菌株 2-1-1 于贵州大学校园樱花树干子实体中分离,通过形态学结构、ITS 序列及系统发育树分析,鉴定其为白囊耙齿菌Irpex lacteus,对菌株 2-1-1产生的 3种木质素降解酶进行测定,发现菌株可分泌漆酶(laccase,Lac)、木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)和锰过氧化物酶(manganese peroxidase,MnP).利用菌株 2-1-1 对固体培养基条件下 7 种染料的脱色能力进行检测,筛选出较易脱色的刚果红染料,同时采用气相色谱-质谱联用(gas chromatography-mass spectroscopy,GC-MS)分析确定经白囊耙齿菌降解的刚果红染料代谢产物,并对其进行脱色条件优化和毒力测验,试验分析表明:菌株 2-1-1 对 7 种染料均有脱色,对刚果红脱色效果较佳.GC-MS分析刚果红染料降解产物主要为联苯胺、联苯、苯乙烯、十六烷和3-硝基苯酚.单因素和综合优化脱色条件:染料浓度 50 mg/L,碳源为果糖、金属离子为锌离子、pH 7,该条件下刚果红染料脱色效果最优.优化条件下菌株 2-1-1 对刚果红染料脱色率达 91.03%,相比对照组脱色率提高 17.13%,刚果红染料经菌株 2-1-1 脱色前后毒力测试:染料原液>脱色后>清水处理,表明该菌株可降低刚果红染料毒性.

目的:分离并鉴定柬埔寨野生灵芝菌株及伴生菌,通过拮抗试验初步评价伴生真菌对灵芝的影响.方法:对64个分离自柬埔寨灵芝的真菌样品进行了ITS序列鉴定,对检出的灵芝菌株与相同子实体中分离到的伴生真菌进行了拮抗试验.结果:检出22株灵芝,占比34.4％,全部鉴定为Ganoderma lingzhi;在非灵芝菌株中最常见的是炭角菌属(Xylaria)及炭团菌属(Hypoxylon),分别占比35.9％及15.6％,另检出灵芝病原真菌1株,鉴定为灵芝腐败木生红曲霉Xylogone ganodermophthora;检出药用真菌1株,鉴定为白囊耙齿菌Irpex lacteus.实验证明灵芝菌株间的拮抗作用更为突出,而灵芝与伴生真菌之间能交织生长,这影响到灵芝的品质.结论:柬埔寨民间习用灵芝的药用特性尚需专业而系统的研究,方可确立为药用灵芝种质与资源的一个新自然分布区与产地;当地炭角菌属真菌以及采后储藏方式是影响柬埔寨灵芝品质或用药道地性的重要因素.

锰过氧化物酶(manganese peroxidase,MnP)是白腐真菌降解多种异生物质的主要降解酶之一.本研究对白囊耙齿菌Irpex lacteus产MnP的酶活曲线进行监测,利用单因素和正交试验对I.lacteus产MnP的发酵条件进行优化,同时检测了I.lacteus的MnP粗酶液对5种染料的脱色效果.结果显示,I.lacteus在培养5d时MnP活性较大;I.lacteus产MnP较优的条件为:可溶性淀粉20g/L、尿素1g/L、pH 6.3、CaCl2 1mmol/L、FeCl3 1mmol/L,该条件下MnP活性达29.24U/L,与优化前MnP活性相比提高了1.25倍;I.lacteus的MnP粗酶液对5种染料均可脱色,其中对直接大红和活性红的脱色效果更为明显,脱色5d后的脱色率分别达到82％和81％.

本文对白囊耙齿菌子实体不同提取物防治慢性肾小球肾炎进行研究,采用腺嘌呤灌胃法建立小鼠慢性肾小球肾炎模型,探究白囊耙齿菌子实体水提取物和醇提取物的高、中、低剂量组对慢性肾小球肾炎的预防作用及不同提取物的高剂量组对慢性肾小球肾炎的治疗作用,并对小鼠体重进行测量,检测尿蛋白(UP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、总胆固醇(TC)、超氧歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)指标,分析肾、肝、脾、胸腺的病理变化.结果 表明,水提取物中剂量(240mg/kg)能显著降低小鼠尿蛋白含量和肾组织中炎症因子含量,使血清生化指标维持正常,并对免疫器官有保护作用;醇提取物高剂量(200mg/kg)对慢性肾小球肾炎有治疗作用,但对免疫器官保护作用较弱.研究表明,白囊耙齿菌子实体水提取物中剂量具有预防慢性肾小球肾炎的作用且效果优于阳性药肾炎康胶囊,具有开发利用潜力,机制有待于进一步研究.

