目的:探讨严重烧伤小鼠肠-胰岛轴功能的变化及其作用。方法:该研究为实验研究。将90只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为假伤组和烧伤组（每组45只小鼠），于烧伤组小鼠背部制备30%体表总面积Ⅲ度烫伤（以下称烧伤）创面，假伤组小鼠模拟致假伤。伤后24 h，检测空腹血糖（样本数为12）后，行腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验，并绘制血糖浓度-时间变化曲线，计算曲线下面积（样本数为6）；分别于腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前及腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min从心脏取血，采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测血浆胰岛素和胰高血糖素样肽1（GLP-1）水平（样本数为3）；取每组3只小鼠回肠组织，行免疫荧光染色及原位末端标记染色检测肠道L细胞GLP-1表达及凋亡水平；提取每组6只小鼠胰岛行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验，分别经低糖（2.8 mmol/L葡萄糖）和高糖（16.7 mmol/L葡萄糖）孵育后取上清液，采用ELISA法检测胰岛素水平。取36只雄性8~10周龄C57BL/6J小鼠，按随机数字表法分为假伤组、烧伤组和烧伤+艾塞那肽4（Ex-4）组（每组12只小鼠），对假伤组和烧伤组小鼠行同前对应处理，将烧伤+Ex-4组小鼠同烧伤组小鼠致伤后给予其GLP-1受体激动剂Ex-4。伤后24 h，提取小鼠胰岛，采用蛋白质印迹法检测重链结合蛋白（BIP）、蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）、磷酸化PERK（p-PERK）、真核翻译起始因子2α（eIF2α）、磷酸化eIF2α（p-eIF2α）和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白（CHOP）的蛋白表达并计算p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α比值（样本数为3），采用流式细胞术检测胰岛细胞凋亡率（样本数为3），同前行葡萄糖刺激的胰岛素分泌实验以检测上清液中胰岛素水平（样本数为6）。结果:伤后24 h，烧伤组小鼠空腹血糖为（7.3±1.0）mmol/L，显著高于假伤组的（5.1±0.6）mmol/L（ t=6.36， P<0.05）。伤后24 h，在腹腔糖耐量实验和口服糖耐量实验中，烧伤组小鼠血糖浓度-时间变化曲线下面积均显著大于假伤组（ t值分别为4.32、6.03， P<0.05）；与假伤组相比，烧伤组小鼠经腹腔注射给予葡萄糖溶液前血浆胰岛素水平及经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液前血浆GLP-1水平均显著降低（ P<0.05），经腹腔注射或灌胃给予葡萄糖溶液后30、60、120 min血浆胰岛素水平及经灌胃给予葡萄糖溶液后30、60 min血浆GLP-1水平均显著降低（ P<0.05）。伤后24 h，与假伤组相比，烧伤组小鼠肠道L细胞GLP-1表达水平显著降低（ t=7.74， P<0.05），凋亡水平显著升高（ t=14.28， P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平为（8.5±0.4）ng/mg，显著低于假伤组的（15.7±0.3）ng/mg（ t=18.68， P<0.05）。伤后24 h，与假伤组相比，烧伤组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著升高（ P<0.05）；与烧伤组相比，烧伤+Ex-4组小鼠胰岛中BIP、p-PERK/PERK、p-eIF2α/eIF2α和CHOP的蛋白表达水平均显著降低（ P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠胰岛细胞凋亡率为（32.0±3.0）%，显著高于假伤组的（10.3±2.5）%（ P<0.05）；烧伤+Ex-4组小鼠胰岛细胞凋亡率为（20.0±3.6）%，显著低于烧伤组（ P<0.05）。伤后24 h，烧伤组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著低于假伤组（ P<0.05），烧伤+Ex-4组小鼠经高糖孵育的胰岛上清液中胰岛素水平显著高于烧伤组（ P<0.05）。 结论:严重烧伤后小鼠肠-胰岛轴功能障碍，肠道L细胞凋亡增多、GLP-1合成及分泌减少，胰岛细胞发生内质网应激、凋亡增多，葡萄糖刺激的胰岛素分泌减少；GLP-1受体激动剂Ex-4能保护严重烧伤小鼠胰岛细胞功能，可能通过减轻内质网应激降低胰岛细胞凋亡水平，促进胰岛素分泌。

