目的 研究阿霉素及卡铂双载药脂质体对卵巢癌腹水的治疗.方法 采用薄膜分散法结合硫酸铵梯度法制备阿霉素-卡铂脂质体(doxorubicin-carboplatin liposome,DOX/CBP-Lip),考察其粒径、电位、包封率、载药量和体外药物释放性能,对其体外抗肿瘤活性进行初步研究,评价其体内药效,包括腹围、体质量变化和生存率情况.结果 DOX/CBP-Lip 的粒径为 177.90 nm,电位为-32.63 mV,其中CBP的包封率在49.04%左右,DOX的包封率在93.17%左右,且有一定的缓释作用.DOX/CBP-Lip对OVCAR3 细胞具有协同抗肿瘤的作用,在相同给药剂量下,DOX/CBP-Lip可以发挥协同作用,增强药物的抗肿瘤活性,降低药物毒性.结论 将DOX和CBP制成双载药脂质体可以提高卵巢癌引发腹水的治疗效果,降低DOX和CBP的毒性,为联合使用抗肿瘤药物治疗肿瘤引起的腹水提供参考.

本文制备光敏感型活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)响应脂质体,研究其体外抗肿瘤活性.采用硫酸铵梯度法制备共输送光敏剂八丁氧基酞菁钯[1,4,8,11,15,18,22,25-octabutoxypalladium phthalocyanine,PdPC(OBu)8]与盐酸多柔比星(doxorubicin hydrochloride,DOX)的脂质体[liposome loaded with PdPC(OBu)8and DOX,LPD],考察LPD的粒径、zeta电位、透射电镜照片、光敏感型ROS响应药物的光响应释放及在血清中稳定性,进一步考察LPD在MCF-7细胞中的细胞毒性、细胞摄取及细胞内单线态氧(singlet oxygen,1O2)水平.结果显示,LPD的粒径为(169.3±1.2) nm,PDI为0.198±0.003,粒径均匀,zeta电位为(-39.8±0.8)mV.LPD具有良好的光响应释放特性,在730 nm激光以300 mW·cm-2光照强度下,5 min内DOX释放率达到95.5％.LPD能显著促进DOX的细胞摄取,而且光照时细胞内能产生大量1O2.与游离DOX相比,LPD未光照时IC50下降67.9％,光照时IC50下降85.7％.因此,光敏ROS响应脂质体是具有前景的给药系统.

采用薄膜分散-硫酸铵梯度法制备了紫杉醇-阿霉素复方脂质体,并以N-十二烷基-O-羟乙基两亲性壳聚糖衍生物锚定修饰,透射电镜观察脂质体形态,动态光散射法测定粒径及表面电荷,数字酸度计及渗透压测定仪检测其pH及渗透压,HPLC法测定并计算两种药物包封率、渗漏稳定性、血浆稳定性及体外释放行为.所制备的多糖锚定修饰复方脂质体呈球形,粒径分布均匀,在150 nm左右,pH为5.3～6.1,渗透压为820～870 mOsm/kg,对两种药物皆具有较高的包封率(均大于90％),且和非多糖锚定修饰脂质体相比,药物泄漏率显著降低,血浆稳定性显著提高,缓释能力增强,且在肿瘤模拟pH环境比血液pH环境具有更快的释药速度.本研究制备的多糖修饰复方脂质体具有优良的药物负载、稳定性及缓释能力,在临床联合化疗具有一定的应用前景.

目的:建立WGA(麦胚凝集素)修饰的柔红霉素和粉防己碱脂质体中柔红霉素和粉防己碱的含量测定方法,对制剂进行有效的质量控制.方法:采用薄膜分散法和硫酸铵梯度法制备WGA修饰柔红霉素和粉防己碱脂质体;通过方法学考察,建立高效液相色谱法测定WGA修饰柔红霉素和粉防己碱脂质体中柔红霉素和粉防己碱含量的方法.结果:本色谱条件下,WGA修饰的空白脂质体对主药含量的测定无干扰.WGA修饰的柔红霉素和粉防己碱脂质体中柔红霉素和粉防己碱分别在2.75 ～ 55 μg/mL和17 ～ 170 μg/mL范围内线性关系良好;回收率均在95％以上,RSD均小于1.0％;脂质体中柔红霉素和粉防己碱的含量为(290.87±0.40) μg/mL和(341.51±3.64) μg/mL.结论:本法准确、可靠、简便、可用于WGA修饰柔红霉素和粉防己碱脂质体中药物含量的质量控制.

目的:制备麦胚凝集素(WGA)修饰的长春瑞滨(VRB)阳离子脂质体(WGA-VRB阳离子脂质体),优化处方并进行细胞毒性试验.方法:以磷脂、胆固醇为辅料,以3β-[N-(N'-N'-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基]胆固醇盐酸盐(DC-Chol)为阳离子材料,以二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000(DSPE-PEG2000)为长循环链,采用薄膜分散法及硫酸铵梯度法制备WGA-VRB阳离子脂质体.以包封率为指标,采用星点设计-响应面法优化处方中DC-Chol、胆固醇和VRB用量.测定所制VRB脂质体和 WGA-VRB阳离子脂质体中VRB含量,比较二者和空白阳离子脂质体作用于人乳腺癌细胞MCF-7和人非小细胞肺癌细胞A549后对细胞存活率的影响.结果:5 mL WGA-VRB阳离子脂质体的最优处方为磷脂22 mg、胆固醇12 mg、DC-Chol8 mg、VRB0.5 mg,其包封率为(92. 24±1. 21)％(n=3),与预测值的相对误差为5. 3％.VRB脂质体和WGA-VRB阳离子脂质体中VRB含量分别为(96. 01±3. 26)、(93. 39±1. 59) μg/mL(n=3);与空白阳离子脂质体和VRB脂质体比较,WGA-VRB阳离子脂质体可明显降低MCF-7、A549细胞的存活率(P<0. 05).结论:成功制得WGA-VRB阳离子脂质体,其对MCF-7、A549细胞存活的抑制作用强于VRB脂质体.

