目的:通过体外培养人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)观察微小RNA(miRNA)-29a与第10号染色体上缺失与张力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)的调节对神经细胞增殖和轴突生长的作用。方法:通过上海中科院细胞库购买的SH-SY5Y细胞经过体外培养(4×10 4/ml)分别转染miRNA-29a的激动剂和抑制剂(40 nmol/L)，构建miRNA-29a不同表达水平的细胞。通过实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测细胞转染效果(转染24 h)和人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Akt)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因表达水平(转染48 h)。转染72 h后通过蛋白免疫印迹(Western blot)检测不同细胞中PTEN、Akt和mTOR蛋白的表达和磷酸化水平，通过神经形态学和二苯基四氮唑溴盐比色法(MTT)检测细胞的增殖和轴突长度。通过单因素方差分析及LSD- t法检验比较各组数据。 结果:转染miRNA-29a激动剂组的miRNA-29a表达水平明显高于miRNA-29a抑制组(9.03±0.12比0.31±0.03， t＝241.70， P<0.05)，而激动组PTEN基因和蛋白的表达水平明显低于抑制组(0.31±0.02比3.26±0.23、0.30±0.06比3.36±0.15， t＝45.09、58.79， P<0.05)。miRNA-29a激动组中Akt、mTOR蛋白的磷酸化水平明显高于抑制组(3.26±0.13比0.42±0.03、2.57±0.13比0.31±0.04， t＝71.45、51.55， P<0.05)。在miRNA-29a激动组中，SH-SY5Y细胞增殖活性和轴突长度明显高于miRNA-29a抑制组[0.86±0.07比0.44±0.03、(157.56±11.13) μm比(43.48±4.92) μm， t＝13.89、31.11， P<0.05]。 结论:miRNA-29a可以通过干预PTEN表达，调节磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/Akt/mTOR信号通路中Akt和mTOR蛋白的磷酸化水平，促进SH-SY5Y细胞增殖和轴突生长。

目的:评价磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路在依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍中的作用。方法:健康雄性SD大鼠60只，20月龄，体质量600~700 g，采用随机数字表法分为4组( n＝15)：对照组(C组)、手术组(O组)、依达拉奉组(E组)和PI3K抑制剂LY294002组(LY组)。O组、E组和LY组于3%七氟烷麻醉下行剖腹探查术。E组和LY组术前30 min时腹腔注射依达拉奉3 mg/kg，同时LY组尾静脉注射LY294002 0.3 mg/kg。术后3 d时行旷场实验评估大鼠自发活动能力，然后行Morris水迷宫实验评估大鼠认知功能。行为学实验结束后处死大鼠分离海马组织，采用Western blot法测定磷酸化PI3K(p-PI3K)、磷酸化Akt(p-Akt)、磷酸化mTOR(p-mTOR)、突触素(SYP)和突触后致密蛋白95(PSD-95)的表达水平，行高尔基染色记录海马CA1区神经元树突长度，计算树突棘密度。 结果:4组运动速度、路程及旷场中心停留时间比较差异无统计学意义( P>0.05)。与C组比较，O组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达下调，海马CA1区神经元树突长度缩短，树突棘密度降低( P<0.05)；与O组比较，E组逃避潜伏期缩短，穿越原平台位置次数增加，海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达上调，海马CA1区神经元树突长度增加，树突棘密度升高( P<0.05)；与E组比较，LY组逃避潜伏期延长，穿越原平台位置次数减少，海马p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、SYP和PSD-95表达下调，海马CA1区神经元树突长度缩短，树突棘密度降低( P<0.05)。 结论:依达拉奉减轻老龄大鼠术后认知功能障碍的机制与激活PI3K/Akt/mTOR信号通路，改善海马突触可塑性有关。