近期研究表明，应激时RNA代谢的变化在神经退行性疾病的病理生理学中具有重要作用，特别是在肌萎缩侧索硬化症、额颞叶痴呆和阿尔茨海默病中。RNA结合蛋白可以在应激时通过形成一种被称为应激颗粒的无膜细胞器来控制mRNA的利用。这些结构通过一种液-液相分离的过程形成。多种生化途径均可调节应激颗粒的形成。调节应激颗粒形成的主要信号通路包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-真核翻译起始因子4F（eIF4F）和真核翻译起始因子eIF2的α亚基通路，而调节应激颗粒分散和转移的通路由含缬酪肽蛋白和自噬介导。RNA结合蛋白的翻译后修饰也参与应激颗粒的调节。有证据表明应激颗粒是短暂存在的结构，但与衰老相关的慢性应激会导致慢性持续性应激颗粒形成，这些应激颗粒可能充当了疾病相关蛋白质聚集的病灶。当应激颗粒持续存在时，细胞RNA代谢中的内在脆弱性可能导致RNA结合蛋白的病理性聚集。因此，神经退行性疾病的病理生理学很可能源于细胞代谢中的内在脆弱性这一过程加速一些神经退行性疾病的病理过程，并为疾病干预提供新的靶点。

目的:探究异氟醚通过激活蛋白激酶样内质网激酶（protein kinase-like endoplasmic reticulum kinase, PERK）/真核翻译起始因子2α（eukaryotic translation initiation factor 2α, eIF2α）通路诱导神经元凋亡和内质网应激（endoplasmic reticulum stress, ERS）在围手术期神经认知障碍（perioperative neurocognitive disorders, PND）中的作用机制。方法:30只雄性SD大鼠按随机数字表法分为3组（每组10只）：对照组、异氟醚组和PERK抑制剂组（GSK组）。异氟醚组和GSK组大鼠放置于麻醉箱，通过吸入2%异氟醚4 h建立PND模型，GSK组大鼠在吸入异氟醚6 h前使用PERK抑制剂GSK2606414（150 mg/kg）灌胃；对照组大鼠进行同样处理，但不吸入异氟醚，给予等量生理盐水灌胃。吸入异氟醚4 h后进行水迷宫试验，记录逃避潜伏期、穿越平台次数和目标象限停留时间，分析大鼠神经功能。水迷宫实验结束后处死大鼠取海马组织，TUNEL染色检测海马组织神经元细胞凋亡率，Western blot法检测海马组织PERK、eIF2α磷酸化水平及78 kDa葡糖调节蛋白（78 kDa glucose-regulated protein, GRP78）、C/EBP同源蛋白（C/EBP homologous protein, CHOP）水平，免疫组化染色检测海马组织B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2, Bcl-2）、B淋巴细胞瘤-2-Associated X（B-cell lymphoma-2-Associated X, Bax）水平。结果:异氟醚组逃避潜伏期长于GSK组及对照组（ P<0.05），穿越平台次数和目标象限停留时间少于GSK组及对照组（ P<0.05）。异氟醚组海马组织神经元细胞凋亡率高于GSK组及对照组（ P<0.05），PERK、eIF2α磷酸化水平高于GSK组及对照组（ P<0.05），GRP78、CHOP水平高于GSK组及对照组（ P<0.05），Bax水平高于GSK组及对照组，Bcl-2水平低于GSK组及对照组（ P<0.05）。 结论:异氟醚可能通过激活PERK/eIF2α通路和ERS引起海马组织神经元细胞凋亡，抑制PERK/eIF2α通路的激活可通过抑制ERS缓解海马组织神经元细胞凋亡从而对PND模型大鼠的神经功能起到保护作用。

目的:探讨慢性乙型肝炎(慢性乙肝)患者肝组织中真核细胞翻译启始因子2α(p-elF2α)及活化转录因子4(ATF4)的表达水平及其与肝纤维化间的关系。方法:纳入2016年1月至2019年1月淮安市第四人民医院共158例慢性乙肝患者穿刺活检肝组织标本。免疫组织化学染色分别评估不同肝纤维化分期间p-elF2α、ATF4的表达水平差异，并用Spearman秩相关分析其相关性。结果:肝脏标本病理结果提示纤维化各分期分别为S0期19例，S1期29例，S2期42例，S3期35例，S4期33例。免疫组化结果显示纤维化组的p-eIF2α及ATF4水平显著高于正常对照组( P<0.001)，不同纤维化程度分期之间的p-eIF2α及ATF4水平差异有统计学意义( P<0.01)。慢性乙肝患者肝纤维化等级与肝组织中p-eIF2α及ATF4染色得分间呈正相关( r＝0.473，0.422， P<0.05)。 结论:慢性乙肝患者肝组织的纤维化程度与p-eIF2α及ATF4表达呈正相关，p-eIF2α-ATF4通路激活可能参与慢性乙肝纤维化过程。

