磷脂酶Cζ（phospholipase Cζ，PLCζ）由XY催化结构域、EF-手型结构域和C2结构域组成，通过经典磷脂酰肌醇4，5-二磷酸［phosphatidylinositol（4，5）-bisphosphate，PIP 2］→1，4，5-三磷酸肌醇［（1，4，5）-inositol trisphosphate，IP 3］+二酰基甘油信号转导通路，特异性水解卵母细胞胞质内而非质膜上PIP 2，引起卵母细胞内Ca 2+振荡，在激活卵母细胞、启动配子发育中起到不可替代的作用。PLCζ表达异常导致精子无法激活卵母细胞、与各类精子异常密切相关，最终引起男性生育力低下甚至不育。综上，本文针对PLCζ的结构、生物学作用以及PLCζ异常导致的临床疾病及治疗进展相关的文献研究进行综述。

目的 比较精液冷冻前、复苏后精子参数以及精子质膜蛋白磷脂酶C-zeta(Phospholipase C-zeta,PLCζ)表达水平的变化,探究冷冻保存对人类精子PLCζ的损伤作用.方法 选取2022 年2 月—2023 年7 月在本中心进行辅助生殖技术(Assisted reproductive technology,ART)治疗的不育男性患者30 份正常精液标本.将每份精液均分为冻前新鲜组和复苏后冷冻组.比较分析冷冻前、复苏后精子的活力(PR级),存活率和形态变化;密度梯度离心处理两组精液标本,通过免疫荧光和Western blot技术检测精子PLCζ表达水平.结果 与新鲜精子相比,冷冻保存明显降低精子的前向运动精子百分率(31.8%±5.5%)vs(59.3%±7.4%)(P<0.01),精子活动率(38.7%±4.6%)vs(69.07%±6.7%)(P<0.01)和精子存活率(48.2%±6.1%)vs(83.4%±7.2%)(P<0.01),精子正常形态率也发生改变(3.4%±0.7%)vs(12.4%±3.3%)(P<0.01),尾部卷曲的异常形态比例增多;冷冻复苏精子PLCζ荧光免疫反应减弱(33.08±9.74)vs(114.1±12.92)(P<0.01),染色为散在红色点状荧光,且特征性的染色定位缺失;Western blot实验中,精子PLCζ蛋白表达明显减弱.结论 冷冻保存不仅对精子参数有负面影响,同时对精子质膜蛋白PLCζ有损伤作用.

卵母细胞激活障碍(oocyte activation deficiency,OAD)是指精子进入卵母细胞后无法正确产生Ca2+振荡,从而无法解除对第二次减数分裂的阻滞、排出第二极体、释放皮质颗粒以及形成雌雄原核等对胚胎形成和发育至关重要的事件.造成OAD的原因既可能是由精子的异常导致,也可能是由卵母细胞本身的缺陷导致.卵母细胞辅助激活(assisted oocyte activation,AOA)或向卵母细胞内注射特定的重组蛋白rhPLCζ可以显著改善由OAD导致的胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)后受精失败.归纳和综述OAD的各种原因及治疗手段.

受精时,精子诱导卵母细胞胞浆内Ca2+发生一系列升高,成熟的卵母细胞激活进而继续发育,这个过程称为钙振荡.钙振荡在卵胞浆内单精子注射(ICSI)后也会出现,它主要由精子蛋白磷脂酶C-zeta(PLCζ)触发.目前,ICSI是使卵母细胞受精的有效方法,但一部分卵母细胞在ICSI后仍受精失败,这种情况似乎与PLCζ缺乏有关.在辅助生殖领域常通过卵母细胞人工激活(AOA)技术来改善受精失败患者的结局.本研究综述了卵母细胞激活的科学背景,并对AOA技术做了一些讨论.

通常认为卵母细胞在成熟分裂促进因子(matura-tion-promoting factor, MPF) 和细胞生长抑制因子(cyso-static factor, CSF)的作用下,发育并停滞于第二次减数分裂中期,在精子或某些理化因素的刺激下卵母细胞才能恢复并完成减数分裂,这一过程称为卵母细胞激活(oocyte activation, OA)[1].1990年,Swann等人通过将精子内提取物注射入卵母细胞内,并观察到受精成功的信号——钙离子振荡,首次提出关于"精子因子"的证据 [2].精源性卵母细胞激活因子(sperm-borne oocyte activation factor,SOAF)被认为是精卵质膜融合后,由精子向卵母细胞质内释放的一种或多种可溶性蛋白,可以启动信号转导通路,通过诱导钙离子振荡以达到激活卵母细胞的目的.目前广泛接受并唯一已明确的关键SOAF是磷脂酶C-zeta (phospholipase C zeta, PLCζ)[4],已有多项研究证实,精子内PLCζ蛋白的缺乏、位置异常、活性及表达异常、相关基因突变与ICSI失败及男性不育相关[4].但其后续激活钙离子振荡和卵母细胞激活的机制仍未完全阐明;同时,在部分文献中提出其他可能作为SOAF的候选蛋白,但目前仍存在争议.本文旨在对SOAF的可能候选蛋白及其相关作用机制进行总结.

