目的:探讨咖啡酸苯乙酯（caffeic acid phenethyl ester，CAPE）是否通过激活核因子E2相关因子2（nuclear factor erythroid-2-related factor 2，Nrf2）/血红素氧合酶1（heme oxygenase-1，HO-1）信号通路减轻氧化应激损伤，从而改善腹膜透析（peritoneal dialysis，PD）相关性腹膜纤维化。方法:按随机数字表法将32只雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为4组：对照组（CON组，0.9%生理盐水20 ml/d腹腔注射）、单独CAPE组（CAPE组，0.9%生理盐水20 ml/d+CAPE 10 mg·kg -1·d -1腹腔注射）、模型组［PD组，4.25%葡萄糖腹膜透析液（peritoneal dialysis fluid，PDF）20 ml/d腹腔注射，并于第1、3、5及7天予脂多糖0.6 mg/kg腹腔注射］及CAPE干预组（PD+CAPE组，在PD组基础上予CAPE 10 mg·kg -1·d -1腹腔注射），每组8只。腹腔注射持续28 d，第28天行腹膜平衡试验检测腹膜转运功能后处死大鼠，收集壁层腹膜和网膜组织进行后续检测。为进一步探讨机制，分离培养原代大鼠腹膜间皮细胞（peritoneal mesothelial cells，PMCs），用2.5%葡萄糖PDF刺激PMCs，加5 μmol/L CAPE干预，检测PMCs的形态和功能。应用Nrf2特异性抑制剂ML385阻断Nrf2探讨CAPE对PMCs保护作用与Nrf2/HO-1通路的关系。组织病理染色检测腹膜组织的结构变化，免疫组化分析Cleaved caspase-3、Bax、α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、纤维连接蛋白（fibronectin，FN）及Ⅰ型胶原蛋白（typeⅠcollagen，Col-Ⅰ）的蛋白表达，Western印迹检测α-SMA、FN、转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）、HO-1及细胞核内Nrf2（N-Nrf2）的蛋白表达量，细胞凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡情况，流式细胞术检测活性氧（reactive oxygen species，ROS）表达，丙二醛（malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性检测试剂盒分别检测MDA含量和SOD活性，细胞免疫荧光分析Nrf2蛋白的表达。 结果:与CON组相比，PD组大鼠腹膜较厚，凋亡相关蛋白Cleaved caspase-3、Bax、间皮下α-SMA、FN、Col-Ⅰ蛋白表达及MDA含量均较高，HO-1、N-Nrf2蛋白表达和SOD活性均较低（均 P<0.05）；与PD组相比，PD+CAPE组大鼠腹膜形态明显改善，Cleaved caspase-3、Bax、α-SMA、FN、Col-Ⅰ蛋白表达及MDA含量均较低，HO-1、N-Nrf2蛋白表达和SOD活性均较高（均 P<0.05）。与CON组相比，PD组大鼠超滤量较低，腹膜通透性较高，CAPE干预后大鼠腹膜转运功能显著改善（均 P<0.05）。在体外培养的PMCs中，PDF抑制Nrf2核转位和HO-1蛋白表达，上调细胞内ROS水平，诱导细胞凋亡增多和α-SMA、TGF-β1和FN蛋白表达增加（均 P<0.05）；CAPE可激活Nrf2核转位，增加HO-1蛋白表达，下调细胞内ROS水平，部分逆转PDF诱导的细胞凋亡及上皮-间充质转化（均 P<0.05）；CAPE对PMCs的保护作用可部分被ML385抵消（均 P<0.05）。 结论:CAPE可减轻PD对腹膜的氧化应激损伤，减少PMCs凋亡和上皮-间充质转化，改善腹膜纤维化及超滤功能。CAPE对腹膜的保护作用与激活Nrf2/HO-1通路有关。

