我国非新生儿破伤风防控形势严峻，强化含破伤风类毒素疫苗（TTCV）的主动免疫是非新生儿破伤风防控的关键。通过破伤风抗体（TAB）检测可以明确个体的TTCV免疫状态，从而正确实施TTCV主动免疫。国外对TAB检测技术的研究呈现停滞状态，而国内有现实的TAB检测需求，破伤风抗体检测技术仍然处于动态发展过程中。本文收集国内也相对有限的TAB检测技术资料，对国内应用和发展的小鼠毒素中和试验（MTNT）、间接血凝法（IHA）、凝胶双向扩散试验或Rubin法、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金（CG）法等TAB检测技术进行总结，以期为国内TAB检测提供较全面的依据。由于缺乏国内TAB检测和国际机构、参考试剂的对比研究，我国的TAB检测技术尚未实现国际化认可。我国特殊的破伤风防控形势使得TAB检测技术研究在国内有一定的现实意义，ELISA、CG法等快速检测试剂具备一定的应用价值。

目的:观察组分无细胞百白破-Sabin株脊髓灰质炎联合疫苗(DTacP-sIPV)或无细胞百白破-灭活脊髓灰质炎-b型流感嗜血杆菌联合疫苗(DTacP-IPV/Hib)基础免疫大鼠后加强免疫破伤风类毒素、降低抗原含量的白喉毒素和无细胞百日咳联合疫苗(Tdap)是否产生免疫加强效果，为候选青少年及成人Tdap疫苗提供临床前研究参考。方法:将自主研发的DTacP-sIPV和已上市的DTacP-IPV/Hib按0、1、2月3剂免疫程序分别免疫Wistar大鼠，检测免疫前和每剂次免疫后各组大鼠血清中各组分抗体水平。基础免疫完成10个月后，用候选Tdap加强免疫1次，并检测加强免疫前和免疫1个月、6个月后血清中各组分抗体水平。结果:3剂次基础免疫1个月后，DTacP-sIPV组抗白喉类毒素(diphtheria toxoid，DT)、抗破伤风类毒素(tetanus toxoid，TT)、抗百日咳毒素(pertussis toxin，PT)、抗丝状血凝素(filamentous hemagglutinin，FHA)和抗百日咳黏附素(pertactin，PRN)抗体的几何平均滴度(GMT，Log2)分别为17.41、18.34、18.11、19.93、13.91，血清阳转率均达到100%；基础免疫10个月后，抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.17、14.26、13.60、14.51、10.39，血清阳转率维持在89%以上。Tdap加强免疫1个月后，DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA抗体的GMT分别为16.49和17.26、16.80和17.63、16.70和17.74、18.48和19.26，血清阳转率均达到100%，组间差异无统计学意义( P均>0.05)；抗PRN抗体的GMT分别为13.07和11.00，血清阳转率为100%和88%，DTacP-sIPV组高于DTacP-IPV/Hib组( P<0.05)。Tdap加强免疫6个月后，DTacP-sIPV组和DTacP-IPV/Hib组抗DT、抗TT、抗PT、抗FHA和抗PRN抗体的GMT分别下降至15.74和14.87、15.07和15.14、14.84和15.73、16.62和16.37、11.44和9.96，血清阳转率维持在88%以上。 结论:候选疫苗Tdap在基础免疫接种DTacP-sIPV和DTacP-IPV/Hib的Wistar大鼠模型加强免疫中可诱导产生良好的体液免疫应答，但抗体滴度随时间推移而衰减。