目的:构建呈现人白细胞介素-13(interleukin-13,IL-13)抗原肽的Qβ噬菌体病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)疫苗.方法:将人IL-13抗原肽经基因重组插入Qβ噬菌体衣壳蛋白(CP)的C端.在BL21细菌中,经IPTG诱导CP及C端接有IL-13抗原肽的CP(CP/IL-13)同时表达.以硫酸铵沉淀及蔗糖密度梯度离心进行VLPs纯化及分析嵌合VLPs的存在,以HPLC分析VLPs纯度,以电镜观察颗粒形态.小鼠经皮下免疫VLPs后采集血清,以ELISA检测人IL-13特异性IgG抗体水平.结果:重组蛋白CP与CP/IL-13获得成功表达,两者在密度梯度离心中有一致的、与QβVLPs相同的沉降行为,而CP/IL-13单独无Qβ颗粒行为.经纯化获得了高纯度颗粒,嵌合颗粒与Qβ颗粒形态相似.此外,该VLPs疫苗诱导小鼠产生了IL-13特异的抗体应答.结论:利用共表达策略可成功构建呈现人IL-13抗原表位的嵌合VLPs,为以主动免疫方式调控IL-13在疾病中的病理作用,提供了具有临床应用潜能的疫苗形式.

背景与目的 阿法替尼是针对非小细胞肺癌及继发性耐药研发的第二代不可逆表皮生长因子受体抑制剂,目前仅停留在口服给药方式,其生物利用度低,不良反应较多.本研究旨在制备新型药物传递系统-阿法替尼脂质体,并建立包封率的测定方法.方法 4种不同方法制备阿法替尼脂质体,通过对比包封率和粒径确定最佳制备工艺.结果 经验证可采用葡聚糖凝胶微柱离心法纯化脂质体,并通过紫外分光光度法测定脂质体的包封率.不同制备方法中硫酸铵梯度法制备的脂质体,包封率约为90.73％,平均粒径为108.6 nm.结论硫酸铵梯度法制备阿法替尼脂质体包封率高、粒径小,紫外分光光度法用来测定脂质体的包封率简单易行、准确度高.

目的:建立体外释放测定方法, 考察两种方法制备的盐酸伊立替康脂质体的体外释药特性.方法:以含有铵离子的PBS作为释放介质, 采用微柱离心法分离样品, 考察以蔗糖八硫酸酯三乙胺梯度法和硫酸铵梯度法制备的伊立替康脂质体的体外释放.结果:两种方法制备的载药脂质体在PBS中24 h释放度分别为43.3％、89.8％.结论:两种伊立替康脂质体的体外释放行为存在明显差异, 以蔗糖八硫酸酯三乙胺梯度法制备的伊立替康脂质体改善了药物的滞留.

目的 制备7pep修饰的雷帕霉素胶束和羟氯喹脂质体,考察两种纳米载体联合给药对耐药肿瘤细胞的协同抗肿瘤作用,并探索可能的机制.方法 采用薄膜分散法和硫酸铵梯度法分别制备7pep修饰的主动靶向胶束和主动靶向脂质体,对纳米载体的粒径大小、分布、包封率以及Zeta电位进行表征,采用流式细胞术和激光共聚焦法观察7pep修饰纳米载体的靶向性,SRB法评价两种纳米药物联合给药的细胞毒性,通过MDC染色法考察胞内自噬囊泡蓄积情况,ELISA法定量测定自噬体标记物LC3Ⅱ的表达水平.结果 雷帕霉素胶束粒径在20 nm左右,包封率在90％以上.羟氯喹脂质体粒径在90～100 nm之间,包封率在88％以上.主动靶向胶束和主动靶向脂质体通过转铁蛋白受体介导的途径增加胞内摄取.7pep修饰的雷帕霉素胶束和羟氯喹脂质体对耐药细胞呈剂量依赖性细胞毒性,且两种纳米载体联合给药具有协同抗肿瘤作用,并导致细胞内自噬囊泡大量蓄积和自噬标记物LC3Ⅱ表达水平升高.结论 7pep修饰的雷帕霉素胶束和羟氯喹脂质体联合给药能抑制耐药肿瘤细胞增殖,诱导细胞过度自噬可能是其作用机制之一.

目的 建立测定小儿复方氨基酸注射液中盐酸半胱氨酸含量的反相液相色谱法.方法 采用菲罗门Gemini C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱;以缓冲液(取硫酸铵5.0 g和庚烷磺酸钠4.0 g加水1000 mL溶解,用HCl调节pH 1.5)为流动相A,甲醇为流动相B,梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:205 nm:柱温:40℃;进样量:10μL.结果盐酸半胱氨酸在0.02104～0.8416 mg/mL范围内,呈良好的线性关系(r=1.0000);平均回收率(n=15)为98.4％,RSD为1.8％;18AA-Ⅰ注射液中盐酸半胱氨酸的含量普遍高于18AA-Ⅱ和19AA-Ⅰ注射液.结论 建立的方法专属性高,结果准确可靠,可用于小儿复方氨基酸注射液中盐酸半胱氨酸含量的控制,18AA-Ⅱ和19AA-Ⅰ注射液生产工艺有待改进.