目的:观察组分无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗(DTacP-sIPV)或无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTacP-IPV/Hib)基础免疫大鼠后加强免疫破伤风类毒素、降低抗原含量的白喉毒素和无细胞百日咳联合疫苗(Tdap)是否产生免疫加强效果，为候选青少年及成人Tdap疫苗提供临床前研究参考。方法:将自主研发的DTacP-sIPV和已上市的DTacP-IPV/Hib按0、1、2月3剂免疫程序分别免疫Wistar大鼠，检测免疫前和每剂次免疫后各组大鼠血清中各组分抗体水平。基础免疫完成10个月后，用候选Tdap加强免疫1次，并检测加强免疫前和免疫1个月、6个月后血清中各组分抗体水平。结果:3剂次基础免疫1个月后，DTacP-sIPV组抗白喉类毒素(diphtheria toxoid，DT)、抗破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT)、抗百日咳毒素(pertussis toxin，PT)、抗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin，FHA)和抗百日咳黏附素(pertactin，PRN)抗体的几何平均滴度(GMT，Log2)分别为17.41、18.34、18.11、19.93、13.91，血清阳转率均达到100%；基础免疫10个月后，抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.17、14.26、13.60、14.51、10.39，血清阳转率维持在89%以上。Tdap加强免疫1个月后，DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA抗体的GMT分别为16.49和17.26、16.80和17.63、16.70和17.74、18.48和19.26，血清阳转率均达到100%，组间差异无统计学意义( P均>0.05)；抗PRN抗体的GMT分别为13.07和11.00，血清阳转率为100%和88%，DTacP-sIPV组高于DTacP-IPV/Hib组( P<0.05)。Tdap加强免疫6个月后，DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.74和14.87、15.07和15.14、14.84和15.73、16.62和16.37、11.44和9.96，血清阳转率维持在88%以上。 结论:候选疫苗Tdap在基础免疫接种DTacP-sIPV和DTacP-IPV/Hib的Wistar大鼠模型加强免疫中可诱导产生良好的体液免疫应答，但抗体滴度随时间推移而衰减。

干细胞在创面愈合中，尤其是再上皮化过程中是至关重要的，但它们在皮肤损伤过程中的具体作用尚不清楚。该文采用富含亮氨酸重复序列的G蛋白偶联受体6（Lgr6）标记了仅存在于小鼠皮肤部分区域的具有参与创面再生且需要与神经相互作用的表皮干细胞（ESC）。将特异性敲除白喉毒素A 亚基介导的Lgr6+干细胞作用于创面会导致愈合显著延迟。通过活体成像系统追踪损伤后的干细胞，结果显示Lgr6+干细胞的创面再生能力在背根神经节消融后变差。这导致了包含毛囊干细胞等在内的其他干细胞群的募集，以部分补偿创面闭合。单细胞谱系追踪和基因表达分析表明，Lgr6+干细胞在失去它们的生态位后转向分化而不是自我复制。因此，Lgr6+ ESC 可以通过损伤后的反应活化及与神经相互作用来调节其命运。该研究团队使用目前最先进的成像工具观察到ESC 的独特亚群,并且首次揭示了周围神经可作为干细胞生态位的重要成员调控干细胞命运，这为调节创面愈合的再上皮化阶段的研究提供了关键线索。

