目的 采用血清蛋白质组学方法探讨培土清心颗粒(白术、连翘、白茅根、太子参等)治疗特应性皮炎的作用靶点.方法 选择特应性皮炎患者 5 例,以培土清心颗粒治疗 12 周,并以健康志愿者 5 例作为对照.对特应性皮炎患者治疗后的临床核心评价指标包括病情严重程度评分(EASI、SCORAD)、瘙痒程度评分、患者自评(POEM)、生活质量指数等进行评估.采用数据非依赖采集质谱(DIA-MS)技术检测血清样本,并根据P＜0.05、变化倍数(Fold Change)＞1.2 筛选出特应性皮炎患者与健康人群的血清差异蛋白,以及培土清心颗粒治疗前后特应性皮炎患者的血清差异蛋白.对差异蛋白进行GO功能富集分析和KEGG通路富集分析.结果 (1)与治疗前比较,特应性皮炎患者治疗后的临床核心评价指标包括病情严重程度评分(EASI、SCORAD)、瘙痒程度评分、患者自评(POEM)、生活质量指数等均得到明显改善,差异均有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01).(2)健康对照组及特应性皮炎组共分析出 28 个差异性蛋白,其中 12 个蛋白表达水平上升,16 个蛋白表达水平下降,包括ALAD(δ-氨基乙酰丙酸脱水酶)、LTA4H(白三烯A-4 水解酶)、CA1(碳酸酐酶 1)、F11(凝血因子XI)、LCP1(淋巴细胞胞浆蛋白 1)等.主要涉及PI3K-AKT信号通路、脂质与动脉粥样硬化、ECM-受体相互作用、血小板活化、NF-κB信号通路、中性粒细胞外陷阱形成等信号通路.(3)特应性皮炎患者经培土清心颗粒治疗前后共分析出 12 个差异蛋白,其中 8 个蛋白表达水平上升,4 个蛋白表达水平下降,包括ALAD、FGA(纤维蛋白原α链)、IGHV3-64D及IGHV3-38 等.主要涉及脂质与动脉粥样硬化、补体途径、金黄色葡萄球菌感染、NF-κB信号通路、流体剪切应力与动脉粥样硬化等信号通路.(4)ALAD、FGA、IGHV3-64D等 3 个蛋白靶点在特应性皮炎患者中的表达显著下调,而在培土清心颗粒治疗后显著上调.结论 差异表达蛋白ALAD、FGA、IGHV3-64D可能是培土清心颗粒治疗特应性皮炎的作用靶点,为进一步实验验证奠定了基础.

目的·观察孟鲁司特在哮喘治疗中对白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)代谢途径关键分子表达的影响,探讨哮喘的潜在干预靶点.方法·卵清蛋白(ovalbumin,OVA)+A1(OH)3致敏激发小鼠,建立以过敏性气道疾病(allergic airway disease,AAD)为特点的小鼠急性、亚急性和慢性哮喘模型并予孟鲁司特灌胃干预,然后再予OVA激发慢性哮喘模型.无约束全身体积描记仪测定小鼠肺功能,探究气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR)的变化规律.苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察肺组织嗜酸性粒细胞(eosinophil,EOS)浸润及杯状细胞(goblet cell,GCL)增生情况,观察气道过敏性炎症的病理学特点.ELISA和液相芯片多因子检测试剂盒检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和血清的免疫球蛋白 E(immunoglobulin E,IgE)、干扰素γ(interferon γ,IFN-γ)和白细胞介素(interleukin,IL)表达水平,观察2型辅助性T细胞(helper T cell type 2,Th2)炎症情况.RT-qPCR、Western blotting及免疫组织化学检测小鼠LTB4合成限速酶5-脂氧合酶激活蛋白(5-lipoxygenase activating protein,ALOX5AP)和白三烯A4水解酶(leukotrieneA4 hydrolase,LTA4H)及LTB4受体 1(leukotriene B4receptor 1,BLT1)基因及蛋白表达,探究LTB4的代谢与哮喘的关系.结果·OVA+A1(OH)3可建立以AAD为特征的小鼠哮喘模型,表现为以增强呼气间歇(enhanced pause,Penh)值升高为肺功能特点的AHR,以气道EOS浸润和GCL增生为病理学特点的嗜酸性炎症和黏液高分泌状态,及以BALF和血清中IgE、IL-4和IL-13升高且IFN-γ、IL-2和IL-12降低为免疫学特点的Th2型炎症反应;孟鲁司特可有效缓解AAD.ALOX5AP、LTA4H和BLT1基因及蛋白在哮喘中表达增强,孟鲁司特始终抑制ALOX5AP表达,但可促进LTA4H和BLT1在慢性期的表达.OVA再次激发后,孟鲁司特可使LTA4H和BLT1表达增强.结论·孟鲁司特具有缓解哮喘小鼠过敏性炎症的效应,但可刺激LTB4的生成和堆积并以慢性期显著;再次予OVA激发孟鲁司特持续干预的哮喘小鼠可使LTB4与BLT1的表达增强;孟鲁司特可能存在激活LTB4及其受体BLT1进而加重哮喘发作的风险,LTB4代谢限速酶LTA4H及受体BLT1可能是哮喘治疗的潜在靶点.