目的:评价电针对内毒素血症大鼠急性肾损伤时血红素氧合酶-1(HO-1)/PTEN假定激酶1(PINK1)/Parkin信号通路的影响。方法:SPF级健康雄性SD大鼠24只，6~8周龄，体质量180~220 g。采用随机数字表法分为4组( n＝6)：对照组(C组)、内毒素血症组(E组)、穴位电针+内毒素血症组(EE组)和非穴位电针+内毒素血症组(NE组)。采用腹腔注射LPS 10 mg/kg的方法制备大鼠内毒素血症模型，C组注射等体积生理盐水；E组腹腔注射LPS 10 mg/kg；EE组于造模前5 d开始电针刺激，1次/d，选择双侧足三里及肾俞穴，疏密波，频率2/15 Hz，刺激强度以大鼠出现轻微肌颤为宜，30 min/次，留针至注射后6 h。NE组刺激穴位旁开0.5 cm处。LPS注射后6 h时麻醉大鼠股静脉取血样，采用生化分析仪法检测血清Cr和BUN的浓度；ELISA法检测血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)、肾损伤分子1(KIM-1)、IL-6和TNF-α的浓度。随后处死大鼠取肾组织HE染色并进行肾损伤评分，采用Western blot法检测HO-1、PINK1、Parkin、线粒体融合蛋白2(Mfn2)、视神经萎缩蛋白1(OPA1)和线粒体动力相关蛋白1(Drp1)的表达。 结果:与C组比较，E组、EE组和NE组血清Cr、BUN、KIM-1、NGAL、IL-6、TNF-α浓度和肾损伤评分升高，肾组织HO-1、PINK1、Parkin和Drp1表达上调，Mfn2和OPA1表达下调( P<0.05)；与E组比较，EE组血清Cr、BUN、KIM-1、NGAL、IL-6、TNF-α浓度和肾损伤评分降低，肾组织HO-1、PINK1、Parkin、Mfn2和OPA1表达上调，Drp1表达下调( P<0.05)，NE组上述指标差异无统计学意义( P>0.05)。 结论:电针减轻内毒素血症大鼠急性肾损伤的机制与激活HO-1/PINK1/Parkin信号通路有关。

目的:探讨骨髓间充质干细胞来源的外泌体(BMMSC-exos)对活化肝星状细胞(HSC)的作用及其机制。方法:应用脂多糖(LPS)诱导HSC形成激活体外模型。按照实验要求分为对照组(Con)、活化组(LPS)、LPS＋BMMSCs(L＋B)组、LPS＋BMMSC-exo(L＋B-exo)组、L＋B-exo＋小干扰RNA阴性对照组(si-NC)及L＋B-exo＋敲降NCOA4组(si-NCOA4)。通过细胞增殖测定细胞活力；实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测平滑肌激动蛋白(α-SMA)、核受体共激活因子4(NCOA4)和铁蛋白(FTH1)mRNA；蛋白质免疫印迹法检测NCOA4、FTH1、波形蛋白(Vimentin)、α-SMA、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、p62、环氧合酶-2(COX-2)、苄氯素1(Beclin 1)及微管相关蛋白(LC3)蛋白表达水平；免疫荧光化学检测NCOA4、FTH1及Vimentin表达；检测丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)及脂质活性氧(Lipid ROS)含量变化，多组间的数据比较采用单因素方差分析。结果:BMMSC-exos对活化的HSC-T6细胞的影响：L＋B-exo组纤维化标志物α-SMA和Vimentin表达量(0.58±0.04、0.25±0.05)低于LPS组(1.26±0.04、1.06±0.03)和L＋B组(0.76±0.04、0.75±0.15， F＝50.607、35.916， P<0.05)。BMMSC-exos促进活化的HSC-T6细胞铁死亡和自噬：L＋B-exo组MDA与Lipid ROS的表达量[(4.27±1.06) nmol/(mg·prot)、8 950.49±114.34]高于LPS组[(2.27±0.73) nmol/(mg·prot)、5 492.73±25.69]和L＋B组[(3.27±0.90) nmol/(mg·prot)、7 198.05±116.63， F＝1.263、1 372.009， P<0.05]；L＋B-exo组GSH水平[(10.47±0.31) μg/10 6 cells]低于LPS组[(15.94±0.11) μg/10 6 cells]和L＋B组[(12.60±0.15) μg/10 6 cells， F＝646.842， P<0.05]；L＋B-exo组NCOA4蛋白表达量[(1.19±0.06)]高于LPS组[(0.73±0.12)]和L＋B组[(0.95±0.13)， F＝44.456， P<0.05]；L＋B-exo组FTH1蛋白表达量(0.25±0.05)低于LPS组(1.06±0.03)和L＋B组(0.75±0.15， F＝35.916， P<0.05)。NCOA4介导的铁蛋白自噬参与BMMSC-exos对HSC-T6细胞的作用：si-NCOA4组的MDA[(0.83±0.11) nmol/(mg·prot)]低于si-NC组[(1.17±0.09) nmol/(mg·prot)， F＝17.217， P<0.05]。 结论:BMMSC-exos通过NCOA4介导的铁蛋白自噬诱导活化的HSC铁死亡，从而抑制HSC活化，发挥抗肝纤维化作用。

