增生性瘢痕是皮肤组织缺损后，伤口愈合过程中细胞外基质过度沉积的结果。瘢痕形成处可出现瘙痒、疼痛、挛缩、运动障碍，并影响患者外观。目前各种治疗方法存在患者依从性低、不良反应多、效果不明确等弊端。近年研究发现，甲壳素及其衍生物能够减缓机体多种纤维化进程，通过调节胶原代谢等多种途径抑制瘢痕形成。

目的:制备负载小鼠脂肪干细胞的甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶并探讨其对大鼠全层皮肤缺损创面愈合的作用。方法:该研究为实验研究。通过酸水解碱的方法提取甲壳素纳米纤维，将提取物与透明质酸和胶原混合制备甲壳素/透明质酸/胶原水凝胶（以下简称水凝胶），另制备负载小鼠脂肪干细胞的水凝胶。将30只雄性12周龄豚鼠按照随机数字表法分为阴性对照组、阳性对照组和水凝胶组（每组10只），分别在豚鼠背部两侧涂抹乙醇、4-氨基苯甲酸乙酯、前述制备的不含细胞的水凝胶进行诱导接触和激发接触，于激发接触后24、48 h观察皮肤水肿和红斑形成情况。将小鼠脂肪干细胞分为行常规培养的正常对照组和用前述制备的不含细胞的水凝胶培养的水凝胶组，培养3 d，采用蛋白质印迹法检测血小板衍生生长因子-D（PDGF-D）、胰岛素样生长因子Ⅰ（IGF-Ⅰ）、转化生长因子β 1（TGF-β 1）的蛋白表达（样本数均为3）。取8只雄性8周龄SD大鼠，在其背部两侧各制备1个圆形全层皮肤缺损创面，分别作为空白对照组（不进行任何处理）和水凝胶组（涂抹前述制备的负载脂肪干细胞的水凝胶）。伤后0（即刻）、2、4、8、10 d，观察创面愈合情况并计算伤后2、4、8、10 d的创面愈合率。取伤后10 d创面组织，行苏木精-伊红染色观察新生组织形成情况，采用酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素1α（IL-1α）、IL-6、IL-4和IL-10的浓度，行免疫组织化学染色观察CD16、CD206阳性细胞表达并计算阳性细胞百分比。动物实验样本数均为8。 结果:激发接触后24 h，3组豚鼠皮肤均无水肿形成，仅阳性对照组7只豚鼠皮肤出现轻微红斑。激发接触后48 h，阳性对照组8只豚鼠皮肤出现红斑，4只豚鼠皮肤出现水肿；其余2组豚鼠皮肤无明显红斑或水肿。培养3 d，水凝胶组脂肪干细胞中PDGF-D、IGF-Ⅰ和TGF-β 1的蛋白表达水平均明显高于正常对照组（ t值分别为12.91、11.83、7.92， P<0.05）。伤后0~10 d，2组创面面积均逐渐缩小，水凝胶组创面于伤后10 d基本愈合。伤后4、8、10 d，水凝胶组创面愈合率分别为（38±4）%、（54±5）%、（69±6）%，分别明显高于空白对照组的（21±6）%、（29±7）%、（31±7）%（ t值分别为3.82、3.97、4.05， P值均<0.05）。伤后10 d，与空白对照组比较，水凝胶组创面表皮更加完整，毛囊、血管和其他皮肤附件增多。伤后10 d，水凝胶组创面组织中IL-1α、IL-6浓度均较空白对照组明显降低（ t值分别为8.21、7.99， P<0.05），IL-4、IL-10浓度均较空白对照组明显升高（ t值分别为6.57、9.03， P<0.05）；水凝胶组创面组织中CD16阳性细胞百分比较空白对照组明显降低（ t=8.02， P<0.05），CD206阳性细胞百分比较空白对照组明显升高（ t=7.21， P<0.05）。 结论:负载小鼠脂肪干细胞的水凝胶无致敏性，能促进脂肪干细胞中生长因子分泌，促进大鼠全层皮肤缺损创面组织中巨噬细胞向M2型极化，减轻炎症反应，从而促进创面愈合。

周围神经再生是世界难题。理想的组织工程神经支架材料需具备良好的降解性、组织相容性及一定的导电性能 [1,2,3]。文献报道显示，甲壳素、壳聚糖相对较为理想，但两者皆不具备导电性。为赋予支架材料导电性，规避甲壳素溶解性差等问题，发挥低脱乙酰度壳聚糖降解性能好的特点 [3]，本研究制备了纳米聚吡咯/不同乙酰度壳聚糖复合材料神经导管，桥接大鼠坐骨神经缺损，观察各导管修复神经缺损的效果。

