目的:基于细胞代谢组学分析炙淫羊藿炮制前后对小鼠黑色素瘤细胞（B16细胞）内源性代谢物的影响，探讨炙淫羊藿炮制前后的药性变化。方法:采用超高效液相色谱串联四级杆轨道阱质谱（UHPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS）技术，对淫羊藿、炙淫羊藿干预的B16细胞内源性小分子进行代谢组学分析，获取组间差异代谢产物，并基于MetaboAnalyst 5.0数据库分析相关代谢通路。结果:经炙淫羊藿及其生品干预后，B16细胞中13个细胞内源性差异性代谢物发生变化，分别为丙氨酸、肉毒碱C3∶0、谷氨酸-1、乳酸、异亮氨酸、胆碱、磷脂酰胆碱（34∶2、36∶2）、游离脂肪酸、柠檬酸、肉毒碱C4∶0、溶血磷脂酰胆碱16∶0、苹果酸，且炮制品对差异代谢物的影响强于生品。涉及的主要通路有瓦博格效应、丙酮酸代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭、丙酮醛降解等。结论:淫羊藿、炙淫羊藿对细胞代谢途径有一定影响，可能与淫羊藿炮制前后药效作用、寒热药性变化有关。

目的:观察毛蕊异黄酮(calycosin，CA)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)细胞系SH-SY5Y细胞增殖和瓦博格效应的影响并探讨其可能的机制。方法:将SH-SY5Y细胞培养于DMEM培养基，实验分为对照组和CA组、CA+siRNA阴性对照组和CA+siRNA TAp73α组。CA组的细胞用50、100和150 μmol/L CA分别处理24、48和72 h。CA+siRNA阴性对照组的细胞转染阴性对照siRNA质粒24 h后，再加100 μmol/L CA处理48 h。CA+siRNA TAp73α组的细胞转染TAp73α干扰RNA质粒24 h后，再加100 μmol/L CA处理48 h。用CCK-8法检测细胞的增殖水平，用化学检测法检测细胞培养液中乳酸的水平和细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)活性，用液闪法检测细胞对葡萄糖的吸收量。采用细胞外通量分析仪检测细胞外液酸化速率、细胞氧气消耗速率和细胞糖酵解能力。采用蛋白质印迹法检测TAp73蛋白的表达水平。采用实时定量聚合酶链反应(quantificational real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR)检测TAp73α mRNA的相对表达水平。采用单因素方差分析比较各组间的差异，采用LSD- t检验进行组间差异的两两比较。 结果:与对照组比较，经50、100和150 μmol/L CA处理的SH-SY5Y细胞，在24、48和72 h细胞的增殖水平显著降低，呈现剂量和时间依赖性。与对照组比较，经50、100和150 μmol/L CA处理的SH-SY5Y细胞在48 h以剂量依赖的方式降低了培养液中乳酸的水平，对照组和CA组(50、100和150 μmol/L)的乳酸相对水平分别为(100±0)%、(84.31±5.14)%、(52.06±6.37)%和(32.16±4.11)%，对照组和CA组之间的差异具有统计学意义(均 P<0.05)。CA显著降低了SH-SY5Y细胞中LDH活力，LDH的活力在对照组和CA组(50、100和150 μmol/L)分别为(24.32±3.77)U/mg、(19.39±2.34)U/mg、(12.34±2.64)U/mg和(7.61±1.06)U/mg，对照组和CA组之间的差异具有统计学意义( P<0.05)。CA显著降低了SH-SY5Y细胞对葡萄糖的吸收，葡萄糖吸收的相对水平在对照组和CA组(50、100和150 μmol/L)分别为(100±0)%、(78.36±6.22)%、(42.91±5.07)%和(26.18±4.39)%，对照组和CA组之间的差异具有统计学意义( P<0.05)。CA显著降低了SH-SY5Y细胞的细胞外液酸化速率，细胞外液酸化速率在对照组和CA组(50、100和150 μmol/L)的相对水平分别为(100±0)%、(75.37±5.37)%、(38.42±4.11)%和(22.31±2.86)%，对照组和CA组之间的差异具有统计学意义( P<0.05)。细胞氧气消耗速率的相对水平在对照组和CA组(50、100和150 μmol/L)分别为(100±0)%、(85.76±5.29)%、(64.11±6.07)%和(42.86±3.85)%，对照组和CA组之间的差异具有统计学意义( P<0.05)。细胞糖酵解能力的相对水平在对照组和CA组(50、100和150 μmol/L)分别为(100±0)%、(75.87±8.06)%、(54.93±6.33)%和(36.75±5.28)%，对照组和CA组之间的差异具有统计学意义( P<0.05)。与对照组比较，100、150 μmol/L的CA显著上调了TAp73蛋白的表达水平，对照组和CA组(100和150 μmol/L)的TAp73蛋白相对表达水平分别为12.76±2.64、35.84±5.61和67.51±5.97。RNA干扰沉默TAp73α的表达，影响CA对SH-SY5Y细胞增殖和瓦博格效应的抑制作用。 结论:CA可抑制人NB细胞株SH-SY5Y细胞的增殖，作用机制可能与通过上调TAp73蛋白的表达水平从而抑制瓦博格效应有关。