目的:了解深圳市南山区孕妇百日咳、白喉、破伤风IgG抗体水平。方法:于2019年1—3月，以深圳市南山区某医院495名孕妇作为调查对象，采用酶联免疫吸附试验法检测血清中百日咳、白喉、破伤风IgG抗体水平，比较不同特征孕妇各抗体水平差异。结果:孕妇年龄为（29.23±4.08）岁。百日咳的抗体几何平均浓度（GMC） M（ P25， P75）为2.589（1.172，4.953）IU/ml，1.01%（5名）的孕妇百日咳抗体浓度≥40 IU/ml，75.15%（372名）的孕妇百日咳抗体浓度<5 IU/ml。孕妇白喉GMC值和抗体阳性率分别为0.024（0.009，0.065）IU/ml、72.53%（359名），破伤风GMC值和抗体阳性率分别为0.014（0.006，0.034）IU/ml、53.74%（266名）；不同特征孕妇白喉、破伤风抗体水平以及抗体阳性率差异均无统计学意义。 结论:深圳市南山区孕妇百日咳、白喉、破伤风抗体浓度均处于较低水平，不足以保护自身免受疾病的感染。

目的:了解河南省健康人群破伤风抗体水平，为破伤风疫苗免疫策略的调整提供依据。方法:2020—2021年采用多阶段分层抽样法在河南省选择7 519名健康人群，采集血清标本，酶联免疫吸附试验检测血清抗破伤风类毒素IgG抗体，分析抗体阳性率(≥0.01 IU/ml)、保护率(≥0.1 IU/ml)和中位数浓度(median concentration，MC)。结果:7 519名调查对象破伤风抗体总阳性率、保护率、MC分别为70.33%(5 288/7 519)、37.07%(2 787/7 519)、0.035 IU/ml。破伤风疫苗基础免疫和加强免疫均有良好效果。随着年龄的增长，破伤风抗体阳性率、保护率和MC分别由6岁人群的99.63%(272/273)、82.05%(224/273)和0.215 IU/ml下降至16~19岁人群的64.22%(262/408)、21.57%(88/408)和0.023 IU/ml，进一步下降至20岁以上人群的40.97%(1 302/3 178)、5.48%(174/3 178)和0.007 IU/ml。结论:河南省健康人群破伤风抗体水平呈现随年龄增长逐渐下降趋势，建议16~20岁时开展第6剂破伤风疫苗加强免疫。

目的:制备含有L452R和T478K突变位点的新型冠状病毒受体结合域（RBD）-破伤风类毒素蛋白（TT），表达后蛋白免疫小鼠以了解突变体蛋白的免疫原性。方法:设计2对新型冠状病毒引物对RBD中的L452R和T478K进行突变，并将TT肽的核苷酸片段嵌入RBD中；利用大肠埃希菌表达系统表达蛋白，借助离子柱层析技术纯化出目的蛋白，复性获得空间构象后通过ELISA、高效液相和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法（SDS-PAGE）等进行检定；免疫小鼠后ELISPOT检测其细胞免疫水平；用竞争法ELISA和活病毒中和试验评估其中和抗体对新型冠状病毒流行突变株的抑制能力。结果:成功构建了新型冠状病毒RBD的L452R和T478K突变蛋白，蛋白相对分子质量为26 390。小鼠免疫后产生了特异性的细胞免疫，突变蛋白组刺激后产生的分泌IFN-γ的效应T细胞为（21.43±11.71）个斑点形成细胞/5×10 5个细胞,高于对照组（3.38±2.56）个斑点形成细胞/5×10 5个细胞，差异有统计学意义（ t= 4.17, P=0.003）；同时产生了针对新型冠状病毒德尔塔、奥密克戎（BA.1）流行株的高滴度中和抗体，中和滴度几何平均数分别为3 012.28和1 086.12。 结论:本研究所构建的L452R和T478K突变蛋白对流行的新型冠状病毒德尔塔、奥密克戎（BA.1）流行株有效，为开发重组广谱的新型冠状病毒疫苗提供依据。

