目的:评价小窝蛋白3(Cav-3)在小鼠糖尿病心肌病中的作用及其与内质网应激的关系。方法:在体实验：清洁级健康成年雄性野生型小鼠16只，体质量18~20 g，采用随机数字表法分为2组( n＝8)：对照组(Control组)和糖尿病心肌病组(DCM组)，另取Cav-3 KO小鼠8只为Cav-3 KO+糖尿病心肌病组(Cav-3 KO+DCM组)。采用高脂饮食联合腹腔一次性注射链脲佐菌素100 mg/kg的方法制备小鼠2型糖尿病模型，8周时采用心脏超声测定小鼠左心射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、左室收缩末期容积(LVESD)、左室舒张末期容积(LVEDD)。随后处死小鼠取心脏，HE染色观察心肌组织形态学结果。离体实验：小鼠来源的HL-1心肌细胞，采用随机数字表法分为3组( n＝6)：正常糖培养组(NG组)、高糖组(HG组)和高糖+甲基-β-环糊精组(HG+β-CD组)。高糖模型采用专用培养基加入50%葡萄糖至终浓度达到30 mmol/L，持续培养36 h。采用LDH、CCK8试剂盒评估细胞损伤情况。采用Western blot法检测心肌组织与HL-1细胞内质网应激相关蛋白结合免疫球蛋白(BiP)、C/EBP同源蛋白(CHOP)及剪接型X-box结合蛋白1(XBP1-s)的表达。 结果:在体实验：与Control组比较，DCM组和Cav-3 KO+DCM组小鼠进食量、饮水量及心脏质量/体质量增加，EF和FS降低，LVESD和LVEDD升高，心肌BiP、CHOP和XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)，病理学损伤加重；与DCM组比较，Cav-3 KO+DCM组EF和FS降低，LVESD和LVEDD升高，心肌BiP、CHOP与XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)，病理学损伤加重。离体实验：与NG组比较，HG组和HG+β-CD组心肌细胞存活率下降，LDH活性升高，BiP、CHOP与XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)；与HG组比较，HG+β-CD组心肌细胞存活率下降，LDH活性升高，BiP、CHOP和XBP1-s表达上调，Cav-3表达下调( P<0.05)。 结论:Cav-3表达下调会加重小鼠糖尿病心肌损伤，其机制与内质网应激过度激活有关。

目的:探讨小窝蛋白(Cav-3)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在吗啡预处理减轻慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用。方法:清洁级健康雄性成年SD大鼠，体重200~250 g，结扎冠状动脉左前降支6周制备慢性心力衰竭模型。取慢性心力衰竭和Langendorff灌注模型制备成功的大鼠心脏36个，采用随机数字表法分为4组( n＝9)：心肌缺血再灌注组(IR组)、吗啡预处理组(MP组)、吗啡预处理+甲基-β-环糊精组(MP+MβCD组)、甲基-β-环糊精对照组(MβCD组)。采用全心停灌30 min再灌注120 min的方法建立离体心脏全心缺血再灌注损伤模型。MP组于平衡灌注15 min后灌注含1 μmol/L吗啡的K-H液进行预处理，灌注5 min后改为K-H液灌注5 min，3个循环共计30 min，处理结束后全心停灌30 min再灌注120 min。MP+MβCD组于吗啡预处理前10 min灌注含200 μmol/L甲基-β-环糊精的K-H液，其余操作同MP组。MβCD组：于全心停灌前40 min灌注含200 μmol/L甲基-β-环糊精的K-H液，其余操作同IR组。于平衡灌注15 min(T 0)、再灌注5 min(T 1)、10 min(T 2)时收集冠状动脉流出液，采用化学比色法检测LDH活性。再灌注120 min时，测定心肌梗死体积(IS)、缺血危险区体积(AAR)，计算IS/AAR；采用Western blot法检测心肌组织Cav-3、ERK1/2、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)表达水平，计算p-ERK1/2/ERK1/2比值。 结果:与IR组比较，MP组IS和IS/AAR降低，冠状动脉流出液LDH活性降低，心肌组织Cav-3表达上调，p-ERK1/2/ERK1/2比值升高( P<0.05)，MβCD组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)；与MP组比较，MP+MβCD组IS和IS/AAR升高，冠状动脉流出液LDH活性升高，心肌组织Cav-3表达下调，p-ERK1/2/ERK1/2比值降低( P<0.05)。 结论:吗啡预处理减轻慢性心力衰竭大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制可能与激活Cav-3/ERK信号通路有关。