目的:探究真核翻译起始因子2α(eIF2α)在结直肠腺癌中的表达及对细胞增殖的作用。方法:收集2016年1月至2017年12月在华北理工大学附属医院行结直肠腺癌手术治疗的患者64例，留取肿瘤及癌旁正常黏膜组织，免疫组织化学法检测eIF2α和增殖细胞核抗原(PCNA)。选择结肠癌SW480、HCT15、SW620和正常结肠NCM460细胞株，转染siRNA-eIF2α建立SW480细胞株的si-eIF2α组，建立空载体转染组和空白对照组，Western blot法检测eIF2α和PCNA，CCK-8法检测细胞增殖活性。符合正态分布的计量资料比较行 t检验、方差分析，率的比较行 χ2检验，并应用相关回归分析。 结果:结直肠腺癌组织中eIF2α阳性率高于正常黏膜组织[56.3%(36/64)比21.9%(14/64)， χ2＝15.885， P<0.05]。浸润浆膜及以外组eIF2α阳性率高于浸润未及浆膜组[33.3%(5/15)比63.3%(31/49)， χ2＝4.181， P<0.05]。eIF2α在不同TNM分期[16.7%(2/12)比64.0%(16/25)比64.0%(16/25)比100.0%(2/2)， χ2＝10.416， P<0.05]中阳性率差异有统计学意义。eIF2α与PCNA正相关( r＝0.698， P<0.05)。结肠癌细胞株SW480、HCT15和SW620中eIF2α均高于NCM460(1.30±0.13比1.13±0.16比1.18±0.21比0.88±0.19， F＝5.802， P<0.05)。si-eIF2α组中PCNA表达低于空载体转染组和空白对照组(0.88±0.16比1.32±0.18比1.34±0.14， F＝5.221， P<0.05)。si-eIF2α组细胞增殖活性低于空白对照组和空载体转染组( P<0.05)。 结论:eIF2α在结直肠腺癌组织中高表达，能促进肿瘤细胞增殖。

目的:探讨真核翻译起始因子2α（eIF2α）在类风湿关节炎滑膜成纤维细胞（RA-FLS）中的表达特征，分析其对成纤维细胞增殖的调控作用。方法:收集40例RA和40例OA患者术后关节的滑膜组织，免疫组织化学法检测eIF2α和增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。选择RA-FLS株（MH7A）进行体外培养，合成小干扰RNA（siRNA）-eIF2α质粒转染建立si-eIF2α组，并设立空载体转染组和空白对照组，应用蛋白质印迹法检测PCNA的表达，应用CCK-8法检测细胞增殖活性。计数资料组间比较行 χ2检验，计量资料的比较采用独立样本 t检验或方差分析，并应用相关回归分析计算回归方程。 结果:eIF2α在RA-FLS中的阳性率明显高于OA[52.5%（21/40）与20.0%（8/20）]，差异有统计学意义（ χ2=9.14， P=0.003）。相关回归分析显示RA中eIF2α与PCNA呈正相关（回归方程为 Y=0.366 X+2.220， P=0.001）。与空白对照组和空载体转染组相比，MH7A细胞株的si-eIF2α组中细胞增殖活性在72 h[（0.65±0.08）与（0.96±0.12）与（1.09±0.06）， F=4.52， P=0.022]和96 h[（1.13±0.14）比（1.42±0.97）比（1.56±0.12）， F=9.87， P=0.001]均显著降低，PCNA蛋白的表达[（0.84±0.15）与（1.32±0.18）与（1.28±0.14）， F=5.22， P=0.012]显著降低。 结论:eIF2α在RA滑膜成纤维细胞中高表达，对成纤维细胞增殖有一定的促进作用。