目的:了解破伤风类毒素(tetanus toxoid, TT)免疫效果，为改进破伤风免疫预防策略提供参考。方法:2019—2021年，对在晋江市罗山街道社区卫生服务中心因外伤就诊的患者调查其含破伤风类毒素疫苗(tetanus toxoid-containing vaccine, TTCV)免疫史。对353例TTCV计划免疫后5~10年的受试者(A组)检测血清破伤风抗体(tetanus antibody, TAB)，比较不同年龄人群不同TAB水平(<0.01 IU/ml、0.01~0.10 IU/ml、>0.10 IU/ml)受试者的分布差异；对68例有TTCV免疫史、年龄14~83岁、TAB水平为0.01~0.10 IU/ml的受试者(B组)与133例无TTCV免疫史、年龄17~77岁的受试者(C组)分别接种1剂、3剂TT，观察免疫后28 d TAB水平变化。结果:A组不同年龄人群不同TAB水平的受试者比例差异有统计学意义(χ 2＝47.69, P<0.001)，随着年龄增长，TAB水平在<0.01 IU/ml和0.01~0.10 IU/ml之间的受试者比例增高。B组受试者1剂TT免疫后28 d，68例中有66例TAB>0.10 IU/ml，免疫前后TAB水平为0.01~0.10 IU/ml、>0.10 IU/ml的受试者比例差异有统计学意义(χ 2＝128.23, P<0.001)。C组受试者3剂TT免疫前，133例中有129例TAB<0.01 IU/ml、4例TAB为0.01~0.10 IU/ml；3剂TT免疫后28 d，1例TAB为0.01~0.10 IU/ml、132例TAB>0.10 IU/ml，免疫前后不同TAB水平的受试者比例差异有统计学意义(χ 2＝262.80, P<0.001)。 结论:TTCV计划免疫5年后，TAB水平在<0.01 IU/ml和0.01~0.10 IU/ml之间的个体比例随年龄增长而增高；对于无TTCV免疫史人群和TTCV免疫后TAB保护作用下降的人群，加强TT免疫可以显著提高群体TAB保护状况。

目的 探讨2022年四川省某地区健康人群白喉、破伤风抗体水平、影响因素及空间分布.方法 采用多阶段抽样法根据该地区地理位置选取11个监测点,再将健康人群分为10个年龄组,共抽取440名监测对象.采用多因素logistic回归及空间自相关分析白喉、破伤风抗体水平的影响因素和空间聚集性.结果 白喉、破伤风IgG抗体阳性率分别为72.05％和56.36％,几何平均抗体浓度(GMC)分别为0.56 IU/mL和0.47 IU/mL.白喉、破伤风各年龄组的IgG抗体阳性率为43.18％(50～59岁)～90.91％(＜1 岁)(x2=63.768,P＜0.001)和 13.64％(＞60 岁)～93.18％(＜1 岁)(x2=190.134,P＜0.001).空间分析模型全局自相关显示白喉抗体阳性率差异有统计学意义,局部自相关结果显示,白喉抗体阳性率、白喉GMC水平与破伤风GMC水平在空间上形成了 3个高-低聚集区、1个低-低聚集区和1个低-高聚集区.多因素logistic回归模型显示,男性、有免疫史与＜40岁组对白喉IgG抗体水平的影响为保护因素.有免疫史、＜40岁组是破伤风IgG抗体水平的保护因素.结论 该地区健康人群白喉、坡上分抗体水平偏低,建议制定或出台针对青少年、成年人与乡镇地区免疫力较弱人群开展额外的白破疫苗、破伤风疫苗的免疫策略,提高全人群白破抗体水平.

目的 了解深圳市南山区大学新生百日咳、白喉、破伤风IgG抗体水平.方法 于2021年9月,以深圳市南山区287名大学新生作为调查对象,采用酶联免疫吸附试验法检测血清中百日咳、白喉、破伤风IgG抗体水平,比较不同特征大学新生各抗体水平差异.结果 大学新生百日咳的抗体几何平均浓度(GMC)和阳性率分别为14.642(13.073～16.399)IU/mL、20.56％(59名).大学新生白喉的抗体GMC、阳性率和保护率分别为0.098(0.086～0.111)IU/mL、98.95％(284名)、46.69％(134名).大学新生破伤风的抗体GMC、阳性率和保护率分别为0.121(0.106～0.139)IU/mL、100.00％(287名)、54.70％(157名).不同分组大学新生的百白破抗体浓度差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论 深圳市南山区大学新生人群百日咳抗体阳性率较高,提示近期百日咳感染比例较高,需加强对此群体的百日咳的监测;白喉、破伤风抗体阳性率较高,而保护率较低,可能需要进一步的疫苗接种政策.

