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新型纸基酶联免疫吸附试验的研究进展
编辑人员丨4天前
纸基酶联免疫吸附试验(paper-based enzyme-linked immunosorbent assay,p-ELISA)作为新一代纸基微量检测技术,因其检测准确、快速、低成本等诸多显著优点,在临床诊断、食品药品监督等领域已展现出十分广泛的应用前景。文章主要从材料的选择、微孔板的制造和设计、生物分子固定、p-ELISA检测模式及应用等方面进行综述,为进一步实验室研究和实践应用提供依据。
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编辑人员丨4天前
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围术期认知功能紊乱小鼠海马蛋白质组学的变化及生物信息学分析
编辑人员丨4天前
目的:评价围术期认知功能紊乱(PND)小鼠海马蛋白质组学的变化及生物信息学分析。方法:清洁级健康雄性C57BL/6小鼠,15月龄,体重30~35 g,采用随机数字表法分为2组( n=9):对照组(C组)和PND组。采用异氟烷麻醉下行胫骨骨折切开复位内固定术构建PND模型。分别于术前1 d和术后1、3、7 d时行Morris水迷宫实验、旷场实验和条件恐惧实验。分别于术后1、3和7 d时,P组处死每次认知功能测试最差的3只小鼠、C组随机处死3只小鼠,取海马组织,采用高效液相色谱-质谱法筛选差异表达蛋白,并对差异表达蛋白进行Gene Ontology生物学过程富集分析(GO分析)和KEGG通路富集分析(KEGG分析)。 结果:与C组相比,P组术后各时点逃避潜伏期延长,靶象限停留时间百分比降低,场景恐惧记忆实验僵直时间百分降低( P<0.05)。采用高效液相色谱-质谱法筛选出21个差异表达的蛋白,其中有12个蛋白表达上调,有9个蛋白表达下调。GO分析结果表明,差异表达蛋白参与了代谢、信号传递、生物过程的调节等过程,构成了细胞器、突触等结构,并与结合、运输等分子功能有关。KEGG分析结果表明,MAPK信号通路、ErBb信号通路、AMPK信号通路、SNARE蛋白囊泡运输等存在差异。 结论:PND小鼠海马存在21个差异表达的蛋白,这些蛋白参与了神经炎症反应、突触结构异常、线粒体功能异常、自噬能力下降等可能与PND有关的病理过程。
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编辑人员丨4天前
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华氏巨球蛋白血症合并重-轻链型淀粉样变1例并文献复习
编辑人员丨4天前
目的:提高对华氏巨球蛋白血症(WM)合并重-轻链型淀粉样变(AHL)的认识。方法:回顾性分析宁夏回族自治区人民医院2020年5月收治的1例WM合并AHL患者的临床表现、诊断、治疗及预后,并复习相关文献。结果:患者以头晕、乏力为主要临床表现,检查发现贫血、肾功能不全、免疫球蛋白IgM升高,血免疫固定电泳提示IgM λ型单克隆免疫球蛋白,经骨髓细胞形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学(MICM)分型明确诊断为WM。皮下脂肪刚果红染色阳性,偏振光下见"苹果绿"样改变。采用显微切割及蛋白质谱方法分析沉积蛋白类型,结果显示在轻链λ增高的同时存在大量IgM重链,最终诊断为WM合并AHL。结论:WM合并AHL比较罕见,需通过MICM分型及受累组织或皮下脂肪刚果红染色进行综合诊断,利妥昔单抗及伊布替尼治疗有效。
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编辑人员丨4天前
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建立基于适体-纳米金的比色生物传感器用于快速检测Lp-PLA2
编辑人员丨4天前
目的:筛选血管炎性标志物脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的DNA适体,并建立以非标记核酸适体-纳米金为探针的可视化检测方法。方法:方法学建立。通过磁珠固定SELEX技术经孵育结合、ssDNA分离、PCR扩增、单链回收的8轮循环筛选Lp-PLA2适体,利用表面等离子体共振技术和流式细胞术验证适体的亲和力和特异性,并通过计算机软件模拟适体二级结构及其与靶蛋白的三维分子对接。随后制备适体-纳米金复合物,利用靶标竞争结合导致纳米金溶液在盐诱导下凝聚引起颜色变化,分光光度计检测溶液的吸光度检测靶标浓度,建立样品溶液中Lp-PLA2浓度与吸光度的线性关系。结果:筛选获得3条高亲和力、强特异性的Lp-PLA2核酸适体B76-2、B76-4及B76-5,解离常数分别为1.07、1.26及1.75 nmol/L;并成功基于B76-2适体构建纳米金比色传感方法,其线性范围和检测限分别是20~500 ng/ml和78 ng/ml,反应时间30 min,可特异性区分靶标与其他血栓标志物如凝血酶和髓过氧化物酶。结论:利用核酸适体-纳米金显色实现了简单、快速、特异的Lp-PLA2可视化检测。