目的:研究小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）细胞膜上Caveolae/Caveolin-1与膜胆固醇（Chol）对BMSCs成骨分化的影响。方法:体外培养BMSCs，未处理细胞作为对照，对细胞进行以下干预：用甲基-β-环糊精（MβCD）处理耗竭细胞膜Chol，添加Chol补充细胞膜Chol，转染非特异性小干扰siRNA （si Ctrl）和转染Caveolin-1 siRNA （si CAV-1）。通过Amplex Red法检测各处理组细胞的Chol含量；RT-PCR与Western blot检测各组Caveolin-1表达；碱性磷酸酶活性测定和茜素红染色观察成骨细胞形成情况。多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验。结果:与对照相比，MβCD处理细胞后Chol含量[（59.33 ± 11.24）比（127.00 ± 12.45）mmol/L]、Caveolin-1 mRNA （0.52 ± 0.05比1.00 ± 0.15）下降，ALP活性[（18.37 ± 0.31）比（10.13 ± 0.41）U/L]增强，添加Chol后细胞Chol含量[（228.21 ± 10.38）比（127.00 ± 12.45 ）mmol/L]、Caveolin-1 mRNA （4.58 ± 0.25比1.00 ± 0.15）和Caveolin-1蛋白表达（184.00 ± 10.25比51.25 ± 8.12）增加，ALP活性[（6.32 ± 0.54）比（10.13 ± 0.41）U/L]减弱（P均< 0.05）。与转染si Ctrl相比，转染si CAV-1的细胞Chol含量[（95.35 ± 14.05）比（136.00 ± 15.52）mmol/L]、Caveolin-1 mRNA （0.10 ± 0.21比1.00 ± 0.45）和Caveolin-1蛋白表达（6.12 ± 0.35比13.06 ± 1.52）下降，ALP活性[（19.28 ± 0.34）比（10.15 ± 0.43）U/L]增强（P均< 0.05）。茜素红染色显示，MβCD处理和转染si CAV-1使BMSCs基质矿化增加，而添加Chol使BMSCs基质矿化减少。结论:Caveolae/Caveolin-1与膜Chol相互影响并共同调控小鼠BMSCs成骨分化。

目的 以2,6-二甲基-β-环糊精(DM-β-CD)为包合材料制备氟苯尼考(florfenicol,FF)包合物FF/DM-β-CD,以改善FF的溶解度和溶出速度,提高其生物利用度.方法 在应用分子对接结合相溶解度法筛选合适的环糊精(CD)后,采用加热搅拌法制备FF/DM-β-CD,并使用DSC、PXRD、FT-IR对包合物进行物相鉴别,对其溶解性、溶液稳定性和体外溶出进行考察,同时进行了FF/DM-β-CD在鸡体内的药动学研究.结果 FF与HP-β-CD、DM-β-CD和SBE-β-CD对接后的模型较稳定,DM-β-CD改善FF溶解度的效果最好.选择DM-β-CD作为包合材料,加热搅拌法制备了FF/DM-β-CD,DSC、PXRD和FT-IR结果证实FF/DM-β-CD的形成.FF/DM-β-CD可显著增加FF的溶解度,在标准硬水、自来水、去离子水和纯化水中的溶解度均大于FF的55.0倍.FF/DM-β-CD溶液在25 ℃放置1 d后,自来水中无析出,标准硬水、纯化水和去离子水中有微量析出;随着时间增加,析出逐渐增多,7d后,以自来水中析出最少;FF含量无明显变化.FF/DM-β-CD在不同水质水中的溶出无明显差异,25 ℃、5min时均已完全溶出,为FF原料药的17.09倍.与FF相比,FF/DM-β-CD能明显提高FF在鸡体内的生物利用度(F=165.24％).结论 以DM-β-CD为包合材料制备FF/DM-β-CD,可显著提高FF的溶解度、溶出度和生物利用度.