目的:探讨由甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)和甲壳素纳米晶须(ChiNC)组成的混合生物墨水的物理特征、生物相容性，以及3D打印效果。方法:2021年5月至2022年12月，于100 mg/ml GelMA生物墨水中添加ChiNC，制备成ChiNC浓度分别为5、10、20 mg/ml的混合生物墨水，分别命名为GC5、GC10、GC20组，与未添加ChiNC的GelMA生物墨水(GC0组)共同实验。采用扫描电镜观察4组生物墨水光固化后形成的水凝胶的横截面，计算孔隙率。称量各组水凝胶溶胀前后质量，计算平衡溶胀比。将4组生物墨水加入48孔板中，光固化成水凝胶，表面种植人脐静脉内皮细胞(HUVECs)，于培养基中培养至第1、3、7天分别行CCK-8实验检测吸光度 A值，比较4组水凝胶中细胞的增殖速度。4组生物墨水中添加HUVECs，打印网格状支架，于培养基中培养至第1、7天分别行Live-Dead染色，观察细胞存活率。采用打印挤出成丝实验，观察各组生物墨水挤出时的连续成丝性，比较各组的打印效果。采用最佳配比的混合生物墨水3D打印模拟膀胱壁黏膜层、黏膜下层和肌层解剖结构的组织工程膀胱补片，观察打印结构的稳定性和保真度，验证混合生物墨水打印多层复杂结构的可行性。 结果:扫描电镜观察结果显示，GC0、GC5、GC10、GC20组水凝胶的孔隙率分别为(51.43±6.23)%、(51.85±6.47)%、(50.55±4.59)%和(42.49±2.20)%，GC0组与其他3组比较差异均无统计学意义( P＝0.9994、 P＝0.9948、 P＝0.1200)。GC0组平衡溶胀比为9.37±0.49，低于GC5组(8.81±0.41， P＝0.0457)、GC10组(7.95±0.19， P<0.01)、GC20组(7.71±0.14， P<0.01)，差异均有统计学意义。CCK-8检测结果显示，GC0、GC5、GC10、GC20组培养第1天的吸光度 A值分别为0.357±0.007、0.350±0.012、0.360±0.009、0.345±0.018，GC10组与其他3组比较差异均无统计学意义( P＝0.9332、 P＝0.5464、 P＝0.4937)；培养第3天的吸光度 A值分别为0.634±0.010、0.704±0.009、0.755±0.012、0.653±0.015，GC10组与其他3组比较差异均有统计学意义( P<0.01、 P＝0.0033、 P＝0.0002)；培养第7天的吸光度 A值分别为0.846±0.026、0.930±0.043、1.001±0.031、0.841±0.024，GC10组与其他3组比较差异均有统计学意义( P＝0.0012、 P＝0.1390、 P＝0.0010)。GC0、GC5、GC10、GC20组培养第1天的HUVECs细胞存活率分别为(90.13±1.63)%、(90.6±2.45)%、(92.58±2.15)%、(91.40±3.17)%，GC0组与其他3组比较差异均无统计学意义( P＝0.9869、 P＝0.3093、 P＝0.8008)；培养第7天的细胞存活率分别为(89.97±3.10)%、(92.18±2.21)%、(92.05±2.25)%、(90.12±1.97)%，GC0组与其他3组比较差异均无统计学意义( P＝0.3965、 P＝0.4511、 P＝0.9995)。打印挤出成丝测试结果显示，GC0组在24℃～25℃时挤出连续且能成丝，GC10组在24℃～27℃时挤出连续且能成丝。使用GC10组打印组织工程膀胱补片，结果显示打印的补片稳定，无坍塌，保真度高。 结论:在GelMA中添加ChiNC能促进细胞黏附、增殖，扩大GelMA生物墨水的打印窗口。在GelMA中添加10 mg/ml ChiNC制备的混合生物墨水的生物相容性良好，能打印模拟天然膀胱壁解剖结构的组织工程膀胱补片。