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编辑人员丨4天前
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基于石墨烯场效应晶体管的新型冠状病毒抗原检测技术
编辑人员丨4天前
目的:建立一种简易、灵敏且快速的新型冠状病毒(2019 novel coronavirus,2019-nCoV)抗原检测方法。方法:构建石墨烯场效应晶体管器件,并对传感器沟道材料进行探针分子修饰。在不同浓度2019-nCoV刺突蛋白溶液中进行电学信号的测试,从而将抗原抗体特异性识别的生物信号转化为电学信号。结果:抗体探针通过连接分子成功固定在石墨烯表面,特异性靶向目标待测物,从而确保传感器件的检测准确性。测试不同目标物浓度条件下石墨烯场效应晶体管的转移曲线得到相应的狄拉克点偏移,最低检测浓度达到3.6×10 -17 g/ml,器件响应时间低至3 min。 结论:本研究初步建立了利用石墨烯场效应晶体管进行灵敏、高效且简便的2019-nCoV抗原检测方法。
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编辑人员丨4天前
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甲醛固定石蜡包埋组织组学应用的研究进展
编辑人员丨4天前
全球累积的甲醛固定石蜡包埋(FFPE)样本库为生物医学研究提供了庞大的资源基础。随着测序技术的飞速发展,FFPE样本在全基因组学、转录组学、蛋白质组学、表观遗传学和代谢组学等组学研究中的应用不断扩展,为疾病机制的深入解析提供了新的视角。然而,甲醛在组织固定过程中会诱导细胞内的核酸和蛋白质等生物大分子发生交联,给测序和分析带来了挑战。本文综述了FFPE样本在多组学研究中的应用进展及其挑战,为未来的生物医学研究提供参考。
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编辑人员丨4天前
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为创面愈合量身定制的生物医学材料
编辑人员丨4天前
创面愈合是一个长期的、多阶段的生物学过程,主要包括止血、炎症、增殖和组织重塑等阶段。控制感染和炎症,促进组织再生,有助于创面愈合。智能生物材料具有在时间和空间上控制创面愈合的能力,在创面修复方面具有显著的优势。了解生物材料是如何为创面愈合的不同阶段设计的,将有助于未来针对不同创面设计个性化材料,从而促进创面愈合。江苏大学医学院史惠副教授等在《Burns & Trauma》杂志发表题为《Tailored biomedical materials for wound healing》的综述。该文总结了用于抗炎、抗菌和组织再生等领域的生物材料的设计方法,重点介绍了生物材料在创面愈合不同阶段的精准调控。抗炎是创面愈合的炎症阶段的重要治疗策略,抗炎生物材料的设计必须包括相关分子的缓慢释放,改变生物材料的物理、化学性质或利用生物材料介导创伤微环境中的相关信号。抗菌生物材料也是提高创面愈合效率的重要工具,常用抗菌材料设计的关键是利用该材料作为载体承载/固定抗菌信号,通过对材料表面进行物理、化学修饰,也可以利用材料本身的特性来达到抗菌效果。合成更高效、更经济的抗菌材料是未来需要解决的问题。加速创面愈合增殖阶段和重塑阶段的关键是利用生物材料的载体缓释特性,提供相关的增殖和再生活性分子,协同促进创面修复。
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编辑人员丨4天前
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浆细胞肿瘤患者临床病理学及分子生物学特征分析
编辑人员丨4天前
