目的:研究邻苯二甲酸二辛酯（DOP）对肾上腺嗜铬细胞瘤（PC12）细胞的毒性以及对淀粉样前体蛋白（APP）酶解的影响。方法:体外试验中将PC12细胞分为空白对照（CT）组、低浓度DOP（DOP1）组、中浓度DOP（DOP2）组、高浓度DOP（DOP3）组、低浓度DOP+Aβ 25-35（DOP1+Aβ）组、中浓度DOP+Aβ 25-35（DOP2+Aβ）组、高浓度DOP+Aβ 25-35（DOP3+Aβ）组、Aβ 25-35（Aβ）组共8组，每组4个样本；采用MTT法测定细胞活力，测定乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）含量，采用蛋白免疫印迹（Western blot）法测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）表达。转染实验用仓鼠卵巢（CHO）细胞转染APP695，使用不同浓度的DOP进行处理，分为转染空载体V-Flag对照（V-Flag）组、转染APP695-Flag模型（APP695）组、低浓度DOP（DOP1+APP695）组、中浓度DOP（DOP2+APP695）组、高浓度DOP（DOP3+APP695）组共5组，每组4个样本；采用酶联免疫分析（ELISA）法测定Aβ 1-40含量以及γ-分泌酶活力。体内实验选择SPF级雄性昆明种小鼠50只，体重为（20±2）g，随机分为对照组、铅（Pb）组、低DOP浓度（DOP1’）组、中DOP浓度（DOP2’）组、高DOP浓度（DOP3’）组共5组，每组10只，连续灌胃6周；使用Morris水迷宫方法检测不同浓度的DOP对小鼠学习记忆的影响，并用ELISA法检测脑组织中β和γ-分泌酶活力及Aβ 1-40含量。 结果:与CT组比较，DOP2、DOP3组细胞活力降低，LDH、MDA、NO含量增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与CT组比较，DOP1+Aβ、DOP2+Aβ、DOP3+Aβ组细胞活力下降，LDH、MDA、NO含量增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与Aβ组比较，DOP3+Aβ组细胞活力下降，LDH、MDA、NO含量增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与Aβ组比较，DOP2+Aβ组LDH、NO含量增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与CT组比较，DOP2、DOP3组Caspase-3表达水平增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与Aβ组比较，DOP2+Aβ、DOP3+Aβ组Caspase-3表达水平增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与APP695组比较，DOP2+APP695、DOP3+APP695组Aβ 1-40含量及γ-分泌酶活力增高，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，DOP3’组小鼠脑组织β和γ-分泌酶活力及Aβ 1-40含量增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）；与Pb组比较，DOP3’组β和γ-分泌酶活力及Aβ 1-40含量增加，差异均有统计学意义（ P<0.05）。与对照组比较，DOP2’和DOP3’组小鼠目标象限停留时间、穿台次数减少，差异均有统计学意义（ P<0.05）。 结论:DOP对PC12细胞具有一定的毒性作用，引起小鼠学习记忆障碍，可能对阿尔茨海默病的病理进展起促进作用。

目的:探讨小檗碱对小鼠代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）致肝细胞程序性坏死的影响及其相关分子机制。方法:20只雄性C57BL/6N小鼠随机分为4组（每组 n = 5）：对照（S）组、脂肪肝（H）组、小檗碱（B）组、核因子-E2相关因子（Nrf2）抑制剂全反式维甲酸组（ATRA，A组）。12周末检测各组血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）浓度，计算肝指数（肝质量/体质量比值）；进行肝组织HE、Masson和油红O染色，采用SAF评分评价肝损伤程度；Western blot法检测肝组织程序性坏死相关蛋白，即受体相互作用蛋白激酶3（RIPK3）、磷酸化混合系列蛋白酶样结构域（p-MLKL）及Nrf2表达水平。组间均数比较采用单因素方差分析，组间多重比较采用LSD- t检验。 结果:与S组相比，H组血清ALT、AST、LDH、TG、TC、TNF-α、IL-1β水平及肝指数显著升高；肝组织充满空泡样改变及炎性细胞浸润，油红O染色可见大量红色脂滴，Masson染色可见胶原纤维增生明显，SAF评分（6.60±0.55与0.80±0.45）显著增高。RIPK3及p-MLKL表达上调，Nrf2水平相对增加，差异均有统计学意义（ P < 0.05）。与H组相比，小檗碱干预可明显降低小鼠肝脏生化指标与血脂指标水平、促炎介质表达、肝指数及SAF评分，RIPK3和p-MLKL也表达下调，而Nrf2水平进一步增加，差异均有统计学意义（ P < 0.05）。与B组相比，给予Nrf2抑制剂处理可拮抗小檗碱对脂肪肝的保护效应，血清ALT、AST、LDH、TG、TC、TNF-α、IL-1β水平及肝指数显著升高，SAF评分升高，RIPK3和p-MLKL表达相对增加，差异均有统计学意义（ P < 0.05）。 结论:小檗碱可明显改善小鼠代谢相关脂肪性肝病损伤，其机制与激活Nrf2、抑制肝细胞程序性坏死有关。