目的:探讨碳纳米管地三维多孔骨组织工程支架材料制备方法及具体临床效果。方法:首先制备CNTs/PLA/CHI碳纳米管(CNTs)/聚乳酸(PLA)/甲壳素(CHI)三维多孔支架材料，然后对材料亲水性表征及动物实验效果进行观察。应用SPSS 20.0统计软件分析。结果:(1)甲壳素纤维的亲水性理想，可将复合材料的亲水性显著改善。对于本研究所使用的几种材料，唯有聚乳酸(PLA)/碳纤维(CF)复合材料亲水性最佳。与未含碳纳米管的对照组比较，加入少量的碳纳米管地low组的亲水性要显著降低，然而随着复合材料中所加入的碳纳米管(CNTs)逐渐增多，材料亲水性也稍增强。但是材料亲水性与是否交联无显著关系。当CNTs添加至PLA/CF复合材料中，会使得复合材料亲水性显著下降。当CNTs水平逐渐增大时，复合材料的亲水性能则出现一定的增强。(2)经X线片检查，各组术后骨缺损移植地人工骨材料均未发生移位以及断裂现象。在第4周时，实验组桡骨缺损区域能够发现存在非常明显的骨生成影像，呈现云雾状，且均匀分布于骨缺损区域，骨密度水平非常低，存在大量孔隙；第8周时，经X线检查，显示植入体已与缺损断端骨性愈合，骨缺损部位的骨密度水平显著增大，新骨阴影非常显著，有成骨出现，但皮质骨连续性较差；第12周时，实验组CNTs中剂量组以及高剂量组均显示，植入体已与骨缺损部位断端骨性愈合，皮质骨连续性比较理想，髓腔畅通性较好。4种不同含量的CNTs复合材料组中，随着CNTs含量逐渐增多，骨缺损愈合程度逐渐加大。(3)随着CNTs含量的逐渐增加，骨密度水平显著增大，低含量组、中等含量组与高含量组骨密度均分别显著高于对照组(低含量：4周： P<0.01；中等含量：4周： P<0.01，8周： P<0.01，12周： P<0.01；高含量：4周： P<0.01，8周： P<0.01，12周： P<0.01)，同组各时间节点骨密度水平两两均存在差异，有统计学意义(低含量：4周比8周： P<0.01，4周比12周： P<0.01，8周比12周： P<0.01；中等含量：4周比8周： P<0.01，4周比12周： P<0.01，8周比12周： P<0.01；高含量：4周比8周： P<0.01，4周比12周： P<0.01，8周比12周： P<0.01)。 结论:碳纳米管可有效促进新骨生成。

探讨复方利多卡因乳膏联合纳米甲壳素促进面部皮肤表面麻醉的效果。2018年7月至2019年7月，昆明市呈贡区人民医院皮肤医学美容科将面部皮肤滚针治疗患者120例，男31例，女89例，年龄19~45岁，平均32岁。分为3个组，对照组用利多卡因乳膏麻醉，观察组用利多卡因乳膏联合纳米甲壳素麻醉，空白组用纳米甲壳素外敷。观察3个组麻醉效果和不良反应发生率。观察组麻醉有效率45例(100%)高于对照组41例(91%)，差异有统计学意义( P<0.05)，空白组无麻醉效果。仅对照组4例出现不良反应，其余两组无不良反应。复方利多卡因联合纳米甲壳素麻醉效果较好。