目的:探索巨噬细胞在非酒精性脂肪性肝炎(NASH)中的作用、机制和治疗价值。方法:通过给予8周龄雄性Alms突变( foz/ foz)小鼠高脂饮食6、8和10周，给予8周龄雄性C57BL/6小鼠蛋氨酸胆碱缺乏(MCD)饮食7 d、3周和4周分别构建NASH小鼠模型，对照组小鼠分别给予普通饮食和MCD对照饮食。采用荧光定量聚合酶链反应方法检测NASH模型小鼠和对照组小鼠肝脏的 F4/80 mRNA水平，采用免疫荧光染色观察对照组小鼠和NASH模型小鼠肝脏中的巨噬细胞。lysM-Cre/DTR转基因小鼠予MCD饮食5周后，分为转基因实验组(给予白喉毒素清除巨噬细胞)和转基因对照组(给予磷酸盐缓冲液注射)。检测转基因实验组和转基因对照组小鼠肝脏中的甘油三酯水平和脂质过氧化物水平，并对小鼠的肝脏组织进行炎症评分。通过细胞因子分析实验和蛋白质印迹法分析巨噬细胞调节NASH中炎症的作用机制。通过AML-12肝细胞和RAW264.7巨噬细胞条件培养基与细胞共培养观察肝细胞和巨噬细胞的相互作用。通过氯膦酸脂质体清除野生型和NASH模型小鼠中的巨噬细胞，证实其在NASH预防中的价值。统计学方法采用独立样本 t检验。 结果:NASH模型 foz/ foz小鼠高脂饮食饲养6、8和10周时肝脏中的 F4/80 mRNA水平均高于对照组小鼠(1.49±0.19、1.70±0.15、1.93±0.04比1.05±0.22)，差异均有统计学意义( t＝3.06、4.92、7.92，均 P<0.05)；NASH模型小鼠MCD饮食饲养7 d和3周时肝脏中的 F4/80 mRNA水平均高于对照组小鼠(2.70±0.99和3.08±1.71比1.00±0.83)，差异均有统计学意义( t＝3.43、3.54，均 P<0.01)；免疫荧光染色结果显示，与对照组比较，NASH模型小鼠MCD饲养4周时肝脏中F4/80 +诱导型一氧化氮合酶(iNOS) +的M1型巨噬细胞增多，F4/80 +CD206 +的M2型巨噬细胞明显减少。巨噬细胞清除后转基因实验组小鼠的炎症评分、肝脏甘油三酯和脂质过氧化物水平均低于转基因对照组[(0.69±0.32)分比(1.95±0.74)分、(43.97±13.24) g/mg比(63.09±14.85) g/mg、(24.84±6.21) nmol/mg比(37.91±8.91) nmol/mg]，差异均有统计学意义( t＝3.14、2.72、2.41，均 P<0.05)。细胞因子分析实验结果显示，巨噬细胞清除可显著降低血液中白细胞介素(IL)-12和巨噬细胞炎症蛋白-1α的蛋白质水平(差异倍数分别为-3.98、-2.74，均 P<0.05)。转基因实验组小鼠细胞核中CCAAT/增强子结合蛋白β蛋白质减少。体外研究发现RAW264.7巨噬细胞条件培养基可促进AML-12肝细胞中脂肪聚集；MCD培养基处理的AML-12肝细胞条件培养基可促进RAW264.7巨噬细胞向M1型极化。经氯膦酸脂质体处理后的野生型小鼠肝脏中的甘油三酯和脂质过氧化物的蛋白质表达水平均低于MCD诱导的NASH模型小鼠[(45.33±14.59) g/mg比(63.10±16.02) g/mg、(2.11±0.48) nmol/mg比(2.73±0.17) nmol/mg]，差异均有统计学意义( t＝2.84、2.73，均 P<0.05)。蛋白质印迹法结果显示，经氯膦酸脂质体处理后的NASH模型小鼠肝脏中的磷酸化蛋白激酶R样内质网激酶、肌醇需求酶-1α、蛋白质二硫键异构酶、葡萄糖调节蛋白78、磷酸化真核起始因子2α的蛋白质相对表达量均低于未经氯膦酸脂质体处理的NASH模型小鼠(1.84±0.36比3.05±0.83、1.50±0.84比6.65±1.47、0.87±0.12比2.28±0.52、1.68±0.43比4.76±1.13、1.42±0.19比2.75±0.79)，差异均有统计学意义( t＝2.32、5.28、4.56、4.41、2.85，均 P<0.05)。 结论:NASH中巨噬细胞发生M1型极化，并与肝细胞相互作用促进炎症因子分泌、脂肪合成因子上调、氧化应激和内质网应激，引起NASH进展。巨噬细胞清除剂氯膦酸脂质体是预防NASH潜在的新途径。

目的:利用Cre/iDTR系统特异性剔除Kupffer细胞,探究Kupffer细胞在对乙酰氨基酚(APAP)诱导的药物性肝损伤中的作用.方法:腹腔注射1μg白喉毒素(DT),流式细胞术检测注射后肝脏Kupffer细胞的清除效率.接着将Clec4fCre/iDTR小鼠分为4组,分别是对照组、注射DT组、注射APAP组及注射DT和APAP组,饥饿18 h后腹腔注射300 mg/kg APAP,建立急性药物性肝损伤模型.酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞因子微球检测(CBA)技术检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放和炎症因子的分泌;苏木精-伊红(HE)染色和原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色检测肝组织的坏死和肝细胞的凋亡;免疫组织化学检测肝脏炎性细胞的浸润;免疫印迹法检测肝组织中信号通路的活化;定量聚合酶链反应(qPCR)检测肝脏中炎症因子的mRNA表达水平.结果:清除Kupffer细胞,降低APAP模型血清中ALT、AST转氨酶的释放,减轻肝组织坏死和肝细胞凋亡.与对照组相比,清除Kupffer细胞抑制血清中TNF-α、IL-6等炎症因子的分泌,减少肝脏F4/80+、Ly6G+细胞的浸润,降低TNF-α、IL-6等炎性因子的mRNA水平以及JNK炎症通路的活化.结论:清除Kupffer细胞可显著缓解APAP诱导的药物性肝损伤,明确了 Kupffer细胞在APAP致肝损伤中的重要作用.

目的 制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)兔多克隆抗体(简称多抗),建立定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并进行验证及应用.方法 采用传统方法,用PT免疫青紫蓝兔制备PT兔多抗.优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并进行特异性、线性、准确性、精密性、灵敏度验证.采用建立的方法对脱毒过程样品及其他百日咳抗原纯化过程样品菌毛蛋白(fimbriae proteins,FIM)原液中PT抗原含量进行检测.结果 PT抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的工作条件为PT兔多抗包被浓度为1 μg/mL,酶标抗体稀释度为1∶8 000.此检测系统能与PT纯化蛋白发生特异性反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉类毒素、破伤风类毒素均未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法线性检测范围在25～400ng/mL之间;PT高、中、低浓度回收率分别为103.27％、91.48％、103.52％;酶标板内和板间的变异系数(CV)均小于10％;该方法的灵敏度为20.719 ng/mL,检测下限为41.438 ng/mL.检测5种不同脱毒工艺条件下、不同取样时间点的35批样品,其抗原含量变化均符合脱毒反应变化趋势.结论 成功制备了PT兔多抗,并建立了精密性和准确性良好的定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,可用于组分百白破联合疫苗生产过程中化学脱毒样品的抗原含量检测.

