目的 筛选KCNQ通道开放活性化合物并进一步评价其抗癫痫作用.方法 利用铷流出高通量筛选技术初筛,对优选化合物QO-72,复制多个动物模型,通过行为学以及脑电图(EEG)分析,结合一般药理学实验,对其有效性安全性进行初步评价,并探讨作用机制.结果 得到3个系列活性化合物共51个.化合物QO-72在MES和PTZ急性实验中,灌胃和腹腔注射可明显提高抗惊厥保护率(P＜0.05,0.01),延长癫痫大发作阈值(P＜0.01).在PTZ点燃慢性癫痫模型中,QO-72腹腔注射不同剂量均可降低癫痫发作等级(P＜0.01),缩短癫痫发作持续时间(P＜0.01),大剂量明显提高发作保护率(P＜0.01);QO-72治疗组EEG癫痫波时程明显缩短、振幅明显降低、波功率谱密度明显下降(P＜0.05,0.01).QO-72灌胃给药治疗剂量16倍或腹腔注射8倍,对小鼠协调运动、自主活动、戊巴比妥钠协同睡眠无明显影响.QO-72给药组海马区脑脊液GABA含量可明显增加(P＜0.01),Glu没有明显变化(P＞0.05).结论 化合物QO-72在电刺激和化学诱导的急、慢性癫痫模型上,均表现出良好抗癫痫作用,其机制除开放KCNQ通道外,可能还与增加脑内抑制性神经递质GABA含量有关.

目的 观察平痫冲剂的抗痫作用,并探讨其作用机制.方法 将 62 只 3 周龄Wistar大鼠随机分为空白组 12 只,造模组50 只,采用戊四唑(pentetrazol,PTZ)腹腔注射制备癫痫模型;模型制备成功后,随机分成模型组、西药组及平痫冲剂组,每组各12 只,西药组给予丙戊酸钠灌胃,平痫冲剂组给予平痫冲剂灌胃.干预7d后,观察癫痫大鼠运动皮质区的组织形态结构;免疫组化、RT-qPCR以及Western blot检测大脑运动皮质区组织 L 型氨基酸转运体(L-type amino acid transporter,LAT)1、P 糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的表达情况.结果 与空白组比较,模型组大鼠大脑运动皮质区神经元数量减少(P＜0.01),LAT1 蛋白及mRNA表达下降(P＜0.05),P-gp、BCRP及其mRNA表达升高(P＜0.05).与模型组比较,平痫冲剂组大鼠大脑运动皮质区神经元数量增多(P＜0.05),神经元病理形态有所改善,LAT1 及其mRNA表达升高(P＜0.01),P-gp、BCRP及其mRNA表达下降(P＜0.01).结论 平痫冲剂可能通过调控血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)药物转运体P-gp、BCRP、LAT1 的表达,从而发挥抗痫作用.

目的:探讨miR-125a-5p通过靶向信号转导与转录激活因子3(STAT3)对戊四唑(PTZ)诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应的影响.方法:采用PTZ点燃法建立大鼠癫痫模型,并将其随机分为6组:Con组、PTZ组、PTZ+agomir NC组、PTZ+miR-125a-5p agomir组、PTZ+miR-125a-5p agomir+pcDNA组和PTZ+miR-125a-5p agomir+pc-STAT3组,评价miR-125a-5p对大鼠癫痫持续时间、潜伏期、惊厥次数和严重程度的影响.qRT-PCR检测miR-125a-5p和STAT3 mRNA表达;改良神经系统严重程度评分(mNSS)、开场实验和Rotarod测试评价癫痫大鼠的神经功能;Morris水迷宫实验评价癫痫大鼠的认知功能;免疫染色观察海马CA1和CA3区域神经元凋亡;ELISA检测海马组织炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-18)水平;Western blot检测海马组织中STAT3蛋白表达;双荧光素酶实验验证miR-125a-5p和STAT3的关系.结果:在PTZ诱导的癫痫大鼠中,miR-125a-5p表达上调,STAT3表达下调,且miR-125a-5p靶向抑制STAT3表达.与PTZ组相比,PTZ+miR-125a-5p agomir组癫痫大鼠的潜伏期缩短,癫痫评分降低,癫痫发作时间和次数减少,mNSS降低,掉落潜伏期及外围区域的移动距离、开放区域的总距离延长,逃避潜伏期显著降低,穿越平台次数及停留在目标象限的时间和游泳距离均增加,海马组织TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-18表达降低,CA3和CA1区的NenN+细胞增多(P<0.05);STAT3过表达可逆转miR-125a-5p agomir对癫痫大鼠神经功能障碍及炎症反应的缓解作用(P<0.05).结论:miR-125a-5p通过靶向下调STAT3,减轻PTZ诱导的癫痫大鼠神经功能障碍和炎症反应.

