目的 筛选KCNQ通道开放活性化合物并进一步评价其抗癫痫作用.方法 利用铷流出高通量筛选技术初筛,对优选化合物QO-72,复制多个动物模型,通过行为学以及脑电图(EEG)分析,结合一般药理学实验,对其有效性安全性进行初步评价,并探讨作用机制.结果 得到3个系列活性化合物共51个.化合物QO-72在MES和PTZ急性实验中,灌胃和腹腔注射可明显提高抗惊厥保护率(P＜0.05,0.01),延长癫痫大发作阈值(P＜0.01).在PTZ点燃慢性癫痫模型中,QO-72腹腔注射不同剂量均可降低癫痫发作等级(P＜0.01),缩短癫痫发作持续时间(P＜0.01),大剂量明显提高发作保护率(P＜0.01);QO-72治疗组EEG癫痫波时程明显缩短、振幅明显降低、波功率谱密度明显下降(P＜0.05,0.01).QO-72灌胃给药治疗剂量16倍或腹腔注射8倍,对小鼠协调运动、自主活动、戊巴比妥钠协同睡眠无明显影响.QO-72给药组海马区脑脊液GABA含量可明显增加(P＜0.01),Glu没有明显变化(P＞0.05).结论 化合物QO-72在电刺激和化学诱导的急、慢性癫痫模型上,均表现出良好抗癫痫作用,其机制除开放KCNQ通道外,可能还与增加脑内抑制性神经递质GABA含量有关.

心-面-皮肤综合征(cardio-facio-cutaneous syndrome，CFCS)是一种罕见的遗传综合征，与丝裂原活化蛋白激酶(RAS-mitogen-activated protein kinase，RAS-MAPK)信号传导通路异常激活有关，由BRAF、MAP2K1、MAP2K2、KRAS基因生殖系突变所致，呈常染色体显性遗传。CFCS患者表现为多系统异常，包括颅面部畸形、先天性心脏病、皮肤异常、胃肠道异常、生长迟缓、神经认知障碍、癫痫等，与其他RAS通路病患者有许多重叠的临床表型。CFCS患者可通过典型的临床表现和基因检测明确诊断，早期诊断有助于评估相关基因型的严重并发症风险，改善患者预后。MEK抑制剂可有效改善部分CFCS动物模型的异常表型，但目前尚无有效的临床治疗方法，明确诊断后需行多学科评估与对症治疗。

目的:探讨CXCR4特异性拮抗剂AMD3100影响癫痫发作的分子机制。方法:(1)动物实验：36只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组，每组12只。癫痫组大鼠腹腔注射戊四氮(PTZ)构建癫痫模型，剂量为40 mg/kg；AMD3100处理组大鼠侧脑室注射5 μL(5 mg/mL) AMD3100 20 min后腹腔注射同等剂量PTZ；对照组大鼠腹腔注射等量生理盐水。采用Racine分级评估各组大鼠癫痫发作等级并记录其癫痫发作潜伏期，采用脑电图(EEG)记录各组大鼠脑神经元异常放电情况，采用ELISA试剂盒检测各组大鼠海马组织 γ-氨基丁酸(GABA)含量。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测各组大鼠海马组织神经元γ-氨基丁酸A受体α1亚单位( GABAAR α1) mRNA水平。(2)细胞实验：另取SD大鼠鼠婴(1日龄)培养原代海马神经元，培养7 d后将细胞分为对照组、癫痫组和AMD3100处理组。癫痫组神经元采用无镁外液诱导的方法构建癫痫细胞模型；AMD3100处理组神经元在含有10 nmol/L AMD3100的无镁外液中培养3 h，随后换为Neurobasal继续培养；对照组采用Neurobasal培养基常规培养。采用全细胞膜片钳技术检测各组神经元灌流AMD3100(10 nmol/L)后自发性抑制性突触后电流(sIPSC)。 结果:(1)动物实验：AMD3100处理组大鼠发作潜伏期较癫痫组大鼠明显缩短[分别为(663.30±74.84) s、(164.40±17.20) s]，差异有统计学意义( t=6.490， P<0.001)；AMD3100处理组大鼠4级以上发作次数较癫痫组大鼠明显减少[分别为(3.75±0.39)次、(9.00±0.73)次]，差异有统计学意义( t=4.680， P<0.001)。ELISA实验结果显示，3组大鼠GABA含量差异有统计学意义( F=17.850， P<0.001)，其中癫痫组明显低于对照组，AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组，差异均有统计学意义( P<0.05)。qRT-PCR实验结果显示，3组大鼠 GABAAR α1 mRNA含量差异有统计学意义( F=14.400， P<0.001)，其中癫痫组明显低于对照组，AMD3100处理组大鼠明显高于癫痫组，差异均有统计学意义( P<0.05)。EEG结果显示，与癫痫组大鼠比较，AMD3100处理组大鼠放电频率有所降低。3组大鼠EEG功率差异无统计学意义( F=3.220， P=0.062)，但与癫痫组、对照组大鼠比较，AMD3100处理组大鼠EEG功率有所降低。(2)细胞实验：膜片钳技术检测结果显示，3组神经元sIPSCs的频率和波幅差异均有统计学意义( F=13.670， P<0.001； F=10.920， P<0.001)。与对照组、癫痫组比较，AMD3100处理组神经元sIPSCs的频率和波幅均显著增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:CXCR4拮抗剂AMD3100可通过增强抑制性神经传递降低癫痫发作频率。