目的 探讨抑制脂质合成对人骨骼横纹肌肉瘤细胞的影响及其分子机制.方法 采用肿瘤基因表达数据库检查人骨骼肌细胞(HSMC)和人骨骼横纹肌肉瘤细胞脂质合成相关基因固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)和角鲨烯环氧化酶(SQLE)mRNA表达水平并通过qRT-PCR验证.通过细胞增殖实验选出脂质抑制剂甲基-β-环糊精(mβCD)的细胞处理浓度.分别将3株人骨骼横纹肌肉瘤细胞(RD、SJCRH30和A673)作为对照组,1 mmol/L mβCD处理的三株人骨骼横纹肌肉瘤细胞分别作为实验组.平板克隆实验、软琼脂集落形成实验、细胞迁移及侵袭实验和裸鼠成瘤实验检测对照组和mβCD处理组人骨骼横纹肌肉瘤细胞增殖、迁移、侵袭和肿瘤生长的变化.通过脂质组学及三酰甘油(TG)分析探究mβCD抑制人骨骼横纹肌肉瘤细胞恶性的分子机制.结果 相对于HSMC,人骨骼横纹肌肉瘤细胞脂质合成相关基因SREBP1、SQLE表达增高(P＜0.001);与对照组相比,mβCD组人骨骼横纹肌肉瘤细胞的增殖、平板克隆、迁移侵袭和集落形成能力减弱(P＜0.05);裸鼠肿瘤体积和肿瘤质量增加也减少(P＜0.05);脂质组学和TG试剂盒检测结果发现,与对照组相比,mβCD组TG含量降低(P＜0.01).结论mβCD可能通过降低TG等脂质代谢过程从而抑制人骨骼横纹肌肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为.

背景:细胞外基质合成与降解的失衡是髓核退变的主要原因,小分子药物Kartogenin(KGN)可恢复基质合成和降解的平衡.利用合适的载药系统实现KGN的缓释对KGN发挥长期有效的治疗至关重要.目的:用甲基丙烯酰化明胶(gelatin methacryloyl,GelMA)包裹KGN,通过微流控技术制备成可注射的水凝胶微球,探究其生物相容性和对髓核细胞生物学功能的影响.方法:将β-环糊精(β-cyclodextrins,β-CD)与KGN混合成包合物,与10%GelMA按1∶9的体积混合,利用微流控技术制备可注射水凝胶微球GelMA@β-CD@KGN,扫描电镜表征微球的微观形貌,检测水凝胶微球浸泡于PBS中1个月的药物释放情况.提取SD大鼠髓核细胞,将第1代细胞分3组培养:对照组单独培养髓核细胞,另外两组分别将GelMA@β-CD微球、GelMA@β-CD@KGN微球与髓核细胞共培养,利用CCK-8法检测细胞增殖,活死细胞染色检测细胞存活.分别用含有白细胞介素1β和不含白细胞介素1β的完全培养基将髓核细胞与两种微球共培养,采用RT-PCR法检测髓核细胞基质合成蛋白和分解蛋白的mRNA表达.结果与结论:①扫描电镜下可见,冻干后的GelMA@β-CD@KGN微球为规则的球形,保持高度分散且大小均一,形状饱满;GelMA@β-CD@KGN微球体外可持续释放药物,至30 d时药物释放量达到总量的62%;②活死细胞染色显示,GelMA@β-CD@KGN可保持髓核细胞的活性;CCK-8检测显示,GelMA@β-CD@KGN可促进髓核细胞的增殖;③在含或不含白细胞介素1β的完全培养基中,GelMA@β-CD@KGN微球组聚集蛋白聚糖、Ⅱ型胶原的mRNA表达均高于GelMA@β-CD微球组(P<0.05,P<0.01),基质金属蛋白酶13、血小板反应蛋白解整合素金属肽酶5的mRNA表达均低于GelMA@β-CD微球组(P<0.01);④结果表明,GelMA@β-CD@KGN微球具有良好的生物相容性和药物缓释能力,作为载药系统是一种具有广阔应用前景的生物材料.