睾丸3β-羟基类固醇脱氢酶（3β-hydroxysteroid dehydrogenase，3β-HSD）是一种类固醇生成酶，催化3β-羟基类固醇转化为3-酮类固醇。目前已克隆了人类的两种不同亚型， HSD3B1和 HSD3B2；其中， HSD3B2位于睾丸中，表达3β-HSD2。 HSD3B2是一种双底物酶，可与辅因子NAD +和3β-类固醇结合。许多内分泌干扰物，包括工业化合物（邻苯二甲酸盐、双酚类、全氟烷基物质和二苯甲酮类）、杀虫剂和杀菌剂（有机氯杀虫剂和有机锡）、食品添加剂（丁基羟基苯甲醚、白藜芦醇、棉酚、黄酮和异黄酮、类姜黄素和查尔酮类）和药物（依托咪酯、甲羟孕酮和酮康唑）可抑制睾丸中3β-HSD的活性，可能干扰雄激素合成。本文总结了3β-HSD的独特睾丸亚型，其基因、化学、亚细胞、位置以及直接抑制睾丸3β-HSD的内分泌干扰物及其抑制模式，期望为临床研究雄激素调控方法及以雄激素为靶点的药物研发提供参考。

患儿，男，2岁10个月，因"发热3 d，发现血常规异常2 d"于2021年3月14日就诊于南方医科大学珠江医院小儿血液科。入院时血常规：WBC 24.82×10 9/L，中性粒细胞占85.5%，HGB 72 g/L，PLT 105×10 9/L。凝血功能：凝血酶原（PT）14.9 s，部分凝血活酶时间（APTT）29.6 s，纤维蛋白原（Fg）1.22 g/L，D-二聚体3.07 mg/L。血生化检查：乳酸脱氢酶（LDH）1718.3 IU/L。骨髓细胞形态学：考虑急性早幼粒细胞白血病（APL）。染色体核型正常。流式细胞术检测免疫表型：异常细胞占有核细胞总数约84.6%，符合急性髓系白血病（AML）免疫表型。头颅磁共振（MRI）增强扫描提示：双侧侧脑室后角及枕角旁小片状异常信号，脑室系统稍扩大；双侧额裂骨、颅底骨质及下颌骨支不均匀增厚伴明显强化，不排除白血病浸润。胸腹部CT：拟右肺间质性炎症及少许炎症灶；左侧第7后肋骨质破坏并软组织肿块形成，考虑白血病浸润可能。2021年3月16日，根据骨髓细胞形态学初步诊断为APL，按华南儿童癌症协作组（SCCCG）APL2020高危方案，开始口服全反式维甲酸（ATRA，20 mg·m -2·d -1）和复方黄黛片（RIF，135 mg·kg -1·d -1）治疗，2021年3月20日，骨髓标本PML-RARA融合基因PCR定量检测为阴性。骨髓标本PML-RARA融合基因荧光原位杂交（FISH）检测为阴性。骨髓标本AML相关基因突变检测：KARS p.Q61H变异（变异频率12.15%）、NARS p.G13V变异（变异频率0.9%）、TBL1XR1 c.427+1G>A变异（变异频率2.12%）。修正诊断为PML-RARA融合基因阴性的APL，遂送检初始骨髓标本，加做白血病相关基因转录组测序（RNA-seq）。2021年4月2日，评估APL方案的疗效，外周血涂片未见幼稚细胞。骨髓细胞形态学提示原始早幼粒细胞占4%，骨髓多参数流式细胞术（MFC）检测微小残留病（MRD）为1.9%，骨髓细胞形态学示完全缓解。复查头颅MRI增强扫描及肺部CT扫描，以上髓外浸润病灶消失。2021年4月7日骨髓白血病相关基因RNA-seq定量检测结果报告：TBL1XR1-RARB融合基因36.54%（目的基因/内参基因36.54%）。2021年4月13日（化疗第27天），修正诊断为TBL1XR1-RARB融合基因阳性APL，按照SCCCG-APL2020方案的标准，非RARA基因重排的APL应按照非APL的AML方案化疗，改按华南儿童AML（华南AML-15）诊疗方案化疗，FLAG（氟达拉滨、阿糖胞苷、G-CSF）+去甲氧柔红霉素（IDA）方案诱导治疗2个疗程，HA（高三尖杉酯碱+阿糖胞苷）、EA（依托泊苷+阿糖胞苷）、DA（柔红霉素+阿糖胞苷）方案各巩固治疗1个疗程，第1个疗程诱导治疗后骨髓MRD（MFC）1.8%，融合基因定量阴性，之后每个疗程后检测骨髓MRD（MFC）和融合基因均为阴性。诱导化疗第1疗程结束后合并粒细胞缺乏伴感染，经抗感染治疗控制；诱导化疗第2疗程结束后合并粒细胞缺乏伴铜绿假单胞菌败血症和侵袭性曲霉菌肺炎，经抗感染及对症治疗后治愈；巩固化疗1个疗程结束后合并肺炎克雷伯菌败血症，经抗感染及对症治疗后治愈；巩固治疗第2、3疗程结束后均合并粒细胞缺乏，但无感染发生。

