临床病毒血清学检测在病原筛查、病程监测、疗效评估等病毒感染性疾病诊疗中发挥了重要作用。近年来，得益于新型免疫技术的发展，病毒血清学检测的灵敏度和准确性得到大幅提升。但是与分子检测技术等方法相比，病毒血清学检测仍存在灵敏度及特异性不足、应对病毒变异检测方法开发滞后、快速检测多样性及多重检测手段欠缺等瓶颈问题。未来磁性纳米颗粒、分子印迹聚合物等新兴技术的研发应用，并结合人工智能等探索新技术新方法，可望进一步提升灵敏度和特异性，提高检测速度和通量，突破现有瓶颈。

目的:应用磁性分子印迹技术,从降尿酸中药秦艽中特异性吸附与分离龙胆苦苷.方法:以龙胆苦苷为模板分子,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,甲醇为致孔剂,制备龙胆苦苷磁性分子印迹聚合物.通过傅里叶变换红外光谱(FTIP)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)对材料进行表征,通过绘制动力学吸附曲线及静态等温线评价其吸附性能.结果:龙胆苦苷磁性分子印迹聚合物合成成功,震荡60 min基本达到吸附平衡,从秦艽中提取和分离龙胆苦苷,吸附量为6.316 mg/g.结论:降尿酸中药秦艽中的龙胆苦苷可被龙胆苦苷磁性分子印迹聚合物特异性捕获.

目的 建立磁性分子印迹技术联用高效液相色谱定量检测乳制品中的三聚氰胺.方法 制备以氧化石墨烯/多壁碳纳米管修饰的Fe3O4(Fe3O4-rGO/MWNT)为磁性组分,三聚氰胺为模板分子,多巴胺为功能单体的磁性分子印迹聚合物研究其对三聚氰胺的吸附性能,探讨吸附等温线及分子识别性,并应用于实际样品中分离富集三聚氰胺.结果 所制备的磁性分子印迹聚合物具有高吸附容量(56.60 mg/g)及显著的吸附选择性.以其作为新型磁性固相萃取材料,结合高效液相色谱检测,在0.01～0.50 mg/L内线性关系良好,相关系数R2为0.998 0,检出限为2μg/L.对样品中的三聚氰胺进行分离、纯化和检测,加标回收率为90.0％～ 112.0％.结论 磁性分子印迹聚合物快速萃取法简单快速,可应用于样品中非法添加的三聚氰胺的定量检测.

本文综述了近年来以分子印迹材料为基础的药物分析新方法及其在临床样本(血浆、尿液)中的应用,详细评述了基于分子印迹技术的固相萃取、固相微萃取、磁性固相萃取、传感器和酶联免疫分析等最新进展,为我国临床药物分析新方法研究提供参考.

目的 研究泛素连接酶(Cbl-b)基因沉默对H9人T淋巴细胞免疫杀伤人喉鳞癌细胞Hep-2作用的影响和相关机制.方法 选择12例喉鳞癌患和12例健康对照者,用磁性细胞分离技术分离外周血CD4+T细胞应用RT-PCR法检测Cbl-b的表达水平.同时,将人T淋巴细胞H9接种培养于96孔板,分为4组:以脂质体转染法将Cbl-b-siRNA重组序列转染人T淋巴细胞H9,作为Cbl-b-siRNA组;Cbl-b-siRNA重组序列转染T细胞成功后,在其培养液中加入IL-2中和抗体,作为anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组;以脂质体转染法将随机阴性对照序列转染的人T淋巴细胞H9作为阴性组(NC组);以不做任何处理人T淋巴细胞H9为空白组(BC组).采用倒置荧光显微镜观察人T淋巴细胞H9的转染效率、以实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹法检测各组人T淋巴细胞H9中Cbl-b mRNA和蛋白表达情况.以细胞计数试剂盒(CCK-8)检测各组人T淋巴细胞H9对Hep-2细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测各组人T淋巴细胞H9表面活化分子CD69、CD25阳性表达率;采用ELISA法检测T细胞上清液中白介素-2(IL-2)、γ干扰素(INF-γ)水平.结果 Cbl-b mRNA在喉鳞癌患者CD4+T细胞中表达升高,与健康对照差异有显著性(P<0.05).Cbl-b-siRNA组和阴性组的转染效率分别为(78.30±6.06)％、(77.25±6.38)％,转染效果良好;Cbl-b-siRNA组人T淋巴细胞H9的Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量与anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组无显著差异(P>0.05),但显著低于空白组和阴性组(P<0.05);不同效靶比时,Cbl-b-siRNA组Hep-2肿瘤细胞杀伤率均显著高于anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组、阴性组和空白组(P<0.05).Cbl-b-siRNA组人T淋巴细胞H9表面活化分子CD69、CD25阳性表达率均显著高于anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组、空白组和阴性组(P<0.05);Cbl-b-siRNA组人T淋巴细胞H9上清液中INF-γ、IL-2水平均显著高于空白组和阴性组(P<0.05);空白组与阴性组人T淋巴细胞H9的Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量、肿瘤细胞杀伤率、表面活化分子CD69、CD25阳性表达率、上清液中IL-2、INF-γ水平比较差异均不显著(P>0.05).结论 应用siRNA技术沉默T细胞Cbl-b基因可有效增强人T淋巴细胞H9对人喉鳞癌细胞株Hep-2体外免疫杀伤作用,其机制可能与T细胞Cbl-b基因沉默促进人T淋巴细胞H9分泌IL-2、加强T淋巴细胞激活有关.