白囊耙齿菌Irpex lacteus是分离自倒木上的一株可以分泌漆酶和锰过氧化物酶的白腐真菌.利用I.lacteus对固体条件下的活性黑、活性红、结晶紫、茜素红和孔雀石绿进行脱色能力的检测,通过单因素和正交试验优化I.lacteus对茜素红的脱色条件,并以3种作物发芽率为指标测定茜素红被I.lacteus脱色前后的毒性变化.结果 显示,I.lacteus对5种染料均可脱色,其中对茜素红染料的脱色更为彻底;单因素和正交试验优化I.lacteus对茜素红的脱色条件为:pH 7.0、葡萄糖10.0g/L、硫酸铵0.66g/L、接种量2片(φ=8.0mm)、100.0mL三角瓶装液20.0mL,优化条件下I.lacteus对茜素红脱色10d时的脱色率为88.26％,与未优化前的脱色率相比提高了60.50％;茜素红染料被I.lacteus脱色前后毒性大小排序为:染料原液＞染料脱色后＞PDB培养基处理,表明茜素红染料存在一定的毒性,I.lacteus脱色茜素红后可以使其毒性减弱.通过本研究,为I.lacteus在茜素红等染料废水脱色以及降低染料废水毒性方面的应用奠定基础.

木腐真菌是一类以木材为生长基质的大型真菌,通过分泌各种水解酶全部或部分降解木材中的木质素、纤维素和半纤维素,促进森林生态系统的物质循环,具有重要的生态功能.本研究调查了丰林国家级自然保护区固定样地中木腐真菌的多样性和倒木特征,并进行了木腐真菌的物种多样性和数量与倒木的种类、数量、腐朽程度、直径大小等的相关性分析.结果 显示:在样地内共采集木腐真菌标本295份,经鉴定为93种,Shannon多样性指数为3.86,Simpson指数为0.96.相关性分析发现木腐真菌的数量和种类与直径为2-5 cm和5-10 cm的倒木、2级腐烂的倒木和红松倒木均显著相关.样地中优势倒木寄主分别为槭属(Acer)、榛属(Corylus)、云杉属(Picea)和松属(Pinus),这4类倒木上生长的木腐真菌种类组成具有明显的差异,槭属和榛属倒木上的共有优势种主要是三色拟迷孔菌(Daedaleopsis tricolor)、云芝(Trametes versicolor)和桦附毛孔菌(Trichaptum pargamenum),而松属和云杉属的共有优势种主要有白囊耙齿菌(Irpex lacteus)、云芝、冷杉附毛孔菌(Trichaptum abietinum)和褐紫附毛孔菌(T.fuscoviolaceum).倒木产生真菌子实体的概率研究表明,同一类寄主倒木上发生木腐真菌子实体的概率在调查面积增加到0.36 ha后趋于一个定值,松属倒木中仅有10.2％产生真菌子实体,槭属和云杉属分别是12.9％和13.4％,榛属最高,达到53.7％.本研究结果对于预测森林生态系统中木腐真菌的发生具有重要理论意义.

为表征白囊耙齿菌多糖结构并筛选出具有抗肾小球系膜细胞(GMC)增殖作用的活性多糖,研究活性多糖对GMC异常增殖及细胞外基质分泌的影响.实验采用碱提醇沉法提取粗多糖(PC),经离子交换色谱柱纯化、SePhadex G-50凝胶柱分离得到把齿菌多糖PCP-1、PCP-2.通过苯酚酸法、BCA法等测定其含量,甲基化,IR分析进行结构表征.采用MTT法、ELISA法考察对GMC增殖的影响.结果表明,PCP-1和 PC-2的总糖含量分别为 98.05％、96.92％,酸性糖及蛋白质含量几乎为零;PCP-1主要由 Man、Glc和 Gal组成,具有多分枝结构,包含吡喃糖类型的结构,具备α和β两种构型;而PCP-2仅由Glc组成,没有分支,为α-构型吡喃聚糖.具有抗GMC增殖活性的均一多糖为PCP-1,可保护LPS诱导的GMC增殖,减少LN、FN蛋白的释放.