脂氧合酶(LOX)家族蛋白在恶性肿瘤演进中发挥重要作用,其亚型5-LOX在多种肿瘤组织和细胞中呈高表达,且与淋巴结转移、患者的生存期有关,可通过诱导Src的磷酸化、选择性抑制p53依赖的促凋亡基因转录、促进肿瘤血管形成、刺激上皮-间质转化、形成转移前微环境等,促进肿瘤细胞增殖和转移、抑制凋亡,参与调控肿瘤的恶性演进过程.基于5-LOX及其激活蛋白ALOX5AP的促癌作用,已开发出直接、间接两类抑制剂及COX-2/5-LOX双重抑制剂,有望通过降低5-LOX活性或阻断5-LOX代谢途径发挥抗肿瘤作用.本文概述5-LOX在肿瘤中的调控作用以及5-LOX和其激活蛋白抑制剂的研究现状,以期为后续抗肿瘤药物的开发及临床应用提供参考及新的理论依据.

目的 评价湖北金粟兰中倍半萜二聚体化合物(+)-chlorahupetenesB[(+)-CHB]对脂多糖(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)炎症反应的影响及作用机制.方法 RAW264.7细胞分为对照组(给予等体积DMSO)、模型组(给予等体积DMSO)、地塞米松磷酸钠注射液(Dex,阳性对照,1μmol·L-1)组和(+)-CHB低、中、高浓度(5、10、20μmol·L-1)组.各组分别加入相应药物孵育细胞1h,除对照组外,其余组加入LPS(1 μg·mL-1)诱导24h造成炎症应答模型.细胞增殖检测法用于评估细胞活力;Griess反应检测一氧化氮(NO)浓度;酶联免疫分析检测炎症细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6的生成;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测IL-1β、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、环氧合酶-2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-6和TNF-α mRNA表达;Western blotting检测Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子κB(NF-κB)p65、p-NF-κB p65、NLRP3、嘌呤能受体(P2X7)蛋白表达水平.结果 与模型组比较,(+)-CHB减少了梭形细胞数量,使大部分细胞恢复正常形态;显著抑制NO、TNF-α、IL-6、IL-1β生成(P＜0.01),显著降低 COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α、NLRP3、IL-1β mRNA 水平(P＜0.05、0.01);显著降低 TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-NF-κB p65、NLRP3、P2X7蛋白表达水平(P＜0.05、0.01).结论 (+)-CHB通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路和P2X7/NLRP3/IL-1β炎症小体轴激活缓解LPS诱导的巨噬细胞炎症反应.

目的 微小核糖核酸-589-5p(miRNA-589-5p)、组蛋白去乙酰化酶(HDAC)3对氧糖剥夺人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响,并探索其潜在的作用机制.方法 HBMEC细胞分为对照组、氧糖剥夺组;运用脂质体法将氧糖剥夺+miRNA-con组(转染miRNA-con)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p组(转染miRNA-589-5p的模拟物序列)、氧糖剥夺+miRNA-si-con组(转染 miRNA-si-con)、氧糖剥夺+si-HDAC3 组(转染 si-HDAC3)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA 组(共转染 miRNA-589-5p的模拟物序列和 pcDNA)、氧糖剥夺+miRNA-589-5p+pcDNA-HDAC3 组(共转染 miRNA-589-5p mimics 和 pcDNA-HDAC3)转染至HBMEC,并行氧糖剥夺处理;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)、Western印迹检测细胞中miRNA-589-5p、HDAC3 mRNA表达和HDAC3、裂解的半胱氨酸蛋白酶(Cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、核因子2相关因子(NRF)2、血红素氧合酶(HO)-1蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH);膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(Annexin V-FITC/PI)试剂盒检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因检测试剂盒检测细胞荧光活性.结果 与对照组相比,氧糖剥夺组细胞miRNA-589-5p表达水平明显降低,HDAC3表达、LDH、细胞凋亡率、Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、NRF2/HO-1信号通路关键基因NRF2核蛋白/PCNA、HO-1蛋白表达均显著降低(P＜0.05);过表达miRNA-589-5p或沉默HDAC3均可明显抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞上述指标的调控.双荧光素酶报告实验显示,miRNA-589-5p明显抑制野生型HDAC3细胞的荧光活性,并负向调控HDAC3的蛋白表达.过表达HDAC3部分逆转过表达miRNA-589-5p对氧糖剥夺诱导HBMEC细胞的LDH、凋亡的抑制和NRF2/HO-1信号通路的激活作用.结论 miRNA-589-5p抑制氧糖剥夺对HBMEC细胞的损伤,其作用机制与靶向HDAC3,激活NRF2/HO-1信号通路有关.