目的 观察维甲酸相关孤核受体α(RORα)过表达病毒载体尾静脉注射对多柔比星(DOX)诱导小鼠心脏毒性(DIC)的影响,并探讨其可能的机制.方法 将80只雄性C57BL/6小鼠随机分为Con组、DIC组、DIC+RORα组、DIC+RORα+EX527组,每组20只.DIC+RORα组和DIC+RORα+EX527组经尾静脉注射过表达RORα基因的腺相关病毒9型(AAV9)载体,DIC组经尾静脉注射AAV9空白对照载体;AAV9载体注射3周后,除Con组外均采用尾静脉注射DOX的方法建立DIC小鼠模型;DIC+RORα+EX527组每次DOX注射后腹腔注射沉默信息调节因子(SIRT1)信号通路特异性阻断剂EX527.各组分组处理后4周,经胸超声心动图检查测算左心室射血分数(LVEF)和左心室缩短分数(LVFS),处死后取眼眶血和心肌组织.采用HE染色观察心肌组织病理情况,ELISA法检测血清肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTnI)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α),TUNEL染色后计算细胞凋亡率,二氢乙锭法检测心肌组织活性氧(ROS)表达,比色法检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)表达,免疫荧光染色观察心肌组织巨噬细胞浸润和NF-κB p65表达,Western blotting法检测心肌组织cleaved Caspase-3、RORα、SIRT1蛋白表达并计算Ac-NF-κB p65/NF-κB p65、Ac-Foxo1/Foxo1,实时荧光定量PCR法检测心肌组织RORα、SIRT1 mRNA表达.结果 与Con组比较,DIC组小鼠心肌纤维排列紊乱且断裂明显,心肌细胞空泡化显著;与DIC组、DIC+RORα+EX527组比较,DIC+RORα组小鼠心肌纤维断裂及心肌细胞空泡化均减轻.LVEF、LVFS及心肌组织SOD、GSH-Px:Con组>DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).血清CK-MB、LDH、cTnI、IL-1β、IL-6、TNF-α及心肌组织细胞凋亡率、cleaved Caspase-3蛋白、ROS、MDA、巨噬细胞浸润、NF-κB p65:Con组DIC组(P均<0.05).SIRT1 mRNA及蛋白:Con组、DIC+RORα组>DIC组、DIC+RORα+EX527组(P均<0.05).Ac-Foxo1/Foxo1、Ac-NF-κB p65/NF-κB p65:Con组、DIC+RORα组

