌细胞系HepG2细胞毒性评价：紫草素组和牛乳-紫草素纳米载药体系组的肝癌细胞存活率分别为53.9%±2.9%和45.4%±1.9%，两组比较，差异有统计学意义（ t=46.27， P<0.05）。（3）人肝癌细胞系HepG2细胞凋亡情况分析：紫草素组和牛乳-紫草素纳米载药体系组的肝癌细胞早期凋亡率分别为11.3%±1.5%和14.8%±2.2%，两组比较，差异无统计学意义（ t=1.37， P>0.05）。紫草素组的肝癌细胞晚期凋亡率和总凋亡率分别为32.3%±1.3%和43.6%±4.3%，牛乳-紫草素纳米载药体系组的肝癌细胞晚期凋亡率和总凋亡率分别为38.7%±3.2%和53.5%±4.4%，两组比较，差异均有统计学意义（ t=37.39，30.97， P<0.05）。（4）人肝癌细胞系HepG2细胞Bax和Bcl-2蛋白表达水平检测：紫草素组Bax和Bcl-2蛋白表达水平分别为232.0±2.6和32.0±1.6，牛乳-紫草素纳米载药体系组中Bax和Bcl-2蛋白表达水平分别为286.0±3.8和17.0±1.5，两组比较，差异均有统计学意义（ t=69.83，53.32， P<0.05）。 结论:牛乳-紫草素纳米载药体系对人肝癌细胞系HepG2细胞有细胞毒性和凋亡诱导作用，可抑制肝癌细胞生长。

β-酪蛋白是牛乳蛋白的主要成分，其中以A1、A2 β-酪蛋白最为常见。β-酪蛋白衍生肽具有生物活性，可影响胃肠道和肠脑轴功能。A1和A2 β-酪蛋白具有不同的生理效应，其中A1 β-酪蛋白衍生肽可能加重肠道功能障碍和胃肠道炎症、干扰氧化还原平衡，并可能导致神经炎症和认知功能障碍。临床试验表明，与饮用含A1和A2 β-酪蛋白的牛奶相比，饮用不含A1 β-酪蛋白的牛奶胃肠不良症状和肠道炎症较少，并且在标准化测试中与认知功能的改善相关。虽然还需要进一步研究A1和A2 β-酪蛋白在生理和发育过程中的作用，但目前的研究表明，避免食用A1 β-酪蛋白可改善人的整体健康，尤其是改善消化和认知功能。

目的:在牛乳中添加等同母乳剂量的生长抑素(SST)及胃动素(MTL)，探讨其对食物过敏/不耐受的调节作用。方法:挪威大鼠(BN)幼鼠给予母乳(母乳组)、牛乳(牛乳组)、添加SST的牛乳(SST组)、添加MTL的牛乳(MTL组)、添加SST+MTL的牛乳(SST+MTL组)5种方式喂养4周，并配合皮肤致敏。每周量化评定临床损害。酶联免疫吸附法(ELISA)测定血总免疫球蛋白E (IgE)及粪钙卫蛋白(FC)水平。葡聚糖蓝法测定胃排空比率及小肠推进比。结果:母乳组、牛乳组、SST组、MTL组及SST+MTL组的总IgE水平分别为(45.75±5.05) μg/L、(580.42±45.24) μg/L、(290.38±22.88) μg/L、(424.26±22.17) μg/L、(209.49±17.59) μg/L；FC水平分别为(149.07±24.78) μg/g、(458.85±33.81) μg/g、(343.63±34.97) μg/g、(407.79±29.62) μg/g、(296.83±28.77) μg/g；第4周临床损害总评分分别为：(0.50±0.61)分、(9.37±1.04)分、(6.83±1.49)分、(7.00±1.14)分、(5.37±1.19)分。与牛乳组比较，SST组、MTL组及SST+MTL组的IgE、FC水平及临床损害评分均显著降低，差异均有统计学意义(均 P<0.01)。牛乳组临床损害最重，SST+MTL组临床损害最轻，SST+MTL组最接近母乳喂养天然状态。MTL组的胃排空比率最接近母乳组[(92.52±6.27)%比(100.00±9.70) %， P<0.05]。牛乳组有明显腹泻及小肠推进比过快，小肠推进比母乳组为(39.32±2.61)%，牛乳组为(71.96±4.43)%，2组比较差异有统计学意义( P<0.01)。SST+MTL组的肠动力有所下降，但这刚好对抗了牛乳过敏产生的腹泻，SST+MTL组小肠推进比为(38.90±2.65)%，母乳组为(39.32±2.61)%，2组比较差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:牛乳中添加母乳剂量的SST及MTL使牛乳的致敏性及胃肠耐受性更接近母乳，SST有利于抑制过敏免疫损伤，MTL有利于改善牛乳的胃肠耐受性，且SST与MTL有拮抗平衡调节作用，二者同时添加，可协同提高牛乳的胃肠耐受性。