目的 本文研究N-乙酰-D-氨基葡萄糖(N-acetyl-D-glucosamine,GlcNAc)对大鼠急性胰腺炎的影响.方法 将 20 只SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、AP组、低剂量GlcNAc + AP组、高剂量GlcNAc + AP组,每组 5 只.AP组、低剂量GlcNAc + AP组、高剂量GlcNAc + AP组分别予以腹腔注射2.5 g/kg的L-精氨酸致大鼠急性胰腺炎 2 次,每次间隔 1h,其中低剂量GlcNAc + AP组和高剂量GlcNAc + AP组第1 次腹腔注射L-精氨酸前24h分别予以 50 mg/kg和 200 mg/kg GlcNAc腹腔注射,对照组、AP组腹腔注射同等体积生理盐水.24 h后处死大鼠,采集血清和胰腺组织.HE染色观察胰腺组织形态,酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中淀粉酶(AMY)、脂肪酶(LPS)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA);Western Blot检测胰腺组织核因子E2 相关因子 2(NRF2)、血红素氧合酶-1(HO-1)、过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)的表达;免疫荧光检测胰腺组织白细胞分化抗原 86(CD86)、白细胞分化抗原(CD206)、巨噬细胞标志物(F4/80).免疫组化检测胰腺CD86、CD206 的表达.结果 (1)与对照组大鼠相比,AP组大鼠血清AMY、LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA水平、胰腺CD86 免疫荧光定量明显升高(P<0.05);而SOD活性、NRF2、HO-1、PPAR-γ蛋白表达水平、胰腺CD206 免疫荧光定量明显下降(P<0.05);(2)与AP组大鼠相比,低剂量 GlcNAc + AP组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、LPS、胰腺CD86 免疫荧光定量水平明显降低(P<0.05);胰腺PPAR-γ蛋白水平明显升高(P<0.05);(3)与 AP 组大鼠相比,高剂量 GlcNAc + AP 组大鼠血清 AMY、LPS、IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、胰腺CD86 免疫荧光定量水平明显降低(P<0.05),而血清SOD水平、NRF2、HO-1、PPAR-γ蛋白表达水平、胰腺CD206 免疫荧光定量水平明显升高(P<0.05);(4)与低剂量 GlcNAc + AP组相比,高剂量 GlcNAc + AP组大鼠血清LPS、IL-1β、IL-6明显降低(P<0.05);胰腺HO-1、PPAR-γ蛋白的表达水平、胰腺CD206 免疫荧光定量明显升高(P<0.05).结论 GlcNAc干预可以减轻AP大鼠急性胰腺炎损伤,可能是激活NRF2/HO-1 信号通路抑制氧化应激和促进巨噬细胞M2 极化来减轻AP大鼠胰腺损伤.