目的:探讨法舒地尔对主动脉平滑肌细胞（VSMC）自噬及凋亡的影响以及与磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）-蛋白激酶B（Akt）-哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的关系。方法:用10%胎牛血清+DMEM培养液培养SD大鼠VSMC，并利用免疫细胞化学染色法检测传代细胞α平滑肌肌动蛋白（a-SMA）的表达情况鉴定VSMC。采用血小板源性生长因子（PDGF）诱导VSMC，并将PDGF诱导的VSMC分为空白组、对照组、法舒地尔组（30 μmol/L法舒地尔）、法舒地尔+LY294002组（30 μmol/L法舒地尔+25 μmol/L LY294002）。采用MTT法检测各组细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞凋亡率和凋亡周期，GFP-mRFP-LC3双荧光检测细胞自噬水平。采用蛋白免疫印迹法（WB）检测各组细胞Bax、Bcl-2、LC3、Beclin-1及PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的蛋白表达情况并比较分析。结果:镜下观察培养细胞呈长梭形、放射性生长，出现典型的"峰-谷"样结构，a-SMA阳性表达率为99%，确认所培养细胞为高纯度主动脉VSMC。法舒地尔组细胞增殖能力低于对照组（ P<0.05），法舒地尔+LY294002组高于法舒地尔组（ P<0.05）。与对照组比较，法舒地尔组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例升高（均 P<0.05）；与法舒地尔组相比，法舒地尔+LY294002组凋亡率及G 0-G 1期细胞比例回降（均 P<0.05）。与对照组比较，法舒地尔组自噬增强（ P<0.05），而法舒地尔+LY294002组的自噬则较法舒地尔组有所减弱（ P<0.05）。与对照组比较，Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平升高（均 P<0.05）；法舒地尔+LY294002组Bax、Bcl-2、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin 1水平以及PI3K、Akt、mTOR磷酸化水平较法舒地尔组有所回降（均 P<0.05）。 结论:法舒地尔通过激活PI3K-AKT-mTOR信号通路抑制VSMC增殖，促进自噬及凋亡，改善血管功能。

脓毒症是宿主对感染反应失调引起的危及生命的器官功能障碍，是临床上常见的危重症。尽管对脓毒症的发病机制有了深入理解，但国内外临床治疗中脓毒症的病死率仍未见明显改善。近年来，自噬在脓毒症发病中的作用成为新的医学研究热点。自噬在脓毒症中可能通过清除病原微生物、中和微生物毒素、调节细胞因子释放等机制对机体起到保护作用，并在脓毒症时心、肺等器官功能障碍及炎症免疫反应中发挥作用。硫化氢（H 2S）可通过多个信号通路激活自噬而发挥作用，如磷酸腺苷依赖性蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（AMPK/mTOR）、磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/mTOR（PI3K/Akt/mTOR）、肝激酶B1/STE20相关衔接蛋白/小鼠蛋白25（LKB1/STRAD/MO25）和微小RNA-30c（miR-30c）等。本文就H 2S通过影响自噬相关基因酵母ATG6同源物（Beclin-1）、微管相关蛋白1轻链3（LC3）的表达对脓毒症肠功能的影响进行综述，以探讨H 2S介导自噬相关基因表达在脓毒症肠功能损伤中的保护作用，为脓毒症治疗提供新的策略。

自噬是降解细胞内蛋白质和受损细胞器的一个动态过程，维持着细胞内的环境稳定，并为细胞的存活提供良好条件。高氧性急性肺损伤（HALI）是临床氧疗的严重并发症之一。HALI的发病机制尚不明确，已有研究表明自噬参与了HALI的发生过程。调控自噬的通路机制众多，包括磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路、丝裂素活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶（MAPK/ERK）信号通路、磷酸腺苷依赖性蛋白激酶/unc-51类自噬激活激酶1（AMPK/ULK1）信号通路以及转化生长因子-β（TGF-β）、叉头转录因子O1（FoxO1）和Ras三磷酸腺苷酶超家族成员Rab11a参与的信号通路，上述信号通路相关基因作为微小RNA-21-5p（miR-21-5p）靶基因在众多疾病中具有调控自噬活性的作用。本文就miR-21-5p靶基因调控自噬的各信号通路进行综述，以期寻找到有关HALI中miR-21-5p靶基因调控自噬发挥肺保护作用机制的线索，也为后续基础研究提供相关理论依据。

