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狂犬病病毒体外生存活力研究
编辑人员丨5天前
目的:了解狂犬病病毒在体外组织和体液样本中的生存能力。方法:通过病毒滴度测定、直接免疫荧光、RT-PCR和病毒分离实验室技术手段对体外组织和悬液中狂犬病病毒生存活力进行验证。结果:随着温度升高,脑组织和悬液中狂犬病病毒活力逐渐下降,在56℃,30 min后病毒即失去感染力,在37℃时,组织中病毒活力可保持7 d;在pH9.6时,1 h后无法检测病毒活力;终浓度30%以上乙醇,500 mg/L以上次氯酸钠和100 mg/L以上苯扎溴铵对悬液中狂犬病病毒作用3 min后即可完全灭活;80%丙酮对组织中狂犬病病毒灭活作用最强,在浸泡4 h后样本即无法进行病毒分离。结论:狂犬病病毒不耐高温,在pH6.8~7.4环境中较为稳定,常用消毒剂即可对病毒发挥作用;本实验旨在为狂犬病病毒的体外生存活力提供详细数据,为下一步狂犬病防控工作开展提供理论支持。
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编辑人员丨5天前
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工作场所空气中30种挥发性有机污染物的气相色谱快速测定法
编辑人员丨5天前
目的:建立DB-WAX毛细管柱同时测定工作场所空气中30种挥发性有机污染物的快速检测方法。方法:于2020年8月,用活性炭管采集工作场所空气中正戊烷、正己烷、甲基环己烷、辛烷、丙酮、乙酸乙酯、丁酮、苯、3-戊酮、三氯乙烯、四氯乙烯、甲苯、乙酸丁酯、2-己酮、乙酸异戊酯、乙苯、对二甲苯、间二甲苯、乙酸戊酯、邻二甲苯、氯苯、苯乙烯、环己酮、对氯甲苯、溴苯、间二氯苯、对二氯苯、邻二氯苯、邻氯甲苯、1, 2, 4-三氯苯30种物质,经二硫化碳解析,解吸液经DB-WAX柱分析,火焰离子化检测器测定。结果:30种挥发性有机污染物分离效果好,工作曲线线性相关系数均>0.999,相对标准偏差0.1%~3.2%,解吸效率77.0%~117.1%,定量下限0.33~ 5.33 μg/ml,最低定量浓度0.22~ 3.55 mg/m 3,加标回收率95.4%~104.9%。 结论:该方法能够较好地分离和测定工作场所空气中30种挥发性有机化合物,操作简便、快捷。
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编辑人员丨5天前
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3-溴丙酮酸-胆固醇酯增强乳腺癌细胞对他莫昔芬敏感性研究
编辑人员丨2023/11/18
目的:探讨3-溴丙酮酸-胆固醇酯(3-bro-mopyruvate cholesterol ester,3-BP-Cl)增强乳腺癌对他莫昔芬(tamoxifen,TAM)敏感性作用及机制.方法:MTT法检测药物对乳腺癌细胞活力的影响,并使用金氏公式检验3-溴丙酮酸-胆固醇酯与他莫昔芬是否具有协同抗乳腺癌作用.Calcein AM/PI染色法检测药物对细胞的毒性作用,集落克隆形成法检测药物对乳腺癌细胞的增殖抑制作用.流式细胞术检测药物诱导乳腺癌细胞的凋亡作用.Western blot检测药物对细胞己糖激酶2、Bcl-2、Bax蛋白表达的影响.结果:MTT结果显示3-溴丙酮酸-胆固醇酯具有抑制乳腺癌作用,与他莫昔芬联用能显著抑制MCF-7细胞生长活性(P<0.05).金氏公式测算结果显示3-溴丙酮酸-胆固醇酯与他莫昔芬具有协同抑制乳腺癌细胞增殖作用(q>1.15).Calce-in AM/PI染色结果显示两药联用组细胞死亡数量最多.集落克隆形成实验结果显示两药联用组MCF-7细胞的集落数量最少.Annexin V凋亡结果显示与单药组相比,联用组细胞凋亡数量显著升高(P<0.01).Western blot结果显示3-溴丙酮酸-胆固醇酯具有抑制MCF-7细胞内己糖激酶2、Bcl-2表达,增强Bax表达的作用.结论:3-溴丙酮酸-胆固醇酯可增加乳腺癌细胞对他莫昔芬的敏感性,协同发挥抑制乳腺癌细胞的作用.机制与其下调细胞内己糖激酶2、Bcl-2的表达,增强Bax的表达有关.