目的 制备百日咳毒素(pertussis toxin,PT)兔多克隆抗体(简称多抗),建立定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,并进行验证及应用.方法 采用传统方法,用PT免疫青紫蓝兔制备PT兔多抗.优化ELISA系统反应条件,建立PT双抗体夹心ELISA定量检测方法,并进行特异性、线性、准确性、精密性、灵敏度验证.采用建立的方法对脱毒过程样品及其他百日咳抗原纯化过程样品菌毛蛋白(fimbriae proteins,FIM)原液中PT抗原含量进行检测.结果 PT抗原含量双抗体夹心ELISA检测方法的工作条件为PT兔多抗包被浓度为1 μg/mL,酶标抗体稀释度为1∶8 000.此检测系统能与PT纯化蛋白发生特异性反应,而与百日咳丝状血凝素、白喉类毒素、破伤风类毒素均未发生交叉反应;建立的双抗体夹心ELISA法线性检测范围在25～400ng/mL之间;PT高、中、低浓度回收率分别为103.27％、91.48％、103.52％;酶标板内和板间的变异系数(CV)均小于10％;该方法的灵敏度为20.719 ng/mL,检测下限为41.438 ng/mL.检测5种不同脱毒工艺条件下、不同取样时间点的35批样品,其抗原含量变化均符合脱毒反应变化趋势.结论 成功制备了PT兔多抗,并建立了精密性和准确性良好的定量检测PT抗原含量的双抗体夹心ELISA法,可用于组分百白破联合疫苗生产过程中化学脱毒样品的抗原含量检测.

目的 比较白喉无毒突变体(cross-reactive material 197,CRM197)、白喉类毒素(diphtheria toxoid,DT)及破伤风类毒素(tetanus toxoid,TT)3种不同载体蛋白C群脑膜炎球菌荚膜多糖(group C meningococcal polysaccharide,GCMP)结合疫苗在小鼠体内的免疫原性.方法 在碳二亚胺[N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride,EDAC]的缩合作用下,将TT和DT用1,6-己二酰肼(1,6-adipic acid dihydrazide,ADH)进行衍生,制备TT-AH及DT-AH衍生物,GCMP再分别与TT-AH、DT-AH及CRM197共价结合制备结合物,经Sepharose 4FF凝胶柱分离纯化后,进行化学检测、相对分子质量测定及鉴别试验.用GCMP及3种结合物经皮下注射NIH小鼠,第0、14、28天各免疫1次,分别于首免后第7、21和35天经小鼠颈动脉采血,分离血清,ELISA法检测抗体效价.结果 GCMP-TT和GCMP-DT的糖/蛋白比及多糖回收率较高,GCMP-CRM197较低,3种结合物游离多糖的含量均在5％以下,相对分子质量分别为5.8× 106、2.8× 106、1.1×106,且均可与GCMP的诊断血清产生沉淀线.3种结合物在小鼠体内均能产生良好的免疫原性,抗体水平均明显高于多糖组(P＜0.05);免疫2针后,GCMP-TT与GCMP-DT组的抗体水平差异无统计学意义(P＞0.05),而GCMP-TT和GCMP-DT组的抗体水平明显高于GCMP-CRM197组(P＜O.05);免疫3针后,GCMP-TT组小鼠产生抗体水平明显高于GCMP-DT及GCMP-CRM197组(P＜0.05).结论 3种不同载体的GCMP结合物免疫小鼠后均可产生良好的免疫应答,对于共价结合的方法,载体蛋白TT优于其他两种载体.