目的:探讨补充牛乳铁蛋白(bLF)对早产大鼠坏死性小肠结肠炎(NEC)模型肠道黏膜组织的保护作用及对炎性因子表达的影响，为补充bLF预防NEC提供理论依据。方法:SD早产大鼠随机分为4组，每组25只。对照组：单纯人工喂养；模型组：人工喂养＋脂多糖(LPS)灌胃＋缺氧刺激；高剂量bLF干预组：每天给予bLF(7g/L)＋人工喂养＋LPS灌胃＋缺氧刺激；低剂量bLF干预组：每天给予bLF(2 g/L)＋人工喂养＋LPS灌胃＋缺氧刺激。应用HE染色进行组织病理学分析。酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠道黏膜组织白细胞介素(IL)-1β和IL-6的表达水平。结果:(1)形态学观察：模型组大鼠肠壁菲薄，肠腔可见不同程度积气、积液。镜下见肠道组织坏死严重，肠壁绒毛脱落，腺体排列紊乱，上皮细胞水肿明显，固有层和黏膜下层重度水肿、分离，大量炎性细胞浸润。高剂量bLF干预组和低剂量bLF干预组大鼠上述表现减轻，对照组无明显异常。(2)肠道组织炎性因子IL-1β、IL-6的表达：模型组大鼠肠道黏膜组织中IL-1β和IL-6的表达水平[(380.89±20.25) ng/L，(485.12±31.44) ng/L]均高于对照组[(270.69±45.58) ng/L，(212.62±89.46) ng/L]，差异均有统计学意义( q＝9.785、14.030，均 P<0.01)。缺氧和LPS刺激大鼠经过bLF喂养，回肠黏膜组织中IL-1β和IL-6的表达被显著抑制，差异均有统计学意义(IL-1β： q＝9.105、8.761，均 P<0.01; IL-6： q＝8.175、8.996，均 P<0.01)。高剂量bLF干预组与低剂量bLF干预组IL-1β和IL-6的表达差异均无统计学意义(IL-1β： q＝－0.084， P>0.05；IL-6： q＝－1.140， P>0.05)。 结论:经肠道补充bLF可减轻早产SD大鼠NEC模型肠道组织的损伤程度，并抑制肠道组织IL-1β和IL-6炎性因子的表达，对早产SD大鼠肠道组织有一定的保护作用。

随着全球癌症患病比例的逐年增加,癌症已经成为全球死亡的主要原因和重大的公共卫生问题.抗癌肽能破坏肿瘤细胞膜结构或抑制癌细胞增殖和迁移以及肿瘤血管的形成,几乎不表现溶血性且对正常的人体细胞基本无损伤等优点,已经成为抗肿瘤新药研究的一大热点.抗癌肽主要来源可分为4类:抗菌肽类如牛乳铁蛋白肽(LfcinB)、天蚕素等,对细菌等微生物具有广谱高效的抑制活性,同时能够抑制多种癌细胞的增殖和生长,诱导癌细胞凋亡;多肽激素类如心房利钠肽(ANP)以及在ANP形成过程中的其他一些多肽,在临床上具有增加血管通透性、降压、利钠、利尿、舒张血管平滑肌、调节水盐平衡和抑制细胞增殖等作用,最近研究发现它们可以直接杀死肿瘤细胞或强力抑制癌细胞DNA的合成,从而抑制癌细胞的生长;多肽毒素类如蜂毒、蛇毒、蝎毒等毒性较强的生物毒素,对多种肿瘤均有抑制作用;内皮抑制素可以抑制肿瘤血管的生成抑制癌细胞的生长和转移.抗癌肽主要通过诱导细胞凋亡、破坏细胞的膜结构,改变细胞周围或细胞内pH以及增强免疫应答等多种机制来抑制癌细胞增殖.综述抗癌肽的来源、抑癌机理,并对抗癌肽的应用前景进行分析,旨为抗癌肽的深入研究和开发应用提供参考.