盐碱胁迫下植物根系分泌物包含丰富生化信息并具有重要生态作用.为了探讨耐盐碱牧草湖南稷子(Echinochloa frumentacea)在盐碱胁迫下根系分泌物组成,揭示其在盐碱胁迫下的生理及生态作用,以湖南稷子为试验对象,在人工气候室开展水培试验,并在苗期分别进行中性盐(NaCl+Na2SO4 100 mmol/L)、碱性盐(NaCl+NaHCO3 100 mmol/L)和碱(Na2CO3+NaHCO350 mmol/L)处理.在处理3 d后,利用液质联用仪(LC-MS/MS)检测对照组和处理组根系分泌物的化合物成分.结果表明,盐碱胁迫下湖南稷子根系分泌物共有334种化合物.依据正交偏最小二乘法判别分析(OPLS、|DA),重要值(VIP)得分及t检验的P值,发现对照比SaSo100(碱性盐处理100 mmol/L),对照比Soda50(碱处理50 mmol/L)和对照比Salt 100(中性盐处理100 mmol/L)分别有22、15和21个差异根系分泌物.其中碱性盐和碱处理下根系分泌物组成相近,包括脂质、酚酸,生物碱,苯酞类,氨基糖,萜类,醌类,氨基酸及其衍生物;中性盐处理下有脂质、酚酸,生物碱,苯酞类,萜类.京都基因与基因组百科全书注释及富集发现,盐碱胁迫下根系分泌物不仅含有三羧酸循环代谢产生的碳水化合物、核苷酸,氨基酸,脂肪酸,类脂和维生素等物质,而且与瓦博格效应、膜运输,信号传导以及遗传信息处理等途径有关.研究表明,湖南稷子通过根系分泌物渗出,调节自身代谢物浓度,加强或改变碳同化、呼吸作用、信号传导等提高对盐碱胁迫的适应性.

目的 通过观察苯扎贝特对肺腺癌A549细胞生长的抑制作用,探寻其可能的作用机制.方法 取对数生长期A549细胞,设苯扎贝特组(25、50、100、200、400 μmol/L)、阴性对照组、空白对照组,药物干预48 h及72 h后,CCK-8法检测A549细胞增殖抑制率;测定细胞经药物作用后的葡萄糖及乳酸含量,计算葡萄糖消耗率及乳酸产量,评价不同浓度苯扎贝特对A549细胞有氧糖酵解的影响;免疫印迹法(Western blot)检测高中低浓度苯扎贝特组细胞中Akt、mTOR和PKM2的蛋白表达.结果 苯扎贝特能显著抑制肺腺癌A549细胞增殖,抑制作用与用药浓度成正比;苯扎贝特可影响A549细胞糖酵解过程,随着用药浓度增大,细胞中葡萄糖消耗量及乳酸产量不断减少;苯扎贝特可明显抑制Akt、mTOR和PKM2的蛋白表达,抑制作用呈现浓度依赖性.结论 苯扎贝特能够促进肺腺癌A549细胞凋亡,作用机制可能与抑制糖酵解途径,逆转肿瘤细胞的瓦博格效应有关.

尿路上皮病变主要包括炎症和肿瘤.尿路上皮发生癌变后,部分肿瘤细胞会随尿液排出,因此,尿脱落细胞学检查已成为尿路上皮癌(urothelial carcinoma,UC)诊断和术后随访的主要方法之一.UC细胞依赖有氧糖酵解,作为维持其无限生长和增殖的主要能量来源,称为瓦博格(Warburg)效应.