目的 考察尼可地尔溶液化学稳定性、油水分配系数(P)及溶解度并对该药经鼻黏膜吸收促渗剂进行筛选,为研制尼可地尔鼻腔给药新剂型奠定实验基础.方法 建立尼可地尔的HPLC含量测定方法,研究在不同pH值下该药物溶液的化学稳定性、P值及溶解度;以离体羊鼻黏膜为实验模型,以羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)、磺丁基-β-环糊精(SBE-β-CD)、二甲基-β环糊精(DM-β-CD)为候选促渗剂,采用Franz扩散池法,筛选尼可地尔经鼻黏膜吸收的理想促渗剂.结果 尼可地尔溶液在强酸pH下化学稳定性最好,而在强碱性pH值下最差;尼可地尔的P值随着pH值的增大总体呈增大趋势;尼可地尔的溶解度随介质pH值的增大总体呈减小趋势;HP-β-CD与SBE-β-CD对尼可地尔经羊鼻黏膜吸收有明显促进作用,而DM-β-CD对药物的吸收呈抑制作用.结论 尼可地尔溶液的化学稳定性、油水分配系数及溶解度均与介质pH值密切相关.SBE-β-CD可能是制备尼可地尔鼻腔给药制剂的最佳促渗剂.

目的:建立西酞普兰及其代谢产物(去甲基西酞普兰及二去甲基西酞普兰)的高效毛细管电泳手性拆分方法.方法:以磺酸化-p-环糊精为手性选择试剂对西酞普兰及其代谢产物进行拆分,并考察了S-β3-CD浓度、背景电解质的pH、有机溶剂的比例对手性分离的影响.结果:在pH为3.0,30 mmol·L-1磷酸二氢钠缓冲溶液,S-β3-CD浓度为10 mg·mL-1,有机溶剂甲醇的浓度为30％,分离电压为20 kV,检测波长为205 nm,西酞普兰及其2个代谢产物均达到完全分离,其分离度分别为7.2,6.3,3.4.结论:该方法简便、快速,可用于西酞普兰、去甲基西酞普兰及二去甲基西酞普兰的手性分离.

目的 通过计算机辅助药物设计的方法比较β-环糊精(β-cyclodextrin,β-CD)及其常见衍生物对黄芩提取物中主要的黄酮成分的包合效果,寻找对黄芩提取物整体包合效果好的环糊精,为黄芩提取物整体入药制剂研究提供理论参考.方法 从蛋白质晶体数据库PDB(www.rcsb.org)中获取β-CD的分子模型,经构象优化计算后并以此为基础,分别建立羟丙基-β-环糊精(hydroxypropyl-β-cyclodextrins,HP-β-CD)、羧甲基-β-环糊精(carboxymethyl-β-cyclodextrin,CM-β-CD)、磺丁基醚-β-环糊精(sulfobutylether-β-cyclodextrin,SBE-β-CD)和甲基-β-环糊精分子模型(methyl-β-cyclodextrin,Me-β-CD),同时建立黄芩提取物中4种主要成分(黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素)的分子模型.通过分子对接得出它们之间两两的平均结合能,参考黄芩提取物粗制品与精制品中各成分含量,得出不同环糊精对黄芩提取物的总体包合效果.结果 环糊精及其衍生物对黄芩提取物的总体包合效果为:SBE-β-CD> HP-β-CD> Me-β-CD> CM-β-CD>β-CD.结论 SBE-β-CD 对黄芩提取物的包合效果最好, HP-β-CD其次.

目的 制备鱼腥草挥发油羟丙基-β-环糊精(HPCD)包合物肠用温敏凝胶.方法 冷溶法制备凝胶,以泊洛沙姆407、泊洛沙姆188用量为影响因素,相变温度为评价指标,星点设计-效应面法优化处方.以甲基正壬酮为指标成分,无膜溶出法和透析袋法分别考察凝胶溶出率与体外释放率,再通过高温(40、60℃)、低温(4℃)、强光[(4 500 ±500) 1x]、加速(3个月)试验评价其稳定性.结果 最佳条件为P407用量20.61％,P188用量3.03％,相变温度36.5℃.在30～ 150 min时,HPCD包合物凝胶累积溶出率高于挥发油凝胶,在150 ～ 210 min时趋于一致,但前者累积释放率(0～50 h)一直高于后者.所得凝胶在低温下稳定性良好;高温、强光、加速下其外观、性状(高温除外)、pH均较稳定,但甲基正壬酮含有量明显降低.结论 鱼腥草挥发油HPCD包合物肠用温敏凝胶应在低温(4℃)下保存.