将源于白囊耙齿菌(Irpex lacteus)的一种锰过氧化物酶(manganese peroxidase,MnP)基因进行密码子优化后连接于表达载体pET-28a,并在E.coli BL21中表达,重组锰过氧化物酶经镍离子亲和层析分离得到纯酶,其分子质量和比酶活分别为43 ku和24 U/mg.酶学性质研究表明,重组锰过氧化物酶的最适反应温度为40℃,最适反应pH值为3.0,且该重组酶在20℃ ～50℃、pH 2.5～3.5范围内稳定性较好.当添加的金属离子浓度为10 mmol/L,Na+、Ca2+和Mg2+对重组酶酶活有促进作用;当添加的金属离子浓度为5 mmol/L时,除Ca2+外,其他金属离子均能抑制重组酶的活力;Fe2+、Cu2+在10、5和1 mmol/L离子浓度下均对重组酶有明显的抑制作用.重组锰过氧化物酶在48 h内可以有效降解玉米秸秆中35.8％及麸皮中27.3％的木质素,降解效果显著.

目的 探索稳定期中性粒细胞增多型哮喘患者的气道微生物群组特征及其临床意义.方法 采集2019年8月至2020年1月就诊于陆军军医大学第二附属医院的44例临床稳定期中性粒细胞增多型哮喘患者的诱导痰标本,提取DNA后,采用PacBio SMRT测序技术对细菌16S rRNA和真菌ITS序列进行测序,通过对测序数据的层次聚类分析确定出2个亚组,分析组间细菌、真菌菌群及相关临床指标的差异.结果 通过对44例受试者的细菌测序数据聚类分析鉴定出2组聚类簇,与较大的聚类簇(A1组,n=32)相比,较小的聚类簇(A2组,n=12)以嗜血杆菌处于其细菌菌群的优势地位为特征,展示出了更高的痰中性粒细胞百分比(Z=-4.14,P＜0.001)和更低的FEV1％ pred(t=2.15,P=0.037).在细菌菌群结构上,2组聚类簇之间α多样性(Chao1指数和Simpson指数,P＜0.001)和β多样性(Adonis,R2=0.290,P=0.001)差异都具有统计学意义;LEfSe分析提示在种水平上,A1组显著富集肺炎链球菌、副流感嗜血杆菌、具核梭杆菌、奇异劳特普罗菌、脑膜炎奈瑟氏菌、牙龈卟啉单胞菌、产黑色素普雷沃氏菌、苍白普雷沃氏菌、青枯劳尔氏菌,A2组则富集流感嗜血杆菌.在真菌菌群结构上,2组在α多样性上未观察到显著差异(Chao1指数,P=0.230;Simpson指数,P=0.097),而在β多样性上两组差异显著(Adonis,R2=0.068,P=0.002);LEfSe分析提示在种水平上,A1组富集裂褶菌,而A2组则富集变色栓菌、白囊耙齿菌.进一步互作网络分析则提示A2组较A1组展现出了更多的菌属之间的相关关系,且A2组菌属之间的关联强度较A1组更强.结论 在稳定期中性粒细胞增多型哮喘患者中,存在以流感嗜血杆菌作为其气道优势定植菌的亚组,该亚组在细菌及真菌菌群结构上与非流感嗜血杆菌优势组存在显著差异,并在临床上表现为更严重的气道炎症水平和更差的肺功能特征.

首次将源于白囊耙齿菌(Irpexlacteus,I.lacteus)的一种锰过氧化物酶基因mnp(GenBank:MH120207.1)经密码子优化后与无任何抗性基因且有Gfa基因的高效表达载体pREP相连,构建原核-真核穿梭表达载体pREP-mnp,再电转化导入Gfa营养缺陷型粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)中,构建生物安全级粟酒裂殖酵母,SDS-PAGE验证目的蛋白表达.所构建的工程菌胞外表达MnP,酶活力在第4天达到峰值,为17.46 U/L.所构建的工程菌经混菌发酵菌种筛选和氮源优化,在菌酶协同发酵中有显著的促进玉米秸秆木质素降解的效果.玉米秸秆中添加0.5％ 尿素、2％(NH4)2 SO4、0.02％Tween-80、使基质终浓度为0.5 mmol/L的草酸、0.5％CaCl2、0.3％MnSO4,S.pombe-pREP-mnp与N.crassa、S.pombe-man、C.utili、1％Lac、0.4％GOD协同发酵3 d后,玉米秸秆中木质素、半纤维素和纤维素的降解率分别为60.79％、27.61％和25.49％,真蛋白含量提高了310.99％.