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编辑人员丨2023/11/18
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3-溴丙酮酸对耐顺铂鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的:探讨糖酵解抑制剂3-溴丙酮酸(3-BP)对耐顺铂鼻咽癌细胞HNE1/DDP增殖和凋亡的影响.方法:MTT比色法和集落克隆形成实验检测3-BP对HNE1/DDP细胞的增殖抑制作用,PI染色法检测3-BP对HNE1/DDP细胞凋亡的影响,Western blotting检测凋亡相关蛋白多聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(PARP)、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达.结果:3-BP可显著抑制HNE1/DDP细胞的增殖,其48 h的IC50值为260.2μmol/L.低浓度(10、20、40μmol/L)的3-BP能明显抑制HNE1/DDP细胞集落克隆的形成.3-BP可诱导HNE1/DDP细胞发生明显的细胞凋亡(P<0.01),80、160、320μmol/L 3-BP作用48 h的细胞凋亡率分别为(13.7±2.1)%、(25.5±2.4)%、(45.5±3.5)%,对照组的细胞凋亡率为(1.6±0.6)%.Western blotting结果显示,3-BP处理HNE1/DDP细胞后可促进PARP的剪切,能下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达.结论:3-BP对HNE1/DDP细胞具有增殖抑制及凋亡诱导作用,其机制可能与下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达相关.
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编辑人员丨2023/8/6
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溴氰菊酯暴露对白纹伊蚊抗性株幼虫氨基酸水平的影响
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察溴氰菊酯暴露对抗性白纹伊蚊幼虫氨基酸的影响,探索溴氰菊酯毒性相关氨基酸标志物.方法 从广州市越秀区采集白纹伊蚊幼虫,实验室饲养,取F1代幼虫进行溴氰菊酯抗性测定;将抗性白纹伊蚊F1代幼虫分成药物暴露组、丙酮暴露组和空白对照组(每组10条),前两组分别用溴氰菊酯丙酮溶液和相同浓度的丙酮暴露,空白对照组不做处理;用LC-MS/MS检测三组幼虫体内的氨基酸水平,每组重复检测6次.结果 F1代幼虫LC50=0.065 mg/L,确定为抗性种群;药物组幼虫体内12种氨基酸与空白对照组出现差异(P<0.05),其中丙氨酸、瓜氨酸、酪氨酸、甘氨酸、亮氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、蛋氨酸和苏氨酸11种氨基酸水平在暴露后降低(P<0.05),组氨酸水平在暴露后升高(P<0.05);药物组幼虫体内的丙氨酸、瓜氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸的变化与丙酮暴露组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 溴氰菊酯丙酮溶液暴露可导致抗性白纹伊蚊幼虫体内12种氨基酸水平改变,其中丙氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸和瓜氨酸浓度水平降低与溴氰菊酯暴露有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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单羧酸转运蛋白1增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸的敏感性
编辑人员丨2023/8/6
目的 探究单羧酸转运蛋白1(MCT1)在增强乳腺癌细胞对3-溴丙酮酸(3-BrPA)敏感性中的作用,为乳腺癌治疗提供新思路.方法 MTT法检测3-BrPA对乳腺癌细胞的增殖抑制作用,溴化丙啶单染法流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA试剂盒检测细胞内己糖激酶Ⅱ、乳酸脱氢酶、乳酸、三磷酸腺苷水平,Western blot检测MCT1蛋白的表达,瞬时转染cDNA上调MCTl的表达后,检测3-BrPA对MDA-MB-231细胞的增殖和三磷酸腺苷水平的影响.结果 3-BrPA对MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响不明显,200 μmol/L作用24 h后增殖抑制率和凋亡率仅为8.72%和7.8%;但200 μmol/L 3-BrPA作用MCF-7细胞24 h后其增殖抑制率和凋亡率为84.6%和82.3%.MDA-MB-231细胞的MCT1过表达后,200 μmol/L 3-BrPA对细胞的增殖抑制率为72.44%,明显高于对照组(P<0.05);25、50、100、200 μmol/L 3-BrPA作用细胞6h后,细胞内三磷酸腺苷水平和对照组相比分别为96.98%、88.44%、43.3%、27.56%.结论 MCT1能增强乳腺癌细胞对3-BrPA的敏感性,其机制可能是将3-BrPA转运到细胞内,从而抑制细胞糖酵解来发挥抗肿瘤作用.
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编辑人员丨2023/8/6
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3-溴丙酮酸抑制人肝癌细胞株糖酵解的研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 观察3-溴丙酮酸(3-BrPA)对人肝癌细胞株糖酵解的影响.方法 不同浓度3-BrPA处理人肝癌细胞HepG2和人正常肝细胞QSG-7701后,细胞活性检测试剂盒(CCK-8)检测细胞存活率,流式细胞仪检测细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测HepG2和QSG-7701经过3-BrPA处理前后细胞内c-Myc、单羧酸转运蛋白1(MCT1) mRNA和蛋白表达,酶耦联法检测上述细胞葡萄糖吸收、乳酸分泌及细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量.结果 细胞存活和凋亡结果显示随3-BrPA浓度增加,细胞生长抑制率和凋亡率随之增高.不同浓度3-BrPA(25、50、75μmol/L)处理HepG2细胞24h后,凋亡率分别为(4.64±2.68)%、(14.57±8.41)%、(40.55 ±23.41)%,对照组0μmol/L下HepG2凋亡率为(5.62±3.24)%,75 μmol/L组与对照组比较差异有统计学意义(P=0.025).在mRNA和蛋白水平上,与QSG-7701比较,HepG2中c-Myc、MCT1均高表达(P=0.001、0.000),且当3-BrPA浓度为75 μmol/L时表达均下降(P=0.041、0.000).糖代谢结果显示当3-BrPA浓度为75 μmol/L时HepG2的葡萄糖吸收、乳酸分泌及细胞内ATP含量均逐渐降低(P=0.035、0.000、0.045),而QSG-7701中无改变(P=0.898、0.841、0.112).结论 3-BrPA通过抑制c-Myc/MCT1表达抑制HepG2的糖酵解,从而抑制HepG2细胞生长、促进细胞凋亡.