目的 建立测定白喉产毒培养基中微量铁离子的磺基水杨酸分光光度法,并进行验证及初步应用.方法 全光谱扫描铁-磺基水杨酸络合物最大吸光度;以铁磺基水杨酸络合物吸光度与铁离子含量进行线性回归,建立培养基中铁离子检测方法,并对方法进行稳定性、准确性和精密性验证;考察Ca2+、Mg2+、K+、Na+以及显色反应物对方法的影响;采用磺基水杨酸分光光度法测定自制及市售白喉产毒培养基中微量铁离子;分别采用磺基水杨酸分光度法及常用方法亚铁嗪比色法、邻菲啰啉分光光度法检测两种培养基(牛肉胰酶消化液、5％多聚蛋白胨)中铁含量,比较3种方法的检测结果.结果 铁-磺基水杨酸络合物在波长425nm处有最大吸光度;铁离子浓度在1～0.05μg/mL范围内与吸光度存在良好的线性关系,检测限为0.05 μg/mL,标准曲线方程为:Y=0.027 9 X+0.046 1,R2＞0.99;每间隔5 min测定1次A425值,各浓度标准品A425值的变异系数(CV)均小于5％;低(0.05 μg/mL)、中(0.5 μg/mL)、高浓度(1 μg/mL)Fe3+标准品溶液连续测定3次,每个浓度平行测定9组的CV均＜5％,回收率均＞95％;Ca2+、Mg2+、K+、Na+、15 μL磺基水杨酸(20％)和50 μL氢氧化氨(1∶1)不对检测方法构成干扰;产毒培养基测定结果与白喉细菌产毒结果一致;3种检测方法结果一致.结论 建立的磺基水杨酸分光光度法能够准确、有效地测定白喉产毒培养基中微量铁离子含量.

目的 白磺酰胺生物合成蛋白 2(DPH2)基因是白喉毒素靶标白硫胺生物合成的关键酶,它对前列腺癌患者的预后和免疫浸润的影响尚不清楚,探讨其在前列腺癌中的免疫浸润及预后预测中作用.方法 从癌症基因组图谱(TCGA)数据库中获得的前列腺癌患者的表达谱和临床信息.使用Wilcoxon秩和检验,比较前列腺癌和正常前列腺组织之间的DPH2 表达水平.进行功能富集分析以探索所涉及的潜在信号通路和生物学功能.使用单样本基因集富集分析评估免疫细胞浸润.UALCAN数据库用于分析DPH2 的甲基化状态.采用Kaplan-Meier方法和Cox回归分析确定DPH2 的预后价值.构建列线图以预测癌症诊断后 1 年、3 年和 5 年的复发转移率.结果 DPH2 在前列腺癌中过表达,与 T分期(P=0.013)、N分期(P=0.025)、PFI事件(P=0.023)和 OS(P＜0.001)显著相关.DPH2 过表达导致 OS和疾病特异性生存率显著下降.多变量Cox分析将DPH2 确定为 OS的独立预后标志物.同样,DPH2 的低甲基化状态也与预后不良有关.功能富集分析表明,富集途径包括葡萄糖醛酸盐代谢过程、脱氧核糖核酸-结合转录激活物RNA活性、特异的聚合酶Ⅱ、细胞周期、细胞衰老和卵母细胞减数分裂.此外,DPH2 的过表达与自然杀伤细胞、Mast细胞、Th1 细胞和浆细胞样树突状细胞的免疫细胞浸润水平呈负相关.结论 DPH2 可能是一种新型的预后生物标志物,在前列腺癌的免疫浸润中起重要作用.

目的:评估临床收治的肺炎或哮喘住院患儿中百日咳近期或现症感染状况.方法:收集在呼吸科住院的610例肺炎患儿及60例哮喘患儿年龄、咳嗽病史和百白破疫苗接种史等资料,检测患儿住院时冻存的血清标本中白喉毒素(DT)-IgG和百日咳毒素(PT)-IgG水平,分析百白破疫苗接种、百日咳近期或现症感染情况.结果:670例咳嗽患儿中,88.8％的患儿DT-IgG阳性,提示该组患儿普遍接种过百白破疫苗,仅有32.2％的患儿PT-IgG抗体水平处于检测限以上;诊断为肺炎与哮喘的患儿中分别有5例(0.8％)与6例(10.0％)存在百日咳近期或现症感染.结论:在小儿呼吸科住院治疗的肺炎和哮喘患儿中有少数百日咳近期或现症感染患儿未被诊断,应予以重视.