为探讨七氟醚(sevoflurane)麻醉处理对小鼠肝脏缺血再灌注损伤(hepatic ischemia-reperfusion injury,HIRI)的影响及机制,将健康成年C57雄性小鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注+戊巴比妥钠组(HIRI+Pent组)、缺血再灌注+七氟醚组(HIRI+Sevo组),每组10只;经腹腔手术构建小鼠70％肝脏HIRI模型,肝脏缺血60 min,再灌注3 h后,将小鼠处死取材.取肝组织行苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色,观察肝组织病理损伤,同时采用免疫荧光染色检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)含量,并采用TUNEL检测组织细胞凋亡;通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)、聚合酶链反应(polymerase chain re-action,PCR)检测肝组织炎症相关因子的表达;通过 Western-blot检测肝组织干扰素基因刺激因子(stimulator of interferon genes,STING)、AMP 活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)等相关蛋白质的表达;采用生化分析仪检测血清丙氨酸转氨酶(alanine transaminase,ALT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase,AST)和乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平;分别采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)比色法、黄嘌吟氧化酶法及二硫代二硝基苯甲酸法测定还原型谷胱甘肤(glutathione,GSH)、脂质过氧化物丙二醛(malondialde-hyde,MDA)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量.结果显示,与Sham组比较,缺血再灌注后,HIRI+Pent组小鼠血清ALT、AST明显升高,肝脏组织可观察到大片梗死区域,细胞凋亡明显增加,STING、核因子κB(nuclear factor-KB,NF-κB)表达升高,同时AMPK下降明显,炎症因子肿瘤坏死因子-a(tumor necrosis factor-a,TNF-a)、白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-18明显升高,MPO表达明显增加,氧化应激标志物GSH、MDA及SOD水平均出现明显差异,而在HIRI+Sevo组中,上述变化程度均得到明显缓解,且差异具有统计显著性(P＜0.05).结果表明,七氟醚可部分通过STING/AMPK信号通路减轻小鼠肝脏缺血再灌注损伤.

目的 研究小檗碱对肿瘤干细胞增殖的体外抑制作用机制,并评价其体内安全性.方法 采用流式细胞术从小鼠皮肤黑色素瘤B16F10细胞中分选肿瘤干细胞;以CD44、CD133、Nanog同源盒蛋白(NANOG)、八聚体结合转录因子4(OCT4)为指标对肿瘤干细胞进行表征.将肿瘤干细胞分为对照组、全反式维甲酸(ATRA)组和小檗碱组,采用CCK-8法检测小檗碱对肿瘤干细胞活力的影响;采用流式细胞仪检测细胞凋亡率、CD44+/CD133+细胞比例和性别决定区Y框蛋白2(SOX2)阳性细胞率;记录小檗碱处理后肿瘤球的形态变化;记录各组细胞焦亡形态图并检测乳酸脱氢酶(LDH)释放率,采用Western blot法检测焦亡相关蛋白消皮素E(GSDME)、消皮素E氮端(GSDME-N)、胱天蛋白酶3(caspase-3)和裂解胱天蛋白酶3(cleaved-caspase-3)的蛋白表达水平.采用斑马鱼胚胎毒性实验对小檗碱的体内安全性进行初步评价.结果 与B16F10细胞比较,肿瘤干细胞中CD44+/CD133+细胞比例和NANOG、OCT4荧光强度均显著升高(P＜0.000 1).小檗碱对肿瘤干细胞的半数抑制浓度为50.98 μmol/L;与对照组比较,小檗碱组细胞凋亡率显著升高,CD44+/CD133+细胞比例和SOX2阳性细胞率均显著降低(P＜0.000 1),肿瘤干细胞球皱缩,部分细胞死亡.小檗碱处理后的肿瘤干细胞,其最外层细胞膜肿胀,LDH释放率显著增加,且随剂量增大而升高(P＜0.05);小檗碱20、40 μmol/L组的GSDME-N、cleaved-caspase-3蛋白表达水平显著上升,GSDME、caspase-3蛋白表达水平显著下降(小檗碱20 μmol/L组除外,P＜0.05).经小檗碱处理的斑马鱼胚胎发育几乎未受影响,胚胎存活率达到100%,未观察到明显畸形.结论 小檗碱具有较好的抗肿瘤干细胞增殖活性,其作用机制可能与激活GSDME、促进细胞焦亡有关;且小檗碱体内安全性良好.