目的 用计算机网络药理学技术分析柴胡疏肝散治疗卒中后抑郁的有效成分,并预测其作用机制.方法 从中药系统药理学分析平台(TCMSP)中获取柴胡疏肝散的化学成分和靶点,同时利用OMIM、TTD和PharmGkb数据库获取治疗卒中和抑郁的共有靶标.采用Excel筛选分子和靶标,Cytoscape软件建立柴胡疏肝散的中药成分-靶点网络图,通过生物学信息注释数据库(DAVID)对基因功能及代谢通路进行分析.结果 从数据库筛选出柴胡疏肝散122个中药成分与卒中后抑郁的42个靶蛋白相互作用,其中雌激素受体(ESR1)、前列素内环氧化物合成酶2(PTGS2)、糖原合成酶激酶3β(GSK3β)、SLC6A4和白三烯A4水解酶(LTA4H)为柴胡疏肝散治疗卒中后抑郁的作用靶点,主要涉及花生四烯酸代谢通路、5-羟色胺能突触通路、催乳素信号通路和甲状腺激素信号通路,通过调节炎症应答、突触合成、雌激素应答、记忆、生物合成、药物反应和昼夜节律从而治疗卒中后抑郁.结论 通过网络药理学研究揭示了柴胡疏肝散治疗卒中后抑郁的可能机制,为进一步阐明其作用靶点奠定了基础.

目的 探讨白三烯A4水解酶(LTA4H)基因rs17525495位点多态性与结核性脑膜炎(TBM)患者病情严重程度的相关性.方法 以2014年1月至2016年10月河北医科大学第二医院神经内科收治的184例TBM患者为研究对象,参照英国医学研究会标准将患者病情严重程度分为3期,对患者LTA4H基因单核苷酸多态性位点rs17525495进行基因测序,并对患者的一般病例资料、临床表现、腰椎穿刺术检查结果进行数据描述与分析.结果 184例患者中LTA4H基因rs17525495位点CC基因型91例(49.5％),CT型75例(40.8％),TT型18例(9.8％),等位基因频率C为69.8％,T为30.2％.CC型患者中,Ⅰ期患者所占比例(54.9％,50/91)高于Ⅱ(22.0％,20/91)、Ⅲ期(23.1％,21/91);TT型患者中,Ⅱ(8/18)、Ⅲ期(8/18)患者所占比例高于Ⅰ期(2/18)患者(χ2=15.898,P=0.003).对患者头痛、发热、恶心呕吐、颈项强直、癫痫、意识障碍6个方面进行统计分析,发现TT型患者与CC、CT型患者相比,发热(TT型13/18,CC型42/91,CT型50/75,χ2=8.932,P=0.011)、颈项强直(TT型12/18,CC型38/91,CT型46/75,χ2=7.993,P=0.018)的发生率更高,不同基因型组间头痛、恶心呕吐、意识障碍、癫痫发生率差异无统计学意义.不同基因型患者间腰椎穿刺压力、氯化物、蛋白质、葡萄糖差异均无统计学意义.结论 TBM患者病情较轻时,多提示LTA4H基因rs17525495位点为CC型;病情较重的患者则提示LTA4H基因rs17525495位点为TT型.