目的 探讨睾酮分子印迹磁性纳米粒子(Fe3O4@TSTO-MIPs)作为雄激素依赖型前列腺癌去雄治疗新型药物的可行性.方法 以溶胶凝胶法制备的Fe3O4@TSTO-MIPs作为去雄药物;以人前列腺癌雄激素依赖LNCaP细胞和非依赖C4-2细胞为研究对象,分别进行四组处理:①空白对照组:正常培养基,不处理;②去雄处理组:去雄培养基,不处理;③阳性对照组:正常培养基,20 nmol/L临床应用的前列腺癌去势药物MDV3100处理;④实验组:正常培养基,160μg/ml睾酮分子印迹纳米粒子处理.采用细胞免疫荧光试验检测各组细胞雄激素受体(androgen receptor,AR)活性变化,采用流式细胞技术检测其对细胞周期的影响.结果 Fe3O4@TSTO-MIPs具有高吸附能力(6.96 μtg/mg)和高选择性[选择性系数(SC)=3.03];与细胞共同培养,Fe3O4@TSTO-MIPs可自由进入细胞,且24 h后细胞状态仍良好;与空白对照组比较,药物处理后的LNCaP细胞AR入核活性被抑制,细胞周期出现明显阻滞;C4-2细胞的AR入核活性虽被抑制,但未出现细胞周期阻滞.结论 Fe3O4@TSTO-MIPs抑制雄激素依赖前列腺癌细胞的生长,其作用机制可能与直接去除前列腺癌细胞内的睾酮有关,去雄能力与MDV3100相当.

将分子印迹技术与电化学相结合,构建了能同步提取和检测敌草隆的快速新型电化学传感器.采用表面印迹法合成了对敌草隆具有特异性吸附功能的磁性分子印迹聚合物,通过磁分离快速提取食品介质中的敌草隆;进一步通过磁吸附作用,将磁性印迹材料固定在磁性玻碳电极表面,在含有KCl的铁氰化钾和亚铁氰化钾的混合溶液中,利用示差脉冲伏安法测定敌草隆含量.该方法在0.0004～0.03 mmol/L敌草隆浓度范围内有良好的线性关系(R2=0.9929),检测限为1.3×10-5 mmol/L.在实际样品自来水、茶饮料、大白菜中的加标回收率为95％～110％,相对标准偏差0.7％～8.1％,能较好地应用于实际样品的检测.综上,此传感器能实现提取检测一体化,具有较好的实时检测能力,其方法灵敏度高、重现性和稳定性较好,在食品安全领域具有很好的应用前景.

目的 建立基于流动注射系统磁性分子印迹技术联用气相色谱法快速测定蔬菜中莠去津的检测方法.方法 磁性分子印迹材料以壳聚糖包裹的四氧化三铁(Fe3O4-CS)为载体,莠去津为模板分子,甲基丙烯酸为功能单体,二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂制备所得.蔬菜样品经乙酸乙酯提取,自制磁性分子印迹固相萃取柱净化富集,用甲醇洗脱目标化合物随后进入气相色谱仪进行定量测定.结果 通过静态吸附实验考察磁性分子印迹材料对莠去津的最大吸附容量为52.0 mg/g.在本实验条件下,莠去津在5～100 μg/L范围内线性良好,相关系数(R2)0.9976,样品加标时,方法回收率为81.5％～ 107.7％(n=6),检出限为0.6μg/kg.结论 本方法净化效果较好,可以用于蔬菜样品中莠去津残留检测.

目的:采用表面分子印迹技术制备马兜铃酸Ⅰ(AAI)磁性分子印迹聚合物(MIPs).方法:以四氧化三铁纳米颗粒(Fe3O4)为载体,分别考察模板分子、功能单体、交联剂不同投料比,使用不同功能单体以及不同溶剂种类下形成的AAIMIPs的印迹效率,并在优化好的实验条件下制备AAIMIPs.同时,借助扫描电镜(SEM)、傅立叶红外变换光谱仪(FT-IR)对AAIMIPs进行表征,考察聚合物对AAI的吸附性能.结果:经过实验优化,确定的最佳制备条件为甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)为交联剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,溶剂体系为乙腈-甲醇(3∶1,v/v)且模板分子、功能单体、交联剂物质的量比为1∶4∶20.经过硅壳改性后的Fe3O4作为优良的载体有利于形成表面印迹层,得到对AAI有特异性吸附的MIPs.结论:本研究得到的MIPs对AAI有较好的识别性,为实现天然产物中AAI的分离富集,优化AAI检测的前处理步骤提供了一种新思路.