实验旨在探究不同水平的大豆球蛋白对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)肠道菌群和抗菌相关基因的影响.在饲料中添加0(G0组,作为对照组)、1.82％(GL组)、3.64％(GH1组)、5.46％(GH2组)和7.28％(GH3组)五种不同水平的大豆球蛋白饲喂克氏原螯虾(平均体重约为4.3 g)4周.养殖实验结束后测定肠道微生物的组成和抗菌相关基因的表达.结果显示:(1)饲料中的大豆球蛋白对克氏原螯虾肠道菌群的Alpha多样性没有显著性影响,但改变了其肠道菌群组成.GL组Cloacibacterium、沙曼气单胞菌(Aeromonas sharmana)等菌群的相对丰度显著高于其他4组.与G0组相比,红杆菌属(Rhodobacter)、副球菌属(Paracoccus)、丙酸杆菌属(Propionicimonas)和生丝微菌属(Hyphomicrobium)等益生菌及亨氏柄杆菌(Caulobacter henricii)的相对丰度在GH2或GH3组中显著下降;而GH3组壤霉菌属(Agromyces)、巴氏微杆菌(Microbacterium barkeri)、假黄色单胞菌属(Pseudoxanthomonas)和军团杆菌属(Legionella)等潜在病原菌的相对丰度显著高于G0组.(2)随着大豆球蛋白水平的升高,各组肠道抗菌相关基因的表达水平呈现一次线性和二次响应的变化趋势.与G0组相比,GL组抗脂多糖因子(alf)、甲壳素(cru)和血蓝蛋白(hem)基因的表达水平显著下降;除组织蛋白酶-B(cst-b)外,GH1、GH2和GH3组其他抗菌相关基因的表达水平随着饲料中大豆球蛋白水平的升高而显著上升;GH2组cst-b的表达水平显著高于其余4组.(3)斯皮尔曼相关分析结果表明肠道菌群和抗菌相关基因之间存在显著的相关关系.cru、alf、C型凝集素(lec-c)、溶菌酶(lys)、白细胞介素增强因子结合子-2(iebf-2)、hem、热休克蛋白-70(hsp-70)和cst-b的表达水平与亨氏柄杆菌、副球菌属、红杆菌属、丙酸杆菌属、Desulfovibrio putealis、Thermomonas dokdonensis、沙曼气单胞菌和气单胞菌属、Chitinilyticum aquatile、台湾几丁质杆菌、Cloaci-bacterium 和生丝微菌属等菌群的相对丰度具有显著的负相关关系;而与壤霉菌属、产气荚膜梭杆菌(Clostri-dium Perfringens)、巴氏微杆菌、乳球菌(Lactococcus)、明串珠菌属(Leuconostoc)、类诺卡氏菌属(Nocar-dioides)和Peredibacter starrii等菌群的相对丰度具有显著的正相关关系.综上所述,饲料中低水平的大豆球蛋白(1.82％)在一定程度上能够促进肠道中益生菌的生长,改善肠道菌群健康,同时下调抗菌相关基因的表达;而高水平的大豆球蛋白(≥3.64％)可能抑制了益生菌的生长,导致病原菌的增殖,从而破坏了肠道菌群稳态,并且上调了抗菌相关基因的表达.相关分析结果表明抗菌相关基因与肠道菌群之间可能存在一定的互作关系.

目的 探讨甲壳素纳米纤维(ChitinNFs)溶液作为内镜黏膜下注射液的可行性.方法 在离体猪胃黏膜下分别注射0.1%、0.2%的ChitinNFs溶液及生理盐水,分别记为0.1%ChitinNFs组、0.2%ChitinNFs组、对照组.应用格尺在黏膜外测量各组注射后不同时间点黏膜隆起高度.应用超声小探头收集注射后各个时间点黏膜下影像.收集注射 60 min后黏膜标本进行HE染色.结果 黏膜外测量及超声影像黏膜下检测发现,0.1%ChitinNFs组、0.2%ChitinNFs组黏膜下注射后各时间点隆起高度显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).HE染色发现,0.1%ChitinNFs组、0.2%ChitinNFs组黏膜层和固有肌层明显分离,可见注射液垫.结论 ChitinNFs溶液作为内镜黏膜下注射液具有明确的可行性.

目的:探究铁离子功能化羧甲基甲壳素基微球(Fe@CM-g-AA)作为可吸收止血材料的可行性.方法:结合光学显微镜和电子显微镜观察Fe@CM-g-AA微球的形貌;采用CCK-8 和溶血实验评价微球的生物相容性;利用体外酶促降解实验评价微球的生物降解性;利用体外凝血实验评价微球的促凝血性能.结果:Fe@CM-g-AA微球具有完整的球形结构,在生理条件下结构稳定,在体外酶促降解至第 9 天时,降解超过 60%,显示出良好的生物降解性.Fe@CM-g-AA微球对L929 和Lewis细胞均无毒性,且溶血率低于 5%,具有良好的生物相容性.在凝血实验中,相比于空白对照组,Fe@CM-g-AA微球体外凝血时间从 77s缩短至 57 s,能够形成更为牢固的血凝块;活化部分凝血活酶时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)均显著缩短(P＜0.01).结论:通过电子束辐照和螯合作用制备了Fe@CM-g-AA微球,该微球能够通过促进红细胞聚集和血液凝血级联反应加速血液凝固,具有作为可吸收止血材料的潜在价值.

壳聚糖是一种通过甲壳素脱乙酰化衍生而来的天然高分子多糖.脱乙酰基后,壳聚糖可以很容易地与DNA、蛋白质、脂类或带负电的合成聚合物产生相互作用,从而拥有独特的生物相容性、降解性等特性.壳聚糖温敏性水凝胶是由壳聚糖与表面活性剂复合制成的高分子水凝胶,当外界温度发生变化时,水凝胶自身发生状态的变化.因温敏性水凝胶具有良好的生物相容性、较低组织免疫反应及优良的细胞黏附性,在组织工程技术、药物载体、再生医学等方面有着重要应用价值.本文将对壳聚糖及壳聚糖温敏性水凝胶对口腔组织工程中的应用进行简要综述.