目的 筛选肾缺血再灌注(RIR)致肺损伤的关键基因并对其表达与功能进行验证.方法 GEO数据库下载RIR致肺损伤数据集GSE6730,利用生物信息学方法筛选关键基因.SD大鼠按照随机数字表法分为2组:假手术组(Sham组)和RIR组,每组6只;HE染色观察2组大鼠肺组织病理形态;qRT-PCR检测2组大鼠肺组织中TNF-α、IL-6、IL-18及花生四烯酸5-脂氧合酶激活蛋白(Alox5ap)mRNA的表达.常规培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞 RLE-6TN,将其分为 Control 组、LPS 组(LPS 处理)、LPS+si-NC 组(转染 si-NC 联合 LPS 处理)、LPS+si-Alox5ap组(转染si-Alox5ap联合LPS处理)、LPS+MK-886组(LPS联合抑制剂MK-886处理);qRT-PCR检测各组TNF α、IL-6、IL-18的mRNA表达.结果 Alox5ap为RIR致肺损伤的关键基因.与Sham组比较,RIR组肺组织见明显损伤,TNF-α、IL-6、IL-18 及 Alox5ap mRNA 表达均增加(P＜0.05).与 Control 组比较,LPS 组 TNF-α、IL-6、IL-18 mRNA 表达均升高(P＜0.05);与 LPS+si-NC 组比较,LPS+si-Alox5ap 组的 TNF-α、IL-6、IL-18 的mRNA表达均降低(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+MK-886组的TNF-α、IL-6、IL-18的mRNA表达均降低(P＜0.05).结论 成功筛选RIR致肺损伤关键基因Alox5ap,RIR致肺损伤后肺组织中Alox5ap表达升高;下调Alox5ap表达可减轻LPS诱导肺损伤的炎症因子表达.

目的 探索Yes相关蛋白(YAP)可否通过调控铁死亡影响急性肝衰竭的发生发展.方法 将8周龄C57BL/6小鼠20只随机分为对照组、急性肝衰竭模型组、YAP激动剂XMU-MP-1干预组和YAP抑制剂维替泊芬(verteporfin)干预组.肝组织HE染色、肝脏生化学检测观察小鼠肝损伤表现;试剂盒检测小鼠肝组织中铁(Fe)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量;透射电镜观察小鼠肝细胞线粒体改变;荧光定量PCR和Western blot法检测YAP及铁死亡关键基因谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、5-脂氧合酶(5-LOX)的表达情况.结果 与对照组相比,急性肝衰竭小鼠肝组织严重淤血,可见炎细胞浸润伴肝小叶结构破坏,XMU-MP-1干预组肝损伤减轻.随肝衰竭发生,血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平显著升高,XMU-MP-1干预组肝功能改善.此外,电镜观察到肝衰竭小鼠肝细胞内线粒体变小,双层膜密度增高,XMU-MP-1减轻线粒体改变.肝衰竭小鼠肝组织内Fe、MDA水平增加,及GPX4蛋白表达降低、5-LOX表达升高均提示铁死亡参与小鼠急性肝衰竭发生,而活化YAP可抑制铁死亡表现.结论 活化YAP可通过抑制铁死亡减轻急性肝衰竭小鼠肝损伤.

目的:研究微米大黄炭对乙醇诱导急性胃黏膜损伤模型大鼠黏膜的保护作用及脂氧素A4合成途径的影响.方法:将32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、铝镁加混悬液组和微米大黄炭组,每组8只,各组分别予以相应浓度药物灌胃1 h后,采用无水乙醇法制备急性胃黏膜损伤大鼠模型,观察各组大鼠胃黏膜组织PGE2、LXA4、LTA4、LTB4水平,检测各组大鼠胃黏膜组织5-LOX、12-LOX、15-LOX及LXA4受体FPR2的蛋白表达水平.结果:各给药组大鼠黏膜损伤指数显著低于模型组.与模型组相比,铝镁加组PGE2、LXA4、15-LOX表达水平显著上升,LTA4、LTB4表达水平均显著下降,5-LOX、12-LOX、FPR2表达水平差异无统计学意义;微米大黄炭组PGE2、LXA4、5-LOX、15-LOX、FPR2表达水平显著上升,LTA4、LTB4表达水平显著下降,12-LOX表达水平差异无统计学意义;组间比较,微米大黄炭组较铝镁加组PGE2、LXA4、5-LOX、15-LOX、FPR2表达水平升高更为显著,LTA4、LTB4表达水平差异无统计学意义.结论:微米大黄炭对乙醇诱导急性胃黏膜损伤大鼠的保护作用机制可能通过上调PGE2、FPR2表达水平,激活15/5-LOX催化LXA4合成途径,发挥促进黏膜修复作用.