[目的]分析乳酸脱氢酶A(LDHA)在肾细胞癌组织及细胞系中的表达情况并探讨其影响肾细胞癌细胞进展的方式.[方法]收集自2018年6月至2022年6月在我院通过手术方式获取的肾细胞癌组织标本52例及癌旁组织标本49例,免疫组织化学法比较LDHA的表达差异.通过qRT-PCR及Western blot实验检测LDHA在正常人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)及肾细胞癌细胞系(A498,Caki-2,ACHN,786-O)中的表达水平.构建LDHA-shRNA重组质粒,转染至786-O以敲低LDHA表达,利用CCK-8、克隆形成实验及EdU染色法检测敲低LDHA表达对癌细胞增殖活性的影响.利用细胞葡萄糖摄取试验及乳酸分泌试验检测细胞糖摄取水平和乳酸分泌水平的变化.利用糖酵解压力测试实验检测细胞糖酵解能力的变化.[结果]免疫组化结果可见LDHA在肾细胞癌组织中表达明显高于癌旁组织,并且临床TNM分期越高的肾癌组织,LDHA的表达水平越高(P<0.05).qRT-PCR和Western blot结果可见,LDHA在各肾细胞癌细胞系中的表达均较HK-2有明显升高(P<0.05).在786-O敲低LDHA表达后,细胞增殖活性及糖酵解能力均显著下调(P<0.05).[结论]LDHA在肾细胞癌组织及细胞中的表达均明显升高,肿瘤分期越晚期,LDHA的表达越高.抑制LDHA表达能显著抑制肾细胞癌细胞786-O的增殖活性及有氧糖酵解活性.

目的 探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-BrPA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路.方法 MTT法检测3-BrPA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染cDNA上调MCTl的表达后,检测3-BrPA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响.结果 3-BrPA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200 μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72％和7.8％;但200 μmol/L 3-BrPA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6％和82.3％.MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200 μmol/L 3-BrPA对细胞的增殖抑制率为72.44％,明显高于对照组(P＜0.05);25、50、100、200 μmol/L 3-BrPA作用细胞6h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98％、88.44％、43.3％、27.56％.结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-BrPA的敏感性,其机制可能是将3-BrPA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用.

肿瘤已成为全球最重要的公共卫生问题,近年来调控肿瘤能量代谢成为防治肿瘤的研究热点.“瓦博格效应”为肿瘤细胞特有的代谢方式,自噬是细胞重要的物质代谢方式与保护机制,自噬缺陷则促进肿瘤发生,两者在能量代谢方面密切相关,且代谢特点均与脾失健运的表现非常相似,属于中医脾虚范畴.因此,通过健脾中药抑制“瓦博格效应”并促进肿瘤细胞自噬可能是中医药防治肿瘤的新思路.

脾肾亏虚是“衰老-癌变”进程主要的脏腑病机.衰老过程中衰老代谢物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)的降低,肿瘤代谢物(R)-2羟戊二酸[(R)-2HG]、延胡索酸和琥珀酸的累积,体现肾不藏精,脾失健运.缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在正常组织升高,诱导假性缺氧状态,是衰老代谢物与肿瘤代谢物的整合性枢纽,驱动氧化磷酸化向瓦博格样有氧糖酵解的转变.假性缺氧通过表观遗传修饰如组蛋白甲基化、组蛋白乙酰化和DNA甲基化,诱导循序渐进的代谢重编程导致脾肾相互滋生化源不足,产生易于肿瘤发生的微环境,产生肿瘤样状态.健脾补肾可能通过“卡路里限制样效应”,改善能量代谢障碍,延缓或逆转衰老-癌变进程.

瓦博格效应认为,即便在氧气充足时,肿瘤仍大量利用葡萄糖进行有氧糖酵解,产生乳酸和少量ATP.虽产能效率低,但中间产物有利于改造肿瘤微环境,促进肿瘤恶性进展.近年发现,成纤维细胞作为肿瘤间质的重要组成部分,在肿瘤细胞诱导下具有癌相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblast, CAF)表型,通过自身线粒体功能障碍?自噬而持续向肿瘤细胞提供生物大分子合成原料,用以促进肿瘤增殖?侵袭?转移?耐药.相反,肿瘤细胞自身则提高线粒体代谢水平,进行氧化磷酸化,此现象被命名为反瓦博格效应.CAF 与酸化的微环境驱动肿瘤细胞自发选择葡萄糖代谢方式?促进肿瘤恶性进展.