[目的]基于网络药理学、分子对接和实验研究探讨肉桂醛联合姜黄素抗肝细胞癌的作用机制.[方法]利用PharmMapper、SwissTarget、Target Net数据库筛选肉桂醛、姜黄素的相关作用靶点;TTD、Gene cards、OMIM筛选肝癌作用靶点;Venny软件筛选共同靶点;STRING数据库、Cytoscape 3.8.0软件构建蛋白相互作用网络(PPI);通过DAVID数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并进行分子对接.通过噻唑蓝(MTT)法、Hoechst 33258染色法、实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法检测进行体外细胞实验验证.[结果]经过筛选获取肉桂醛-姜黄素抗肝癌关键靶点,主要是RAC-α丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、基质金属蛋白酶-9(MMP9)、肿瘤坏死因子(TNF)等,可能涉及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)、白细胞介素(IL)-17、血管内皮生长因子(VEGF)等197条信号通路.分子对接表明,两药合用对AKT1具有较好的亲和性.选取PI3K/Akt信号通路上关键靶点进行体外实验验证,结果表明,与空白对照组比较,肉桂醛联合姜黄素能显著抑制SMMC-7721肝癌细胞存活率(P＜0.01),显著升高凋亡率(P＜0.05),并显著降低PI3K、AKT1、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、核因子-κB1(NF-κB1)mRNA的表达(P＜0.01).[结论]肉桂醛联合姜黄素能有效抑制SMMC-7721肝癌细胞活性,诱导其凋亡,其抗肝癌作用机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路有关.

目的 探索精神分裂症患者外周血中mRNA/微小核糖核酸(miRNA)网络综合分析.方法 纳入2022年12月至2023年2月就诊于该院的精神分裂患者6例作为实验组,志愿者4例作为对照组.收集两组人群血液样本,采用RNA-seq技术检测mRNA及miRNA的表达水平.最后利用基因表达综合数据库中GSE145554基因集进行生物信息学验证分析.结果 与对照组相比,实验组中共分析出差异mRNA 2 133个,其中包括上调mRNA 1 410个,下调mRNA 723个;差异miRNA 150个,其中包括上调miRNA 72个,下调miRNA 78个.京都基因与基因组百科全书和基因本体论富集的生物学过程和信号途径主要包括哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)信号通路、坏死性凋亡及内质网中的蛋白质加工信号通路等.结论 PI3K-AKT、mTOR、坏死性凋亡及内质网中的蛋白质加工信号通路参与精神分裂的发生发展过程,为阐明精神分裂症的预防、诊断及治疗提供新的研究方向.

目的 探讨长管贝壳杉素A(longikaurin A,LK-A)对结肠癌细胞的抗肿瘤效应及其潜在的分子机制.方法 将结肠癌HCT116、HT-29细胞分为对照组和实验组,其中对照组给予二甲亚砜溶剂,实验组给予不同浓度LK-A干预,采用CCK-8法评价细胞增殖能力,流式细胞仪分析细胞凋亡情况,以及裸鼠皮下移植瘤实验评价LK-A抑瘤效应,蛋白质印迹法检测PI3K/AKT/mTOR通路蛋白的变化.结果 低浓度的LK-A对结肠癌细胞具有显著生长抑制和促进凋亡的作用.LK-A干预 HCT116 和 HT-29 细胞 24 h 的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)分别为 2.18μmol/L 和 1.42μmol/L,48 h 的 IC50 分别为 0.88 μmol/L 和 0.72 μmol/L.在 HCT116 细胞中,2 或 4μmol/L LK-A干预24 h细胞凋亡率分别为(17.36±2.05)％和(34.75±7.01)％,高于对照组(6.60± 1.10)％(P＜0.05);而在 HT-29 细胞中分别为(15.47±1.65)％和(26.30±2.25)％,高于对照组(4.69± 0.91)％(P＜0.05).蛋白质印迹法检测分析显示,随着LK-A浓度增加,磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol-3 kinase,p-PI3K),磷酸化丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(phosphorylated serine-threonine kinase,p-AKT)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)表达呈现明显下降趋势.添加AKT激活剂SC79后,LK-A对HCT116和HT-29细胞的增殖抑制和诱导凋亡能力明显下降.裸鼠实验结果提示LK-A具有明显的体内抑瘤作用.结论 LK-A能抑制结肠癌细胞增殖和促进其凋亡发生,其作用机制与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路活化有关.