目的:探究碳黑与镉（cadmium，Cd）复合暴露对人支气管上皮细胞株16HBE细胞蛋白激酶R样内质网激酶（protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase，PERK）通路的影响，及其所致自噬和炎症反应的作用机制。方法:于2022年1月，复苏培养人支气管上皮16HBE细胞。将碳黑纳米颗粒（carbon black nanoparticles，CBNPs）氧化后吸附Cd 2+构建CBNPs-Cd复合物。CCK-8试验检测CBNPs与Cd不同浓度和时间组合暴露对16HBE细胞活力的影响。以2 μg/ml Cd，100 μg/ml CBNPs，100 μg/ml CBNPs+2 μg/ml Cd联合暴露24 h作为后续剂量分组。分别应用透射电镜检测自噬体和自噬溶酶体数量。蛋白免疫印迹（Western blotting）法检测PERK通路蛋白PERK、真核翻译起始因子2α（eukaryotic initiation factor 2α，eIf2α）、激活转录因子4（activating transcription factor 4，ATF4）、自噬相关蛋白螯合体1（sequestosome 1，SQSTM1）/P62和微管相关蛋白1轻链3（microtubule-associated protein 1 light chain 3，MAlPILC3，简称LC3）的表达。以基因沉默技术抑制PERK基因后，检测自噬标志蛋白P62、LC3的变化，使用荧光定量PCR技术检测炎症因子白细胞介素-6 （interleukin-6，IL6）、白细胞介素-8 （interleukin-8，IL8）的表达。多组比较采用单因素方差分析，组内两两之间的比较采用 LSD检验；多因素的成分分析采用析因分析。 结果:CBNPs与Cd单独/复合暴露24 h后，16HBE细胞活力变化均无统计学意义（ P>0.05）。与对照组比较，CBNPs与Cd单独/复合暴露组16HBE细胞P62和LC3表达均明显升高（ P<0.05），且复合暴露组较其他组别的自噬体和自噬溶酶体数量增加。与对照组比较，CBNPs和Cd单独暴露对p-PERK/PERK、p-eIf2α/eIf2α蛋白表达影响均无统计学意义（ P>0.05），但复合暴露组p-PERK/PERK、p-eIf2α/eIf2α、ATF4蛋白的表达均升高（ P<0.05），且CBNPs与Cd单独/复合暴露组16HBE细胞IL6、IL8水平均明显高于对照组（ P<0.05）。CBNPs-Cd复合暴露组敲低PERK基因后，LC3蛋白和IL6、IL8水平均减少（ P<0.05）。析因分析结果显示，CBNPs和Cd单独暴露对P62、LC3和IL6的表达发挥明显作用（ P<0.05），但两化学物之间交互作用无统计学意义（ P>0.05）。 结论:CBNPs-Cd复合暴露可能通过激活PERK-eIf2α-ATF4通路，致人支气管上皮细胞自噬受阻、炎症反应增加。

目的:探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核翻译起始因子2α(eIF2α)通路在草酸钙诱导的肾小管上皮细胞损伤中的作用机制。方法:将人肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组、草酸钙组和草酸钙+4-苯基丁酸组。草酸钙组和草酸钙+4-苯基丁酸组在培养基中加入终浓度为5 mmol/L的草酸钙诱导细胞损伤模型，草酸钙+4-苯基丁酸组在培养基中另加入终浓度为2 mmol/L的4-苯基丁酸。通过CCK-8法、流式细胞术和DCFH-DA荧光探针检测细胞活力、凋亡和细胞内活性氧(ROS)水平，并分析细胞内PERK/eIF2α通路中蛋白以及Caspase12和Caspase3表达水平。结果:草酸钙组的OD值(0.42±0.05)低于对照组(0.71±0.08)，草酸钙+4-苯基丁酸组的OD值(0.65±0.07)高于草酸钙组(均 P<0.05)。草酸钙组的细胞凋亡率、ROS水平、PERK和eIF2α蛋白水平、Caspase12、Caspase3 mRNA和蛋白水平高于对照组，差异均有统计学意义(均 P<0.05)。草酸钙+4-苯基丁酸组的细胞凋亡率、ROS水平、PERK和eIF2α蛋白水平、Caspase12、Caspase3的mRNA和蛋白水平低于草酸钙组，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:在草酸钙诱导的肾小管上皮细胞损伤中使用4-苯基丁酸抑制内质网应激可抑制PERK/eIF2α通路并缓解细胞凋亡。