目的 探讨三七治疗动脉粥样硬化的作用机制. 方法 基于中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库,以口服吸收利用度(OB) ≥30％,药物相似性(DL)≥0.18,细胞渗透性(Caco-2)≥-0.4作为筛选条件,结合文献筛选得到三七有效活性成分群,通过PharmMapper数据库提取活性成分作用靶点及相关疾病,用OMIM、TTD、Drugbank等数据库收集动脉粥样硬化全部靶点,构建“成分-疾病-靶点”网络图,并与筛选到的靶点进行验证.采用DAVID数据库进行关键靶点的GO分析和KEGG通路富集分析. 结果 从三七中共筛选得到人参皂苷rh2、槲皮素、β-谷甾醇等1 1个有效成分,作用于92个靶点,269种相关疾病.直接治疗动脉粥样硬化的靶点9个,分别是白三烯A4水解酶(LTA4H)、花生四烯酸5脂氧合酶(ALOX5)、基质金属蛋白酶3(MMP3)、尿激酶型纤溶酶原激活因子(PLAU)、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素1β (IL1B)、人E选择素(SELE)、髓过氧化酶(MPO)、视黄醇X受体α(RXRA).GO分析结果显示,生物过程与炎症密切相关,包括白三烯代谢和合成过程、调节I-κB激酶/NF-κB信号传导等.KEGG分析结果显示,多种功能和信号通路与动脉粥样硬化相关. 结论 三七有效成分群通过直接调控动脉粥样硬化相关的靶点,间接调控关键炎症因子,进而调节炎症因子相关的NF-κB信号通路、TNF信号通路等来发挥治疗动脉粥样硬化的作用.

白三烯B 4(LTB 4)在炎症和过敏性疾病(如异位性皮炎,AD)的发病机理中起着重要作用,它的形成与LTA 4水解酶的催化作用相关。作者在该研究中,通过检测AD患者外周血白细胞中LTA 4水解酶的活性,以进一步了解其病理生理作用,并为AD的治疗提供新的依据。

表皮5-脂氧合酶活性极其有限或缺乏,银屑病皮损中白三烯B 4的来源成为研究热点。新近研究表明,表皮存在白三烯A 4水解酶,它可将中性粒细胞释放出的白三烯A 4水解为白三烯B 4,即跨细胞合成白三烯B 4。因此,白三烯A 4水解酶在银屑病发病机制中有重要意义,并可能成为抗银屑病药物的靶位。

目的 探讨白三烯B4(LTB4)在"肺保护性"机械通气(LPMV)致肺损伤中的作用机制.方法 32只健康日本大耳白兔随机平均分为:溶剂预处理+假手术组(S组)、乌苯美司(白三烯A4水解酶抑制剂)预处理+假手术组(BS组)、溶剂预处理+LPMV组(PM组)和乌苯美司预处理+LPMV组(BPM组).BS组和BPM组先实施连续5 d的乌苯美司8 mg/(kg·d)灌胃预处理,S组和PM组则在相同时间点灌胃给予同等容积的溶剂.乌苯美司或溶剂预处理结束后,对PM组和BPM组实验动物实施时长为5 h的LPMV:潮气量(VT)=8 mL/kg,呼气末正压(PEEP)=5 cm H2O,吸气时间:呼气时间(I:E)=1:2,吸入氧浓度(FiO2)=0.5,调整呼吸频率(RR)维持呼末CO2在35～45 mmHg范围内;S组和BS组则保留自主呼吸.酶联免疫法用于检测实验动物肺组织LTB4和环一磷酸腺苷(cAMP)含量;肺组织cAMP含量、蛋白激酶A(PKA)蛋白表达水平和活化Rap1蛋白(Rap1-GTP)/总Rap1蛋白比值分别用于反映cAMP/PKA和Rap1信号通路活性变化情况;用肺通透性[肺通透性指数和肺湿/干(W/D)重比值]、肺炎症反应[支气管肺泡灌洗液(BALF)中多形核白细胞(PMN)计数和肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性]和肺组织形态学评分对肺损伤的严重程度进行判断.结果 S组与BS组实验动物各检测指标无显著差异;除肺组织学评分无显著差异外,PM组和BPM组实验动物其余各指标均显著增高于S组(P＜0.05);与PM组相比,BPM组实验动物肺内LTB4生成明显减少(P＜0.05),cAMP/PKA和Rap1信号通路活性进一步上调(P＜0.05),肺炎症反应与肺通透性增加明显减轻(P＜0.05).结论 LPMV会造成实验动物肺内LTB4大量生成继而诱发肺炎症反应和肺通透性增加,LTB4在其中的作用机制与下调cAMP/PKA和Rap1信号通路活性有关;乌苯美司可通过抑制肺内LTB4的生成发挥抗LPMV诱导的肺炎症反应和肺通透性增加保护作用.