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编辑人员丨2023/8/6
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三溴丙酮酸对MCF-7细胞增殖、侵袭的影响及其机制研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 探讨三溴丙酮酸(3-BrPA)对MCF-7细胞增殖、侵袭,以及对真核转录起始因子5A2(eIF5A2)、c-myc基因、转移相关蛋白1(MTA1)表达的影响.方法 实验分为5组:加入等量PBS的对照组,75、100、125和150μmol/L 3-BrPA组.分别将3-BrPA作用于MCF-7细胞24、48和72 h,利用MTT、Transwell法检测3-BrPA对MCF-7细胞存活率和侵袭的影响.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白的变化.结果 与对照组比较,3-BrPA作用于乳腺癌MCF-7细胞后,细胞存活率降低(P<0.05),并且具有时间和剂量依赖性.Transwell结果显示,3-BrPA作用于MCF-7细胞24 h后,与对照组相比,穿过小室的细胞数减少(P<0.05).RT-PCR和Western blot检测结果提示,eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白表达水平随着药物浓度的增加而降低(P<0.05).结论 3-BrPA可以抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖及侵袭,其作用机制可能与降低eIF5A2、c-myc、MTA1基因和蛋白的表达有关.
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编辑人员丨2023/8/6
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艾沙康唑的合成工艺改进
编辑人员丨2023/8/6
目的 改进抗真菌药艾沙康唑的合成工艺.方法 R-乳酸甲酯与吗啉发生氨解反应后用3,4-二氢吡喃保护得到(R)-1-(4-吗啉基)-2-羟基-1-丙酮,再与2,5-二氟苯基溴化镁经格氏反应得到(R)-1-(2,5-二氟苯基)-2-[(2-四氢吡喃基)氧基]-1-丙酮,然后与三甲基碘化亚砜、三氮唑反应后脱THP保护基,并成甲磺酸盐得到高纯度的(2R,3R)-2-(2,5-二氟苯基)-1-(1,2,4-三唑基)-2,3-丁二醇甲磺酸盐;然后进一步分子内关环后与三甲基氰硅烷反应得到(2S,3R)-3-(2,5-二氟苯基)-3-羟基-2-甲基-4-(1,2,4-三唑基)丁腈,最后经水解、硫代,再与4-溴乙酰基苄腈环合即得艾沙康唑.结果与结论 工艺优化后目标化合物的总收率为12.5%(以R-乳酸甲酯计),纯度为100%(HPLC面积归一化法),ee值也达到100%,改进后的工艺反应条件温和、后处理简便,有利于工业化生产.
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编辑人员丨2023/8/6
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三溴丙酮酸抑制恶性转化的树突状细胞增殖的实验研究
编辑人员丨2023/8/6
目的 从阻滞糖代谢途径,探讨三溴丙酮酸(3-BrPA)抑制恶性转化的树突状细胞(DC)增殖的可能性.方法 采用髓源性小鼠DC与人脑胶质瘤干细胞(SU3细胞株)体外共培养的方法,诱导DC恶性转化,对恶性转化的DC单克隆,培养的细胞命名为胶质瘤干细胞诱导恶性转化的DC (GSPC-MTDCs).采用CCK-8法和细胞平板克隆形成实验检测SU3、正常DC、GSPC-MTDCs的增殖能力;采用Transwell小室侵袭实验检测细胞的侵袭能力.将GSPC-MTDCs接种于20只无荧光裸小鼠皮下,接种后11d,选取致瘤均一的10只裸鼠分为干预组和对照组,每组5只.干预组给予3-BrPA(5 mg·kg-1·d-1)腹腔注射,对照组给予等体积的生理盐水腹腔注射,共干预24 d.比较两组的致瘤情况.结果 (1) GSPC-MTDCs具有永生化特征,与SU3相比,其增殖速度加快,克隆形成率明显增高[(38.1±1.9)%对比(30.2±2.7)%,P<0.01];Transwell小室侵袭实验显示,GSPC-MTDCs侵袭能力强于SU3[(1 042±49)个对比(782 ±38)个,P<0.01)].(2)GSPC-MTDCs接种于无荧光裸小鼠皮下和尾静脉后全部致瘤.3-BrPA干预后24 d,干预组和对照组肿瘤的重量分别为(1.5±0.6)g、(3.3±1.0)g,差异有统计学意义(P =0.0107).病理学观察显示,相较于干预组,对照组细胞核异形明显、核分裂象多、血管丰富、炎症细胞浸润明显、c-myc阳性细胞比例高.结论 胶质瘤干细胞具有诱导DC恶变的潜能;3-BrPA具有抑制GSPC-MTDCs增值的作用.
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编辑人员丨2023/8/6