目的 研究泽泻汤对高脂血症急性胰腺炎(hyperlipidemia acute pancreatitis,HLAP)的防治作用及机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠以高脂饮食喂养,ig泽泻汤干预8周后,ip雨蛙素(50μg/kg)制备HLAP模型.采用试剂盒检测小鼠血清中三酰甘油(triglyceride,TG)、总胆固醇(total cholesterol,TC)水平及淀粉酶(amylase,AMY)、脂肪酶(lipase,LPS)、总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)活性;采用油红O染色观察肝脏组织脂质蓄积情况,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏、胰腺组织病理学变化;采用Western blotting检测胰腺组织中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、核因子 E2 相关基因(nuclear factor erythroid-2-related factor2,Nrf2)、免疫球蛋白重链结合蛋白(binding immunoglobulin protein,BIP)、真核翻译起始因子 2α(eukaryotic translation initiation factor 2α,eIF2α)、p-eIF2α、Bcl-2 相互作用蛋白(Bcl-2 interacting coiled-coil protein-1,Beclin-1)、自噬蛋白 5(autophagy-related protein 5,ATG5)、自噬蛋白 12(autophagy-related protein 12,ATG12)、微管相关蛋白 1 轻链 3-Ⅱ/Ⅰ(microtubule-associated protein light chain 3-Ⅱ/Ⅰ,LC3-Ⅱ/Ⅰ)及溶酶体相关膜蛋白 1(lysosomal associated membrane protein 1,LAMP-1)表达.采用棕榈酸(200mmol/L)和雨蛙素(10nmol/L)处理胰腺腺泡AR42J细胞构建HLAP细胞模型,给予泽泻汤干预后,采用试剂盒检测细胞培养上清液中LPS、T-SOD活性;采用DCFH-DA荧光探针、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)荧光探针检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及MMP水平;采用透射电镜观察细胞超微结构及自噬变化;采用Western blotting 检测细胞中 HO-1、Nrf2、Kelch 样环氧氯丙烷相关蛋白 1(kelch-like ECH-associatedprotein 1,Keap1)、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、LC3-Ⅱ/Ⅰ和LAMP-1表达.结果 与模型组比较,泽泻汤能够降低小鼠血清中TC、TG水平及AMY、LPS活性(P＜0.05、0.01、0.001),抑制肝脏组织中的脂滴蓄积,减轻肝脏及胰腺组织病理损伤,同时上调血清及胰腺腺泡细胞中SOD、CAT活性(P＜0.05、0.01),下调ROS水平(P＜0.001),上调胰腺组织及细胞中HO-1、Nrf2、LAMP1表达(P＜0.05、0.01、0.001),下调 Keap1、BIP、eIF2α、p-eIF2α、Beclin-1、ATG5、ATG12 及 LC3-Ⅱ/Ⅰ 表达(P＜0.05、0.01、0.001).结论 泽泻汤可以防治HLAP,其作用机制可能与抑制内质网应激诱导的过度自噬、恢复自噬通量有关.

探讨人参皂苷Rg,(GRg1)对脓毒症急性肺损伤(SALI)的干预疗效与作用机制.采用盲肠结扎穿孔术(CLP)建立SALI小鼠模型,随机分组给予GRg1干预,记录存活与体质量变化情况,小鼠无创肺功能检测系统检测肺功能,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织损伤情况,酶联免疫吸附实验(ELISA)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子含量与表达,流式细胞术、TUNEL染色等检测凋亡情况,蛋白质印迹(Western blot)、qRT-PCR检测凋亡相关分子胱天蛋白酶3(caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)与内质网应激相关分子蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)、活化转录因子4(ATF4)、C/EBP同源蛋白(CHOP)的活化表达情况.此外,利用脂多糖(LPS)体外诱导小鼠肺泡上皮细胞损伤模型,给予内质网应激激动剂衣霉素(TUN)验证GRg1的作用机制.结果显示,与模型组相比,GRg1干预可提高CLP小鼠生存时间,减缓其体质量下降,改善其受损的肺功能指标.同时,与模型组相比,GRg1给药组小鼠肺组织病理损伤评分降低,肺组织湿干比和肺泡灌洗液蛋白含量降低,血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平及肺组织中上述细胞因子的mRNA表达下降,肺泡上皮细胞凋亡比例明显下降,caspase-3、Bax表达下调,Bcl-2表达上调,PERK、eIF2α、ATF4、CHOP活化及表达下调.体外结果显示联合TUN后,GRg1降低凋亡细胞比例、下调凋亡相关蛋白表达的作用被抑制.综上,GRg1可减少肺泡上皮细胞凋亡,抑制肺部炎症渗出,减轻肺损伤,改善肺功能,可能与PERK/eIF2α/ATF4/CHOP 通路相关.