对司巴生坦(1)的合成方法进行优化.4-溴-3-甲基苯甲腈(2)经自由基反应、亲核取代、氰基还原和Miyaura硼化反应后,得3-(乙氧基甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂戊烷-2-基)苯甲醛(6);2-溴苯磺酰氯(7)与3-氨基-4,5-二甲基异(噁)唑(8)缩合,再保护仲胺得到2-溴-N-(4,5-二甲基异(噁)唑-3-基)-N-[(2-甲氧基乙氧基)甲基]苯磺酰胺(11);6与11经Suzuki偶联反应得N-(4,5-二甲基异(噁)唑-3-基)-2'-(乙氧基甲基)-4'-甲酰基-N-[(2-甲氧基乙氧基)甲基][1,1'-联苯]-2-磺酰胺(12);12再经过还原、溴化、缩合和脱保护反应,得目标产物(1).总收率约43.25％(以2计),纯度99.5％.优化后的路线避免了危险、有毒试剂(正丁基锂、四溴化碳)的使用,简化了纯化方式.

目的 对"远志-酸枣仁"中潜在作用于钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)靶点的活性物质进行筛选,阐明其药效物质基础.方法 采用以药效团为基础的虚拟筛选手段,通过收集已出版文献中报道的具有调控CaMK Ⅱ作用的化合物信息,建立基于CaMK Ⅱ配体的HipHop药效团模型,收集文献中报道的"远志-酸枣仁"中的成分并建立化合物库,对"远志-酸枣仁"中的成分与药效团进行匹配,随后使用分子模拟对接手段对匹配到的小分子化合物与CaMK Ⅱ靶点(PDB ID:2V7O)进行对接,研究潜在活性单体与CaMK Ⅱ的作用.用戊四唑(pentylenetetrazol,PTZ)点燃模型对活性单体细叶远志苷A(39)的抗癫痫作用进行测定,并对CaMK Ⅱ水平的调控作用进行评价.结论 通过文献检索建立包含"远志-酸枣仁"中109种化学成分的化合物库,通过测试集验证确定将药效团03用于对"远志-酸枣仁"化合物库的虚拟筛选,对匹配度排前6位的单体通过分子模拟对接分析其与CaMK Ⅱ的作用情况,并用抗癫痫动物模型对单体的活性进行评价,化合物39能够在中高剂量下延长PTZ致癫痫发作的潜伏时间,改善PTZ所致的焦虑抑郁样行为,改善PTZ诱导的癫痫发作后脑内尼氏体丢失,提升PTZ所致的CaMK Ⅱ表达水平降低,提升海马CA1、CA3区及颞叶皮层内CaMK Ⅱ免疫阳性细胞数量并进一步对nAChR4受体水平进行调控.表明基于虚拟筛选与活性评价手段探讨"远志-酸枣仁"中CaMK Ⅱ调控作用的成分具有一定的准确性.