目的:探讨海马内注射酪氨酸激酶受体结合蛋白B3(Ephrin-B3)激动剂对癫痫模型大鼠自发性痫性发作及海马组织分泌型糖蛋白Reelin及磷酸化接头蛋白(p-Dab1)表达的影响。方法:将78只大鼠按照体质量匹配原则随机分成对照组和模型组，每组39只。对照组大鼠正常饲养，模型组大鼠采用氯化锂-匹罗卡品注射法建立大鼠癫痫模型，在癫痫持续状态诱导成功后的急性期(7 d)，静止期(14 d)和慢性期(60 d)取海马组织，采用免疫组化及蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测癫痫模型大鼠和正常大鼠海马组织Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化，每个时间点每组随机选取13只大鼠。另取48只大鼠，按照随机数字表法分为正常对照Fc-control组、正常对照EphB3-Fc组、癫痫Fc-control组和癫痫EphB3-Fc组，每组12只，前两组正常饲养，后两组进行癫痫造模，造模后7 d，所有大鼠按照分组分别进行双侧海马内注射Ephrin-B3的激动剂(EphB3-Fc)和Ephrin-B3激动剂的对照剂Fc-control，1次/d，连续7 d。给药结束后，观察两周内大鼠行为与脑电图的变化，采用免疫组化及Western blot检测Reelin蛋白及p-Dab1蛋白表达变化。采用SPSS 21.0进行统计分析，多组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用Tukey's检验。结果:免疫组化和Western blot结果均显示，模型组大鼠海马组织中Reelin和p-Dab1蛋白在致痫后7 d、14 d、60 d表达均低于对照组(均 P<0.01)。免疫组化结果显示，与癫痫后Fc-control组相比，癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dab1蛋白的平均光密度值更高[(0.41±0.04)，(0.58±0.06)， P<0.05]。Western blot结果显示，癫痫后EphB3-Fc组大鼠海马组织中p-Dab1蛋白表达显著高于癫痫后Fc-control组[(1.34±0.04)，(2.26±0.10)， P<0.01]。动物行为学监测显示，与癫痫后Fc-control组相比，癫痫后EphB3-Fc组大鼠自发性痫性发作持续时间更短[(39.00±1.79)s，(26.50±1.87)s； t＝23.21， P<0.01]，频率更低[(2.00±0.89)次，(0.50±0.55)次； t＝2.32， P<0.01]，潜伏期延长[(6.33±1.37)d，(12.50±1.87)d； t＝2.52， P<0.01]。脑电图结果显示，与癫痫后Fc-control组相比，癫痫后EphB3-Fc组的大鼠脑电图痫性放电幅度下降[(37.30±1.21)μV，(29.00±1.41)μV； t＝25.14， P<0.01]，发作持续时间缩短[(5.35±0.19)s，(2.35±0.19)s； t＝3.13， P<0.01]。 结论:Ephrin-B3通过上调Reelin和p-Dab1减轻颞叶癫痫大鼠自发复发性癫痫发作。

大多数抗癫痫药物不会改变癫痫的病程，基本上是“对症治疗”，即使有多种新型抗癫痫药物不断问世，仍有超过30%的患者发展为药物难治性癫痫。因此，寻找新的治疗靶点和开发有效的药物来预防或逆转癫痫发生和进展，是临床和临床前研究的重要目标。基于目前的研究现状，实现抗癫痫发作向抗癫痫发生、疾病修正治疗的转变，不仅需要标准化的动物模型、能够预测癫痫发生或进展的生物标志物，而且需要足够且广泛的受试者群体、严谨的设计方案和前沿的分析方法，使得临床前研究成功向临床转化。毫无疑问，未来以各种神经损伤途径作为靶点来实现癫痫的预防和疾病修正治疗，或可成为治疗及预防癫痫真正有效的手段。