动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是常见的心血管疾病,能引起严重的并发症,是导致病人死亡最常见的病因之一.炎症反应是动脉粥样硬化的发病机制之一,而白三烯(leukotrienes,LTs)是重要的炎症介质,在炎症信号通路中具有免疫调节和促炎作用.白三烯与动脉粥样硬化密切相关.白三烯的产生主要通过5-脂氧合酶和环氧合酶产生.白三烯B4(leukotrienes B4,LTB4)、半胱氨酸-白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTs)等通过诱导中性粒细胞聚集,增强内皮细胞通透性,介导血管平滑肌细胞核钙信号转导,促进动脉粥样硬化的形成.一些与动脉粥样硬化有关的疾病,如阻塞性睡眠呼吸暂停的夜间间歇性低氧显著增加了白三烯B4的产生及5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)的表达;糖尿病患者基质金属蛋白酶明显增加,可促进5-脂氧合酶和白三烯B4表达.本文论述了白三烯及其代谢途径中相关物质、产生白三烯相关疾病与动脉粥样硬化的关系,提出了抑制白三烯受体、5-脂氧合酶途径和白三烯A4水解酶等新的治疗动脉粥样硬化的策略.

目的 探讨白三烯A4水解酶基因多态性rs17025122检测在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者中的临床价值.方法 纳入COPD急性加重(AECOPD)组及对照组(包括支气管扩张、社区获得性肺炎患者)各150例,两组再分为不吸烟组、吸烟组两个亚组,采用imLDR多重连接酶单核苷酸多态性(SNP)分型检测技术,检测患者外周血白三烯A4水解酶rs17025122基因多态性,并测定每例患者治疗前后动脉血气、肺功能、6 min步行距离(6MWT)、慢性阻塞性肺病评估测试(CAT)问卷评分.比较两组上述指标差异.结果 对照组与AECOPD组rs17025122基因型频率分布差异有统计学意义(P<0.05),相较于GG基因型,AG基因型突变使COPD患病风险显著增加(OR=2.93,P=0.0002).在吸烟亚组中,相较于GG基因型,AG基因型突变使COPD患病风险显著增加(OR=4.82,P=0.006).相较于AECOPD不吸烟患者治疗前,AECOPD吸烟患者治疗前第1秒用力呼气容积(FEV1)、FEV1％、6MWT、CAT评分差异均有统计学意义(均P<0.05).相较于对照组治疗前,AECOPD组治疗前动脉血二氧化碳分压(PaCO2)、FEV1、FEV1％、6MWT、CAT评分差异均有统计学意义(均P<0.05).相较于对照组患者治疗后,AECOPD患者治疗后FEV1、FEV1％、6MWT、CAT评分指标之间的差异均有统计学意义(P<0.05).结论 通过对白三烯A4水解酶基因多态性rs17025122位点进行测定,变异杂合子AG基因型突变显著增加了吸烟者罹患COPD的风险.相较于不吸烟的COPD患者,吸烟的COPD患者有更高的AG突变基因型表达,且吸烟的COPD患者肺功能更差、6MWT更短、CAT评分更高.