目的 寻找胆腑郁热型慢性鼻-鼻窦炎(CRS)患者尿液中内源性小分子代谢标志物,为明确其发病机制及治疗提供一定依据.方法 选择2019年4月—2021年10月在黑龙江中医药大学附属第一医院耳鼻喉科门诊就诊的20例胆腑郁热型CRS患者作为CRS组,选择同期就诊的20例鼻中隔偏曲患者作为对照组,采用液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)方法分析2组患者尿液代谢物的差异,并对潜在代谢标志物进行鉴定和分析.结果 与对照组比较,CRS组患者尿液中N-乙酰组胺、咪唑丙酸、去甲肾上腺素、香草扁桃酸、N-乙酰鸟氨酸、L-脯氨酸、2-氨基苯甲酸、氧戊二酸、甲基琥珀酸、4-吡哆酸、2-哌啶酮含量均明显上升(P均＜0.05),核黄素、四氢新蝶呤含量均明显下降(P均＜0.05).差异代谢物主要涉及精氨酸合成、酪氨酸代谢、核黄素代谢、D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢、维生素B6代谢、丁酸代谢、柠檬酸循环(TCA循环)、丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸的代谢、精氨酸和脯氨酸代谢等代谢通路.结论 胆腑郁热型CRS患者与鼻中隔偏曲患者的尿液代谢图谱存在差异,进一步揭示了其发病机制,为CRS中医证候研究提供了一定物质基础.

目的 探究环状RNA(circRNA)在癫痫发病中的可能作用机制.方法 利用circRNA基因芯片检测癫痫患者与健康对照者外周静脉血中circRNA表达谱筛选出差异表达的 circRNA.利用 circPrimer、circMir、TargetScan 对 circ_0017178与癫痫进行生物信息学分析并构建相关腺病毒载体.将30只雄性成年C57BL/6小鼠随机分为对照组、空载体组、circ_0017178过表达组(10只/组),分别向3组小鼠海马内注射生理盐水、空质粒腺病毒载体、circ_0017178过表达腺病毒载体,构建戊四唑癫痫模型后观察各组小鼠的动物行为学变化,用Tunel染色法分析各组小鼠海马组织细胞凋亡情况.结果 基因芯片结果表明,与对照组比较,癫痫组中 circ_0069272、circ_0033065、circ_0017178、circ_0073442、circ_0033063、circ_0049415 上 调,circ_0083773、circ_0088262、circ_0016396 下调.其中 circ_0017178 可能与癫痫密切相关,通过生信分析circ_0017178可能结合20个miR-NA调控39个癫痫基因,并具备潜在m6A、IRES、ORF1结合位点.在动物实验中,相比空载体组及对照组,circ_0017178过表达组癫痫的潜伏期缩短(P＜0.05)、发作时间延长(P＜0.05)、发作次数增加(P＜0.05);空载体组及对照组间无统计学意义(P＞0.05).相比空载体组及对照组,circ_0017178过表达组癫痫小鼠海马组织细胞凋亡程度明显增加(P＜0.05),空载体组及对照组间无统计学意义(P＞0.05).结论Circ_0017178在癫痫患者外周血单个核细胞表达谱中升高,Circ_0017178可能充当miRNA的"分子海绵"在癫痫中发挥作用,并具备m6A甲基化和翻译蛋白质的潜能.Circ_0017178可能通过促进戊四唑癫痫小鼠的细胞凋亡增加癫痫的易感性和严重程度.