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目的 对本研究前期建立的用于乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台进行评价.方法 使用3份生牛乳样品,批内重复8次检测,计算批内精密度;另对3份生牛乳分别重复8个批次检测,计算批间精密度.对高浓度标准品稀释3个浓度后,进行稀释回收率试验;另对3个浓度基础液分别进行加标回收率试验;取10份生牛乳样品,分别用蛋白质芯片检测平台与商用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行检测并对结果进行方法学比较.结果 用于生牛乳中乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台的批内精密度在9.79％ ～ 15.90％之间,批间精密度在11.63％～23.38％之间;稀释回收率在79.8％ ～ 129.7％之间,加标回收率在105.7％ ～ 133.9％之间;经比较,两种方法的相关系数r=0.825 2,差异有统计学意义(t=4.132,P＜0.05),配对比较t检验结果显示两种方法差异无统计学意义(t=1.282,P＞0.05).结论 本研究建立的用于乳铁蛋白的蛋白质芯片检测平台能够满足实验室检测需要,尚有操作偏倚需进一步优化.

[目的]为从免疫的角度比较和分析黏附素分子细胞外纤维蛋白原结合蛋白(Extracellular fibrinogen-binding protein,EfB)和纤维连接蛋白结合蛋A(Fibronection binding protein,FnBP)对聚集因子A (Clumping factorA,ClfA)抑制牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)黏附牛乳腺原代上皮细胞作用的增强效果.[方法]本试验分离培养牛乳腺上皮细胞并鉴定;将真核重组质粒EfB和FnBPA分别与ClfA组合免疫新西兰大白兔,并利用免疫后抗体体外抑制2株SA分离株侵染牛乳腺上皮细胞,采用平板计数法定量检测与比较不同免疫组合诱导抗体对黏附的抑制作用;对SA和乳腺上皮细胞分别进行荧光染色,观察不同免疫组合诱导的抗体对黏附抑制效果的差异.[结果]成功分离培养了牛乳腺原代上皮细胞;证明了构建的ClfA、FnBPA和EfB真核重组表达质粒均可在细胞中表达,且在免疫实验兔后可诱导特异性抗体的产生;细菌平板计数和荧光染色观察的结果表明,黏附素分子单独和组合免疫的抗体对该菌不同菌株(GY278和GY309)的黏附抑制能力不同,ClfA抗体的黏附抑制能力最强,FnBPA分子A区的黏附抑制能力优于D区.FnBPA、EfB分别与ClfA联合免疫抗体对黏附的抑制程度高于黏附素分子单独免疫组,FnBPA分子A区对ClfA黏附抑制的增强作用优于D区,FnBPA-A区与Efb相比对ClfA的黏附抑制增强差异不显著.[结论]FnBPA-A、FnBPA-D和EfB分别与ClfA联合免疫可不同程度地影响ClfA的黏附抑制效果,该结果为以黏附素分子为靶点的牛乳腺炎疫苗的研究提供了实验数据.

目的 综述婴幼儿配方食品中蛋白质含量对生长发育及长期健康的影响,并探讨婴幼儿配方食品中蛋白质的适宜含量值.方法 计算机检索Cochrane Library、PubMed、Ovid和SinoMed 2005～2016年间发表的与婴幼儿配方食品蛋白质含量或摄入量相关的系统综述和Meta分析、随机对照试验及前瞻性研究.结果 从检索到的1400篇文献中共筛选出9篇(足月儿7篇,早产儿2篇)符合纳入标准的文献.1、高蛋白婴儿配方食品喂养组(1.92～4.7g/100kcal) (HP)的足月儿体质量和身长会有一过性的生长加速,其6月-6岁的体质指数(body mass index,BMI)、12月-6岁的年龄别BMI Z评分均显著高于低蛋白婴儿配方食品(1.6～3.3g/100kcal)喂养组(LP),足月儿在婴儿期摄入高蛋白质含量的婴儿配方食品会增加其6岁时的肥胖风险,但对60月龄内的体成分无显著影响.HP组的足月婴儿血浆必需氨基酸浓度更高.2、高蛋白配方食品能够促进早产儿的生长,但其对蛋白质和氨基酸代谢、神经发育等的影响以及高蛋白摄入所导致的生长加速对健康的长期影响还有待进一步研究.结论 基于现有证据,认为含有1.8g/100kcal的牛乳婴儿配方食品和较大婴儿配方食品能够满足1岁以内足月产婴儿的生长发育需求.对于最大值,牛乳婴儿配方食品3.0g/100kcal是适宜的,而较大婴儿配方食品则应在现有的基础上适度下调,以保证提供充足的营养且不会带来肥胖风险.幼儿配方食品以及早产儿配方食品的蛋白质适宜含量还有待进一步研究.