卵母细胞激活不足是导致卵胞浆内单精子显微注射技术失败的常见原因,其发生通常与精子无法产生足量的磷脂酶C-ζ引起钙离子(Ca2+)振荡来激活卵母细胞有关.为解决卵母细胞激活不足、提高卵胞浆内单精子显微注射技术成功率等,人工卵母细胞激活的相关研究及临床应用越来越多.由于其生物安全性尚未被完全确定,阐明Ca2+在卵母细胞激活中的作用,总结不同激活剂的原理及其临床应用现状,探讨人工卵母细胞激活技术的使用安全性及应用前景是很有必要的.

目的 探究苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大的保护作用及机制.方法 (1)体外培养大鼠H9c2心肌细胞,采用MTT法评价不同浓度的异丙肾上腺素(0.625、1.25、2.5、5、10 μmol·L-1)和不同浓度的苦瓜皂苷L(1.625、3.125、6.25、12.5、25.0 μg·mL-1)对心肌细胞活力的影响.(2)采用异丙肾上腺素诱导心肌细胞肥大模型.实验分为正常组、模型组、苦瓜皂苷L干预组和苦瓜皂苷L单独组.分别通过细胞拍照结合ImageJ软件测量、荧光定量PCR法考察苦瓜皂苷L 12.5 μg·mL-1对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC及α-SKA表达的影响.在此基础上,选择参与甘油磷脂代谢的酶Ⅵ组磷脂酶A2(PLA2G6)、二酰甘油激酶ζ(DGKZ)、甘油磷酸胆碱磷酸二酯酶1(GPCPD1)为指标,评价苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞上述3种酶基因表达的影响;进一步以PLA2G6和DGKZ蛋白为指标,采用Western Blot法考察苦瓜皂苷L对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞PLA2G6和DGKZ蛋白表达的影响.结果 (1)与正常组比较,异丙肾上腺素(0.625～10μmol·L-1)和苦瓜皂苷L(1.625～25μg·mL-1)对心肌细胞活力没有明显影响(P＞0.05).本研究选用异丙肾上腺素10μmol.L-1和苦瓜皂苷L 12.5 μg·mL-1进行实验.(2)与正常组比较,模型组心肌细胞表面积增加(P＜0.05),心肌肥大相关胚胎基因ANP、β-MHC、α-SKA表达上调(P＜0.05),PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA表达上调(P＜0.05),PLA2G6和DGKZ蛋白表达增加(P＜0.05);与模型组比较,苦瓜皂苷L干预组能够降低心肌细胞表面积(P＜0.05),下调心肌肥大相关胚胎基因 ANP、β-MHC、α-SKA 表达(P＜0.05),下调 PLA2G6、DGKZ、GPCPD1 mRNA 表达(P＜0.05),降低PLA2G6和DGKZ蛋白表达(P＜0.05).结论 苦瓜皂苷L可缓解异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,可能与其抑制甘油磷脂代谢酶PLA2G6和DGKZ的表达有关.

目的 观察乙酰紫草素对糖尿病小鼠血糖的改善作用,探究乙酰紫草素对糖尿病小鼠肝脏糖代谢的调控机制.方法 8周龄雄性C57小鼠6只和db/db小鼠18只随机分为正常组、糖尿病对照组、二甲双胍组(200mg/kg)和乙酰紫草素组(200 mg/kg),每组6只.根据分组对小鼠灌胃40 d,监测小鼠血糖变化,检测小鼠口服葡萄糖耐量.采用全自动生化分析仪检测小鼠血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平,ELISA试剂盒检测小鼠血清胰岛素水平,TG和糖原检测试剂盒检测小鼠肝脏TG和糖原水平;苏木素-伊红(HE)染色、油红O染色及过碘酸-雪夫(PAS)染色观察小鼠肝脏病理改变,Western blot检测小鼠肝脏葡萄糖转运蛋白2(GLUT2)、蛋白激酶Cζ(PKCζ)、胰岛素受体底物(IRS)、pIRS、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、pPI3K、蛋白激酶B(AKT)、pAKT、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)和pGSK3β蛋白的表达水平,免疫组化检测小鼠肝脏GLUT2表达.结果 乙酰紫草素可使小鼠血糖显著下降,提高血清胰岛素含量(P＜0.001,F=25.55),改善胰岛素抵抗;乙酰紫草素可降低血清中TC(P＜0.01,F=11.94)、TG(P＜0.01,F=9.135)和LDL-C(P＜0.01,F=17.77)含量,提高HDL-C含量(P＜0.01,F=17.35),减轻肝细胞脂肪变性,改善脂代谢异常,增加肝糖原含量(P＜0.001,F=10.71).乙酰紫草素可上调 GLUT2、PKCζ、IRS、pIRS、PI3K、pPI3K、AKT 和 pAKT 的表达水平,下调 GSK3β 和 pGSK3β的表达水平.结论 乙酰紫草素可改善小鼠糖尿病,其可能与改善脂代谢异常、调控GLUT2及调节IRS/PI3K/AKT/GSK3β通路从而调节肝脏糖原合成有关.