目的:观察"疏肝调神"针法对肝郁型失眠大鼠行为学及海马5-羟色胺1A受体(5-HT1AR)和5-羟色胺2A受体(5-HT2AR)表达的影响.方法:从70只Wistar大鼠中随机选取10只作为空白组,其余采用慢性夹尾刺激结合腹腔注射对氯苯丙氨酸复制肝郁型失眠大鼠模型.选取造模成功大鼠50只随机分为模型组、抓取组、西药组、针刺组和假针刺组,每组10只.抓取组采用和针刺组相同的方式抓取;西药组予以艾司唑仑溶液灌胃;针刺组采用"疏肝调神"针法针刺百会、内关、神门和太冲;假针刺组针刺四个非经非穴点.所有组别每日干预1次,连续7 d.采用戊巴比妥睡眠实验评价治疗7 d后各组大鼠睡眠潜伏期(SL)、睡眠持续时间(ST);高架十字迷宫实验(EPMT)监测各组大鼠开臂进入次数比例(OE%)和开臂停留时间比例(OT%);旷场实验(OFT)监测大鼠直立次数、水平跨格次数、粪便粒数;蛋白免疫印迹法检测大鼠海马区5-HT1AR和5-HT2AR的表达.结果:与空白组相比,模型组大鼠体质量增长幅度、ST、OE%、OT%、直立次数、水平跨格次数及海马5-HT1AR表达明显降低(P<0.01),SL及海马5-HT2AR表达明显升高(P<0.01).治疗后,与抓取组相比,针刺组和西药组大鼠体质量、ST、OT%、OE%、直立次数、水平跨格次数及海马5-HT1AR表达明显升高(P<0.01或P<0.05),SL及海马5-HT2AR表达明显降低(P<0.01或 P<0.05).与西药组相比,针刺组OT%、SL及海马 5-HT1AR升高更显著(P<0.05).与假针刺组相比,针刺组大鼠体质量、OT%、OE%、ST、直立次数、水平跨格次数及海马5-HT1AR表达明显升高(P<0.01),SL及海马5-HT2AR表达明显降低(P<0.01).结论:"疏肝调神"针法不仅可以改善睡眠,还能改善肝郁型失眠大鼠异常行为和情绪,且对异常情绪的改善作用优于西药组.其作用机制可能与针刺调节海马5-HT1AR和5-HT2AR的表达有关.

目的 通过单次腹腔注射戊四唑,建立一种稳定可靠的小鼠急性焦虑样行为模型.方法 根据体重将ICR雄性小鼠随机分为对照组和不同剂量戊四唑给药组(20,30,40和50 mg·kg-1),行为学实验均在戊四唑注射30 min后进行.采用高架十字迷宫实验和明暗箱实验评价小鼠焦虑样行为.结果 高架十字迷宫实验结果显示,与正常组小鼠相比,腹腔注射戊四唑30、40和50 mg·kg-1后,小鼠的进入开臂次数、开臂停留时间、开臂时间百分比显著下降(P＜0.05),戊四唑30和40 mg·kg-1组小鼠在开臂次数百分比显著减少(P＜0.05).明暗箱实验结果显示,与正常组小鼠相比,戊四唑30,40和50 mg·kg-1组小鼠进入明箱次数显著减少(P＜0.05),戊四唑40和50 mg·kg-1组小鼠的明箱停留时间和明箱停留时间百分比显著降低(P＜0.01),50 mg·kg-1组小鼠的明箱进入次数百分比显著降低(P＜0.05).结论 单次腹腔注射戊四唑可建立一种稳定可靠的焦虑动物模型.

目的 通过动物实验阐明酸枣仁汤对小鼠焦虑样行为的改善作用,网络药理学预测酸枣仁汤的靶点,采用分子对接和化合物活性评价,探讨酸枣仁汤抗焦虑的潜在作用物质基础.方法 通过高架十字迷宫、明暗箱和旷场实验观察酸枣仁汤对小鼠焦虑样行为的改善作用.采用MetaCore数据库与分子对接技术分别对相关生物分子进行通路富集分析与靶点-化合物结合能预测,钙通量法检测化合物对靶点的激活作用,通过高架十字迷宫、旷场实验评价所预测化合物的抗焦虑作用.结果 酸枣仁汤(43.4 g·kg-1·d-1)可能通过GABA能突触和5-HT能突触等发挥抗焦虑作用,改善戊四唑(30 mg·kg-1)诱导的小鼠焦虑样行为.分子对接发现灰绿曲霉酰胺、异芒果苷、大黄酚与大麻素受体1(CNR1)的亲和力较好.钙流实验结果表明大黄酚、大黄素和山奈酚对CNR1有激活作用,其EC50分别为138.3,54.37和52.28 μmol·L-1,其中山奈酚和大黄酚对正常小鼠表现出较好的抗焦虑作用.结论 酸枣仁汤可能通过GABA能和大麻素受体信号通路调控焦虑行为,其中山奈酚和大黄酚可能是酸枣仁汤治疗焦虑的物质基础.