目的 探讨七氟醚麻醉对大鼠认知功能及神经细胞凋亡的影响.方法 取96只大鼠,随机分为对照组(吸入2L·min-1氧气)、七氟醚低浓度组(吸入体积分数为1％的七氟醚+2L·min-1氧气)、七氟醚中浓度组(吸入体积分数为2％的七氟醚+2L·min-l氧气)、七氟醚高浓度组(吸入体积分数为4％的七氟醚+2L·min-1氧气),持续吸入6h.用Morris水迷宫实验观察各组大鼠认知能力,用HE染色观察海马组织学形态,用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定海马组织中枢神经特异性蛋白(soluble protein 100β,S-100β)、神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,流式细胞术测定神经细胞凋亡情况,蛋白印迹法(Western blotting)测定海马组织 B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白(Bcl2-associated X protein,Bax)、磷酸化磷脂酰肌醇 3-激酶(phosphorylated phosphatidylinositol 3-kinase,p-PI3K)、磷酸化丝氨酸/苏氨酸激酶(phosphorylated serine/threonine kinase,p-Akt)和磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(phosphorylated mammalian target of rapamycin,p-mTOR)的水平.结果 HE染色结果表明,对照组海马组织神经细胞结构正常,排列紧密,七氟醚各浓度组大鼠海马组织神经细胞减少,排列紊乱,分布不均匀.与对照组比较,七氟醚各浓度组大鼠逃避潜伏期时间,S100-β、NSE、IL-1β、TNF-α水平,Bax蛋白水平和神经细胞凋亡率均升高,穿越平台次数,平台停留时间,Bcl-2、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白水平均降低(P＜0.05);七氟醚各浓度组诸项指数水平变化规律相同,并呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 七氟醚麻醉可诱导大鼠神经细胞凋亡,使大鼠认知能力衰退,其可能与调控PI3K/Akt/mTOR信号通路有关.

目的 探讨连翘苷(phillyrin,PHN)调节磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路对地塞米松(dexamethasone,DEX)诱导的成骨细胞自噬和凋亡的影响.方法 将MC3T3-E1细胞分为对照组(NOR组)、DEX组(10μmol/L DEX处理MC3T3-E1细胞)、L-PHN组(5μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、M-PHN组(10μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、H-PHN组(20μmol/L PHN处理MC3T3-E1细胞)、ZSTK474组(用20μmol/L PHN和2μmol/L的PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂ZSTK474处理MC3T3-E1细胞);MTT法检测细胞毒性和细胞活力;流式细胞术检测MC3T3-E1细胞凋亡;透射电子显微镜(TEM)观察自噬小体;Western blot法检测MC3T3-E1细胞中自噬、凋亡和PI3K/AKT/mTOR通路相关蛋白表达;ALP活性及ALP染色检测MC3T3-E1细胞分化能力.结果 0～80μmol/L PHN对MC3T3-E1细胞无明显毒性影响.与NOR组相比,DEX组OD570值、Bcl-2蛋白水平、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT、mTOR蛋白水平、ALP活性、Beclin1、LC3-Ⅱ/Ⅰ蛋白水平以及自噬小体数目显著降低(P<0.05),凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3显著升高(P<0.05),与DEX组相比,L-PHN组、M-PHN组、H-PHN组凋亡水平显著降低(P<0.05),增殖活性、自噬水平、成骨分化能力、通路蛋白水平显著升高(P<0.05);而ZSTK474消除了PHN对MC3T3-E1细胞的有利作用.结论 PHN可能通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路促进成骨细胞自噬,进而抑制其凋亡.