目的 基于难治性癫痫的中西医临床病症特点,对比评估现有难治性癫痫动物模型,评价模型的有效性和局限性,并探讨整合中西医理论、优化模型构建的思路,为难治性癫痫的机制阐明和防治提供新的研究方向.方法 通过查阅相关文献,整理分析相关资料,总结现有难治性癫痫动物模型复制方法、动物品系和模型优缺点,以难治性癫痫的西医诊断标准与中医辨证标准为依据,对现有的动物模型与临床症状的吻合度进行分析和评价.结果 总结现有的难治性癫痫动物模型,发现电点燃和化学点燃是目前常用的造模方法,锂-匹罗卡品模型和海马内海人酸模型与中西医临床病症特点吻合度较高,是目前应用较广泛的动物模型.现有模型多侧重于模拟难治性癫痫的病理改变,而对于中医学所重视的先天禀赋、情志失调等因素考虑不足,因此在模拟难治性癫痫的病因复杂性、临床异质性和药物治疗反应性等方面仍存在一定局限.结论 复制动物模型虽然可以在一定程度上反映其发病机制,但与机体的自然发病状态和临床表现仍然有较大差异.现有难治性癫痫动物模型多采用电刺激或化学药物诱导,在模拟癫痫持续状态、耐药性方面有一定优势,但仍存在诱导方法单一、病理改变不够复杂等局限.未来可尝试整合中医辨证分型与常规的电刺激或化学药物诱导方法,通过模拟多种致病因素,建立涵盖不同中医证型的难治性癫痫动物模型.同时,采用行为学、电生理、影像学和组织病理学等多维度指标,构建更全面的评价体系,以提高模型的临床相关性和转化应用价值.在造模过程中,可通过夹尾法、慢性束缚法、颈部带枷单笼喂养法等方式建立肝郁证模型;采用高脂饲料喂饲法建立痰凝证模型;使用夹尾+肾上腺素注射的方法建立气滞血瘀证模型;应用惊恐伤肾结合劳倦游泳建立肾虚精亏证模型等.还可通过改变光照和温度条件,模拟环境中的阴阳变化,研究环境变化对中医动物模型的影响.为难治性癫痫的治疗与研究提供更多思路.

听源性癫痫(audiogenic seizures,AGS)是由于强声刺激引起的癫痫,发作时伴全身性肌肉痉挛,其动物模型在研究癫痫发生机制、寻找致病基因及调控通道、筛选新的抗癫痫药物(antiepileptic drugs,AEDs)等方面具有重要意义.本文从发病特点、发病机制及致病基因等方面总结了目前常见AGS动物模型研究进展,以期为AEDs研发提供新的研究方向和靶点.

尽管新型抗癫痫药物(ASMs)不断涌现,目前已经发展到第三代,但仍有1/3癫痫患者可发展为耐药性癫痫(DRE).早在2010年,国际抗癫痫联盟(ILAE)就提出了DRE概念并沿用至今,及早诊断DRE,有助于对ASMs无反应的个体进行术前评估,并从癫痫外科手术中受益.由于DRE的发病率仍然很高以及概念一直没有更新,故在2023年8月ILAE/美国癫痫协会(AES)联合工作组从协调临床前和临床研究角度出发,在整个生命周期和跨物种基础上讨论了DRE表现和机制的异质性、复杂性及动态变化.联合工作组建议有必要重新审视DRE的当前定义,以更好地服务DRE临床管理以及指引DRE未来研究方向,为患者筛选更有效、更精准的个体化治疗,以减少DRE发病率,提高患者生活质量.本文旨在就ILAE/AES此份报告做一简要介绍和解读.

目的 本研究采用立体定向手术在一侧海马注射海人藻酸(kainic acid,KA),建立内侧颞叶癫痫(medial temporal lobe epilepsy,MTLE)慢性模型,通过行为学、电生理学和病理学验证其有效性.方法 取健康的C57BL/6 野生型雄鼠 22 只,随机分成对照组(n=6)和实验组即KA注射组(n=16).对照组和实验组分别在海马CA3 区进行微量注射生理盐水和KA,1 周后再次进行立体定向手术,植入脑电记录电极.植入术后 1 周开始记录小鼠脑电活动,统计癫痫发作次数和持续时间.通过对小鼠的观察与记录,分别从行为学、电生理学和病理学方面验证慢性癫痫模型.结果 本实验对 22 只C57BL/6 野生型雄鼠进行实验,对照组均无癫痫发作,而实验组存活的小鼠均出现癫痫发作.成模的小鼠在行为学上发生了凝视、咀嚼、头面部肌肉抽搐、肢体痉挛等慢性癫痫自发发作行为,有 2 只小鼠因手术死亡、4 只小鼠在急性发作期死亡、10 只小鼠模型成功建立;脑电图呈内侧颞叶癫痫样脑电图改变;在病理组织学方面,经免疫荧光染色发现:CA3 区神经元丢失,星形胶质细胞大量增生,符合海马硬化特征性的病理改变.结论 通过使用KA单侧、单次颅内注射构建的模型具有耗时、易操作、易成型等多项优势,该模型展现出与人类MTLE相似的脑电图、行为与神经病理改变,有助于研究治疗颞叶癫痫的药物,是癫痫外科手术预后判断的理想动物模型.

本研究主要探讨了癫痫猝死(SUDEP)相关动物模型的研究进展.全身强直阵挛发作(GTCS)是SUDEP发生的显著先兆和主要危险因素.SUDEP的发病机制涉及心源性、肺源性和脑源性因素,可能是多种因素的共同作用结果.转基因小鼠模型、声源性SUDEP模型、最大电休克(MES)模型是用于SUDEP研究的 3 类动物模型.开发新的动物模型和进行更多的临床研究十分重要,对于改善癫痫患者的预后和生活质量以及未来SUDEP防治策略的制定具有重要意义.