目的:探讨浆细胞肿瘤患者的临床病理学及分子生物学特点。方法:收集2016年1月至2018年10月山西省人民医院收治的84例浆细胞肿瘤患者骨髓液、骨髓组织、外周血、尿液检查资料,其中骨髓液行骨髓涂片、染色体核型分析、荧光原位杂交(FISH)、免疫分型、第二代基因测序(NGS)等检测;外周血除用于细胞形态观察以外,还与尿液一同用于免疫固定电泳及游离轻链检查;骨髓组织用于观察骨髓组织结构及纤维化情况,并进行相关组织化学及免疫组织化学检查。结果:84例浆细胞肿瘤患者中,2例(2.4%)为意义未明的单克隆免疫球蛋白血症(MGUS),78例(92.8%)为多发性骨髓瘤(其中IgG κ型38例,IgG λ型33例,IgA κ型2例,IgAλ型1例,轻链型3例,不分泌型1例),3例(3.6%)为华氏巨球蛋白血症,1例(1.2%)为不分泌型多发性骨髓瘤(NSM)。81例患者骨髓涂片检查可见异常浆细胞比例为0.132~0.676,79例流式细胞术检查可见异常单克隆浆细胞比例为1.1%~52.4%;骨髓病理免疫组织化学及流式细胞术检查显示CD38、CD138呈阳性或弱阳性;染色体核型分析显示复杂核型少见;FISH检查示24例(28.6%)IGH分离,基因检测IGH-CCND1、IGH-MAF阳性各1例;1例行游离轻链检查,结果为阳性;NGS阳性率偏低。结论:浆细胞肿瘤以IgG型为主,其次为IgA型,轻链型较少见,IgM型及不分泌型极少见。不同克隆类型的浆细胞肿瘤骨髓细胞有不同的形态学表现。
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编辑人员丨4天前
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基于磁珠配体垂钓和液相色谱-质谱联用技术的威廉环毛蚓抗血栓大分子活性成分研究
编辑人员丨1个月前
目的 通过构建靶蛋白固定化磁珠,从威廉环毛蚓Pheretima guillemi中垂钓出与靶蛋白(纤维蛋白原、纤溶酶原)直接作用的抗血栓活性大分子成分,并经液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术鉴定.方法 优化并合成纤维蛋白原、纤溶酶原固定化羧基磁珠,分别通过固定化量、透射电镜、傅里叶红外光谱仪、激光纳米粒度分析仪表征功能化磁珠的靶蛋白固定量、微观形态、官能团及表面带电性;利用功能化磁珠从威廉环毛蚓抗血栓部位DPf3中垂钓与靶蛋白直接作用的抗血栓大分子活性成分,洗脱后经 LC-MS/MS 技术分析,并结合威廉环毛蚓物种蛋白质数据库比对鉴定.结果 靶蛋白固定化磁珠的最佳制备方案为将纤维蛋白原(0.4 mg/mL)或纤溶酶原(1 mg/mL)与磁珠于 4℃混旋孵育 8 h,纤维蛋白原和纤溶酶原的最大偶联量分别为(9.84±2.17)μg/mg和(7.24±0.91)μg/mg;经表征,靶蛋白均已成功固定于磁珠表面.DPf3 经纤维蛋白原、纤溶酶原固定化磁珠垂钓所得洗脱液经扫描比对,分别鉴定到 20 种和 27 种蛋白质,多属于丝氨酸蛋白酶类成分.结论 通过磁珠配体垂钓策略和 LC-MS/MS 技术可从威廉环毛蚓中快速筛选和鉴定目标生物活性大分子,可为动物类中药大分子的分离鉴定提供参考.
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编辑人员丨1个月前
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叶面喷水影响芒果叶片"午休"的转录组分析
编辑人员丨1个月前
[目的]通过组学技术研究持续喷水处理对芒果叶片产生的影响,揭示喷水处理影响"午休"的分子机制,进一步优化喷水处理条件,为达到最佳效果提供科学依据,并对提高芒果产量和品质以及响应国家减肥增效政策具有理论意义.[方法]以元江"台农一号"芒果为材料,对坐果期芒果在"午休"时段(12:30-14:10)喷水3次,每次喷水20 min,间隔20 min,以不喷水为对照,并以2组3个不同时期叶片进行Illumina Hi SeqTM 6000高通量转录组测序分析,用GO和KEGG数据库分析"午休"时段喷水和不喷水处理的差异表达基因(DEGs).用差异表达基因分析工具(DESeq)对基因表达进行差异分析,以|log2αFC|>1,P<0.05为筛选差异表达基因的条件.[结果]3个时期分别获得3 789,2 885,1 667个差异表达基因.GO分析表明差异基因与细胞组分分类中的膜、膜的固有成分、膜的组成成分等密切相关,KEGG分析差异表达基因主要富集在植物激素信号转导、植物MAPK信号通路、植物昼夜节律、氨基糖和核苷酸糖的代谢、类黄酮生物合成、光合生物碳固定、角质和亚硫酸盐及蜡的生物合成、卟啉和叶绿素的代谢、淀粉和蔗糖代谢以及甘油酯质代谢等途径.根据富集结果筛选8个差异表达基因,经实时荧光定量验证,基因表达趋势与转录组测序结果相符.[结论]CAO和POR基因表达延后,表明喷水处理可延长叶绿素的合成时间;FBP和SBP的基因表达略微降低,表明叶面喷水调控基因的表达量降至缓解芒果"午休"的最适范围内,有利于树体积累碳同化物,从而提高光合效率.
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编辑人员丨1个月前