目的 研究钩藤内生放线菌Streptomyces sp.IMW-B19发酵产物的次生代谢产物及部分化合物的生物活性.方法 该菌株的发酵产物采用ODS、Sephadex LH-20、半制备HPLC等色谱技术进行分离纯化,并采用ESI-MS和NMR鉴定化合物的化学结构.使用人肝癌HepG2 细胞评价化合物1 对 11β-羟类固醇脱氢酶 1 活性的影响.结果 共分离得到 11 个化合物,经多种波谱数据分析和文献对比,分别鉴定为actiphenol(1)、苯甲酸薄荷酯A(2)、cyclo(L-Pro-L-Phe)(3)、胸苷(4)、11-hydroxy-4-amorphen-15-oic acid(5)、3-吲哚甲酸甲酯(6)、苯乙酸(7)、1-(3-ethylphenyl)-ethane-1,2-diol(8)、亚油酸(9)、亚油酸甲酯(10)和2-氨基-4-甲氧基苯甲酸(11).化合物1对11β-羟类固醇脱氢酶1具有明显的抑制作用,在20 μmol·L-1时,抑制率达到86.01%.结论 从钩藤内生放线菌Streptomyces sp.IMW-B19发酵产物中共分离得到 11 个化合物,其中化合物4、5、8 为首次从链霉菌属的放线菌中分离得到.化合物1对11β-羟类固醇脱氢酶1具有明显的抑制作用.

酶催化CO2 还原制备高值化学品对缓解全球环境和能源危机具有重要意义,利用甲酸脱氢酶(formate dehydrogenase,FDH)或多酶级联还原CO2 制备甲酸/甲醇具有选择性高、条件温和的优势,但关键酶活性低、稳定性差和重复利用率低的问题限制了其规模化应用,酶的固定化为这些问题提供了有效解决方案.本文总结了近年来利用膜、无机材料、金属有机框架和共价有机框架等载体对酶进行固定化的研究进展,阐释了不同固定材料和固定方式的特点和优势;进一步总结了固定化酶与电催化或光催化耦联反应体系对 CO2 还原的协同效果及应用,同时指出酶固定化技术和耦联反应体系目前存在的问题并对其发展前景进行了展望.

目的:网络药理学结合GEO数据集探讨翻白草治疗 2 型糖尿病的分子机制.方法:通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)下载翻白草化学成分信息,经SwissADME对各成分进行筛选和SwissTargetPrediction预测靶点后,得到药物作用靶点.采用R软件下载GEO数据中GSE系列,提取表达矩阵,对原始数据进行归一化处理后提取临床信息,采用limma程序包进行 2 型糖尿病差异基因分析.通过微生信在线平台获取药物作用靶点和疾病差异基因交集,即为翻白草治疗 2 型糖尿病的潜在作用靶点,对潜在作用靶点进行生物信息学分析,采用分子对接方法对分析结果进行验证.结果:筛选得到翻白草中 20 个化学成分,经SwissTargetPrediction预测后,得到374 个药物作用靶点,R软件分析获得 2 型糖尿病差异基因 658 个,取交集后得到 17 个潜在作用靶点.经过基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析可知,翻白草有效成分有原儿茶酸、咖啡酸、山柰酚、3,4,5-三羟基苯甲酸、罗索酸,通过作用蛋白激酶C-θ(PKC-θ)、核转录因子-κB p65 亚单位(RELA)、核糖体蛋白S6 激酶α3(RPS6KA3)、信号传导和转录激活因子 3(STAT3)、乳酸脱氢酶B(LDHB)和 6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶同工酶 3(PFKFB3)靶点,参与胰岛素抵抗通路(P<0.01)、低氧诱导因子-1(HIF-1)信号通路(P<0.01)和脂肪细胞因子信号通路(P<0.01)来发挥治疗 2 型糖尿病作用.分子对接结果显示,PKC-θ、RELA、STAT3 与咖啡酸,RPS6KA3 与罗索酸,LDHB与 3,4,5-三羟基苯甲酸,PFKFB3 与山柰酚之间均具有较好的对接活性.结论:通过网络药理学结合GEO数据集,初步预测了翻白草治疗 2 型糖尿病的潜在靶点和可能的作用机制,为翻白草治疗 2 型糖尿病的进一步研究提供理论依据.